SjAWMMcAb对吡喹酮杀虫效果的影响

目的 :制备日本血吸虫成虫表膜单克隆抗体 (SjAWMMcAb) ,探讨其与吡喹酮在宿主体内的联合杀虫作用。方法 :用SP2 / 0骨髓瘤细胞与日本血吸虫成虫表膜抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞融合 ,经筛选和克隆化后建立分泌日本血吸虫成虫表膜抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株 ,通过单层细胞培养法和小鼠体内接种法收集单克隆抗体 ;采用Westernblotting和免疫荧光测定 (IFA)对其进行鉴定 ;小鼠实验观察单抗与吡喹酮的联合杀虫作用。结果 :建立了 3个分泌SjAWMMcAb的细胞株 ,Westernblotting显示 3个McAb可识别 5种不同分子量的蛋白 ,IFA表明 3个McAb均能与血吸虫成虫表膜发生特异性反应 ,3B6和 1C2两株McAbs与吡喹酮联用杀虫率分别可提高 4 1.78%和 2 4 .12 %。结论 :某些SjAWMMcAb与吡喹酮可发挥联合杀虫作用     

SjAWMMcAb对吡喹酮杀虫效果的影响

目的：制备日本血吸虫成虫表膜单克隆抗体(SjAWMMcAb)，探讨其与吡喹酮在宿主体内的联合杀虫作用。方法：用SP2／0骨髓瘤细胞与日本血吸虫成虫表膜抗原免疫的BALB／c小鼠脾细胞融合，经筛选和克隆化后建立分泌日本血吸虫成虫表膜抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株，通过单层细胞培养法和小鼠体内接种法收集单克隆抗体；采用Western b1otting和免疫荧光测定(IFA)对其进行鉴定；小鼠实验观察单抗与吡喹酮的联合杀虫作用。结果：建立了3个分泌SjAWMMcAb的细胞株，Western blotting显示3个McAb可识别5种不同分子量的蛋白，IFA表明3个McAb均能与血吸虫成虫表膜发生特异性反应，386和1C2两株McAbs与吡喹酮联用杀虫率分别可提高41．78％和24．12％。结论：某些SjAWMMcAb与吡喹酮可发挥联合杀虫作用。     

McAb-ELISA检测血吸虫循环抗原——Ⅰ.McAb的制备、筛选及初步试验

将感染日本血吸虫或曼氏血吸虫尾蚴的BALB/c小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合,制备了30余株分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤,其靶抗原分别为血吸虫成虫表面膜、肠道、体细胞和虫卵。预试验结果表明,抗血吸虫成虫肠道多糖抗原McAb活性最强,将其用于夹心ELISA检测血吸虫成虫三氯醋酸可溶性抗原,敏感度达1ng/ml。用夹心ELISA测定正常兔血清呈阴性反应;测定感染兔血清呈阳性反应,且抗原水平与感染度呈正相关;8只感染兔治疗后3个月,除2份兔血清外,其余血清均转为阴性。提示本方法优于一般抗体测定法,是一种有潜力的免疫诊断方法。     

旋毛虫幼虫单克隆抗体制备和鉴定

本实验用旋毛虫幼虫可溶性抗原,免疫BALB/c小鼠的脾细胞,与NS_1鼠骨髓瘤细胞融合后,选择4株连续分泌抗旋毛虫幼虫McAb的杂交瘤细胞。经ELISA、IFA鉴定分析,证明这4株细胞能分泌高效价特异性McAb。McAb亚类鉴定结果为IgG_3和IgG_1。是抗幼虫表面抗原,虫体抗原和虫体及囊液不同部位的特异性McAb。     

抗华支睾吸虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其初步应用

本文用华支睾吸虫成虫可溶性抗原免疫的BALB/c小鼠与SP_2/o骨髓瘤细胞融合,经筛选和克隆化后获得4株抗华支睾吸虫单克隆抗体杂交瘤细胞。该4株荜克隆抗体与华支睾吸虫成虫抗原作ELISA,结果均为阳性。经交叉试验(ELISA法)证明与日本血吸虫成虫抗原,虫卵抗原和卫氏并殖吸虫成虫抗原均呈阴性反应。4株单克隆抗体免疫球蛋白亚类鉴定除3F_7株为IgG_1外,其余3株均属IgM。初步试用3F_7株单克隆抗体作ELISA双抗体法检测人体华支睾吸虫循环抗原。     

日本血吸虫多价分子疫苗的制备及其抗原性的研究

目的:为了制备足量、高纯度的供血吸虫保护性免疫力研究的多价分子疫苗。方法:通过制备型SDS-PAGE和电渗方法从日本血吸虫成虫分离纯化出28KD、31/32KD及97KD蛋白。经BCA法检测蛋白含量,SDS-PAGE检测蛋白纯度和分子量,Western-blot及ELISA检测其抗原活性。结果:日本血吸虫成虫28KD、31/32KD及97KD三种纯化蛋白经SDS-PAGE检测均为单一条带并与所分离的蛋白分子量相符;其蛋白含量分别为0.35mg/ml、0.4mg/ml和0.3mg/ml;West-ern-blot均为单一反应区带;ELISA反应滴度分别为1:640、1:1280和1:320。结论:由制备型SDS-PAGE和电渗析方法制备的日本血吸虫成虫28KD、31/32KD及97KD蛋白多价分子疫苗,具有纯度高、制备快、回收率高等优点,而且不影响所纯化的抗原活性。     

