三焦针法对快速老化模型小鼠海马神经元细胞骨架重组相关蛋白的影响

目的观察三焦针法对快速老化模型小鼠（SAMP8）海马神经元细胞骨架重组相关蛋白的影响，探讨针刺治疗阿尔茨海默氏病（AD）的可能细胞生物学机制。方法以7月龄SAMP8为AD动物模型，随机分为对照组、针刺组和非穴组，每组各20只。针刺组给予三焦针法（取穴：膻中、中脘、气海、血海、足三里），非穴组以双侧胁肋下非经非穴点针刺处理，1次/日，连续6日，第7日休息，连续干预4周。采用Morris水迷宫隐蔽平台试验检测小鼠逃避潜伏期，采用空间探索实验检测小鼠原平台象限停留时间。提取小鼠海马组织脂筏，采用液质联用蛋白质组学方法检测各组小鼠海马脂筏蛋白，分析其中募集的细胞骨架相关蛋白的差异表达；采用免疫荧光共定位法检测各组β-tubulin及Cdc42表达；采用Western Blot法检测各组β-tubulin、β-actin、neurofibrillary蛋白表达。结果三组小鼠5天逃避潜伏期逐渐缩短（F=8.61， P=0.0048）。针刺组逃避潜伏期与对照组和非穴组均有显著差异（P<0.01）。与对照组和非穴组比较，针刺组第3天开始逃避潜伏期时间差异有统计学意义（P<0.01）。针刺组原平台象限停留时间［（19.14±4.32）s］明显高于对照组［（11.38±3.35）s］和非穴组［（13.51±2.46）s］，差异有统计学意义（P<0.01）。与对照组比较，针刺组与非穴组海马脂筏募集的蛋白在种类和数量上存在差异。针刺组脂筏募集的细胞骨架相关蛋白和小 G 蛋白明显多于非穴组，且表现出同步增多的特点；免疫荧光共定位提示，针刺组β-tubulin与Cdc42在细胞核周以及轴突部位高度富集；与对照组比较，针刺对3种细胞骨架蛋白表达量的影响未显示统计学意义。结论三焦针法可调节海马神经元细胞骨架重组，这可能是其治疗AD的重要细胞生物学机制之一。     

电针对SAMP8小鼠海马线粒体呼吸链酶复合体活性的影响

目的观察电针对SAMP8小鼠海马线粒体呼吸链酶复合体活性的影响,从线粒体角度探讨电针治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法选取8月龄SAMP8小鼠16只,随机分为模型组8只,电针组8只,另选取8只8月龄的SAMR1小鼠为对照组,疗程结束后,采用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力,分光光度法检测海马线粒体呼吸链酶复合体的活性。结果模型组与对照组相比,模型组鼠平均逃避潜伏期明显延长,原平台象限停留时间缩短,海马线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ活性降低(P<0.01,P<0.05);电针组与模型组比较,电针组平均逃避潜伏期缩短,原平台象限停留时间延长,海马线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ活性明显升高(P<0.01,P<0.05)。结论电针治疗AD的可能机制是提高海马线粒体呼吸链酶复合体活性,改善线粒体功能。     

四君子汤对脾气虚证大鼠脑肠CaM/CaMKⅡ干预效应研究

目的:观察脾气虚证大鼠脑肠中CaM信号通路关键基因的时相性动态表达及四君子汤干预作用。方法:Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组(14,21,28 d)、四君子汤组(14,21,28 d),除对照组外,其余各组均以苦寒破气法(大黄枳实厚朴制剂液7.5 g·kg^-1·d^-1)、游泳力竭法双因素法复制脾气虚证模型,各四君子汤组造模7 d后,继续造模的同时,以四君子汤20 g·kg^-1·d^-1灌胃进行干预治疗,采用免疫组织化学方法、蛋白免疫印迹技术分别检测大鼠海马、小肠在不同时间阶段CaM信号转导通路关键基因CaM/CaMKⅡ表达水平,同时检测以益气健脾法为指导的四君子汤对脾气虚证大鼠的干预效应,并分析其作用机制。结果:脾气虚证大鼠相对于正常大鼠,小肠组织中CaM/CaMKⅡ表达升高,海马组织中CaM/CaMKⅡ表达降低(P<0.05,P<0.01)。四君子汤治疗后大鼠相对于脾气虚证大鼠,小肠组织中CaM/CaMKⅡ表达明显降低,海马组织中CaM/CaMKⅡ表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:脾气虚证证候的形成有可能与CaM/CaMKⅡ在小肠组织中的高表达、海马组织中的低表达有关,四君子汤对脾气虚证的治疗作用有可能是通过降低小肠组织并升高海马组织中CaM/CaMKⅡ的表达来实现的。     

