和厚朴酚抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制

目的探讨和厚朴酚抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法采用MTT法、Transwell法,检测和厚朴酚(5、10、15μg/mL)治疗的宫颈癌细胞的抑制率和迁移侵袭。将pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-THBS2组(转染pcDNA-THBS2)、honokiol+pcDNA组(转染pcDNA并用honokiol处理)、honokiol+pcDNA-FAK组(转染pcDNAFAK并用honokiol处理),转染至siha细胞,Western blot检测细胞中THBS2、MMP-9的蛋白表达。结果与对照组比较,和厚朴酚(5、10、15μg/mL)治疗的siha细胞中细胞增殖、迁移和侵袭均明显降低,MMP-9、THBS2表达均明显升高;过表达THBS2具有与和厚朴酚相同的抑制siha细胞增殖、迁移和侵袭的作用;和厚朴酚、过表达THBS2均可明显的下调siha细胞中的FAK信号通路中FAK的表达,失活FAK信号通路,且过表达FAK可逆转和厚朴酚联合THBS2对siha细胞的增殖、迁移和侵袭抑制作用。结论和厚朴酚可抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与上调THBS2失活FAK信号通路有关,将可为和厚朴酚用于治疗宫颈癌奠定理论基础。     

和厚朴酚联合青蒿素对CNE-2细胞增殖和凋亡的作用

目的:研究和厚朴酚、青蒿素及二者联合应用在体外能否抑制人鼻咽癌CNE-2细胞的生长以及对其细胞凋亡的影响。方法:MTT法检测和厚朴酚、青蒿素单独或联合对细胞生长的抑制作用,以IC50评判抗肿瘤的效果,应用金氏公式进行联合用药的结果分析;DAPI染色观察细胞的凋亡形态,流式细胞仪检测和厚朴酚、青蒿素单独或联合作用对CNE-2凋亡率的影响。结果:和厚朴酚能显著抑制CNE-2细胞的增殖,并呈剂量依赖关系,其半数抑制浓度(IC50)为8.58 mg.L-1;青蒿素对CNE-2细胞生长没有明显的抑制作用,半数抑制浓度(IC50)为62.24 mg.L-1;和厚朴酚与青蒿素联合应用对CNE-2细胞的增殖抑制作用优于各单药组,q>1.15。DAPI染色可观察到和厚朴酚与青蒿素联合组核碎裂、凋亡小体,而单药组则不明显;凋亡分析显示联合用药组作用48 h细胞凋亡率显著高于各单药组。结论:和厚朴酚单独能够杀伤CNE-2细胞,并呈量-效关系,青蒿素单独作用不杀伤CNE-2细胞,两者联合应用对CNE-2细胞具有协同杀伤作用。     

和厚朴酚对U937细胞的体外作用

目的:探讨和厚朴酚对U937白血病细胞系细胞增殖及凋亡的影响。方法:将U937细胞和正常人外周血单个核细胞分别与和厚朴酚共同培养,用噻唑蓝比色法(MTT)检测和厚朴酚对细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪测定细胞周期分布及凋亡;透射电镜观察和厚朴酚处理后的U937细胞的超微结构变化;并以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blotting技术检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达。结果:和厚朴酚对U937的体外增殖有显著的抑制作用,48h半数抑制浓度(IC50)为11.8μg/mL,而对正常人外周血单个核细胞的IC50为40.3μg/mL;和厚朴酚使U937细胞的G0/G1期呈浓度依赖性增加,而S期和G2/M期细胞相应减少,且表现出细胞凋亡与和厚朴酚呈剂量和时间依赖关系。和厚朴酚使U937细胞内凋亡相关bax基因表达呈浓度依赖性增高,Bcl-2基因表达无明显变化,二者比值呈浓度依赖性增高。结论:和厚朴酚对U937细胞有抑制增殖和促进凋亡作用,其机制可能是通过抑制U937的细胞分裂和诱导促凋亡基因Bax表达而实现,但对正常人外周血单个核细胞的增殖抑制和促凋亡作用不明显。     

