肝细胞癌细胞凋亡、增殖及其相关调控因子表达的研究

目的：探讨肝细胞癌细胞凋亡、增殖及其相关调控因子表达特征与HCC分化状态的关系。方法：分别以末端脱氧核苷酸转移酶（TdT)介导的d-UTP缺口末端标记技术（TUNEL）和SP免疫组化方法检测35例人HCC与其癌旁组织中凋亡细胞和增殖细胞核抗原（PCNA）及p53,Fas的表达特征，并结合临床资料进行分析。结果：凋亡细胞在HCC组织中呈散在分布，其凋亡细胞指数显著低于癌旁组织，而PCNA指数明显于癌旁组织，在HCCⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级中，凋亡细胞指数分别为0．53，0．42，0．20，0．21。PCNA指数分别为0．06，0．41，0．63，0．80，均存在显著差异；HCC组的p53表达随Edmondson分级呈递增现象。而Fas均呈低水平表达，结论：HCC的分化程度与细胞凋亡指数呈正相关，而与PCNA指数呈负相关，HCC细胞凋亡为p53依赖型，p53基因高突变，Fas表达的下调的肝癌组织其恶性程度较高，提示预后不佳。     

90例贲门腺癌p53、bcl—2和PCNA异常表达的病理生物学意义

目的：了解p53、bcl-2蛋白和PCNA的异常表达在不同民族贲门癌发生发展中的作用,为该病的发病学环节提供研究依据。方法：应用免疫组化LSAB法检测90例贲门腺癌和21例非癌组织的p53、bcl-2、PCNA的表达及变化。结果：90例贲门腺癌中p53、bcl-2蛋白、PCNA的表达检出率分别为75．56％（69／90）、87．78％（79／90）、97．78％（88／90）;这些指标在贲门非癌良性组织中的表达检出率分别为4．76％（1／21）、52．38（11／21）、0％（0 ／21） 。阳性表达率在癌和非癌组织间存在显著差异（P＜0．05）。贲门腺癌中bcl-2与p53蛋白之间未发现有相关关系（P＞0．05）。bcl-2与PCNA相关（P＜0．05）。结论：（1）突变型p53、癌基因bcl-2和PCNA的异常表达在贲门癌变过程中具有重要作用。（2）贲门癌组织中p53、bcl-2、PCNA表达在肿瘤分化程度、民族分布方法无统计学差别。     

胃癌p21^WAF1基因表达与组蛋白乙酰化关系的初步研究

目的：探讨胃癌组织p21^WAF1基因表达与组蛋白乙酰化的关系。方法：利用RT—PCR对53例原发性胃癌的癌组织、癌旁组织和正常胃黏膜的p21^WAF1 mRNA表达进行分析；同时对其中p21^WAF1 mRNA表达失活或表达量不足癌旁和正常黏膜的1／2的7例患者进行乙酰化组蛋白免疫印迹分析。结果：①胃癌组织中的p21^WAF1表达率和表达值均显著低于正常胃黏膜和癌旁组织。②p21^WAF1表达水平在分化较好和分化较差的胃癌组织间差异没有显著性（P〉0．05），但在不同浸润深度及有／无淋巴结转移的胃癌组织中差异具有显著性（P〈0．05，P〈0．01）。③p21^WAF1 mRNA表达失活或表达量不足癌旁和正常黏膜的1／2的7例患者中有5例（5／7，71.43％）总染色质乙酰化组蛋白H3表达水平明显低于其相应的癌旁和正常黏膜，甚至在检测水平以下。结论：胃癌组织p21^WAF1的表达降低至少部分归因于组蛋白乙酰化水平的低下。     

大肠癌组织p27及增殖细胞核抗原的表达及其意义

目的：研究p27，增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在大肠癌组织中的表达，并探讨其生物学意义。方法：利用免疫组织化学方法对50例大肠癌患者肿瘤组织和50例正常人大肠组织P27，PCNA表达进行检测。结果：p27和PCNA在癌组织及正常组织中的表达均有显著性差异（P＜0．05），且p27,PCNA表达与大肠癌的分化程度，淋巴结转移和Dukes分期显著有关。结论：p27表达与大肠癌的临床病理学特征密切相关，可能是预测大肠癌预后的重要指标之一，PCNA是反映细胞增殖活性的重要指标。     