早期电针干预对SAMP8小鼠学习记忆能力和海马磷酸化Tau蛋白水平的影响

目的:探讨早期电针"百会""大椎""肾俞"穴对快速老化小鼠(SAMP8小鼠)学习记忆能力和海马磷酸化Tau蛋白表达的影响,为临床电针治疗阿尔茨海默病(AD)时间点的选择提供参考。方法:将36只3月龄SAMP8小鼠随机分为模型组、3月龄电针组、9月龄电针组,每组12只;以12只同龄正常老化SAMR1小鼠作为空白对照组。3月龄电针组及9月龄电针组分别于小鼠3月龄及9月龄时予电针"百会""大椎""肾俞"穴治疗(连续波,2 Hz,1.5~2 mA),20 min/次,每日1次,8 d为一疗程,疗程间隔2 d,共治疗3个疗程。每组小鼠在水迷宫检测学习记忆能力结束后统一于10月龄取材;免疫组织化学法、免疫蛋白印迹法(Western blot)检测小鼠海马磷酸化Tau蛋白的表达,实时荧光定量PCR法检测小鼠海马Tau mRNA表达。结果:与空白对照组比较,模型组小鼠逃避潜伏期明显延长(P<0.01),原平台象限停留时间较短,跨越平台次数减少(P<0.01),海马磷酸化Tau蛋白及Tau mRNA表达较高(P<0.01);与模型组比较,3月龄电针组及9月龄电针组小鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05),原平台象限停留时间延长,跨越平台次数增多(P<0.05),小鼠海马磷酸化Tau蛋白及Tau mRNA表达降低(P<0.05);与9月龄电针组比较,3月龄电针组小鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05),原平台象限停留时间延长,跨越平台次数增多(P<0.05),海马磷酸化Tau蛋白及Tau mRNA表达降低(P<0.01)。结论:早期电针干预能更有效地改善SAMP8小鼠学习记忆能力并降低其海马磷酸化Tau蛋白水平。     

“补肾活血”针刺法对老年性痴呆模型SAMP8小鼠学习记忆能力和脑组织AChE活性的影响

目的观察“补肾活血”针刺法对老年痴呆模型SAMP8小鼠学习记忆能力和脑组织AChE活性的影响。方法选取8月龄SAMP8小鼠20只,随机分为针刺组10只,SAMP8空白对照组10只,另选取10只8月龄的SAMR1小鼠为SAMR1对照组。疗程结束后评定疗效,测各组小鼠的学习记忆能力及脑组织中AchE含量。结果与SAMR1组比较,SAMP8空白对照组小鼠在隐蔽平台试验中表现出明显的学习记忆障碍,逃避潜伏期显著延长（P〈0．05）,针刺组逃避潜伏期较SAMP8空白对照组显著缩短（P〈0．05）;探索试验巾针刺组原平台象限的停留时间和穿越原平台次数明显多于SAMP8空白对照组（P〈0．05）,与SAMR1对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;针刺组针刺后脑组织AChE活性较SAMP8空白对照组显著性降低（P〈0．05）,与SAMR1对照组比较差异无统计学差异（P〉0．05）。结论“补肾活血”针刺法能有效提高AD小鼠学习记忆能力,这种作用可能是通过抑制脑组织AChE活性实现的。     

电针对SAMP8小鼠海马区补体及小胶质细胞吞噬能力的作用机制

目的:观察电针对SAMP8小鼠海马区离子钙结合衔接分子1(Iba-1)、补体C1q、分化簇68(CD68)表达水平的影响,探讨电针治疗阿尔茨海默病的作用机制。方法:SAMP8小鼠随机分为模型组与电针组,每组12只,并以12只同月龄SAMR1小鼠作为对照组。电针组予“百会”“大椎”“肾俞”电针治疗,20 min/次,1次/d, 8 d为1个疗程,共干预3个疗程,疗程之间间隔2 d。采用Morris水迷宫实验观察小鼠学习记忆能力,免疫组织化学法检测海马CA1区Iba-1、CD68蛋白阳性表达水平,Western blot法和实时荧光定量PCR法检测海马组织Iba-1、C1q、CD68蛋白和mRNA的表达水平。结果:与对照组比较,模型组平均逃避潜伏期延长(P<0.01),原平台象限停留时间缩短、跨越原平台的次数减少(P<0.01);与模型组比较,电针组平均逃避潜伏期缩短(P<0.05,P<0.01),原平台象限停留时间延长、跨越原平台次数增加(P<0.01)。与对照组比较,模型组海马CA1区Iba-1、CD68蛋白阳性表达及海马组织Iba-1、C1q、CD68蛋...     

