2,3-吲哚醌对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡和端粒酶表达的影响

目的研究2,3-吲哚醌(2,3-dioxoindoline,ISA)对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡和端粒酶表达的影响。方法体外培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞,将SH-SY5Y细胞随机分为对照组和ISA不同浓度(0、100、200、400μmol·L-1)处理组,采用Hochest33258荧光染色和琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡;采用Western blot检测凋亡抑制基因bcl-2、凋亡基因bax蛋白表达的变化;采用RT-PCR检测加药后SH-SY5Y bcl-2,bax及端粒酶逆转录酶(hTERT) mRNA表达水平的变化。结果100、200、400μmol·L-1ISA处理SH-SY5Y细胞48h后,荧光染色可观察到明显的细胞凋亡的核浓缩、核碎裂形态;bcl-2 mRNA及蛋白表达逐渐减少(P<0.05),各组间比较差别有统计学意义;bax mR-NA及蛋白表达水平未见变化(P>0.05);hTERT mRNA表达水平降低(P<0.05),各组间差异比较有统计学意义;200、400μmol·L-1ISA处理SH-SY5Y细胞48h,琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯带。结论2,3-吲哚醌可能通过下调bcl-2和hTERT表达诱导SH-SY5Y细胞凋亡,并在一定浓度范围内呈浓度依赖关系。     

姜黄素对SH-SY5Y细胞血红素加氧酶同工酶表达的影响

目的研究姜黄素在神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)中对血红素加氧酶(HO)同工酶表达的影响,探讨姜黄素通过维持HO-1和HO-2的平衡对神经细胞的保护作用。方法体外培养人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞),以不同浓度的姜黄素(0、1.25、5.0、20μmol·L-1)处理SH-SY5Y细胞24h,及用浓度为5.0μmol·L-1的姜黄素分别处理SH-SY5Y细胞0、12、24、48h。利用荧光探针DCFH-DA和荧光分光光度计检测细胞内活性氧的水平。通过RT-PCR检测HO-1、HO-2mRNA的水平,Western blot检测HO-1、HO-2蛋白的表达。结果姜黄素作用于SH-SY5Y细胞后活性氧水平降低(P<0.05)。HO-1mRNA和蛋白的表达增加(P<0.05),而HO-2mRNA和蛋白的表达水平明显减弱(P<0.05),并呈浓度-时间依赖性。结论姜黄素通过抗氧化应激保护SH-SY5Y细胞,并促进SH-SY5Y细胞中HO-1的表达,下调HO-2的表达(P<0.05),姜黄素对HO-1和HO-2的这种反向调节,可能是姜黄素抗氧化应激、发挥神经细胞保护作用的一个机制。     

梓醇对乳胞素诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的探讨梓醇对蛋白酶体抑制剂乳胞素诱导的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法梓醇10μmol·L-1预处理SH-SY5Y细胞1 h后,加入乳胞素10μmol·L-1继续处理24 h。倒置显微镜下观察细胞形态的变化,MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Hoechst33258染色观察细胞核形态的变化,酶联免疫吸附检测细胞内20S蛋白酶体含量。结果与正常对照组相比,梓醇10μmol·L-1对细胞存活率、形态和凋亡及20S蛋白酶体含量无显著差异;乳胞素10μmol·L-1组细胞存活率为(72.0±1.8)%,明显降低(P<0.05),细胞凋亡率为(64.7±2.6)%,明显增高(P<0.05)。Hoechst33258染色发现梓醇细胞核形态改变,出现凋亡小体;细胞内20S蛋白酶体含量降低60%,差异具有统计学意义(P<0.05)。与乳胞素10μmol·L-1组相比,梓醇10μmol·L-1预处理组细胞存活率(87.9±2.2)%明显增高(P<0.05),细胞凋亡率为(51.4±1.5)%,明显降低(P<0.05)。Hoechst33258染色发现,梓醇细胞核形态明显改善;细胞内20S蛋白酶体含量升高了1.9倍,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论梓醇对乳胞素诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有保护作用,其机制可能与梓醇提高SH-SY5Y细胞内20S蛋白酶体含量有关。     