厚朴酚与和厚朴酚对大鼠回肠短路电流的影响

目的:研究厚朴酚与和厚朴酚对大鼠回肠短路电流的影响。方法:应用体外Ussing chamber系统评价50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L厚朴酚或和厚朴酚对回肠短路电流的作用。结果:厚朴酚与和厚朴酚均能明显抑制大鼠回肠的短路电流,且短路电流呈浓度依赖性降低,同时,其对短路电流的抑制效应显著高于钙通道阻滞剂维拉帕米;不同浓度的厚朴酚与和厚朴酚预处理可以显著降低10μmol/l乙酰胆碱激活的短路电流的增加。结论:厚朴酚与和厚朴酚可抑制大鼠回肠的短路电流,其作用机制可能是作为钙离子拮抗剂,通过调控肠道钙离子通道功能来抑制钙离子或其他离子的转运。     

厚朴酚与和厚朴酚的药理学研究现状

厚朴酚(m agnolol)与和厚朴酚(honok iol)是中药厚朴(Magnolia officinalis Rehd.etWils)的主要化学成分。厚朴属木兰科木兰属乔木,其树皮为我国传统中药材,被誉为三本药材,系国家计划管理的麝香、甘草、杜仲、厚朴4种重要药材之一。厚朴酚与和厚朴酚属于联苯酚类化合物,其分子式见图1。传统中医认为厚朴具有消除胸腹满闷、止痛、健胃、下气降逆、止咳、祛除水毒、活血化瘀等作用。近年来随着现代医学的发展,发现厚朴酚与和厚朴酚具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗肿瘤、抑制吗啡戒断反应等药理作用,本文旨在就厚朴酚与和厚朴酚的代谢动力学及其…     

厚朴不同炮制品中厚朴酚与厚朴酚的气相色谱测定

采用气相色谱法对厚朴生品及１１种不同制品中厚朴酚与和厚朴酚进行含量测定，实验表明不同炮制品中厚朴酚与和厚朴酚的含量各异，以生品含量最高，炮制后均有所下降。     

和厚朴酚联合青蒿素体外抗肿瘤的实验研究

 目的 研究和厚朴酚、青蒿素及二者联合应用对人肺腺癌SPC-A-1细胞生长的抑制作用。方法 MTT法测定和厚朴酚、青蒿素单独或联合对细胞生长的抑制作用,以IC₅₀评判抗肿瘤的效果,应用金氏公式进行联合用药分析的结果;流式细胞仪检测和厚朴酚、青蒿素单独或联合作用对SPC-A-1细胞周期分布的影响。结果 和厚朴酚能显著抑制SPC-A-1细胞的增殖,并呈剂量依赖关系,其半数抑制浓度(IC₅₀)为8.20 μg·mL-1;青蒿素对SPC-A-1细胞生长没有明显的抑制作用,半数抑制浓度(IC₅₀)为53.52 μg·mL-1;和厚朴酚与青蒿素联合应用对SPC-A-1细胞的增殖抑制作用优于各单药组,Q>1.15。细胞周期分布显示联合用药组将细胞阻滞于G₁期,显著高于各单药组。结论 和厚朴酚单独能够杀伤SPC-A-1细胞,并呈量-效关系,青蒿素单独作用不杀伤SPC-A-1细胞,两者青蒿素联合应用对SPC-A-1细胞具有协同作用。     

小檗碱联合厚朴酚及和厚朴酚对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响

目的 通过体外试验研究小檗碱与厚朴酚、和厚朴酚联合对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响及其干预途径.方法 以氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导THP-1巨噬细胞泡沫化为模型,采用HPLC-MS测定泡沫细胞中总胆固醇的含量;ELISA法测定巨噬细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;FCM检测巨噬细胞CD36的表达.结果 经小檗碱与厚朴酚、和厚朴酚联合作用后,泡沫细胞中总胆固醇的含量显著减少,细胞培养上清液中TNF-α分泌量降低,细胞表面CD36表达被抑制.结论 小檗碱联合厚朴酚及和厚朴酚抑制巨噬细胞源性泡沫细胞的形成与抗炎和下调脂质的受体CD36表达有关.     