针刺调控NLRC5抑制NF-κB通路减轻SAMP8小鼠脑内神经炎症反应的研究

[目的]观察针刺调控NLRC5抑制核转录因子-κB(NF-κB)通路减轻SAMP8脑内神经炎症反应的作用。[方法]将7月龄雄性快速老化鼠SAMP8及其同源正常对照小鼠SAMR1分为SAMR1组、SAMP8组和SAMP8针刺组。针刺组予以针刺治疗,采用“调神益智”针法进行治疗,取穴为水沟、内关和三阴交;针刺每日1次,持续30 d。采用Morris水迷宫检测认知能力;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测海马内p65、NF-κB抑制蛋白激酶(IκK)、NLRC5 mRNA及蛋白表达;酶联免疫吸附(ELISA)法检测海马内白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。[结果]与SAMR1组比较,SAMP8小鼠学习记忆功能明显受损,表现为在隐蔽及反向平台实验中逃避潜伏期较长(P<0.05);搜索平台所用策略较为僵化;在空间探索实验中,首次穿越原平台时间明显较长,穿越原平台次数较少,中环区域停留时间百分比较小(P<0.05)。脑内p-IκK、p-p65 mRNA及蛋白表达上升,而NLRC5 mRNA及蛋白表达下降;海马内IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著增高(P<0.01)。针刺治疗后,针刺组在隐蔽平台及反向平台实验中逃避潜伏期较SAMP8组明显缩短(P<0.05),且在空间探索实验中,首次穿越原平台时间、穿越原平台次数、中环区域停留时间百分比均明显改善(P<0.05)。针刺能明显下调SAMP8脑内p-IκK、p-p65 mRNA及蛋白表达,而提高NLRC5 mRNA及蛋白表达。针刺能够降低SAMP8海马内上述炎症因子水平,特别是IL-6降低明显。[结论]SAMP8鼠脑内存在炎症反应激活现象,针刺通过提高NLRC5来抑制NF-κB活化,减少炎症因子释放,降低脑内炎症反应,从而改善神经元存活微环境,进而改善SAMP8小鼠的认知障碍。     

脑还丹对快速老化小鼠SAMP/8学习记忆能力及海马APP、Pin1、HMGB1mRNA表达的影响

目的: 观察脑还丹对快速老化(SAMP/8)小鼠学习记忆能力及海马β-淀粉样蛋白前体蛋白(APP)、肽基脯氨酰顺反异构酶(Pin1)与高迁移率族蛋白Bl(HMGB1)mRNA表达的影响,探讨脑还丹防治阿尔茨海默病(AD)的作用机制。 方法: 选用6月龄雄性SAMP/8小鼠 共30只,随机分为脑还丹高、低剂量组和模型组,另选用6月龄SAMP/1小鼠10只为正常对照组。高、低剂量组分别给予脑还丹84, 21 g·kg^-1ig;模型组、空白组给予双蒸水10 mL·kg^-1,1次/d,连续8周。用Morris水迷宫方法测试小鼠的定位航行和空间探索能力,测试后每组取8只小鼠断头处死,无菌条件下剥出全脑,小心分离海马组织,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测海马组织中APP,Pin1,HMGB1 mRNA表达。 结果: 6月龄SAMP/8雄鼠的学习记忆能力明显低于同月龄SAMR/1雄鼠,表现为逃避潜伏期从第2天起显著延长,原平台象限停留时间缩短。脑还丹治疗8周后,SAMP/8小鼠逃避潜伏期明显缩短(P<0.05)。SAMR/1小鼠和用药各组小鼠的记忆保持能力比SAMP/8小鼠强,尤其以脑还丹高剂量组更明显(P<0.05)。与正常组比较,模型组APP mRNA相对表达量上调;与模型组比较,脑还丹高、低剂量组APP mRNA表达下调(P<0.05),高剂量组APP mRNA表达明显低于低剂量组(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组Pin1 mRNA表达下调;与模型组比较,脑还丹高、低剂量组Pin1 mRNA表达上调(P<0.05),高剂量组Pin1 mRNA表达显著低于低剂量组(P<0.05);与正常组比较,模型组HMGB1 mRNA表达上调;与模型组比较,脑还丹高、低剂量组HMGB1 mRNA表达下调(P<0.05),高剂量组HMGB1 mRNA表达明显低于低剂量组(P<0.05)。 结论: 脑还丹治疗8周可改善SAMP/8小鼠的学习能力和记忆缺损。脑还丹可能通过下调SAMP/8小鼠APP,HMGB1 mRNA的表达,上调Pinl mRNA表达,从源头上阻断老年斑及神经元纤维缠结的形成,这可能是脑还丹防治AD的主要作用点之一。     

