地塞米松对哮喘小鼠气道血管生成及血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨地塞米松对哮喘小鼠气道血管生成及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法用鸡卵清蛋白(OVA)致敏和雾化激发建立慢性哮喘小鼠模型,实验分为对照组、哮喘组和地塞米松组。测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞和嗜酸粒细胞(EOS)及活性VEGF表达的变化;行HE染色及VEGF、抗Ⅷ因子免疫组化染色,在显微镜下计数气管黏膜固有层、黏膜下层血管密度,采用医学图像分析软件测定支气管管壁厚度(WAt/Pbm)及肺组织切片中的血管数。结果哮喘组EOS计数明显升高,气管血管密度、WAt/Pbm及肺组织切片中的血管数明显增加,与VEGF的表达呈正相关。地塞米松组与哮喘组比较炎性反应减轻,气管血管密度、WAt/Pbm及肺组织切片中的血管数减少,VEGF表达减弱,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 VEGF在哮喘小鼠模型气道及肺组织内过度表达,在气道血管生成过程中可能具有重要作用。早期地塞米松干预可降低哮喘模型的气道炎症,减缓气道血管生成的过程。     

急、慢性哮喘小鼠气道血管生成的实验研究

目的观察急、慢性哮喘小鼠气道血管生成的变化，并初步探讨其在哮喘发病中的作用。方法24只BALB／c小鼠随机均分为三组，即A组：正常对照组；B组：急性哮喘组；C组：慢性哮喘组。通过卵白蛋白（OVA）多次腹腔注射致敏和反复滴鼻激发建立急、慢性哮喘小鼠模型。末次激发后24小时处死动物留取血清，右肺行灌洗留取支气管肺泡灌洗液（BnLF），左肺和气管制备病理切片。病理切片行苏木精一伊红（HE）染色和抗Ⅷ因子免疫组织化学染色，于免疫组化切片上显微镜下计数气管黏膜固有层、黏膜下层血管密度。溴甲酚绿（BCG）法检测血清、BALF内白蛋白浓度，计算气道血管渗出指数（BnLF白蛋白浓度／血清白蛋白浓度）。结果①B组小鼠气道血管密度与A组相比无统计学差异；与A组相比，C组气道血管密度明显升高（P〈0．01）。②B、C组血管渗出指数均明显升高（均P〈0．05），两者之间无统计学差别。结论①慢性喘小鼠气道内血管生成明显增加．急性哮喘小鼠气道内无明显血管生成。②急性哮喘小鼠气道内血管渗出明显增加，怛慢性哮喘小鼠血管渗出指数未见进一步增加。     

转化生长因子-β对肥胖哮喘小鼠气道重塑的影响及吡非尼酮的干预作用

目的探讨转化生长因子-β(TGF-β)对肥胖哮喘小鼠气道重塑的影响及吡非尼酮干预的作用。方法 75只C57BL/6J小鼠随机分为对照组(A组)、肥胖组(B组)、肥胖哮喘组(C组)、布地奈德治疗组(D组)、吡非尼酮治疗组(E组)5组,每组15只。肥胖小鼠以高脂饮食诱导肥胖模型,C、D、E组采用卵清蛋白致敏激发建立哮喘模型,对照组以普通饲料饲养,生理盐水致敏激发。D组以布地奈德悬液(0.5 mg/ml)雾化,E组以吡非尼酮(300 mg/kg)饮水干预,余组正常饮水。4周后收集支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数及分类。肺组织切片观察小鼠气道炎症及重塑情况,测定气管壁总面积(WAt)、气管平滑肌面积(WAm)和管腔基底膜周长(Pbm)。采用酶联免疫吸附实验、蛋白质印迹法检测TGF-β水平。结果 C组小鼠BALF中白细胞总数、嗜酸性粒细胞百分比、TGF-β水平、气管壁厚度(WAt/Pbm)和平滑肌厚度(WAm/Pbm)均高于其他四组;E组BALF中嗜酸性粒细胞百分比、WAt/Pbm较D组减少(P均0.05);TGF-β水平按照C、D、E、B、A组依次递减(P均0.05),且与BALF中嗜酸性粒细胞百分比呈正相关(r=0.79,P均0.01)。结论 TGF-β在肥胖哮喘小鼠气道中高表达,与气道重塑有密切关系。吡非尼酮能有效抑制TGF-β的表达,从而改善肥胖哮喘气道重塑。     