抗人IgA McAb的鉴定

用人IgA免疫BALB/C小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP 2/0-Ag 14融合,测定99个融合孔,抗体阳性者10孔。其中2个经克隆获得代表株39-1,2-9。对后者所分泌的McAb及杂交瘤细胞免疫小鼠的腹水,进行了特异性和纯度鉴定。被动血凝抑制试验证明,2个McAb均可被抗原IgA所抑制,抑制率与抗原量成正比;用含2％PEG-6000的琼脂免疫双扩散试验,39-1McAb和免疫抗原IgA产生一条沉淀线,     

风疹病毒单克隆抗体的研究

用风疹病毒(RV)Gos-10株免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,用ELISA法筛选分泌RV McAb的杂交瘤细胞6株,经克隆培养后发现其中的1A_9株能稳定分泌高效价特异性McAb,经鉴定为IgG2a,经ELISA检测、抗原吸收试验、中和试验及HI试验征明该McAb是种特异性的,能与各株RV发生交叉反应,而与其它种病毒不发生反应,证明此McAb对RV抗原有高度特异性与敏感性,可用以制备诊断试剂,实现风疹的早期、快速诊断和基础理论研究。     

日本血吸虫成虫31/32KD 诊断蛋白—与血吸虫单克隆抗体和病人血清的免疫印斑反应

有关血吸虫抗原的分离和纯化已有不少报道和综述。本研究应用免疫印斑技术观察日本血吸虫成虫蛋白与感染日本血吸虫病人和病鼠血清的反应,证实日本血吸虫成虫31/32KD诊断蛋白的存在,并进一步研究了其特性和诊断价值,以期为日本血吸虫病的诊断提供特异的抗原。采用免疫印斑试验进行比较观察,发现日本血吸虫和曼氏血吸虫具有相同的31/32诊断蛋白;应用成虫冰冻切片进行间接免疫荧光抗体试验,检查31/32KD诊断蛋白的形态学定位,证实两者均来源于成虫肠管;与抗血吸虫单克隆抗     

抗猴逆转病毒Ⅰ型(SRV-1)杂交瘤细胞株的建立及应用

以SRV-1蔗糖梯度离心纯化抗原免疫SPF级的BALB/c小鼠,用SP2/0骨髓瘤细胞与免疫小鼠脾细胞融合。应用间接免疫荧光法(IFA)检测抗体,抗原为感染SRV-110d的Raji细胞。筛选出两株SRV-1小鼠杂交瘤细胞株及单克隆抗体(McAb)C_4和C_(15)。两株杂交瘤细胞经3次克隆后分别注入同品系的小鼠腹腔,所产生的腹水经IFA和ELISA法测定其滴度为1:800～1:1600。经琼脂免疫双扩散法鉴定,C_4McAb     

白细胞共同抗原5H_（12）─单抗制备及其理化性质和功能的初步研究

本实验制备了一种单克隆抗体５Ｈ１２，该单抗不但能与正常人外周血多种白细胞反应，也能与多种细胞株反应，说明５Ｈ１２单抗识别的抗原（即５Ｈ１２）是一种白细胞共同抗原。功能实验表明，５Ｈ１２单抗能够抑制Ａｎｔｉ─μ诱导的Ｂ细胞增殖，提示５Ｈ１２抗原对Ｂ细胞活化有某种调节作用，证明５Ｈ１２抗原是一种分子量为２２ＫＤ的单链蛋白质分子。     

非标记抗体技术在流行性出血热病毒抗原研究中的应用

将非标记抗体技术应用于流行性出血热病毒抗原研究,对感染细胞内病毒抗原及经免疫转印到硝酸纤维膜上的病毒多肽抗原进行了检测,并分别与间接免疫荧光和间接酶标抗体方法进行了比较。结果表明,非标记抗体技术敏感性高,背景浅,可用于流行性出血热病毒抗原检测与分析。用非标记抗体技术及间接免疫荧光法对流行性出血热单克隆抗体培养上清液进行筛选,两种方法阳性检出率相同(7.29％,7/96),但前者滴度(1:16～256)高于后者(1:4～32)。     

肾综合征出血热病毒血凝素单克隆抗体的建立与鉴定

用HFRSV血凝素免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,共获得56株分泌抗HFRSV McAb的杂交瘤细胞系。对其中10株细胞系应用血凝抑制试验证明有9株为特异性分泌抗HFRSV血凝素McAb的杂交瘤细胞系。应用微量细胞培养中和试验证明6株具有中和活性。z株(3D_8和3G_1)具有高滴度的血凝抑制活性和中和活性。10株HFRSV血凝素McAb均能与从不同疫区,不同宿主分离的HFRSV反应,说明HFRSV血凝素具有群共同性。     