基于CaMKⅡδ-RIPK1/RIPK3-MLKL通路的黄芪-丹参配伍对缺氧/复氧诱导的H9C2细胞坏死性凋亡的影响

目的 观察黄芪-丹参配伍对缺氧/复氧诱导的H9C2心肌细胞坏死性凋亡的影响，基于CaMKⅡδ-RIPK1/RIPK3-MLKL通路探讨其作用机制。方法 体外培养H9C2细胞，建立缺氧/复氧模型。将细胞分为对照组、模型组、黄芪丹参+激活剂（油酸）组、黄芪丹参组和抑制剂（KN-93磷酸盐）组，分别于相应培养基培养。试剂盒检测细胞上清液乳酸脱氢酶（LDH）水平，流式细胞术检测细胞凋亡，RT-qPCR和Western blot检测钙调蛋白激酶（CaMK）Ⅱδ、受体相互作用蛋白激酶（RIPK）1、RIPK3、混合系激酶区域样蛋白（MLKL）mRNA和蛋白表达。结果 与对照组比较，模型组细胞上清液LDH水平显著升高（P<0.01），细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,CaMKⅡδ、RIPK1、RIPK3和MLKL mRNA和蛋白表达显著升高（P<0.01）；与模型组比较，黄芪丹参组细胞上清液LDH水平显著降低（P<0.01），细胞凋亡率显著降低（P<0.01）,CaMKⅡδ、RIPK1、RIPK3和MLKL mRNA和蛋白表达显著降低（P<0.05,P<0...     

丹参-川芎药对干预大鼠血管性痴呆作用机制

目的:研究丹参-川芎药对干预血管性痴呆大鼠学习记忆能力的机制,及对海马神经元内的[Ca²⁺]i、CaM、CaMPKⅡ活性的影响。方法:采用反复夹闭颈动脉、注射硝普钠降压、单侧永久性结扎颈动脉技术建立模型,采用水迷宫定位航行试验和空间探索试验测试大鼠在造模前、造模后、干预后的学习记忆能力,观察VD大鼠海马神经细胞[Ca²⁺]i变化特征,检测海马组织中CaM、CaMPKⅡ的mRNA水平。结果:丹参-川芎高剂量组与尼莫地平组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。丹参-川芎高剂量组穿越原平台区次数与尼莫地平组比较,差异无统计学意义(P>0.05),但优于丹参-川芎低剂量组(P<0.01)。模型组[Ca²⁺]i荧光强度高于其他各组(均P<0.01),而尼莫地平组、丹参-川芎高剂量组的[Ca²⁺]i荧光强度比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。模型组的CaM mRNA、CaMPKⅡmRNA含量低于其他各组(均P<0.01),丹参-川芎高剂量组与尼莫地平组比较,差异无统计...     

七宝美髯口服液对小鼠脑组织SOD活力及羰基化蛋白含量的影响

目的观察七宝美髯口服液(制何首乌、当归、补骨脂等)对SAMP8小鼠学习记忆功能、海马组织病理形态及SOD活力、羰基化蛋白含有量的影响。方法 27只SAMP8小鼠随机均分为模型对照组、盐酸多奈哌齐组及七宝美髯口服液组,另取9只SAMR1小鼠作为正常对照组,连续灌胃60 d,在给药第56天进行避暗训练,5 d后测定学习记忆能力;HE染色观察病理形态;ELISA法检测脑组织中SOD活力和羰基化蛋白含有量。结果与模型对照组比较,七宝美髯口服液组小鼠的逃避潜伏期显著延长,错误次数明显降低(P0.01),海马组织的病理形态显著改善,SOD活力显著升高,羰基化蛋白含有量明显降低(P0.01)。结论七宝美髯口服液能改善SAMP8小鼠的学习记忆功能,减轻海马组织的退行性病变程度。     