肥胖型哮喘小鼠体内氧化应激反应变化及其与气道炎症和重构的关系

目的探讨肥胖型哮喘小鼠体内氧化应激反应变化及其与气道炎症和重构的关系。方法 60只雌性C57/6 J小鼠随机分为哮喘组、肥胖组、肥胖哮喘组和对照组。哮喘组在普通饲料基础上,采用卵白蛋白腹腔注射致敏与雾化吸入激发的方法构建哮喘模型;肥胖组采用高脂饮食诱导肥胖模型;肥胖哮喘组在高脂饲料基础上,采用卵白蛋白致敏激发构建肥胖哮喘模型;对照组以普通饲料饲养,生理盐水致敏激发。12周后收集小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）进行细胞计数及分类。ELISA法测定肺组织匀浆中IL-6和8异前列腺素2α（8-iso-PGF2α）水平。肺组织切片观察小鼠病理变化,测定气管壁总面积（WAt）、气道平滑肌面积（WAm）和管腔基底膜周长（Pbm）。结果肥胖哮喘组小鼠BALF中白细胞总数和嗜酸粒细胞比例、肺组织IL-6水平以及气管壁总厚度（WAt/Pbm）均较肥胖组、哮喘组明显增高（P〈0.05）。肥胖哮喘组的平滑肌层厚度（WAm/Pbm）较肥胖组增高,但与哮喘组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。肺匀浆8-iso-PGF2α水平按肥胖哮喘组、哮喘组、肥胖组、对照组的顺序依次降低（P〈0.05）,且与BALF白细胞总数、WAt/Pbm及IL-6水平呈正相关（r值分别为0.828、0.863和0.891,P〈0.01）。结论氧化应激反应参与了肥胖哮喘小鼠气道炎症和重构过程。     

两种激素干预对小鼠哮喘气道重塑模型的影响

目的 建立小鼠哮喘气道重塑模型,观察腹腔注射地塞米松和雾化吸入布地奈德对气道重塑的干预作用.方法 将32只BALB/C级小鼠随机分为4组:对照组(A组)、哮喘气道重塑模型组(B组)、地塞米松治疗组(C组)、布地奈德治疗组(D组),每组8只.B,C,D组以卵蛋白致敏,后以卵蛋白反复激发,C组在每次激发前给予腹腔注射地塞米松,D组在每次激发前给予布地奈德雾化吸入,A组以生理盐水代替致敏和激发,解剖小鼠肺组织包埋、切片,行HE染色和Masson染色.然后分析HE染色下各组支气管壁总面积(Wat)和支气管壁平滑肌面积(Wam),分析Masson染色下基底膜下胶原沉积面积(Wcol).结果 B组小鼠支气管壁总面积(Wat)/基底膜周径(Pbm)、支气管平滑肌面积(Wam)/基底膜周径(Pbm)、胶原沉积面积(Wcol)/基底膜周径(Pbm)均高于A组正常对照组的小鼠(P<0.05);C组和D组的(Wat)/(Pbm),(Wam)/(Pbm),(Wcol)/(Pbm)都低于B组(P<0.05);C组和D组比较,无明显的差异(P>0.05).结论 小鼠哮喘形成过程中,气道重塑起着重要作用;腹腔注射地塞米松及雾化吸入布地奈德均能抑制气道重塑的形成,两者比较作用无差异.     

