鸟氨酸脱羧酶活性微量测定法

鸟氨酸脱羧酶(ODC,EC4,1,1,17)是多胺生物合成的限速酶,多胺在生物大分子的合成及细胞生长调节中起重要作用。ODC 活性在快速生长的细胞、再生组织及恶性增生的细胞中都有明显增加。已有资料证明促癌作用与 ODC 的诱导有关,并认为 ODC 活性测定可作为鉴定促癌物、筛选抗癌药及研究促     

抗多胺代谢与HL-60细胞c-myc、c-fos、c-Ha-ras及ODC基因的表达

用核酸分子杂交技术研究多胺生物合成限速酶L-鸟氨酸脱羧酶(ODC)的不可逆抑制剂—二氟甲基鸟氨酸(DFMO)对HL-60细胞c-myc、c-fos、c-Ha-ras癌基因及ODC基因表达的影响。结果表明DFMO处理的HL-60细胞中,c-myc癌基因表达减少,c-fos基因表达水平上升,而DFMO对ODC基因表达无明显影响。此外,本文证实了加入外源性腐胺能阻止DFMO引起的上述变化,表明DFMO对HL-60细胞基因表达的影响是其抑制细胞内多胺生物合成所致。     

鸟氨酸脱羧酶与女性常见恶性肿瘤

鸟氨酸脱羧酶(Ornithine decarboxylase,ODC)是调控细胞内多胺生物合成的限速酶,参与胚胎发育、细胞周期、细胞增殖分化等重要的生理过程,同时也是肿瘤细胞的快速增殖所必须,是目前研究较多的抗肿瘤治疗的潜在分子靶点之一。本文简要综述ODC与女性常见恶性肿瘤关系的研究进展。     

健脾益气中药的小肠隐窝细胞药理靶点探讨

综述近年来开展IEC-6小肠隐窝细胞药理研究的成果。研究工作以隐窝细胞生理学研究进展作为基础,建立IEC-6细胞药理实验模型,开展健脾益气中药的肠上皮干细胞药理研究。实验采用噻唑蓝比色法(MTT)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、高效液相色谱、免疫荧光标记等方法,观察健脾益气中药对IEC-6细胞增殖、迁移及分化的影响并观察其对绒毛蛋白、二价金属转运蛋白、白细胞介素6(IL-6)和鸟氨酸脱羧酶(ODC)的表达及对ODC活性及腐胺含量的影响,结果表明党参、白术、黄芪、甘草化学提取组分通过调节细胞内ODC活性和多胺生成,对IEC-6细胞增殖、迁移、分化、吸收功能起到促进或抑制作用。提示小肠隐窝细胞是健脾益气中药的主要药理作用靶点。     

鸟氨酸脱羧酶与细胞增殖

鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)为多胺生物合成途径中的第一个限速酶(催化合成多胺的第一步反应,即催化L-鸟氨酸脱羧生成腐胺),具有超常转变率和对于刺激的迅速反应性。而多胺广泛存在于生物体的各种细胞和组织中,是一种重要的代谢调控物质,它可直接与DNA相互作用,调节DNA构象,并参与RNA及蛋白质的合成,与细胞增殖、分化密切相关。已有研究表明,哺乳动物细胞增殖体现出完全的多胺依赖性。     

鸟氨酸脱羧酶与胃癌

<正>在正常细胞周期中,细胞的生长、分化均受到某些酶的调控.鸟氨酸脱羧酶(Ornithime decarboxylase,ODC)广泛分布在动物体内,它是多胺(Polyamines)合成的关键酶.而多胺能够刺激DNA、RNA和蛋白质的合成,并且参与维持细胞膜及细胞骨架结构的稳定性.凡生长旺盛或迅速增生的组织,其ODC的活性和多胺的含量均增加.近年来研究发现ODC与肿瘤的关系十分密切.现就其与幽门螺杆菌感染及胃癌的关系概述如下.1 ODC的生物学作用1.1 ODC与多胺合成 ODC是一个胞浆酶,是以磷酸吡哆醛为辅因子的氨基酸脱羧酶.它与S一腺苷蛋氨酸脱羧酶(SAMDC)和精脒、精胺合成酶(spermidine/spermine synthase)共同调控多胺(包括腐胺、精脒和精胺)的合成,其中ODC被公认为是多胺合成的第一个酶     