补肾活血针刺法对阿尔茨海默病模型小鼠海马脑红蛋白表达的影响

目的探讨补肾活血针刺法对阿尔茨海默病模型快速老化小鼠P8(SAMP8)学习记忆能力的影响及作用机制。方法将20只5月龄雄性SAMP8小鼠随机分为针刺治疗组、模型对照组各10只,另设5月龄雄性抗快速老化小鼠(SAMR1)10只作为正常对照组。针刺治疗组予以补肾活血针刺法干预,选穴百会、血海、肾俞、膈俞,采用捻转补泻手法。模型对照组及正常对照组未予特殊处理。干预4周后,取各组小鼠海马组织,采用免疫组化法检测脑红蛋白(Ngb)的表达情况。结果模型对照组小鼠海马组织Ngb的表达水平较正常对照组减弱(P<0.01);与模型对照组相比,针刺治疗组小鼠海马组织Ngb的表达水平明显升高(P<0.01)。结论补肾活血针刺干预能够明显增强SAMP8小鼠海马组织Ngb的表达,这可能是其改善SAMP8小鼠学习记忆能力的潜在分子机制之一。     

“通督启神”针法对APPswe/PS1dE9小鼠海马铁死亡相关因子表达的影响

目的：观察“通督启神”针法对阿尔茨海默病小鼠学习记忆能力及铁死亡相关因子的影响，探讨其提高阿尔茨海默病小鼠学习记忆能力的机制。方法：APPswe/PS1dE9小鼠随机分为模型组和针刺组，以C57BL/6小鼠作为对照组，每组各12只。针刺组予电针“百会”“印堂”并点刺“水沟”，每日1次，每次20 min，共28 d。采用Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力；尼氏染色和透射电镜观察小鼠海马组织神经细胞的形态学及超微结构变化；分别采用WST-1法和TBA法检测小鼠海马组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量；实时荧光定量PCR法检测小鼠海马组织中前列腺素内过氧化物合酶2(ptgs2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)mRNA的表达水平。结果：与对照组相比，模型组小鼠第2—5天逃避潜伏期显著延长（P<0.05），原平台象限游泳时间和穿越原平台次数显著减少（P<0.05）,SOD活性降低（P<0.05）,MDA含量升高（P<0.05）,ptgs2 mRNA表达水平升高（P<0.05）,GPX4 mRNA表达水平降低（P<0.05）。与模型...     

电针对SAMP8小鼠学习记忆与海马神经元NMDA受体表达的影响

目的观察电针"百会""大椎""肾俞"对SAMP8小鼠学习记忆与海马神经元NMDA受体NR2A和NR2B表达的影响,探讨电针治疗阿尔茨海默病的机制。方法 6月龄SAMP8小鼠24只,随机分为模型组和电针组,同龄正常老化SAMR1小鼠12只为对照组。电针组电针"百会""大椎""肾俞"30d。Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,免疫组化染色和Western blot检测海马神经元NR2A和NR2B的表达。结果与对照组比较,模型组小鼠逃避潜伏期明显延长(P0.01),原平台象限停留时间明显缩短(P0.01),跨越原平台次数明显减少(P0.01),海马神经元NR2A相对表达量明显升高(P0.01),NR2B相对表达量明显下降(P0.01);与模型组比较,电针组小鼠逃避潜伏期明显缩短(P0.05),原平台象限停留时间明显延长(P0.01),跨越原平台次数明显增加(P0.05),海马神经元NR2A相对表达量明显下降(P0.05),NR2B相对表达量明显升高(P0.01)。结论电针能改善SAMP8小鼠的学习记忆能力,其作用机制可能与电针抑制海马神经元NMDA受体NR2A的表达和促进NMDA受体NR2B的表达有关。     

黑逍遥散对APP/PS1双转基因小鼠海马和脑皮层CaMKⅡα蛋白及其磷酸化表达的影响

目的:观察黑逍遥散对阿尔茨海默症(AD)小鼠海马和脑皮层钙调蛋白依赖性激酶2α(CaMKⅡα)及其磷酸化表达水平的干预效应。方法:30只APP/PS1双转基因雄性小鼠称体质量并按随机原则分为模型组、盐酸多奈哌齐组、黑逍遥散组,每组10只。同月龄、同种系的野生型C57BL/6雄性小鼠10只为空白组。盐酸多奈哌齐组(6 g·kg~(-1))、黑逍遥散组(3. 25 mg·kg~(-1))分别连续给药90 d后,Morris水迷宫检测行为学变化,免疫组化和蛋白免疫印迹法检测小鼠海马区和脑皮层CaMKⅡα蛋白及其磷酸化的表达。结果:干预90 d后,与空白组比较,AD模型组小鼠,逃避潜伏期显著延长,跨原平台和有效区域次数显著减少(P 0. 01),小鼠海马区及脑皮层Ca MKⅡα蛋白表达显著减弱或降低,而p-CaMKⅡα蛋白表达显著升高(P 0. 05,P 0. 01);与模型组比较,盐酸多奈哌齐和黑逍遥散组小鼠的逃避潜伏期均显著缩短、跨原平台次数均显著增加(P 0. 01),小鼠海马区及脑皮层Ca MKⅡα蛋白显著增强或升高,p-CaMKⅡα蛋白表达显著降低(P 0. 05,P 0. 01)。结论:黑逍遥散通过调节AD小鼠不同脑区参与细胞记忆形成机制的关键蛋白Ca MKⅡα及其磷酸化表达,进而发挥改善AD小鼠的学习记忆能力。     