成肌纤维细胞在哮喘气道重塑中的作用及地塞米松对其的影响

目的：探讨成肌纤维细胞（MF）在哮喘气道重塑中的作用并观察地塞米松对其的影响。方法：SD大鼠30只，随机分为哮喘组（A组）、生理盐水对照组（C组）和地塞米松治疗组（D组），每组10只。利用卵白蛋白（OVA）／Al（OH）。致敏与OVA雾化吸八激发建立大鼠哮喘模型。免疫组化测定肺组织中支气管上皮下成肌纤维细胞的α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）表达含量，并使用图像分析技术进行积分光密度（10D）定量分析测定。ELISA法测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中TGF-β1和IFN—γ的浓度。结果：①定量分析测定的10D值显示A组支气管上皮下MF的α—SMA表达量较C组显著增加（P〈0．01），D组表达量较A组减少（P〈0．05）。②ELISA法测定结果：A组BALF中TGF-β1浓度较C组显著升高（P〈0．01），D组较A组浓度降低（P〈0．01），但仍高于C组（P〈0．05）。A组BALF中IFN—γ浓度较C组显著降低（P〈0．01），D组较A组浓度高（P〈0．01），但仍低于C组（P〈0．05）。结论：MF在气道重塑形成中起重要作用。地塞米松可能通过减少TGF-β1，增加IFN—γ的产生，抑制MF增殖和表达，起到抗哮喘气道重塑的作用。     

慢性哮喘小鼠肺组织巨噬细胞移动抑制因子的表达及地塞米松对其的调节

[ 摘要] 目的 研究巨噬细胞移动抑制因子（MIF）在慢性哮喘小鼠肺组织的表达, 探讨MIF在气道重塑中的作用及地塞米松对其的影响。方法 24只 C57/BL6 小鼠随机分为正常对照组（A组）、哮喘组（B组）、地塞米松组（C组）, 每组 8只; 卵蛋白致敏和激发建立慢性哮喘小鼠模型;支气管肺泡灌洗液（BALF）行细胞学分类;HE 染色观察各组气道炎症发生及气道结构改变情况; 免疫组化观察肺中 MIF的表达及定位; RT-PCR测定各组小鼠MIF mRNA的表达变化。结果 B组BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞（Eos）和淋巴细胞与A组相比明显增高,C组明显低于B组(均P <0.01);HE 染色提示B组与A组相比出现Eos浸润增多、气道壁增厚等改变,C组上述改变较B组为轻(P < 0.01); 免疫组化显示 MIF 在B组小鼠气道上皮细胞、上皮下黏膜、炎症细胞中皆有表达而在A组中表达较弱, C组表达量较B组低(均P < 0.01) ; RT-PCR 检测发现MIF在B组表达较A组高, 而C组表达量低于B组 (均P < 0.01) 。结论 哮喘小鼠肺中MIF 表达增高,与气道重塑有关; 地塞米松可下调 MIF表达,延缓气道重塑进程。     

地塞米松对哮喘小鼠气道重塑的影响

目的探讨糖皮质激素对哮喘气道重塑和肺内基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）表达的影响。方法以卵蛋白致敏激发的慢性哮喘小鼠模型为对象，测定对照组、哮喘组、地塞米松组支气管基底膜周径（Pbm）、上皮黏膜层面积（WAmuc）、平滑肌面积（WAm）、气管内壁面积（WAi），并用Pbm标准化。天狼猩红染色测定气道I、Ⅲ型胶原的面积。免疫组化方法测定气道MMP-9及其抑制剂TIMP-1，行免疫组化图像分析。结果（1）地塞米松组的WAmuc／Pbm、WAm／Pbm、WAi／Pbm大于对照组而小于哮喘组，差异有显著性（P〈0．05）；（2）地塞米松组I、Ⅲ型胶原面积较对照组增加而明显低于哮喘组（P〈0．05）；（3）哮喘组MMP-9、TIMP-1表达明显高于地塞米松组，差异有显著性（P〈0．05）。结论慢性哮喘小鼠气道壁明显增厚，而早期行地塞米松干预则可能通过调节MMP-9／TIMP-1比值来减轻气道重塑。     