鸟氨酸脱羧酶与结直肠癌关系的研究进展

<正>多胺是调节细胞生长、发育和促进组织创伤愈合的细胞信号分子,鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)是多胺代谢过程中的第一限速酶,催化鸟氨酸脱羧生成腐胺,研究显示ODC活性和多胺合成在多种上皮癌中增加,其中包括皮肤癌、前列腺癌和结直肠癌。结直肠癌中K-ras基因突变和腺瘤性息肉病基因的突变诱导ODC基因表达,抑制多胺的代谢,ODC活性的增加与结直肠癌的发生与发展关系密切。在人类ODC     

茶多酚对成纤维细胞L929中鸟氨酸脱羧酶的抑制作用

目的:探讨茶多酚对成纤维细胞L929的增殖抑制作用及其作用机制。方法:体外培养小鼠成纤维细胞L929,加入茶多酚、二氟甲基鸟氨酸(DFMO)作用于细胞。用MTT法观察茶多酚对细胞增殖抑制作用,利用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞技术检测细胞的调亡,RT鄄PCR技术检测鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因的表达。结果:20μmol/L的茶多酚即能明显抑制L929细胞的增殖,促进细胞的调亡,其半数有效浓度为200μmol/L。RT鄄PCR显示细胞中ODCmRNA表达明显下降(P<0.05)。200μmol/L的茶多酚的抑制效果与5mmol/L的DFMO的作用效果相似。二者共同作用于细胞时,对ODC的活性抑制作用更强,抑制效果更佳。结论:茶多酚能通过抑制细胞中ODC的表达来抑制细胞的增殖。     

多胺代谢与肿瘤治疗

多胺代谢在肿瘤发生发展中起重要作用。鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S 腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC)是多胺生物合成的两个关键酶。ODC和SAMDC的抑制剂治疗肿瘤的作用,在体外实验和动物水平的研究中已获得认可,但是,在临床实验中却因其毒副作用而遭受质疑。近年的研究发现,肿瘤组织中ODC和SAMDC基因表达水平增加,而沉默二者的基因表达,则可抑制肿瘤的增殖和侵袭活性,这可能为以多胺代谢为靶标探讨肿瘤防治技术的研究提供了新的思路。本文概述了多胺代谢与肿瘤治疗关系的研究进展。     

二氟甲基鸟氨酸对人肺癌细胞生长特性的影响及其相关基因ALT-04ag表达调控

目的研究抑制多胺生物合成对人肺癌细胞生长特性的影响及该影响与肺癌相关基因ALT-04ag表达调控的关系。方法以细胞形态观察、生长曲线、流式细胞分析、DNA电泳图谱等方法,研究鸟氨酸脱羧酶(ODC)不可逆抑制剂二氟甲基鸟氨酸(DFMO)对人肺鳞癌细胞L78生长特性的影响;根据人肺癌相关抗原ALT-04ag基因片段序列设计引物进行RT-PCR及用抗相关抗原单抗ALT-04进行免疫组化,分别检测ALT-04ag相关基因的mRNA及蛋白表达。结果5mmol/LDFMO作用人肺鳞癌细胞L785d,引起ALT-04ag基因mRNA和蛋白表达下调,并能明显抑制细胞生长、诱导细胞凋亡。同时加入外源性腐胺(Pu)可阻止上述基因及细胞形态的变化。结论抑制多胺生物合成引起的L78细胞生长抑制和细胞凋亡的诱导与肺癌相关抗原基因表达的下调有关。     

高效液相色谱法测定肝组织鸟氨酸脱羧酶活性

目的　建立肝组织鸟氨酸脱羧酶 (ODC)活性的高效液相色谱测定方法。方法　高效液相色谱法测定 3 0 min内 ODC催化产生的腐胺。结果　腐胺在 1.0 74～ 68.746μm ol· L - 1时线性关系良好。最低检测量为 0 .0 4nmol,测定结果的重现性好 ,变异系数为 6.84%。部分肝切除后6h,余留肝组织 ODC活性明显高于正常对照组 (P<0 .0 1)。结论　建立了可靠的、灵敏度较高的ODC测定方法     