生慧汤对APP/PS1双转基因痴呆小鼠海马JAK2/STAT3/SOCS-1信号通路的影响

目的?观察生慧汤对APP/PS1痴呆小鼠海马酪氨酸蛋白激酶2（JAK2）/信号传导及转录激活因子3（STAT3）/细胞因子信号抑制物1（SOCS-1）信号通路的影响，并探讨其改善阿尔茨海默病（AD）突触可塑性的机制。方法?将36只APP/PS1小鼠随机分为APP/PS1组、多奈哌齐（donepezil）组和生慧汤（SHD）组，另将12只C57BL/6JNju小鼠设为空白（WT）组。Donepezil组按0.92 mg / （kg·d）的剂量灌胃多奈哌齐配置的混悬液，SHD组按13.5 g / （kg·d）的剂量灌胃生慧汤水煎液，WT组和APP/PS1组灌胃等体积的纯水。各组连续治疗4周，采用Morris水迷宫实验和跳台实验评价小鼠的认知功能。尼氏染色观察小鼠海马区神经元病理形态；高尔基染色观察小鼠海马区神经元树突棘的变化；酶联免疫吸附测定法（ELISA）和实时聚合酶链式反应（Real-time PCR）分别检测小鼠海马中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）的含量及其mRNA表达水平；采用蛋白免疫印迹（Western Blot）检测小鼠海马离子钙结合蛋白（IBA1）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、JAK2、p-JAK2-Tyr1007、STAT3、p-STAT3-Tyr705、SOCS-1的蛋白表达水平。结果?与WT组比较，APP/PS1组小鼠平台潜伏期、游泳总路程和出错次数增加（P<0.01），穿越平台次数、目标象限停留时间和潜伏期减少（P<0.01）。与APP/PS1组比较，Donepezil组和SHD组小鼠平台潜伏期、游泳总路程和出错次数减少（P<0.05，P<0.01），穿越平台次数、目标停留象限时间和潜伏期增加（P<0.05，P<0.01）。与WT组比较，APP/PS1组小鼠海马CA3和DG区神经元数量及树突棘密度显著减少（P<0.01）。与APP/PS1组比较，Donepezil组和SHD组小鼠海马CA3和DG区神经元数量及树突棘密度增加（P<0.05，P<0.01）。与WT组比较，APP/PS1组小鼠海马中TNF-α和IL-1β的含量及mRNA水平增加（P<0.01）。与APP/PS1组比较，Donepezil组和SHD组小鼠海马中TNF-α和IL-1β的含量及mRNA水平减少（P<0.05，P<0.01）。与WT组比较，APP/PS1组小鼠海马中IBA1、GFAP、p-JAK2-Tyr1007/JAK2、p-STAT3-Tyr705/STAT3和SOCS-1的蛋白表达水平升高（P<0.01）。与APP/PS1组比较，Donepezil组和SHD组小鼠海马中IBA1、GFAP、p-JAK2-Tyr1007/JAK2、p-STAT3-Tyr705/STAT3和SOCS-1的蛋白表达水平减少（P<0.05，P<0.01）。结论?生慧汤可通过抑制神经炎症改善APP/PS1小鼠海马突触可塑性，其机制可能与其抑制JAK2/STAT3/SOCS-1信号通路有关。     