氧化应激反应对肥胖型哮喘小鼠气道炎症和重建影响

目的探讨氧化应激反应在肥胖型哮喘小鼠体内变化及其与气道炎症和重建的关系。方法 45只雌性C57/6J小鼠随机分为哮喘组(A组)、肥胖哮喘组(B组)和对照组(C组)。卵清蛋白雾化吸入和高脂饮食诱导建立肥胖型哮喘模型。计数各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数并分类,肺组织切片观察病理变化,并测定支气管壁总面积(WAt)、支气管平滑肌面积(WAm)、管腔基底膜周长(Pbm),ELISA法测定肺组织匀浆中白细胞介素6(IL-6)和8-异前列腺素2α(8-iso-PGF2α)水平。结果 B组小鼠BALF中白细胞总数和嗜酸性粒细胞比例、肺组织IL-6水平以及肺组织切片中WAt/Pbm和WAm/Pbm均较A组明显增高(F=2.84~32.67,P<0.05)。C、A、B组小鼠血清8-iso-PGF2α水平依次升高,且与BALF中白细胞总数、肺组织IL-6水平以及WAt/Pbm存在正相关性(r=0.821、0.900、0.873,P<0.01)。结论氧化应激反应参与了肥胖型哮喘小鼠气道炎症和重建过程,抑制氧化应激可望成为肥胖型哮喘治疗的有效措施。     

反复吸入烟曲霉孢子对慢性阻塞性肺疾病大鼠气道炎症和重构的影响

目的观察反复吸入烟曲霉（AF）孢子对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠气道炎症和重构的影响。方法50只Wistar大鼠随机分为A、B、C、D及E组,每组10只。A、B、C和D组用气管内吸入脂多糖联合熏香烟的方法建立COPD模型,E组为正常对照组。建模后A、B和C组分别经鼻吸入高浓度AF孢子（1×10^6cfu/次）、低浓度AF孢子（1×10^3cfu/次）和生理盐水100μL,每周2次,连续5周;D组无处理。测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞总数及分类,白细胞介素8（IL-8）和转化生长因子β（TGF-β）的水平;肺组织病理切片HE、PAS和Masson染色,观察气道炎症并行半定量评分及病理图像的形态学测量分析。结果与E组比较,D组大鼠出现典型COPD病理改变,模型建立成功。A组和B组BALF中白细胞总数、中性粒细胞及淋巴细胞百分比均高于C组和D组（P均〈0.01）;A组和B组BALF中的IL-8和TGF-β浓度均高于C组和D组（P均〈0.01）;A组的气道炎症评分高于B、C和D组（P均〈0.01）;A组和B组的管壁总厚度（WAt/Pbm）、平滑肌层厚度（WAm/Pbm）、管壁胶原沉积厚度（WCt/Pbm）、管壁外层胶原沉积厚度（WCo/Pbm）及杯状细胞占上皮细胞比例均高于C组和D组（P均〈0.01）;A组和B组BALF中IL-8与中性粒细胞百分比、气道炎症评分及杯状细胞占上皮细胞百分比呈正相关（r=0.856,P〈0.01;r=0.884,P〈0.01;r= 0.702,P〈0.05）;TGF-β与WAt/Pbm、WCt/Pbm、WCo/Pbm及杯状细胞占上皮细胞百分比呈正相关（r=0.706,P〈0.05;r=0.802,P〈0.01;r=0.876,P〈0.01;r=0.713,P〈0.05）。结论反复吸入AF孢子可加重COPD大鼠气道炎症,并促进气道重构。     