姜黄素通过诱导Nrf-2上调SH-SY5Y细胞中HO-1的表达

目的研究姜黄素(Curcumin)对于血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和核因子相关因子2(nuclear factor erythroid2-related factor2,Nrf-2)表达的影响,探讨Curcumin保护神经细胞的作用机制。方法 SH-SY5Y(人神经母细胞瘤)细胞用0、1.25、5.0、20.0μmol·L-1 Curcumin处理24h,以及用5.0μmol·L-1 Curcumin分别处理细胞0、12、24、48h,然后用RT-PCR和Western blot检测各组的mRNA和蛋白的表达,并在各个浓度组使用Nrf-2siRNA,Western blot检测转染Nrf-2siRNA后HO-1的表达情况。结果 Curcumin处理后,SH-SY5Y细胞中Nrf-2和HO-1的表达均明显增强,且呈时间和浓度依赖性(P<0.05),0、1.25、5.0、20.0μmol·L-1 Curcumin处理的细胞24h后HO-1表达与用0,1.25,5.0,20.0μmol·L-1 Curcumin和转染Nrf-2siRNA同时处理24h后的细胞HO-1表达相比明显下降(group 1 vs group 5,group 2 vs group 6,group 3 vsgroup 7,group 4 vs group 8,P<0.05)。结论 Curcumin通过Nrf-2诱导HO-1的表达作用,可能是其抑制神经细胞氧化应激、发挥保护作用的机制之一。     

沉默Fis1基因对METH诱导体外培养SH-SY5Y细胞增殖能力、线粒体膜电位和超微结构的影响

目的评估线粒体分裂蛋白1(Fis1)在甲基苯丙胺(METH)诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)损伤中的作用。方法采用成组设计方法,将体外培养SH-SY5Y细胞分为不同组别:未沉默组、沉默阴性组和沉默组,不同浓度的METH诱导各组SH-SY5Y细胞24 h。利用Western blot检测Fis1蛋白表达水平,使用CCK-8细胞毒性增殖实验分析METH对SH-SY5Y细胞增殖能力的影响,利用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测METH对SH-SY5Y细胞MMP水平的影响,使用透射电镜观察METH对SH-SY5Y细胞线粒体超微结构的影响。结果未沉默组、沉默阴性组和沉默组中,与对照组比较,各组组内随METH诱导SH-SY5Y细胞的浓度升高,Fis1蛋白表达水平升高(P<0.05)、增殖能力减弱(P<0.05)、MMP水平降低(P<0.05);与未沉默组和沉默阴性组相同浓度比较,沉默组SH-SY5Y细胞Fis1蛋白表达水平降低(P <0. 05),增殖能力增强(P <0. 05),MMP水平升高(P <0. 05)。组内与对照组比较,2. 0mmol·L~(-1)METH诱导未沉默组、沉默阴性组和沉默组,透射电镜观察见线粒体小球状结构增多(P <0. 01)。结论 Fis1可能在METH诱导体外培养SH-SY5Y细胞损伤中起关键作用。     

全反式维甲酸对HFL-Ⅰ细胞α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原、热休克蛋白47表达的影响

目的研究全反式维甲酸(ATRA)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HFL-Ⅰ)中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),Ⅰ型胶原(Collagen-Ⅰ),热休克蛋白47(HSP47)mRNA和蛋白表达的影响。方法体外培养HFL-Ⅰ细胞,MTT法检测不同浓度TGF-β1和ATRA分别作用3 d对HFL-Ⅰ细胞增殖能力的影响。随后分为6组:对照组、5μg·L-1 TGF-β1组、10μmol·L-1 ATRA组、5μg·L-1TGF-β1+0.1μmol·L-1 ATRA组、5μg·L-1 TGF-β1+1μmol·L-1 ATRA组、5μg·L-1 TGF-β1+10μmol·L-1 AT-RA组,RT-PCR和Western blot方法分别检测各实验组细胞中α-SMA,Collagen-Ⅰ,HSP47 mRNA和蛋白的表达。结果①MTT法检测结果显示不同浓度的TGF-β1可刺激HFL-Ⅰ细胞增殖,呈浓度依赖性(P<0.05);不同浓度的ATRA对HFL-Ⅰ细胞增殖能力均有明显抑制作用,并随药物浓度的增加而增强(P<0.05)。②5μg.L-1 TGF-β1诱导后,HFL-Ⅰ细胞中α-SMA,Collagen-I,HSP47 mRNA和蛋白表达均明显上调(P<0.05)。③ATRA以浓度依赖性方式下调经TGF-β1诱导的HFL-Ⅰ细胞中α-SMA,Collagen-I,HSP47 mR-NA和蛋白的表达(P<0.05)。结论 ATRA能够抑制TGF-β1诱导的HFL-Ⅰ细胞的分化,其作用机制可能与降低Col-lagen-I、HSP47表达有关。     