黄连-厚朴配伍比例对和厚朴酚、厚朴酚溶出的影响

目的:探讨黄连-厚朴酸碱药对不同配伍比例对和厚朴酚、厚朴酚溶出的影响。方法:采用高效液相色谱法测定黄连-厚朴药对煎煮液中和厚朴酚及厚朴酚的含量。结果:和厚朴酚在黄连∶厚朴=1∶3时溶出最多,厚朴酚在黄连∶厚朴=1∶1时溶出最多,两者总量在黄连∶厚朴1∶1时最高,2∶1时最低。结论:黄连-厚朴不同配伍比例对和厚朴酚及厚朴酚的溶出有影响,可能与黄连中的生物碱有关。     

厚朴中厚朴酚与和厚朴酚总量测定方法的简化实验

厚朴中厚朴酚与和厚朴酚总量测定方法的简化实验孙立华曹志胜李欣荣(青岛市药品检验所青岛266071)孙国才(青岛市卫生学校青岛266071)《中国药典》1985～1995年版中收载的厚朴酚、和厚朴酚总量的测定方法,是以相同的方法分别测定了厚朴酚、和厚朴酚两种成分的含量,然后将两者的量加起来即为总量。本文在原药典法的基础上,不需将两者分离,直接测定两者的总吸收度,求知总量。1测定方法精密量取供试品溶液50μl(根皮25μl),刮取厚朴....     

秦皮素通过下调p70S6K抑制人黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭研究

目的研究秦皮素对人黑色素瘤A375细胞的增殖、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法 A375细胞给予秦皮素和核糖体S6蛋白激酶(ribosome S6 protein kinase,P70S6K)抑制剂PF-4708671进行干预,采用细胞计数法考察秦皮素和PF-4708671对A375细胞增殖能力的影响;采用Western blotting法检测秦皮素和PF-4708671对m TORC1/p70S6K/S6通路关键蛋白及上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白表达的影响;采用细胞划痕实验和Transwell实验考察秦皮素和PF-4708671对A375细胞迁移和侵袭的影响。结果秦皮素与PF-4708671均可显著抑制A375细胞的增殖、迁移和侵袭(P0.05、0.01)。秦皮素与PF-4708671均显著抑制p70S6K/S6通路活性,下调间质细胞标志蛋白和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)表达水平(P0.05、0.01)。结论秦皮素可能通过下调p70S6K抑制A375细胞的增殖、迁移与侵袭。     

南蛇藤提取物联合miR-302通过PI3K/Akt信号通路调控食管癌细胞增殖、侵袭和迁移的研究

目的探讨南蛇藤提取物(COE)联合miR-302对人食管癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及对PI3K/Akt信号通路的调控作用。方法实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测人正常食管上皮细胞Het-1A及不同食管癌细胞株中miR-302表达情况。将miR-302mimic和阴性对照mimiccontrol转染至人食管癌TE-1细胞中,q RT-PCR检测质粒转染后TE-1细胞中miR-302的表达情况。单独或联合使用COE作用TE-1细胞,CCK-8实验检测TE-1细胞增殖情况,Transwell实验检测TE-1细胞侵袭和迁移能力,Westernblotting分析PI3K/Akt信号通路中相关蛋白表达情况。结果食管癌细胞株中miR-302的表达明显低于正常食管上皮细胞(P0.05)。转染miR-302mimic能够有效提高TE-1细胞中miR-302的表达(P0.05)。单独使用COE或过表达miR-302可抑制食管癌TE-1细胞增殖、侵袭和迁移(P0.05),下调PI3K和p-Akt蛋白表达;二者联合使用对TE-1细胞增殖、侵袭和迁移抑制及对PI3K和p-Akt蛋白表达下调作用更显著(P0.05)。结论 COE联合miR-302可协同抑制食管癌TE-1细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的激活有关。     

Notch1下调对三叶青黄酮抑制食管癌EC9706细胞迁移和侵袭的影响

目的:观察三叶青黄酮(Tetrastigma Hemsleyani Radix flavone,THRF)对食管癌(esophagus cancer,EC)EC9706细胞增殖、迁移、侵袭能力及Notch1的影响,探讨其抗食管癌的可能作用机制。方法:体外培养EC9706细胞,以不同终质量浓度(0.5~20 g·L~(-1))三叶青黄酮进行处理,未加三叶青黄酮为空白组,以MW 167处理为MW167组。采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8),检测三叶青黄酮对EC9706细胞增殖的抑制作用,计算半数抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50);采用细胞黏附实验,划痕修复实验,transwell小室体外侵袭实验观察EC9706细胞黏附力、迁移、侵袭能力,同时采用免疫细胞化学和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Notch1蛋白和mRNA表达的变化。结果:与空白组比较,三叶青黄酮可明显升高EC9706细胞抑制率(P0.05,P0.01),三叶青黄酮可明显降低EC9706细胞黏附率、迁移率、侵袭细胞数,Notch1阳性细胞率和mRNA表达(P0.05,P0.01)。结论:三叶青黄酮能明显抑制EC9706细胞增殖,降低细胞迁移和侵袭能力,与其下调Notch1有关,可能是其抗食管癌的机制之一。     