流感嗜血杆菌下气道定植对哮喘小鼠肺组织TH17细胞表达及气道重塑的影响

目的 检测下呼吸道流感嗜血杆菌定植对哮喘小鼠TH17细胞的表达、气道炎症及对气道重塑的影响。方法 用卵清蛋白（ovalbumin,OVA）致敏和激发制备慢性哮喘小鼠模型,同时制作流感嗜血杆菌琼脂糖菌珠,在气道注菌之后的第1、7、21天处理小鼠,观察肺组织病理变化,流式细胞仪检测肺组织TH17细胞表达、测定CD4⁺T细胞TLR4的表达,并进行气道细菌培养和肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）细胞计数。结果 与正常组和哮喘非注菌组相比,哮喘注菌组有明显的哮喘症状和感染症状;病理学结果显示哮喘组气道黏膜水肿,管壁增厚,大量的炎性细胞浸润,注菌后炎症加重。哮喘小鼠气道注菌之后,随着时间的延长,气管壁厚度（WAt/Pbm）和平滑肌厚度（WAm/Pbm）均显著高于哮喘非注菌组。细菌学培养结果显示正常组第1、7天气管流感嗜血杆菌培养阳性,第21天阴性;哮喘组注菌后1、7、21天气管流感嗜血杆菌检测均阳性。流式细胞仪检测小鼠肺组织TLR4和TH17在CD4⁺T细胞的表达,哮喘组的TLR4和TH17表达均显著高于正常组,注菌之后二者表达显著增加,观察指标在哮喘注菌组变化更明显,差异有统计学意义（P<0.05）。BALF细胞计数结果显示,哮喘组BALF中细胞数明显高于正常组,注菌后细胞数进一步增多。相关性分析发现,哮喘组小鼠肺组织中CD4⁺T细胞TLR4的表达与BALF细胞总数呈正相关（r=0.746,P<0.05）,TH17表达与CD4⁺T细胞TLR4的表达、气道WAt/Pbm、WAm/Pbm和BALF细胞总数呈正相关（分别r=0.612、0.611、0.537、0.752,P<0.05）。结论 流感嗜血杆菌下呼吸道定植可以通过激活TLR4,增加哮喘小鼠肺组织TH17细胞表达,加重哮喘气道炎症和气道重塑,可能是难治性哮喘预后的重要机制之一。     

布地奈德对哮喘小鼠TNOS、cNOS、iNOS及内皮素的影响

目的观察吸入布地奈德（budesonide，BUD）对小鼠哮喘模型哮喘发作、血清及支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）中总的一氧化氮合酶（total nitric oxide synthase，TNOS）、结构型一氧化氮合酶（constitutive nitric oxide synthase，cNOS）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）、内皮素（andothelin，ET）的影响，探讨BUD防治哮喘的机制。方法30只BALB／c小鼠随机分为3组：哮喘模型组（A组，n=10）、BUD治疗组（B组，n=10）、正常对照组（C组，n=10）。以卵蛋白（ovalbumin，OVA）致敏及激发建立小鼠哮喘模型，观察哮喘发作及肺组织病理情况。采用放射免疫法测定3组小鼠血清及BALF中TNOS、iNOS、cNOS的活性及ET-1的水平。结果B、C2组血清及BALF中TNOS、cNOS、iNOS活性及ET-1的水平均明显低于A组（P均〈0．01），B组TNOS、iNOS、cNOS的活性与C组比较差异均无统计学意义（P均〉O．05），而B组ET-1水平明显高于C组（P〈0．05），B、C2组BALF中WBC总数均明显低于A组（P均〈0．01），血清中iNOS活性与ET-1水平呈正相关（r=0．827，P〈0．01），BALF中iNOS活性与ET-1水平呈正相关（r=0．776，P〈0．01）。结论吸入布地奈德防治哮喘的机制可能与抑制哮喘小鼠BALF、血清中TNOS、iNOS、cNOS活性及ET-1水平有关。但并不完全，气道炎症一旦形成，可能需要较长时间来控制。     

哮喘大鼠气道平滑肌细胞caveolae的变化及罗红霉素的调控作用

目的观察支气管哮喘（简称哮喘）大鼠气道平滑肌细胞微囊（caveolae）及微囊蛋白一1（caveolin一1）的表达变化,并探讨罗红霉素对其表达的影响。方法SPF级雄性SD大鼠24只,采用数学表法随机分为对照组（c组）、哮喘组（A组）、罗红霉素组（R组）,每组8只。以卵白蛋白致敏和激发的方法复制大鼠哮喘气道重塑模型,图像分析软件测定气道壁厚度（Wat／Pbm）及气道平滑肌层厚度（Wam／Pbm）;透射电镜观察eaveolae超微结构;Westernblot法测定caveolin—l的表达变化。结果（1）A组大鼠Wat／Pbm、Wam／Pbm大于C组（P〈0．01）;R组大鼠Wat／Pbm、Wam／Pbm小于A组（P〈0．01）,大于C组（P〈0．01）;（2）透射电镜显示c组ASMC胞膜及胞质eaveolae含量丰富、形态多样,A组caveolae含量少、结构单一,R组eaveolae含量明屁减少,但较A组多;（3）Westernblot法显示c组caveolin一1高表达,A组表达明显低于c组（P〈0．01）;R组caveolin-1表达显著高于A组（P〈0．01）,但较c组表达减少;（4）caveolin-1表达与Wam／Pbm呈负相关（r=-0．928,P〈0．01）。结论哮喘大鼠气道平滑肌细胞eaveolae结构明显减少,caveolin-1表达减少,提示caveolae缺乏与哮喘气道重塑有密切关系,罗红霉素可能通过caveolae的影响而抑制哮喘气道重塑。     