分泌抗卫氏并殖吸虫囊蚴抗原单克隆抗体的制备

用卫氏并殖吸虫囊蚴抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞杂交获得成功。融合率62%,抗体阳性率18.35%。经克隆化获得9株分泌抗卫氏并殖吸虫囊蚴单克隆抗体的杂交瘤细胞。此9株单克隆抗体均能用囊蚴抗原的ELISA检出。用囊蚴冷冻切片作IFA,出现两种不同的免疫荧光反应类型。9株单克隆抗体免疫球蛋白亚类鉴定属IgG_1。     

抗人肌红蛋白单克隆抗体的制备和初步鉴定

用纯化的人肌红蛋白（Ｍｂ）抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠通过细胞杂交技术。获得１０株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株．其中３株分泌ＩｇＧ_１亚类抗体，２株为ＩｇＧ_（２ａ），５株为ＩｇＧ_（２ｂ）．间接ＥＬＩＳＡ法证明单抗腹水与Ｍｂ起特异性反应，与人血红蛋白（Ｈｂ）．人白蛋白（Ａｌｂ）无交叉反应．免疫印迹检测结果表明，６株单抗腹水能特异性识别分子量１７ＫＤ的Ｍｂ，抗Ｍｂ单克隆抗体的制备，对于急性心肌梗塞早期诊断很有应用价值．     

抗CD28分子单克隆抗体的制备及其免疫学特性

目的制备抗人CD28单克隆抗体,对其免疫学特性进行分析。方法利用多肽技术合成的CD28抗原免疫BALb/c小鼠,应用细胞杂交技术,获得抗CD28的单克隆抗体,并对其免疫学特性进行了分析。结果经过融合、亚克隆成功获得了9株抗人CD28的杂交瘤细胞株,均为IgG,4株为IgG2a,5株为IgG2b。利用竞争抑制实验分别对其中的5株进行了抗原位点测定,5株分别针对三个不同的抗原位点。结论此单抗细胞株的建立,对于深入研究CD28单抗对T淋巴细胞的作用机理有重要意义。     

人转铁蛋白受体特异性单克隆抗体的研制及其初步鉴定

目的 建立能分泌人转铁蛋白受体(TfR)特异性抗体的杂交瘤细胞株,并对其分泌的抗体进行初步鉴定. 方法 将人肝癌细胞株HepG2分离纯化的TfR蛋白,采用常规法免疫BALB/C小鼠;采用间接ELISA法测定免疫血清抗体效价;采用常规聚乙二醇(PEG)介导法,将免疫小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞株SP2/0融合,用含HAT培养基筛选杂交瘤细胞;采用间接ELISA和Cell-ELISA法筛选TfR抗体阳性的杂交瘤细胞;采用有限稀释法进行克隆和多次亚克隆以建立稳定分泌TfR抗体的杂交瘤细胞株;将杂交瘤细胞注射经石蜡油致敏的小鼠腹腔以产腹水抗体,采用硫酸-辛酸法纯化腹水抗体;采用秋水仙素处理,计数细胞染色体数以进行杂交瘤细胞鉴定;采用免疫荧光染色法和Western blot法初步鉴定抗体与细胞表面或细胞总蛋白中TfR的结合. 结果 提取纯化的人TfR蛋白免疫小鼠获得成功,其1∶5 000稀释的血清抗体光吸收值(A490)是对照小鼠血清(1∶200稀释)的16倍以上;细胞融合率为42.22%,其中TfR抗体阳性孔20个,抗体阳性率为13.16%;抗体阳性孔B6和孔E8中杂交瘤细胞经克隆和亚克隆后建立起稳定分泌抗体的细胞株;B6杂交瘤细胞染色体数量位于56~60条之间,应为B细胞和SP2/0细胞融合而来;腹水抗体染色使HepG2细胞表面出现明亮荧光,并且能使HepG2细胞提取的总蛋白电泳图谱在95 000处出现清晰条带,表明该杂交瘤细胞分泌的抗体能特异性结合TfR蛋白.结论 分泌抗人TfR抗体的小鼠杂交瘤细胞株已被筛选和建立;其分泌的抗体能与HepG2细胞的TfR特异性结合.     

ELISA法在检测流行性出血热病毒抗原中的应用

采用ELISA和IFA法检测细胞培养中EHFV抗原,检出时间分别在病毒感染细胞后第4d 和第6d,对 EHFV 抗原的定量检测提示病毒释放的高峰期在其感染细胞后10～12d,患者血浆标本 EHFV 抗原的检出率为26.6%。以上结果指出 ELISA 法用于 EHFV 抗原的检测比 IFA 法优越,适用于实验室对 EHFV 繁殖的监测,而检测 EHFV 抗原用于临床诊断则敏感性太低。