角质形成细胞模型中白介素8和单核趋化蛋白1的表达及西替利嗪对诱导的干预作用

目的　探讨人角质形成细胞株HaCaT细胞中组胺H1 受体(H1R)表达及西替利嗪(CET)对组胺诱导炎症因子的干预作用。方法　用RT-PCR和免疫组化技术检测HaCaT细胞H1RmRNA和蛋白表达,用组胺处理细胞为模型组,用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测组胺诱导白介素8 (IL-8)和单核趋化蛋白1(MCP-1)的蛋白分泌及CET对诱导的干预作用。结果　HaCaT细胞有H1RmRNA和蛋白表达;组胺(1×10-6 ~1×10-4 mol·L-1 )可显著诱导细胞IL-8蛋白分泌(P<0. 05, vs对照组), 组胺(1×10-5 mol·L-1 )可显著诱导MCP-1分泌(P<0. 05, vs对照组),加入(1×10-6, 1×10-5mol·L-1 )CET共同培养24h,可抑制诱导作用(P<0. 05, vs模型组)。结论　西替利嗪可能通过抑制角质形成细胞趋化因子的表达而发挥抗皮肤过敏炎症作用。     

CCK-8与内源性阿片系统在吗啡依赖中的相互作用

目的通过观察不同剂量的CCK-8对吗啡依赖SH-SY5Y细胞模型内源性阿片系统的影响,初步探讨CCK-8与内源性阿片系统在吗啡依赖过程的相互作用及其机制。方法建立吗啡慢性依赖SH-SY5Y细胞模型,应用放射配基结合技术观察μ阿片受体(MOR)结合特征,应用Real-Time PCR技术检测前脑啡肽原(PENK)、前阿黑皮质素原(POMC)基因的表达,并观察CCK-8对上述指标的影响。结果①10μmol·L-1吗啡作用于全反式维甲酸(RA)分化6d的SH-SY5Y细胞48h,成功建立了慢性吗啡依赖模型;②CCK-8可剂量依赖性地抑制MOR的结合,并且此抑制作用可被CCK1及CCK2受体拮抗剂(L-364,718,LY-288,513)翻转;③10-7、10-6mol·L-1CCK-8使PENK、POMC的表达较正常组分别增加(5.81±0.84)、(7.26±1.55)倍和(4.55±0.73)、(5.16±0.82)倍。吗啡依赖后,PENK、POMC表达较正常组下降(0.43±0.10)倍和(0.37±0.07)倍,10-8、10-7、10-6mol·L-1CCK-8使下调的PENK、POMC表达增加,PENK与正常组的相对表达值为(0.63±0.10)、(0.86±0.21)、(1.17±0.19),POMC与正常组的相对表达值为(0.46±0.10)、(0.60±0.11)、(0.96±0.11)。10-10、10-9mol·L-1CCK-8对PENK、POMC表达无影响。结论低剂量(10-10、10-9mol·L-1)CCK-8可通过激活CCK受体抑制MOR的结合力,对PENK、POMC的表达无影响;高剂量(10-8～10-6mol·L-1)的CCK-8可使PENK、POMC基因表达增加,促进内源性阿片肽的生成,并可改善吗啡依赖后内源性阿片系统的失衡。     

Cr(Ⅵ)诱导肝细胞凋亡与氧化损伤、p53和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的关系

目的探讨6价铬(Cr(Ⅵ))在不同暴露水平诱导细胞凋亡的途径有无差异。方法L-02肝细胞暴露于不同浓度Cr(Ⅵ)24h。用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测细胞凋亡;化学比色法检测SOD,CAT活性与GSH含量;RT-PCR检测p53,caspase3mRNA表达水平;免疫组化检测p53蛋白含量。结果Cr(Ⅵ)诱导L-02肝细胞凋亡率浓度依赖性增加(r=0.997),6~12μmol·L-1Cr(Ⅵ)处理组与对照组比差异有显著性(P<0.05);琼脂糖凝胶电泳表现DNA特征性梯形条带;SOD与CAT活性和GSH含量均下降,Cr(Ⅵ)处理组GSH含量与CAT活性水平明显低于对照组(P<0.05);3~9μmol·L-1Cr(Ⅵ)处理组细胞p53mRNA,caspase3mRNA,p53蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05)。细胞凋亡率与SOD活性、CAT活性呈负相关(r分别为-0.952和-0.885);p53mRNA表达与caspase3mRNA表达正相关(r=0.890);p53蛋白表达与GSH含量呈负相关(r=-0.929)。结论氧化损伤即细胞内抗氧化系统平衡的破坏在Cr(Ⅵ)诱导肝细胞凋亡中具有重要作用;在低浓度水平Cr(Ⅵ)诱导细胞凋亡具有p53和caspase3依赖性,但在较高Cr(Ⅵ)处理水平,不排除非p53及caspase3途径的存在。     