六味地黄丸通过PI3K/Akt/FoxO3a通路调控自噬对SAMP8小鼠记忆功能的影响

目的 探讨六味地黄丸通过磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/叉头框转录因子O3a（FoxO3a）通路调控自噬对快速老化小鼠8型（SAMP8）小鼠记忆功能的影响。方法 6月龄SPF级抗快速老化亚系小鼠（SAMR1）雄性小鼠6只设为正常组，6月龄SPF级SAMP8雄性小鼠24只随机均分为模型组、多奈哌齐组（0.747 mg·kg^-1）、六味地黄丸高、低剂量组（2.700、1.350 g·kg^-1），灌胃给药2个月。Morris水迷宫法检测各组小鼠学习和记忆能力；尼氏染色观察小鼠皮层、海马神经元；免疫组化（IHC）检测皮层、海马微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）阳性表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组小鼠皮层自噬关键分子酵母ATG6同系物（Beclin1）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、自噬相关基因5（ATG5）、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、Caspase-9、Akt、p-Akt、FoxO3a、p-FoxO3a的蛋白表达水平。结果 与正常组小鼠比较，模型组小鼠逃避潜伏期明显延长（P<0.05，P<0.01），穿越平台次数、目标象限停留时间显著减少（P<0.01）；皮层、海马神经细胞数量明显减少、体积缩小，分布疏散，LC3B阳性表达显著增多（P<0.01）；皮层Beclin1、ATG5表达显著升高（P<0.01），Bcl-2表达水平降低（P<0.01），Caspase-3、Caspase-9表达水平显著升高（P<0.01），p-Akt/Akt、p-FoxO3a/FoxO3a表达水平显著降低（P<0.01）。与模型组比较，多奈哌齐组及六味地黄丸高、低剂量组小，3 d逃避潜伏期明显缩短（P<0.05，P<0.01）；穿越平台次数显著增加（P<0.01）；目标象限停留时间显著增加（P<0.01）；多奈哌齐组皮层海马神经元神经细胞数量增多，六味地黄丸高、低剂量组小鼠神经元数目及尼氏体明显增加且分布致密，细胞损伤程度较低；多奈哌齐组及六味地黄丸高、低剂量组皮层、海马LC3B阳性表达显著降低（P<0.01）；六味地黄丸高、低剂量组Beclin1表达显著降低（P<0.01），多奈哌齐组和六味地黄丸低剂量组ATG5表达显著降低（P<0.01），多奈哌齐组及六味地黄丸高、低剂量组皮层Bcl-2表达水平显著升高（P<0.01），Caspase-3表达水平显著降低（P<0.01），Caspase-9表达明显降低（P<0.05，P<0.01），p-Akt/Akt、p-FoxO3a/FoxO3a表达水平显著升高（P<0.01）。结论 六味地黄丸有效改善了快速老化SAMP8 AD模型小鼠的学习记忆能力，保护神经元，其机制可能与调控PI3K/Akt/FoxO3a信号通路，下调自噬相关因子ATG5、Beclin1和LC3B表达和减少凋亡有关。     

七宝美髯口服液对SAMP8小鼠海马神经元凋亡的影响

目的:考察七宝美髯口服液对SAMP8小鼠学习记忆功能及海马Neu N、Nampt和Aβ和表达的影响。方法:SAMP8小鼠灌胃给予七宝美髯口服液,SAMR1小鼠平行对照,连续干预60d,采用Morris水迷宫法考察小鼠学习记忆功能,采用免疫组化法考察小鼠海马Neu N、Aβ和Nampt的表达。结果:与模型对照组比较,七宝美髯口服液(1.44g/kg)能显著提高SAMP8小鼠的学习记忆能力,缩短逃避潜伏期,增加小鼠进入平台象限次数,提高进入平台象限百分比;能显著促进海马Neu N和Nampt的表达,提高其平均光密度值;能显著抑制小鼠海马Aβ的表达,降低其平均光密度值。结论:七宝美髯口服液能够改善SAMP8小鼠的学习记忆功能,该作用与其增强SAMP8小鼠海马Neu N和Nampt表达,抑制Aβ的表达有关。     