吸入脂多糖对哮喘小鼠气道炎症和气道黏液分泌的影响

目的 观察哮喘小鼠吸入脂多糖 （LPS,作为刺激原）其气道炎症和气道黏液分泌的变化 。 方法 30只清洁级BALB/c小鼠随机分为哮喘组 (AST组)、LPS哮喘组 （LAS组）和正常组 (NS组),每组10只。哮喘组用卵清白蛋白 （OVA）致敏和激发制作哮喘模型,LPS哮喘组在哮喘模型的基础上加用LPS (50 μg/mL)雾化吸入30 min,正常组用生理盐水代替OVA。检测各组小鼠支气管肺泡灌洗液 (BALF)细胞总数和细胞分类计数,采用ELISA检测BALF中的白细胞介素4 (IL-4)和肿瘤坏死因子-α （TNF-α）水平,HE染色观察肺部病理学改变,用阿尔辛蓝-过碘酸雪夫 (AB-PAS)染色气道杯状细胞,免疫组织化学法检测肺组织中黏蛋白5ac (Muc5ac)的表达,荧光定量RT-PCR检测Muc5ac mRNA在肺内的表达。并分析Muc5ac蛋白表达与各指标的相关性。 结果 AST及LAS组小鼠较NS组在BALF中的细胞总数、嗜酸性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞百分比,IL-4和TNF-α水平、肺组织AB-PAS阳染面积, Muc5ac蛋白和mRNA表达明显升高,其差异均有统计学意义 (P均<0.05)。LAS组较AST组上述气道炎症（除单核细胞数外）和气道黏液高分泌指标明显增高,差异均有统计学意义 (P<0.05)。气道Muc5ac蛋白表达与BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞数、IL-4、TNF-α水平、气道AB-PAS染色阳性着色面积均呈正相关（P均<0.05）。 结论 OVA致敏和激发的哮喘小鼠出现以嗜酸性粒细胞、淋巴细胞浸润为主的气道炎症及杯状细胞增生的气道黏液高分泌,且气道炎症和气道黏液高分泌关系密切。LPS可使气道炎症和气道黏液高分泌加重,可能与LPS激发了体内炎症介质的生成、活化有关。     

地龙对哮喘小鼠气道重塑的作用

目的探讨地龙对哮喘小鼠气道重塑的干预作用。方法Balb／c小鼠40只,随机分成4组：模型组、空白组、地龙组、孟鲁司特钠组。腹腔注射卵清蛋白（OVA）20μg致敏,2．5％OVA雾化吸入激发建立哮喘小鼠模型。肺泡灌洗液（BALF）计数各炎性细胞;HE染色观察病理变化;Masson染色和PAS染色分别检测胶原沉积情况和PAS阳性细胞数,用Image—ProPlus6．0系统定量。结果与空白组相比,模型组中炎性细胞数显著增加,胶原蛋白沉积和粘蛋白糖原表达显著提高;地龙组和孟鲁司特钠组BALF中嗜酸性粒细胞数（EOS）、气道胶原蛋白沉积、粘蛋白糖原表达明显低于模型组,差异有统计学意义。结论地龙可有效改善哮喘引起的气道重塑。     