三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌细胞分化和凋亡的影响

目的探讨三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌细胞BEL-7402的诱导分化和凋亡作用。方法用不同剂量的3-吡啶-3-基-4-[(4-羟基-3-甲氧基-苯亚甲基)氨基]-5-甲硫基-1,2,4-三唑(LH-37)与BEL-7402细胞共同培养,以MTT法检测细胞增殖和LH-37对细胞增殖的抑制作用;RT-PCR方法检测细胞甲胎蛋白(α-FP)和白蛋白(Alb)mRNA表达;ELISA法测定细胞α-FP含量;免疫组织化学检测细胞内激活型Caspase-3表达;Western blot检测Caspase-3和Caspase-9蛋白表达;可见光法测定超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力;荧光显微镜观察凋亡细胞形态;Annexin-Ⅴ和PI双染流式细胞术测定凋亡细胞数。结果LH-37在10μmol·L-1~1mmol·L-1的浓度范围能抑制细胞增殖,且抑制率随浓度的增加而增高(P<0·05或P<0·01),10μmol·L-1和1·0μmol·L-1的LH-37使细胞Alb mRNA表达量增高,α-FP mRNA和蛋白质表达量明显下降,Caspase-3和Caspase-9表达量明显增加,Caspase-3阳性细胞明显增加;药物浓度达100μmol·L-1作用48h后,BEL-7402细胞皱缩,呈现凋亡各期改变,细胞凋亡率高于对照组(P<0·05)。结论三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌BEL-7402细胞具有抗增殖、促分化和凋亡作用,作用可能与过氧化氢的氧化损伤作用有关。     

2,3-吲哚醌对肿瘤凋亡抑制因子survivin的影响及作用机制

目的研究2,3-吲哚醌(2,3-dioxoindoline,isatin,ISA)在体外对人神经母瘤细胞(SH-SY5Y)分泌肿瘤凋亡抑制因子survivin的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞,将SH-SY5Y细胞随机分为对照组和ISA不同浓度(100、200、400μmol.L-1)处理组,采用荧光染色、DNA Ladder分析细胞凋亡,RT-PCR及Westernblot等方法检测不同浓度ISA作用后survivin及p53在mRNA和蛋白水平的变化,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测Caspase-3蛋白水平的变化。结果ISA(100、200、400μmol.L-1)作用SH-SY5Y细胞48h后,在荧光显微镜下观察到400μmol.L-1ISA组细胞出现典型的凋亡形态学改变:核染色质聚集、核碎裂、胞质浓缩;琼脂糖凝胶电泳显示400μmol.L-1ISA处理组细胞出现明显的梯形条带;RT-PCR及Western blot显示:随着ISA药物浓度的增加,survivin mRNA及蛋白表达逐渐减少(P<0.05),野生型p53mRNA及蛋白表达水平逐渐增加,各用药组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),并呈现浓度依赖关系;FCM结果显示随着ISA药物浓度的增加,活化Caspase-3的表达率分别为18.38%、26.93%、35.66%,明显高于对照组(11.23%,P<0.05)。结论ISA能明显诱导SH-SY5Y细胞凋亡,可能机制是抑制凋亡抑制蛋白(IAP)家族中的生存蛋白(survivin)表达继而增加活化Caspase-3水平来实现的,而这一过程可能与ISA上调野生型p53的表达有关。     

脂质体转染TRPM7 siRNA对Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞分泌炎症因子的影响

目的利用小干扰RNA(siRNA)抑制TRPM7基因的表达,研究TRPM7对Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞分泌炎症因子的影响。方法通过Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞构建阿尔采末病体外模型,MTT法测定Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞最佳作用浓度与时间点,将人工合成抑制TRPM7基因的siR-NA片段,通过脂质体LipofectamineTM2000转染到SH-SY5Y细胞内;RT-PCR检测TRPM7、NF-κB、TNF-α、IL-6 mRNA表达,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒的测定细胞上清乳酸脱氢酶(LDH)的含量;ELISA测定细胞上清中TNF-α、IL-6的含量。结果转染siRNA后SH-SY5Y细胞的TRPM7、NF-κB、TNF-α、IL-6 mRNA表达较模型组明显下降,细胞上清中TNF-α、IL-6、LDH的含量表达较模型组明显下降。结论应用siR-NA干扰靶向抑制TRPM7基因,可以下调TNF-α、IL-6等炎症因子的释放,这一过程可能是通过抑制NF-κB信号转导通路的激活,从而减少炎症因子的释放,进而减轻Aβ对SH-SY5Y细胞的毒性作用。     