汉黄芩素抑制乳腺癌细胞增殖及侵袭的实验研究

目的：研究汉黄芩素对乳腺癌细胞MDA-MB-231生长和增殖的影响,同时观察汉黄芩素对MDA-MB-231细胞黏附、迁移和侵袭能力的影响,进一步探讨其分子作用机制。方法：MTT法检测汉黄芩素对MDA-MB-231细胞生长的影响;Ki-67法检测汉黄芩素对细胞增殖的影响;划痕实验、黏附试验和侵袭小室法检测对MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blotting检测对增殖和转移相关蛋白及相关信号通路的影响。结果：汉黄芩素能明显抑制MDA-MB-231细胞生长和增殖;低浓度情况下明显抑制乳腺癌细胞的迁移、黏附和侵袭能力;汉黄芩素有效抑制MDA-MB-231细胞Survivin,Bcl-2,ICAM-1,MMP-2,MMP-9蛋白的表达。结论：汉黄芩素明显抑制乳腺癌细胞生长和增殖,并抑制MDA-MB-231细胞迁移、黏附、侵袭,其对MDA-MB-231细胞的侵袭和黏附影响可能与其降低ICAM-1,MMP-2,MMP-9表达有关。     

三重四级杆串联质谱(LC-MS/MS)法同时测定复方广痛消水提物中5种有效成分的含量

目的:建立同时测定广痛消水提物中延胡索乙素、芍药苷、小檗碱、厚朴酚、和厚朴酚含量的方法.方法:采用LC-MS/MS联用方法.结果:芍药苷、延胡索乙素、小檗碱、厚朴酚、和厚朴酚线性范围分别为0.882 8 ～ 113(r=0.999 8),1.5438～49.4(r =0.999 5),0.904 7～115.8(r=0.9997),0.8813～112.8 (r=0.9994),0.1656～21.2mg.L-1(r=0.9999).加样回收率分别为1.998％,1.14％,3.117％,1.828％,1.596％.结论:该法专属性强、快速灵敏,可用于广痛消水提物中延胡索乙素、芍药苷、小檗碱、厚朴酚、和厚朴酚的含量测定.     

南蛇藤提取物靶向mTOR抑制人肝癌HepG2细胞侵袭与转移能力的研究

目的探索南蛇藤提取物(COE)靶向哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)抑制人肝癌Hep G2细胞增殖、侵袭与转移的分子机制。方法用si RNA技术,构建敲除m TOR基因的Hep G2细胞模型,MTT法检测COE对Hep G2/m TOR-细胞增殖能力的影响。划痕实验及Transwell实验检测药物对细胞侵袭转移能力的影响。Western blotting法分析用药后基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9蛋白的表达水平变化。结果成功构建敲除m TOR表达的Hep G2/m TOR-细胞。COE明显抑制Hep G2/m TOR-细胞的增殖(P0.05),并呈浓度依赖性。划痕实验结果显示COE降低了细胞迁移能力。Transwell实验结果表明,COE(80 mg/L)明显减少了穿膜细胞数目(P0.05)。Western blotting结果显示,COE(80 mg/L)明显降低MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平(P0.05)。结论 COE明显抑制Hep G2/m TOR-细胞的增殖与侵袭转移,m TOR通路可能是其抑制肝癌的潜在作用靶点之一。     