Rb、p21在食管鳞癌中的表达与侵袭和转移的关系

目的：探讨Rb,p21在食管鳞癌中的表达与侵袭和转移的关系。方法：应用免疫组分S－P法检测Rb、p21基因蛋白在食管鳞癌、癌旁、侵及肌层和淋巴结转移中的表达。结果：p21在癌组织的表达高于癌旁组织，分化Ⅲ级高于Ⅰ、Ⅱ级，有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组，具有显性差异（分别为P＜0．001、P＜0．01）。而p21的表达与肿瘤浸润的深度有明显差异（P＜0．05）。Rb的表达与肿瘤浸润的深度、分化程度和淋巴结转移呈负相关（分别为P＜0．05、P＜0．01）。结论：抑癌基因Rb的失表达和p21蛋白的过表达与食管鳞癌的分化程度、浸润和转移关系密切。检测Rb、p21有助于食管鳞癌的生物学行为及预后的评价。     

p53,nm23及PCNA蛋白的表达与结肠癌浸润转移的关系

目的：探讨结肠癌中p53、nm23及PCNA的表达与结肠癌浸润转移的关系。方法：采用免疫组化SP法检测76例结肠癌患者p53、nm23及PCNA的表达。结果：结肠癌患者中p53、nm23及PCNA的阳性率分别是53％，70％，82％，p53阳性率与癌组织分化（P＜0．05）、癌浸润深度（P＜0．05）、淋巴结转移（P＞0．05）密切相关；nm23阳性率与癌浸润深度（P＜0．05），淋巴结转移（P＜0．05）密切相关；PCNA阳性率与淋巴结转移密切相关（P＜0．05），p53与nm23表达两者呈负相关（r=-0.402),p53阳性、nm23阴性表达患者淋巴结转移率高于p53阴性、nm23阳性表达者（P＜0．05）。结论：p53、nm23及PCNA在结肠癌中的表达在肿瘤细胞增殖及浸润，转移中均起重要作用，可作为临床预测肿瘤转移潜能及预后的重要参考指标。     

贲门癌组织中PCNA、p53和Bcl-2的表达及其意义

目的探讨细胞增殖与细胞凋亡在贲门癌发生发展中的作用。方法60例贲门癌按照病理类型及分化程度分为五组，观察PCNA、p53和Bcl-2在各组癌组织中的分布、表达并进行灰度值及凋亡指数的比较和研究。结果①贲门非黏液性腺癌：P(2NA、p53显示随着癌组织分化程度的降低，其灰度值呈明显的降低趋势；Bcl-2在各组癌组织中呈现灰度值基本一致的阳性表达；凋亡指数在低、未分化癌组织中显著降低；②贲门黏液性腺癌：PCNA在大部分癌细胞中呈阳性表达；p53和Bcl-2在大部分癌细胞中呈阴性表达；凋亡指数在各组贲门癌组织中最低。结论贲门癌组织中PCNA，p53和Bcl-2的分布、表达与癌组织的病理类型及分化程度密切相关。贲门黏膜组织中细胞凋亡机制的抑制将可导致贲门癌的形成。     

涎腺腺样囊性癌p16蛋白和增殖细胞核抗原的表达

目的 探讨涎腺腺样囊性癌中p16蛋白和增殖细胞核抗原（PCNA）表达与病理分型及淋巴转移关系，为临床治疗及判断预后提供资料。方法 利用免疫组化检测36例涎腺腺样囊性癌组织中p16蛋白阳性表达及PCNA表达。结果 p16蛋白在腺样囊性癌组织中阳性率为33．33％，PCNA阳性率为72．22％；癌组织中p16蛋白阳性表达随着病理分级增高而降低（P〈0．05）；不同病理类型癌组织中PCNA阳性表达差异无统计学意义（P〉0．05）；有淋巴转移癌组织中p16蛋白的阳性表达低于无淋巴转移癌组织（P〈0．05），而PCNA阳性表达则高于无淋巴转移癌组织（P〈0．05）。结论 p16和增殖细胞核抗原表达水平反映该肿瘤浸润性和恶性度，可作为预测淋巴结转移和判断预后的参考指标。     