黄芩苷对SH-SY5Y细胞损伤的Bcl-2和Bcl-xL mRNA基因表达的影响

目的 探讨黄芩苷对过氧化氢(H₂O₂)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的Bcl-2和Bcl-xL mRNA表达的影响. 方法 建立人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的体外H₂O₂损伤模型,采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度黄芩苷对SH-SY5Y细胞存活率的影响,采用Real-time PCR法检测各组细胞的Bcl-2和Bcl-xL表达水平的变化. 结果 50,100,200 μmol.L^-1黄芩苷组细胞存活率分别为130.4%,89.9%和60.9%,H₂O₂损伤组细胞存活率为33.9%,50,100 μmol.L^-1黄芩苷组与H₂O₂损伤组比较,差异有统计学意义(P<0.01). 50,100,200 μmol.L^-1黄芩苷组Bcl-2 mRNA表达量分别为(11.48±0.48),(7.37±1.57),(7.39±2.01),H₂O₂损伤组为(5.84±0.58);50,100,200 μmol.L-1黄芩苷组Bcl-xL mRNA表达量分别为(19.96±2.22),(11.36±3.94),(13.07±2.37),H₂O₂损伤组为(7.95±0.58),50 μmol.L^-1组Bcl-2 和Bcl-xL mRNA与H^₂O^₂损伤组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05). 结论 黄芩苷对H₂O₂诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用,可能与黄芩苷上调Bcl-2和Bcl-xL的表达而起到抗凋亡的作用有关.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对H_2O_2诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对过氧化氢(H2O2)诱导的SH-SY5Y神经细胞凋亡的保护作用。方法采用体外细胞培养的方法,建立SH-SY5Y神经细胞H2O2损伤模型。通过观察细胞形态,测定细胞存活率(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)活性,实时荧光定量(real-time)PCR检测细胞bax、bcl-2 mRNA表达的变化。结果同H2O2组比较,终浓度为50、100、150、200μmol.L-1的EGCG能减轻H2O2引起的SH-SY5Y神经细胞的损伤,且呈现剂量依赖趋势,能明显提高细胞的存活率,减少LDH的释放量,bax mR-NA表达下降,bcl-2 mRNA表达升高。结论 EGCG对H2O2诱导的SH-SYSY神经细胞损伤具有明显的保护作用。     

The influence of Schisandrin B on a model of Alzheimer’s disease using β-amyloid protein Aβ1-42-mediated damage in SH-SY5Y neuronal cell line and underlying mechanisms

Schisandrin B, an active substance, is derived from Chinese herb fruit Wuweizi, which exerts various pharmacological activities and has displayed significant beneficial effects in ameliorating Alzheimer’s disease (AD). The aim of this study was to further extend our examination for the use of schisandrin B extract in the potential treatment of AD effects by investigating DNA methylation (DNMT), known to be modified in this disease using SH-SY5Y neuronal cell line exposed to β-amyloid protein (Aβ_1-42). In particular, the purpose of this investigation was to examine alterations in mRNA and protein expression of DNMT. Data demonstrated that schisandrin B blocked Aβ_1-42-mediated injury in SH-SY5Y neuronal cell line as evidenced by a restoration of cellular morphology and cell viability to approximate control levels at the highest 10 μg/ml Schisandrin B. Incubation with Aβ_1-42 significantly decreased mRNA and protein expression of DNMT3A and DNMT1 in SH-SY5Y neuronal cell line. Incubation with Aβ_1-42 followed by 24 treatment with schisandrin B significantly inhibited the Aβ_1-42 -induced changes in mRNA and protein expression of DNMT3A and DNMT3B in a concentration-dependent manner. It is of interest that the mRNA expression of DNMT3A and DNMT1 were significantly higher than control. Data thus indicate schisandrin B was effective in inhibiting the actions of Aβ_1-42 on cell survival and morphology and that DNA methylation may be associated with the beneficial findings.     