屋尘螨诱导气道上皮TLR4表达和影响T淋巴细胞分化在哮喘气道炎症中的作用

目的研究屋尘螨（HDM）对于气道上皮Toll样受体4（TLR4）表达及T淋巴细胞分化的影响,以进一步探讨其在哮喘小鼠气道炎症中作用。方法雌性BALB/c小鼠30只随机分为OVA哮喘模型组（OVA组）、HDM组和生理盐水对照组（对照组）。OVA组用卵白蛋白（OVA）致敏与激发建立小鼠哮喘模型,HDM组给予HDM提取液替代OVA致敏与激发,对照组用生理盐水替代OVA。观察小鼠气道及肺组织病理炎症浸润情况,支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数及细胞分类计数。ELISA检测小鼠BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ和IL-17的含量。实时荧光定量PCR法测定气道上皮TLR4 mRNA的表达,免疫印迹法测定气道上皮TLR4蛋白的表达。流式细胞技术检测小鼠外周血Th1、Th2及Th17淋巴细胞占CD4＋T淋巴细胞百分率情况。结果 OVA组支气管黏膜下水肿,黏液腺增生,以嗜酸粒细胞为主的炎症细胞浸润;HDM组出现肺泡腔及间质充血,中性粒细胞等炎症细胞浸润;对照组小鼠气道上皮无增厚,无炎症细胞浸润,肺泡壁完整。与OVA组比较,HDM组BALF细胞总数及分类计数除嗜酸粒细胞无显著差异外（P〉0.05）,其余均显著升高（P〈0.05）;HDM组BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13及IL-17水平较OVA组明显增高（P〈0.05）,IFN-γ的表达无显著差异（P〉0.05）;HDM组气道上皮TLR4 mRNA及TLR4蛋白的表达明显增高（P〈0.05）,OVA组与对照组差异无统计学意义（P〉0.05）。与OVA组比较,HDM组外周血Th2、Th17细胞显著增高（P〈0.05）,而Th1细胞无明显变化（P〉0.05）。结论 HDM诱导气道上皮TLR4表达增高,使Th2与Th17淋巴细胞活化,气道内炎症细胞浸润,可能在哮喘气道炎症中起重要作用。     

IL-27对哮喘小鼠血清IgE的影响

目的研究IL-27对卵白蛋白（OVA）激发哮喘小鼠血清IgE的影响。方法 24 只雌性BALB/c小鼠随机分为生理盐水组、哮喘组及IL-27组,每组8只。应用OVA建立哮喘模型,IL-27组小鼠应用1 μg IL-27（溶于 50 μl PBS中）滴鼻给药,ELISA法测定小鼠血清IL-4和 IFN-γ 浓度,荧光酶标法测定小鼠血清总IgE和OVA特异性IgE浓度;计数支气管肺泡灌洗液（BALF）中嗜酸粒细胞数量。结果 IL-27 组小鼠血清IL-4浓度为（45.6±10.1）μg/L,明显低于哮喘组的（79.3±14.8）μg/L（P 〈 0.05）;IL-27 组小鼠血清IFN-γ浓度为（63.8±11.5）μg/L,明显高于哮喘组的（25.7±8.2）μg/L（P 〈 0.05）;IL-27组小鼠血清总IgE和OVA特异性IgE浓度分别为（2.77±0.51）KU/L、（0.48±0.09）KU/L,均明显低于哮喘组的（5.88±0.86）KU/L、（1.89±0.15）KU/L（P均〈0.05）;IL-27组小鼠 BALF中嗜酸粒细胞数量为（2.21±0.33）×107/L,明显低于哮喘组的（12.82 ± 2.17）×107/L（P 〈 0.01）。结论 IL-27可能通过促进IFN-γ合成、抑制IL-4合成,降低哮喘小鼠血清总IgE和OVA特异性IgE浓度,降低BALF中嗜酸粒细胞数量。     