骨桥蛋白对大鼠小肠隐窝上皮细胞生物学性状的影响

 目的  观察骨桥蛋白(osteopontin,OPN)对大鼠小肠隐窝上皮细胞(intestinal epithelial cells-6,IEC-6)分化、增殖、迁移等生物学性状的影响。方法  分别采用相差显微镜、细胞贴壁率检测、噻唑蓝比色法、划痕实验、Western blot和ELISA法,观察不同浓度OPN对IEC-6细胞增殖、分化和迁移能力的影响,并从鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)表达变化和炎性反应角度,探讨其可能的作用机制。结果  经不同浓度的OPN处理后,IEC-6细胞形态、贴壁率和增殖率均未见明显变化。OPN能促进IEC 6细胞的移行功能,且OPN浓度越高细胞迁移速度越快。与低浓度或高浓度OPN相比,适当浓度的OPN能促进IEC-6细胞内ODC1蛋白表达(0.1 μg/mL和1.0 μg/mL OPN)和细胞内炎性反应(0.05 μg/mL OPN)。结论  OPN能促进IEC-6细胞的移行功能,从而促进损伤黏膜早期修复,其机制可能与特定浓度的OPN能促进细胞内ODC1蛋白的表达和损伤IEC-6细胞的炎性反应有关。     

鸟氨酸脱羧酶表达水平与溃疡性结肠炎病变时相的关系

【目的】观察鸟氨酸脱羧酶(ODC)表达水平与不同时相溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠结肠病理变化的关系。【方法】Wistar大鼠60只,随机分为正常组(12只),模型1、2、3组(各16只),以90 mg/kg三硝基苯磺酸(TNBS)结肠注射复制UC模型,分别于实验第10、20、30天处死模型1、2、3组大鼠,正常组于第30天处死;分别对各组大鼠结肠进行大体和组织病理学评分,并采用免疫组化法检测结肠ODC的表达。【结果】随着实验周期的延长,模型大鼠结肠病变从急性炎症、组织坏死向慢性炎症、溃疡修复进展,ODC在正常结肠粘膜低表达,在溃疡形成、组织坏死阶段的表达略高于正常组,在溃疡修复、细胞大量增生时ODC表达明显增强,在病灶修复处于稳定阶段时ODC表达有所回落。【结论】不同时相UC模型大鼠结肠ODC表达变化特点与结肠病理变化特点相符。     

鸟氨酸脱羧酶基因沉默对子宫内膜癌细胞Ishikawa的影响

目的利用RNA干扰技术,观察鸟氨酸脱羧酶（ornithine decarboxylase,ODC）基因在子宫内膜癌Ishikawa细胞的沉默效应及对Ishikawa细胞增殖周期的影响。方法设计合成以鸟氨酸脱羧酶基因为靶向目标的siRNA序列质粒,利用脂质体介导的方法将质粒转染至子宫内膜癌Ishikawa细胞,实验分三组：Ishikawa组,pSUPER-EGFP组,pSUPER-EGFP-ODC组。用Real-time PCR和Western blot检测ODC的表达情况。采用MTT和流式细胞术来检测ODC基因沉默对Ishikawa细胞生长的影响。结果 Real-time PCR和Western显示pSUPER-EGFP-ODC组细胞ODC mRNA和蛋白质表达水平明显下降。MTT示pSUPER-EGFP-ODC能显著抑制Ishikawa细胞的增殖活性,与Ishikawa相比,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。流式细胞术结果示pSUPER-EGFP-ODC能显著阻滞Ishikawa细胞于G0/G1期,S期细胞数相应减少,并诱导细胞凋亡,与Ishikawa相比,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。结论转染靶向ODC基因的siRNA序列质粒能够下调ODC基因的表达,抑制人子宫内膜癌细胞Ishikawa在体外的增殖,阻滞Ishikawa细胞于G0/G1期并诱导细胞凋亡。     

ODC与肿瘤关系的研究

肿瘤发病率日渐增高，严重影响和威胁着人们生命。其死亡率在我国是各种疾病死亡率之冠。肿瘤发生原因，众说纷云，但有一点已清楚，组织中鸟氨酸脱按酶（ornithinede-carboxylase，ODC）活性升高。ODC广泛分布于人体组织内，其催化鸟氨酸脱羧生成腐胺，是合成多肢的限速酶。凡生长旺盛的组织（如胚胎，再生肝及肿瘤组织，尤其是恶性肿瘤）ODC的活性升高。组织正常人血清中ODC活性是一定的，只有在上述情况下，此酶活性才升高。因此，测定血清中ODC活性对肿瘤的早期诊断，尤其是对正常人进行健康普查有着十分重要的意义。测定原理：1…     

盐酸小檗碱对结肠癌HT29细胞鸟氨酸脱羧酶表达的影响

[目的]观察盐酸小檗碱对结肠癌HT29细胞鸟氨酸脱羧酶(ODC)表达的影响.[方法]以不同浓度的盐酸小檗碱作用于HT29细胞72 h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖抑制,采用荧光定量PCR法及Western blot方法分别检测ODC mRNA及蛋白的表达水平.[结果]盐酸小檗碱可抑制HT29细胞增殖,剂量依赖性地显著下调ODC蛋白表达(P＜0.05或P＜0.01),但对ODCmRNA表达无显著影响.[结论]盐酸小檗碱具有抑制HT29细胞的增殖作用,其机制可能与下调ODC蛋白表达相关.     