蛋氨酸脑啡肽对神经母细胞瘤细胞生长周期的影响及其机制研究

目的：研究蛋氨酸脑啡肽（Met．ENK）对神经母细胞瘤细胞SH．SY5Y的生长抑制作用及细胞周期的抑制机制。方法：采用MTT法检测细胞生长抑制率;流式细胞术检测Met．ENK作用后肿瘤细胞周期变化;Real．timePCR法检测Met．ENK作用后细胞内P21,P53基因转录量变化;Westernblot法检测细胞内P21,P16。磷酸Rb蛋白表达量的变化情况。结果：MTT法结果显示,Met．ENK对SH．SY5Y细胞有生长抑制作用,在Met．ENK浓度为10-mol·L。时抑制率为40％;流式细胞术证实Met—ENK作用后大多数细胞被抑制于细胞周期的G0／G1期,该期细胞数由63．97％变为87．73％;JP21的基因转录量是用药前的3倍,P53基因转录量是用药前的5倍;咒1,P16蛋白表达量明显增加,磷酸Rb蛋白表达量明显降低。结论：Met．ENK可以通过上调细胞周期蛋白依靠性激酶抑制因子虎1及抑癌基因P53的转录和蛋白表达量,下调Rb蛋白的磷酸化水平将SH—SY5Y细胞的增殖抑制于生长周期的G0／G1期,表明Met．ENK的G0／G1期特异性周期抑瘤作用可以通过调节该途径产生。     

醒脑益智组分中药对β-淀粉样蛋白（1-40）诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的：探讨醒脑益智组分中药对β-淀粉样蛋白（Aβ_1-40）诱导SH-SY5Y细胞损伤的影响。方法：以SH-SY5Y细胞体外培养为研究对象,Aβ_1-40损伤细胞建立模型,石杉碱甲（6 μg·mL^-1）和不同浓度（70,35,17.5 μg·mL^-1）药物干预,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞存活率;细胞膜损伤测定乳酸脱氢酶（LDH）漏出率;酶联免疫吸附法检测脑源性神经营养因子（BDNF）和肿瘤坏死因子（TNF-α）含量;Hochest 33258染色观察药物对损伤细胞的作用;AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果：醒脑益智组分中药能明显改善Aβ_1-40（15 μmol·L^-1）诱导的神经细胞存活率,降低LDH漏出率,改善细胞内BDNF含量,降低TNF-α水平,并抑制细胞的凋亡。结论：醒脑益智组分中药可以改善Aβ_1-40诱导的SH-SY5Y细胞损伤,并抑制其凋亡,其机制可能与改善BDNF水平,调节免疫及相关凋亡基因的表达有关。     

甲基苯丙胺对SH-SY5Y细胞的毒性作用及对α-核突触蛋白表达的影响

目的:探讨甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)对SH-SY5Y细胞的毒性作用和对α-核突触蛋白(α-synuclein,α-SN)表达的影响,为研究α-SN在METH神经毒性机制中的作用奠定基础。方法:分别用浓度0、0.5、1.5、2.5、3.5、4.5 mmol.L-1的METH处理SH-SY5Y细胞24 h,倒置显微镜下观察细胞形态变化;透射电镜观察细胞超微结构;CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞术分析细胞凋亡率;实时荧光定量PCR和Western Blot分别检测α-SN基因和蛋白水平的表达变化。结果:以0 mmol.L-1为对照组,0.5-4.5 mmol.L-1METH处理的SH-SY5Y细胞镜下可见胞体皱缩变圆,突起变短、断裂、消失。电镜显示,METH处理的细胞内可见包涵体和自噬小体。0.5 mmol.L-1处理组与对照组比较,细胞存活率无显著性差异(P=0.274),其他浓度处理组与对照组相比均有显著性差异(P<0.001)。细胞凋亡率随METH浓度增加而递增,与对照组相比均有显著性差异(P<0.001)。与对照组比较,0.5 mmol.L-1处理组α-SN-mRNA的表达量没有显著差异(P=0.936),其他浓度处理组α-SN-mRNA均显著性上升(P<0.001),且α-SN-mRNA表达量随METH浓度增加而逐步上升。α-SN蛋白的表达也随METH浓度增加而递增。结论:METH对SH-SY5Y细胞有毒性作用并可刺激细胞中α-SN基因和蛋白水平的高表达。细胞毒性作用和α-SN的表达均随METH浓度的增加而递增。