六味地黄丸通过RAGE/LRP1受体介导对SAMP8小鼠脑微血管的调节作用

目的 探讨六味地黄丸对SAMP8小鼠神经血管单元损伤的保护作用。方法 将75只6月龄SAMP8小鼠作为肾精不足证阿尔茨海默病（AD）动物模型，设模型组、盐酸多奈哌齐（0.747 mg·kg^-1·d^-1）组、六味地黄丸高、中、低剂量（2.700、1.350、0.675 g·kg^-1·d^-1）组，每组15只，以SAMR1小鼠15只作为正常组，连续给药2个月。采用Morris水迷宫检测小鼠空间记忆能力；苏木素-伊红（HE）观察脑组织海马和皮层病理变化；免疫组化（IHC）法检测脑组织海马和皮层中β淀粉样蛋白（Aβ）沉积情况及血管性血友病因子（vWF）和CD34表达情况；电镜观察脑微血管超微结构变化情况；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测脑组织海马和皮层中晚期糖基化终末产物受体（RAGE）、低密度脂蛋白相关蛋白1（LRP1）、血管内皮生长因子A（VEGF-A）和P-选择素（P-selection）蛋白表达水平。结果 与正常组比较，模型组小鼠逃避潜伏期、游泳路程显著延长（P<0.01），神经胶质细胞数量增多，神经细胞数量减少，脑微血管内皮细胞间隙紧密连接模糊或间隙变大，膜结构损伤较重，内皮细胞线粒体肿胀、膜破裂、嵴大部分溶解，海马和皮层组织中Aβ、vWF蛋白表达显著增加（P<0.01），CD34蛋白表达明显降低（P<0.05），皮层中RAGE和P-selection蛋白表达水平显著升高（P<0.01），LRP1和VEGF-A蛋白表达水平显著下降（P<0.01）；与模型组比较，六味地黄丸各剂量组小鼠逃避潜伏期、游泳路程均明显缩短（P<0.05），皮层和海马中神经胶质细胞数量减少明显，皮层中微血管数量增多明显，微血管内皮细胞间隙紧密连接双层膜结构较清晰，线粒体数量增多、膜完整、线粒嵴恢复，海马和皮层中Aβ、vWF、RAGE和P-selection蛋白表达明显降低（P<0.05），CD34、LRP1和VEGF-A蛋白表达明显升高（P<0.05）。结论 六味地黄丸能够通过RAGE/LRP1受体系统调节Aβ代谢，通过抑制vWF表达和增加VEGF-A和CD34促进脑微血管新生，改善SAMP8小鼠脑微血管损伤。     

Wnt/β-catenin信号通路介导红景天苷诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞定向分化研究

目的探讨红景天苷诱导小鼠骨髓间充质干细胞（mesenchyma stem cells,MSCs）向神经元细胞定向分化的分子机制。方法以小鼠MSCs系D1细胞为研究对象,实验分为阴性对照组（完全培养液）、阳性对照组（含1 mmol/L β-巯基乙醇）、红景天苷组（20 mg/L红景天苷）和阻断组（20 ng/mL DKK1）;1×104个/孔细胞接种于6孔板24 h后分组,荧光免疫化学方法观察阴性对照组、阳性对照组和红景天苷组中β-链蛋白（β-catenin）的表达;RT-PCR法检测阴性对照组、阳性对照组、红景天苷组中神经元特异性烯醇化酶（neuron-specific enolase,NSE）、抗微管蛋白（beta 3 class Ⅲ tubulin,β-tubulin Ⅲ）、孤儿核受体相关因子1 （nuclear receptor related factor1,Nurr1）、神经胶质原纤维酸性蛋白质（glial fibrillary acidic protein,GFAP）mRNA和阻断组Wnt3a、β-catenin、低密度脂蛋白受体相关蛋白6（low-density lipoprotein receptor-related protein6,LRP6）、轴蛋白（Axin）mRNA的表达;Western blot分析阴性对照组、阳性对照组和红景天苷组中β-catenin和NSE蛋白的表达。利用胞外Ca2+螯合剂乙二醇双四乙酸［EGTA（胞外Ca2+螯合剂）］、细胞膜Ca2+通道阻断剂硝苯地平（Nifedipine细胞膜Ca2+通道阻断剂）和LY294002（IP3Ks特异抑制剂）分别阻断细胞不同Ca2+信号阻断剂,RT-PCR检测红景天苷组和阻断组中Wnt3a、LRP-6、Axin、糖原合成酶激酶3 （glycogen synthase kinase,GSK-3）和β-catenin mRNA的表达;Western blot法分析β-catenin蛋白的表达。结果与阳性对照组比较,红景天苷组β-catenin为强阳性表达,Wnt3a、β-catenin、LRP6、Axin mRNA表达明显上调（P<0.01）;NSE、β-tubulin Ⅲ、Nurr1 mRNA和NSE蛋白表达上调（P<0.01）;与阳性对照组和红景天苷组比较,阻断组β-catenin、NSE、Nurr1和β-tubulin Ⅲ mRNA表达降低,β-catenin和NSE蛋白表达下调（P<0.01）。与红景天苷组比较,尼莫地平组、EGTA、LY294002 组Wnt3a、LRP-6、β-catenin和Axin mRNA及蛋白表达降低,β-catenin蛋白表达降低（P<0.05, P<0.01）。结论红景天苷通过Wnt/β-catenin和Ca2+信号通路影响MSCs向神经元细胞定向分化。