p21、IGF-Ⅱ在肝细胞癌和肝硬化组织中的表达水平及其与肝细胞不典型增生的关系

目的：探讨p21、胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF—Ⅱ)在肝硬化、肝细胞癌组织中表达的意义及其与肝细胞不典型增生(LCD)的关系。方法：用免疫组化S—P法检测单纯肝硬化、癌旁肝硬化及肝细胞癌(HCC)p21、IGF—Ⅱ表达情况：结果：癌旁肝硬化、单纯肝硬化、癌组织p21的阳性表达率分别为92．86％、68％、54．55％；癌旁肝硬化、单纯肝硬化、癌组织IGF—Ⅱ的阳性表达率分别为75％、74％、36．36％。肝硬化与HCC之间差异有统计学意义(P＜0．05)；IGF-Ⅱ与p21阳性表达呈正相关关系；HBsAg的阳性或伴LCD改变的肝硬化，p21、IGF—Ⅱ阳性率均高于HBsAg阴性或不伴有LCD改变的肝硬化(P＜0．05)。结论：①在肝细胞癌变演化过程中p21、IGF—Ⅱ可能发挥协同作用；②LCD是一群具有肿瘤增殖潜能的癌前细胞群，尤其有p21、IG7—Ⅱ共同过度表达者，有发生HCC的高度危险。     

前列腺癌中PCNA，p16蛋白的表达及其意义

目的：探讨前列腺癌中增殖细胞核抗原（PCNA），p16蛋白的表达与意义与两者之间的关系。方法：采用免疫组织（S－P法）对50例前列腺癌进行PCNA，p16蛋白的免疫组化检测。结果：前列腺低分化腺癌PCNA指数（PCNA－LI）显著高于高分化腺癌（P＜0．05），而p16蛋白表达阳性率明显降低（P＜0．05），p16蛋白阳性的前列腺癌PCNA－LI显著低于p16蛋白阴性者，差异具有统计学意义（P＜0．05），结论：随着前列腺癌分化程度的降低细胞增殖率升高，而p16蛋白表达率明显降低。p16蛋白表达缺失的前列腺癌细胞增殖较旺盛，PCNA，p16蛋白在前列腺癌的发生发展中发挥重要作用。     

肝细胞癌组织中Skp2的表达及与p27kip1、PCNA蛋白表达的关系

目的:探讨Skp2的表达在肝细胞癌(HCC)发生发展中的作用,及其与p27kip1(p27)和PCNA的关系。方法:收集76例HCC及癌旁组织,l0例肝血管瘤旁肝组织的临床病理档案资料,l0例HCC及癌旁肝新鲜组织,采用免疫组织化学方法及免疫印迹技术检测Skp2、p27及PCNA蛋白在这些组织中的表达。结果:免疫印迹结果显示:Skp2在HCC组织中的表达明显高于对应的癌旁肝组织。免疫组织化学结果显示HCC中Skp2的阳性率(24.08%)显著高于癌旁组织和正常肝组织(P<0.001)。Skp2的表达与肝癌组织分化程度,血清AFP值及转移有关(P<0.05)。p27在正常肝组织和癌旁组织中的表达明显高于HCC组织(P<0.001)。HCC组织中PCNA蛋白的表达明显高于癌旁和正常组织(P<0.01)。HCC组织中Skp2的表达与p27呈负相关(P<0.001);与PCNA呈正相关(P<0.01)。结论:Skp2在HCC组织中表达是上调的,可能是通过作用于细胞周期调控蛋白p27,加速了对p27泛素化依赖的蛋白降解,使其表达及代谢发生异常。导致细胞周期失控并促进细胞异常增殖,从而参与了HCC的发生和发展。     

肝细胞肝癌VEGF与p53的表达及其意义

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)和p53蛋白表达与原发性肝细胞肝癌(HCC)的关系。方法用免疫组织化学SP法,检测49例HCC组织、21例癌旁组织、10例正常肝组织VEGF及p53蛋白的表达情况,并与临床病理指标比较分析。结果49例HCC中VEGF、p53蛋白阳性表达分别为63.2%和53.1%;VEGF和p53蛋白表达有相关性(P<0.05)。21例癌旁组织中VEGF和p53蛋白阳性表达分别为19.0%和9.5%。肝癌组织和癌旁组织VEGF和p53蛋白表达差异有显著性(P<0.01)。10例正常肝组织无VEGF和p53蛋白表达。HCC组织中VEGF、p53蛋白阳性表达与血管侵犯和转移倾向明显相关(P<0.05)。结论HCC组织中VEGF、p53蛋白过表达,通过促进HCC肿瘤血管的生成而促进HCC的生长和浸润转移,p53和VEGF可作为反应HCC生物学行为的重要指标。     

肝癌组织survivin的表达与凋亡,增殖和p53的关系

目的：研究肝癌survivin的表达与细胞增殖、凋亡以及053表达的关系．方法：应用免疫组化法检测原发性肝癌组织42例、癌旁肝硬化组织34例、正常肝组织10例中survivin,p53,增殖细胞核抗原（PCNA）的表达．应用TUNEL法检测细胞凋亡．结果：在42例肝癌组织中survivin阳性30例（71．4％）,显著高于癌旁肝硬化组织（11．8％）和正常肝组织（0％,P〈0．001）．肝癌中survivin蛋白的高表达与病理分级（P=0．003）,p53蛋白水平（P=0．008）、细胞增殖凋亡比（P=0．001）及患者生存时间（P=0．002）存在显著相关性,而与年龄、性别、肿瘤大小、临床分期、门脉癌栓（局部转移）无显著相关（P〉0．05）．结论：肝癌组织survivin高表达在打破肝癌细胞的增生和凋亡之间的平衡中起着重要作用．Survivin可能抑制p53阴性肝癌细胞的凋亡,在肿瘤细胞的进一步恶性转化中发挥作用．     

p57kip2在肝癌组织中的表达及其与临床病理因素、PCNA和p53的关系

目的:检测细胞周期抑制因子p57kip2在肝癌中的表达水平,探讨它与临床病理因素、增殖细胞核抗原(PCNA)、p53的关系. 方法:用免疫组织化学法检测32例肝癌组织和10例正常肝脏组织中p57kip2, PCNA和p53的表达水平. 结果:p57kip2在肝癌组织中的阳性率56.2%,显著低于正常肝脏组织(100%)(P=0.011),p57kip2的缺失表达与肝癌细胞的分化较差(P=0.007)、临床分期较晚(P=0.041)及预后较差有关(P=0.036),与年龄、AFP, 肿瘤大小及肿瘤侵犯转移无显著相关(P>0.05);PCNA在肝癌组织中阳性率为56.2%,与p57kip2的表达有关(P=0.036);p53在肝癌组织中的阳性率46.9%,与p57kip2表达在统计学上无相关性(P>0.05). 结论:肝癌组织中存在p57kip2的表达缺失、PCNA的高表达, 共同参与肝癌的发生、发展,而p57kip2和p53可能通过不同途径来诱导细胞凋亡.     

p21与PCNA在子宫内膜癌中表达水平及相关性研究

目的研究增殖细胞核抗原（proliferation cell nuclear antigen,PCNA）与p21在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化染色,检测80例正常子宫内膜黏膜组织、256例子宫内膜癌组织中PCNA与p21蛋白的表达情况,分析比较其表达与临床病理特征的相关性以及两者之间的相关性。结果 p21在子宫内膜癌组织中的阳性表达率明显低于正常子宫内膜组织,并且差异具有统计学意义（P〈0.05）;PCNA在子宫内膜癌组织中的高增殖率明显高于正常子宫内膜组织,并且差异具有统计学意义（P〈0.05）;PCNA和p21与临床分期、病理分级和淋巴结转移显著相关（P〈0.05）,PCNA和p21在子宫内膜癌组织表达存在负相关（r=-0.79,P〈0.05）。结论联合检测PCNA和p21表达可作为评估子宫内膜癌生物学行为及预后的参考指标。     

肝细胞肝癌和肝硬变组织中P21~(WAF1)与P53,PCNA表达之间的关系

目的：分析在肝细胞肝癌（HCC）和肝硬变组织中P21WAF1与P53，PCNA表达之间的关系．方法：用免疫组织化学的方法分别检测了102例HCC和肝硬变组织中上述三种蛋白的表达，并用免疫组化双标记的方法同时检测了P21WAF1和P53，P21WAF1和PCNA的分布．结果：38例肝硬变组织中，均为P53阴性而P21WAF1阳性或弱阳性．64例HCC组织中，P21WAF1阳性、弱阳性和阴性分别占P53阳性组的0，21．1％和78．9％；占P53阴性组的46．7％，24．4％和28．9％．31例肝硬变组织中，P21WAF1阳性、弱阳性组织平均PCNA阳性细胞百分率分别为14％和30％．56例HCC组织中，P21WAF1阳性、弱阳性和阴性组织平均PCNA阳性细胞百分率分别为16％，39％和49％．免疫组化双标记证实了P53阳性的肝癌组织P21WAF1阴性，而癌旁则恰恰相反；未见P21WAF1与PCNA之间有明确的定位关系．结论：HCC中，P53的异常改变是引起P21WAF1表达减弱或消失的主要原因之一；P21WAF1可以抑制肝细胞和HCC细胞的增殖活性．     

Musashi1正调控肝细胞癌细胞的生长并促进其增殖

目的 Musashi1（MSI1）属于RNA结合蛋白（RBP）家族,可特异性地结合mRNA并对蛋白质的翻译起激活或抑制作用,但它在肝细胞癌（HCC）中的功能还未被深入探究。本课题主要探讨MSI1在HCC细胞生长及增殖中的作用及机制。方法 构建MSI1过表达或敲除细胞系。采用免疫组化和Western blot技术检测MSI1在HCC组织中的表达。采用MTT、流式等方法探讨过表达或沉默MSI1对HCC细胞增殖、细胞活力及细胞周期分布的影响,同时检测细胞内PCNA、Cyclin D1以及Wnt/β-catenin通路关键分子APC和β-catenin的表达。结果 MSI1在HCC组织中的表达比非肿瘤的癌旁组织高。与对照细胞相比,HepG2细胞过表达MSI1不仅显著促进了其生长（7 d时的MTT值从0.52±0.12大幅增加至1.01±0.14,P<0.01）,且处于G0/G1期的细胞比率也从（58.42±3.18）%降至（40.67±1.22）%,而S期细胞比率则从（28.51±1.93）%增加至（40.06±1.92）%（P<0.01）。与此同时,细胞PCNA和Cyclin D1蛋白的表达明显上调。反之,敲除MSI1使Huh7细胞的生长显著受抑,更多细胞停滞于G0/G1期（G0/G1期细胞比率从（43.83±1.57）%增加至（62.84±1.22）%（P<0.01）,同时细胞PCNA和Cyclin D1的表达则显著下调。MSI1的过表达可以降低Wnt/β-catenin信号通路分子APC但增加β-catenin的表达,反之MSI1的敲低却可以增加细胞内APC而降低β-catenin的表达。结论 MSI1可以通过正调控HCC细胞的生长及细胞周期的进程而加速HCC病程的进展,其作用可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路实现的。     

Expressions of Nucleoside Diphosphate Kinase （nm23） in Tumor Tissues are Related with Metastasis and Length of Survival of Patients with Hepatocellular Carcinoma

Objective To evaluate the relationship of expressions of nucleoside diphosphate kinase （nm23） and proliferating cell nuclear antigen （PCNA）, as well as apoptosis, with the prognosis of HCC patients by analyzing their pathological and clinical data. Methods The expressions of nm23 and PCNA were analyzed by immunohistochemistry and the apoptotic phenomena were detected by TUNEL technique in the liver samples from 43 HCC tissues, 39 para-neoplastic tissues, and 10 normal tissues. The mean apoptosis index （AI） and proliferative index （PI） in individual sample were calculated. Results As shown by the detection, 32.6% of carcinomas had negative nm23 signal in tumor tissues, whereas all para-neoplastic and normal tissues had positive nm23. The AI in nm23 positive HCC was significantly higher than that in nm23 negative one, with statistical difference （P0.05）. Furthermore, the expressions of nm23, and the values of AI and PI were contrastively analyzed with some main pathological and clinical data of HCC. It revealed that HCC with extrahepatic metastasis showed remarkable correlation with the negative nm23 （P=0.013） and higher PI values of HCC （P=0.015）. The disease-free survival in HCC patients with negative nm23 expression was significantly poorer than that in patients with positive nm23 expression. Conclusion These data suggest that expressions of nm23 protein in tumor tissues are correlated with occurrences of metastasis and length of survival of the HCC patients, which may be an indicator for their prognosis.     

p21~(ras) p53 PCNA蛋白在胃癌组织中的表达

应用免疫组化Ｓ Ｐ法,检测５５ 例胃癌组织中ｐ２１ｒａｓ、ｐ５３、ＰＣＮＡ 蛋白的表达,结果发现：ｐ２１ｒａｓ、ｐ５３、ＰＣＮＡ 阳性率分别为３８－２％ 、２９－１％ 、８３－６％ 。ｐ２１ｒａｓ、ＰＣＮＡ过表达与胃癌浸润深度有关,ｐ５３、ＰＣＮＡ 过表达与胃癌淋巴结转移有关;在不同分化程度胃癌组间ｐ２１ｒａｓ、ｐ５３、ＰＣＮＡ表达均无显著差异。ＰＣＮＡ和ｐ２１ｒａｓ、ｐ５３ 表达组间均呈正相关,且ｐ２１ｒａｓ、ｐ５３ 协同表达可能在胃癌发生、发展中起重要作用。     

肝细胞癌细胞凋亡、细胞增殖与病理组织学类型的关系

目的研究肝细胞癌细胞凋亡、细胞增殖及其与病理组织学类型的关系。方法经手术病理证实的6种组织学类型肝细胞癌57例,用TUNEL法检测凋亡细胞,用免疫组化检测各标本Bcl-2、Bax,P53,Ki-67和PCNA表达。结果透明细胞型和梁索型Ki-67蛋白表达较假腺样型、实体型和低(未)分化型低(P<0.05)。假腺样型Bcl-2蛋白较低(未)分化型低(P<0.05);Bax蛋白表达梁索型较实体型、低(未)分化型和硬化型高(P<0.05);透明细胞型较低(未)分化型高(P<0.05)。Bcl-2/Bax比值梁索型较假腺样型,硬化型和低(未)分化型低(P<0.05);透明细胞型较低(未)分化型低(P<0.05)。随病理分级的升高Ki-67和PCNA蛋白表达升高(P<0.05)。3级Bax蛋白表达较2级显著降低(P<0.05)。细胞凋亡与Bax蛋白表达显著正相关,与Ki-67蛋白表达和Bcl-2/Bax蛋白表达比值显著负相关(P<0.05)。Ki-67蛋白表达与PCNA和P53蛋白表达显著正相关(P<0.05),与细胞凋亡和Bax蛋白表达显著负相关(P<0.05)。P53蛋白表达与PCNA和Ki-67蛋白表达显著正相关(P<0.05),与Bcl-2/Bax蛋白表达比值显著负相关(P<0.05)。Bcl-2蛋白表达与Bcl-2/Bax蛋白表达比值显著正相关(P<0.05),与PCNA蛋白表达显著负相关(P<0.05)。Bax蛋白表达与细胞凋亡显著正相关(P<0.05),与Ki-67、PCNA蛋白表达和Bcl-2/Bax蛋白