四逆汤协同壮观霉素B1诱导PTEN与SUMO1解离治疗肺癌的研究

目的从蛋白质类泛素化修饰角度解析温里剂四逆汤协同壮观霉素B1抑制肺癌细胞增殖、迁移和促进细胞凋亡的作用机制。方法实验分对照组、壮观霉素B1组、四逆汤组和联合药物组,于人非小细胞肺癌A549细胞株作用48 h后,采用Westernblotting法检测小泛素相关修饰蛋白-1(SUMO1)、10号染色体缺失磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)、磷酸化Akt(p-AKT)和Caspase-9的蛋白表达水平;MTT实验绘制细胞增殖曲线;流式细胞术检测细胞凋亡;细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。结果壮观霉素B1和四逆汤均能够降低A549细胞共价态SUMO1和p-Akt水平,增加PTEN和活化Caspase-9的蛋白水平,抑制细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,壮观霉素B1和四逆汤联合药物组对细胞的抑制作用显著强于各单独给药组。结论四逆汤能够协同壮观霉素B1诱导PTEN与SUMO1解离,进而抑制肺癌细胞增殖、转移和促进细胞凋亡。     

马钱苷联合miR-3619-5p靶向迁移侵袭增强因子1对宫颈癌SiHa细胞迁移和凋亡的影响

目的 研究马钱苷联合miR-3619-5p靶向迁移侵袭增强因子1(migration and invasion enhancer 1,MIEN1)对宫颈癌SiHa细胞迁移和凋亡的影响。方法 采用qRT-PCR法检测宫颈癌SiHa、Hela、CasKi细胞和正常宫颈上皮Ect1/E6E7细胞中miR-3619-5p m RNA表达。在宫颈癌SiHa细胞中转染miR-3619-5p mimics上调miR-3619-5p的表达,给予马钱苷处理,采用CCK-8法分析细胞增殖;流式细胞术分析细胞凋亡;Transwell小室分析细胞迁移和侵袭能力的变化;Western blotting法分析剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved cystein-asparate protease-3,cleaved Caspase-3)和基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotease-2,MMP-2)蛋白表达。生物信息学软件预测miR-3619-5p的靶基因,利用荧光素酶报告系统鉴定二者的靶向关系。在宫颈癌SiHa细胞中共转染miR-3619-5p mimics和MIEN1过表达载体...     

消癌舒及其含药血清对人宫颈癌Hela细胞体外增殖及迁移的影响

目的： 观察消癌舒（XAS）及其含药血清对Hela细胞增殖和迁移的影响,并初步探讨其作用机制。方法： 采用倒置显微镜观察Hela细胞形态;四唑盐（MTT） 法检测Hela细胞的增殖能力;Transwell观察Hela细胞的迁移能力;酶联免疫吸附实验（ELISA）检测Hela细胞糖类抗原125（CA125）的水平;real time RT-PCR 法检测Hela细胞血管内皮生长因子（VEGF） mRNA的表达。结果： 经消癌舒处理后Hela细胞形态发生了改变,表现为细胞折光度下降,体积明显缩小,形状变圆,消癌舒及其含药血清均明显抑制Hela细胞的增殖,消癌舒减少Hela细胞穿过滤膜的个数,降低Hela细胞CA125水平及VEGF mRNA的表达,且与顺铂联用效果更佳。结论： 消癌舒及其含药血清明显抑制Hela细胞的增殖及迁移能力,与顺铂联用作用更明显,其机制可能与降低CA125水平和VEGF mRNA的表达有关。     

基于电子舌和多成分定量技术的厚朴“苦味”药性物质基础研究

目的 通过电子舌与多成分定量相结合的方法揭示厚朴“苦味”药性物质基础。方法 采用电子舌对20批厚朴药材的味觉进行定量化；采用多成分含量测定对20批厚朴中的紫丁香酚苷、木兰花碱、木兰箭毒碱、木兰苷A、木兰苷B、和厚朴酚、厚朴酚和辣薄荷基厚朴酚8个化学成分的含量进行分析，并测定药材电子舌测试液中除辣薄荷基厚朴酚外的7个化学成分的质量浓度；采用皮尔逊相关性分析建立化学成分与味觉传感器响应值的相关关系。根据相关性结果筛选出6个单体化合物并对其味觉进行测定。结果 厚朴药材中和厚朴酚、厚朴酚和辣薄荷基厚朴酚与电子舌苦味、苦味回味存在显著的正相关（P<0.05）；厚朴酚、和厚朴酚虽然为脂溶性化学成分，在电子舌测试液中的含量较低，但仍与苦味、苦味回味有显著正相关（P<0.05）；单体化合物的味觉测试中，厚朴酚、和厚朴酚的苦味和苦味回味的响应值均为最高。结论 厚朴酚与和厚朴酚为厚朴“苦味”药性物质基础。