滨蒿内酯对大鼠哮喘模型蛋白激酶C-α基因表达影响的研究

目的观察滨蒿内酯对哮喘大鼠肺组织蛋白激酶C—α（proteinkinase Cα,PKC-α）mRNA及蛋白表达的影响,探讨滨蒿内酯治疗哮喘的作用机制。方法将40只雄性大鼠随机分成4组：正常对照组（N组）、哮喘组（A组）、地塞米松治疗组（D组）及滨蒿内酯治疗组（S组）。以卵清蛋白致敏和激发方法建立哮喘大鼠动物模型并给予相应治疗。测定N组及A组的肺功能,检测各组支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞总数及嗜酸性粒细胞（Eos）计数;用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）法检测肺组织中PKC—α mRNA,用免疫组化法检测其蛋白表达水平。结果大鼠致敏3周及诱发哮喘4周后,肺功能测定表现为呼气时间延长,呼气峰压明显增大;A组BALF中的白细胞总数及Eos计数、肺组织PKC—α mRNA及蛋白表达水平均较N组明显升高（P〈0．01）;滨蒿内酯治疗组哮喘大鼠BALF中白细胞总数和Eos计数较A组减少（P〈0．01）;PKC—dmRNA及蛋白表达水平较哮喘组下降,但仍较正常对照组升高（P均〈0．01）,D组与S组之间差异无统计意义（P〉0．05）。结论滨蒿内酯可显著抑制哮喘大鼠模型肺组织的PKC—α表达,可明显抑制哮喘大鼠气道炎症的发生发展,对哮喘有较好的治疗作用。     

不同剂量致敏原对小鼠哮喘模型气道反应性的影响

目的:探讨不同剂量致敏原鸡卵蛋白(OVA)制备哮喘模型时对哮喘小鼠气道反应性的影响。方法:将30只BALB/c小鼠随机分为哮喘组和正常对照组(C组),哮喘组又分为小剂量OVA致敏组(A组)和大剂量OVA致敏组(B组),每组各10只。A、B组在开始和第14天时给予含OVA的致敏液200μl(A组含10μg OVA,B组含2 mg OVA,两者含同样的氢氧化铝及生理盐水),21 d开始雾化吸入OVA,连续雾化6 d,操作时观察小鼠活动及呼吸情况;各组分别于末次雾化激发24 h后测定小鼠的无创肺功能中的增强呼气间歇(Penh)值以评价气道反应性;对支气管肺泡灌洗液(BALF)行细胞总数、嗜酸粒细胞计数;取肺组织作HE染色病理切片;ELISA方法测外周血、BALF上清液中的IgE、IFN-γ含量。结果:哮喘B组在第二次致敏后可见喘息、呼吸困难、口唇和尾巴黏膜发紫表现,并在雾化时出现扭体、燥动、呼吸加快等症状。哮喘A、B组的Penh值明显高于C组(P<0.01);从乙酰甲胆碱(Mch)6.25 mg.m l-1开始时哮喘B组的Penh值明显高于哮喘A组(P<0.01)。哮喘A组的BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞数(2.41±0.90,0.93±0.18)较正常对照组明显增高(0.65±0.34,0.30±0.16,均P<0.05);哮喘B组中BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞数(4.89±3.49,1.74±0.76)较正常对照组增高(均P<0.05);哮喘B组BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞数与哮喘A组比较差异无统计学意义。哮喘A、B组的支气管、血管周围,肺间质及肺泡腔内可见嗜酸粒细胞、淋巴细胞浸润,气道上皮损伤,结构紊乱,气道内杯状细胞肥大增生,气道内分泌大量黏液并有黏液栓形成;正常对照组肺组织气道结构清晰,气道纤毛上皮排列整齐,无明显的炎症改变。哮喘A、B组中外周血和BALF的IgE含量均较正常组的增多(P<0.01);哮喘B组中外周血及BALF的IgE含量(37.47±6.18,26.10±7.18)较哮喘A组(26.09±3.76,12.47±3.02,均P<0.01)明显增多。哮喘A、B组中外周血和BALF中的IFN-γ含量均较正常组减少(P<0.01);哮喘B组中外周血及BALF的IFN-γ含量(35.29±10.92,37.44±21.01)与哮喘A组比较差异无统计学意义(32.22±10.04,36.89±22.00,均P>0.05)。结论:哮喘小鼠组模型制备成功。在观察气道高反应方面,较高剂量OVA致敏哮喘模型较低剂量OVA致敏的气道高反应性更敏感。