前列腺非雄激素依赖启动子介导的双反义腺病毒的制备及组织特异性检测

目的  制备前列腺非雄激素依赖启动子（PSES）介导的鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)双反义腺病毒。方法  构建pShuttle-Basic-PSES AdoMetDC-ODC-PolyA穿梭载体,并与载体pAdPL进行体外重组,包装成重组腺病毒。将重组腺病毒转染至前列腺癌、直肠癌等癌细胞中,噻唑兰比色（MTT）法观察其对细胞增殖的影响,Western Blot检测重组腺病毒对细胞中ODC和AdoMetDC表达的抑制作用。结果  成功构建了前列腺特异的ODC和AdoMetDC双反义RNA表达载体,并包装制备出能特异的在前列腺细胞中表达产生ODC和AdoMetDC反义RNA的重组腺病毒。该重组腺病毒具有前列腺组织特异性。结论  构建的前列腺非雄激素依赖启动子介导的ODC、AdoMetDC双反义腺病毒具有组织特异性。     

过表达ODC抑制氧化应激诱导大鼠心肌细胞凋亡的研究

目的构建过表达鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因慢病毒载体,并研究其对氧化应激诱导大鼠H9C2心肌细胞凋亡的影响。方法构建大鼠ODC基因pHIV-ODC过表达质粒,与包装质粒psPAX2、pMD2G共转染293FT细胞,检测其侵染效率;包装慢病毒并侵染H9C2心肌细胞;72 h后观察其侵染效率,RT-PCR法检测细胞ODC mRNA的表达,利用CCK-8、Hochest33258染色检测ODC对H2O2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响。结果酶切及测序鉴定ODC序列正确插入慢病毒过表达载体。侵染H9C2细胞72 h后ODC mRNA水平较阴性慢病毒感染组显著升高。过表达ODC能抑制H2O2诱导的细胞活力下降,减轻H2O2诱导的心肌细胞凋亡,与H2O2组比较差异均有统计学意义(P<0.001)。结论成功构建的过表达ODC慢病毒,上调H9C2细胞中ODC的表达,过表达ODC能显著抑制氧化应激诱导的H9C2心肌细胞凋亡。     

rAd-ODC/Ex3as对前列腺癌PC-3细胞抑制作用的研究

目的:探讨重组腺病毒rAd鄄ODC/Ex3as对前列腺癌细胞的体外抑制作用及对前列腺癌的作用机制。方法:利用报告基因GFP测定病毒感染效率,用WesternBlot检测rAd鄄ODC/Ex3as是否抑制鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因的表达,采用MTT法、Matrigeal侵袭实验观察rAd鄄ODC/Ex3as对前列腺癌细胞PC鄄3恶性表型的影响,并用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果:当MOI为50时,腺病毒感染PC鄄3细胞的效率约为70%,WesternBlot证实rAd鄄ODC/Ex3as可抑制ODC基因的表达。rAd鄄ODC/Ex3as以20MOI感染PC鄄3细胞可明显抑制其生长增殖和侵袭性穴P<0.01雪,流式细胞仪检测结果证实rAd鄄ODC/Ex3as可引起PC鄄3细胞G1期阻滞,但并未引起凋亡。结论:rAd鄄ODC/Ex3as在体外能有效地干扰ODC基因的表达,并可抑制前列腺癌细胞PC鄄3的生长与侵袭,诱导其发生G1期阻滞,有望成为治疗前列腺癌的基因药物。     

多胺生物合成抑制剂DFMO抗人大肠癌的实验研究(论著摘要)

多胺(腐胺、精脒、精胺等)在细胞增殖分化过程中起重要作用,二氟甲基鸟氨酸(DFMO)是人工合成的鸟氨酸脱羧酶抑制剂,在体外可通过阻断多胺生物合成而抑制肿瘤细胞增殖。本研究观察DFMO对二株国内建立的大肠癌细胞系的生长抑制作用。观察到: