α-平滑肌肌动蛋白和β-肌动蛋白在瘢痕组织中的表达

目的探讨α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和β-肌动蛋白(β-actin)对增生性瘢痕形成的可能作用.方法采用荧光定量PCR法检测10例增生性瘢痕和10例正常皮肤组织中α-SMA和β-actin的表达水平.结果增生性瘢痕组织中α-SMA和β-actin表达水平均高于正常皮肤组织,差异有统计学意义(P＜0.01).结论α-SMA和β-actin在瘢痕增生中起重要作用;由于β-actin在瘢痕组织和正常皮肤中的不恒定性,建议在瘢痕的mRNA定量研究中不作为内参照物.     

TGF-β1对瘢痕成纤维细胞α-SMA表达的诱导作用

目的研究转化生长因子β1(TGF-β1)对瘢痕成肌纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的诱导作用.方法以5例增生性瘢痕为标本,3例正常瘢痕为对照,采用成纤维细胞二维培养和三维培养体系及LSAB免疫组织化学染色技术,观察了在不同TGF-β1浓度条件作用下,来源于增生性瘢痕和正常瘢痕的成纤维细胞表达α-SMA的情况.结果①不同浓度的TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞表达α-SMA的作用不同,以5ug/L的TGF-β1作用最有效;②与来源于正常瘢痕的成纤维细胞相比,来源于增生性瘢痕的成纤维细胞在表达α-SMA方面,对TGF-β1的反应更为敏感.③对同一瘢痕来源的成纤维细胞而言,三维培养体系中α-SMA的含量要明显低于二维培养体系.结论①在体外,TGF-β1诱导α-SMA在瘢痕成肌纤维细胞中的表达作用存在着浓度差异;②增生性瘢痕中成纤维细胞与正常瘢痕中成纤维细胞性状存在着差异,对TGF-β1敏感性不同;③细胞外基质成分可能会降低TGF-β1的诱导作用,使α-SMA的表达减少.     

增生性瘢痕胶原结节中成纤维细胞生物学行为的研究

目的研究增生性瘢痕胶原结节中成纤维细胞(fibroblast, Fb)生物学行为及其意义。方法 收集瘢痕切除植皮手术中切除的瘢痕组织及剩余的正常皮肤标本,H-E染色观察正常皮肤与瘢痕组织胶原结节及非结节区域的组织形态学差异,免疫组织化学法检测正常皮肤与瘢痕组织中Ki67及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达及分布情况。结果 与正常皮肤及增生性瘢痕非胶原结节区域相比,增生性瘢痕胶原结节中可见大量Fb,Ki67及α-SMA阳性表达的Fb亦主要分布于胶原结节区域。结论 胶原结节处Fb增殖活跃,并大量分化为肌成纤维细胞(myofibroblast, MFB)。MFB的大量存在提示局部组织处于高张力水平,后者可能是导致Fb功能活跃、大量存在从而形成胶原结节的重要机制之一。     

转化生长因子-β1对瘢痕成纤维细胞的调节及意义

目的 研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对瘢痕成纤维细胞中纤维粘连蛋白(FN)和肌动蛋白(α—actin)表达的诱导作用，探讨TGF-β1与瘢痕挛缩的关系。方法 采用细胞培养、免疫组化、图像分析技术，观察在不同含量TGF-β1的作用下，瘢痕成纤维细胞FN和α—actin的表达情况。结果 不同含量的TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞表达FN和α—actin的作用不同，分别以25～100μg／L和10～50μg／L为有效；与正常瘢痕组织相比，增生性瘢痕的成纤维细胞在表达FN和α—actin方面，对TGF-β1的反应更为敏感，差异均有显著性意义(P＜0．01)。结论 TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞FN和α—actin的表达增加可能与瘢痕挛缩有关。     

重组正反义α-SMA逆转录病毒载体对瘢痕与皮肤成纤维细胞的影响

目的 利用α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因重组反义和正义逆转录病毒载体，探讨α-SMA逆转录病毒对瘢痕与皮肤成纤维细胞的影响。方法 用含α-平滑肌肌动蛋白cDNA，重组反义和正义逆转录病毒载体，并感染培养的瘢痕和皮肤成纤维细胞，进行α-SMA在蛋白水平表达等的研究，观察瘢痕与皮肤成纤维细胞形态学与功能的变化。结果 反义α-SMA逆转录病毒抑制了瘢痕成纤维细胞的增殖，细胞形态变小；α-SMA在瘢痕与皮肤成纤维细胞表达降低，并随着作用时间延长，效果更明显；正义α-SMA逆转录病毒则具有相反的作用，促进α-SMA的表达。结论 α-SMA重组病毒对瘢痕与皮肤成纤维细胞的形态、生长、细胞功能均有影响。     

整合素α1在增生性瘢痕组织中表达的定量研究

目的研究增生性瘢痕组织内整合素α1表达水平及其意义.方法应用荧光定量PCR和巢式PCR技术检测10例增生性瘢痕组织中整合素α1的表达,并以10例正常皮肤组织作为对照.结果样品与内参照物基因组拷贝数的比值(α1 Integrin/GAPDH×100%),增生性瘢痕组为(394.96±27.05)%,正常皮肤组为(20.40±4.88)%,两组差异显著(P<0.01).结论应用荧光定量和巢式PCR方法可对细胞内整合素进行较准确的测定,方法简便且敏感.增生性瘢痕组织中整合素α1的高表达可能是瘢痕增生的重要因素.     

部分喉切除术后喉狭窄瘢痕组织中TGF-β1和α-SMA的表达

[目的]研究喉狭窄瘢痕组织的病理变化,了解转化生长因子β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在喉狭窄瘢痕组织中表达及意义.[方法]垂直喉部分切除术后2～3个月出现喉狭窄10例和未狭窄16例喉瘢痕肉芽组织为实验组及1O例正常声带组织为对照组,进行免疫组化染色,观察组织切片中TGF-β1和α-SMA的表达,并在KONTRON IBAS 2.5全自动图像分析系统下进行阳性细胞计数.[结果]TGF-β1阳性表达主要分布于炎症细胞及成纤维细胞的胞浆,α-SMA阳性表达的主要分布于肌成纤维细胞胞浆.比较非狭窄喉瘢痕组织及正常声带组织,喉狭窄瘢痕组织的TGF-β1和α-SMA的表达均明显增强,阳性细胞数量差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]喉狭窄瘢痕组织的TGFβ1及α-SMA高表达,这些改变可能是喉狭窄发生重要内在因素.     

整合素α1在增生性瘢痕组织中表达的定量研究

目的研究增生性瘢痕组织内整合素α1表达水平及其意义.方法应用荧光定量PCR和巢式PCR技术检测10例增生性瘢痕组织中整合素α1的表达,并以10例正常皮肤组织作为对照.结果样品与内参照物基因组拷贝数的比值(α1 Integrin/GAPDH×100%),增生性瘢痕组为(394.96±27.05)%,正常皮肤组为(20.40±4.88)%,两组差异显著(P<0.01).结论应用荧光定量和巢式PCR方法可对细胞内整合素进行较准确的测定,方法简便且敏感.增生性瘢痕组织中整合素α1的高表达可能是瘢痕增生的重要因素.     

转化生长因子-β及其受体在不同时期增生性瘢痕组织中的表达

目的:检测转化生长因子-β(TGFβ1、TGFβ2)和受体(TGFβRⅠ、TGFβRⅡ)在增生性瘢痕组织中的表达特征,探讨其对增生性瘢痕形成的作用。方法:采用免疫组化染色方法检测TGFβ1、TGFβ2、TGFβRⅠ、TGFβRⅡ在人正常皮肤组织及增生性瘢痕中的表达水平与定位。结果:在正常对照皮肤组织中,TGFβ1在基底细胞层呈弱阳性表达,在真皮成纤维细胞表达为阴性;TGFβ2在基底细胞层、棘细胞层下方、真皮层血管内皮细胞表达为阳性;TGFβRⅠ、TGFβRⅡ在表皮、毛囊上皮细胞、真皮层血管内皮细胞表达阳性,真皮成纤维细胞基本不表达。增生性瘢痕真皮组织中大量成纤维细胞的TGFβ1、TGFβ2、TGFβRⅠ、TGFβRⅡ表达均为强阳性;而部分瘢痕病史超过1年的患者瘢痕真皮层中主要为胶原组织,成纤维细胞较少,成纤维细胞TGFβ1、TGFβ2表达为阴性,但TGFβRⅠ、TGFβRⅡ的表达则为强阳性。结论:转化生长因子-β和受体在增生性瘢痕组织早期形成中发挥重要的促进作用。     

核酶阻断IGF-1及IGF-1R表达抑制病理性瘢痕形成的研究

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及其受体(IGF-1R)在瘢痕组织中的表达水平及核酶对其表达的影响作用.方法:选取2015年5月至2016年7月广州红十字会医院烧伤整形科手术切除的18例患者的病理性瘢痕组织(增生瘢痕9例、瘢痕疙瘩9例),同期收集的20例正常皮肤标本组织,采用苏木精-伊红染色对组织进行观察,采用实时荧光定量PCR技术检测各组织标本的IGF-1 mRNA及其受体mRNA的表达水平,取瘢痕组织成纤维细胞进行细胞培养获得IGF-1及其受体核酶,取第2-4代生长状态良好的对数生长期细胞+核酶继续培养72h后采用实时荧光定量PCR技术检测IGF-1 mRNA及其受体mRNA的表达水平.结果:正常皮肤组织、增生性瘢痕组织、瘢痕疙瘩组织中的IGF-1 mRNA及其受体mRNA的表达水平差异具有统计学意义(P<0.05),组间比较呈现正常皮肤组织<增生性瘢痕组织<瘢痕疙瘩组织的特点且差异均具有统计学意义(P<0.05).正常皮肤组织、增生性瘢痕组织、瘢痕疙瘩组织中的IGF-1 mRNA及其受体mRNA的表达水平差异具有统计学意义(P<0.05),组间比较呈现正常皮肤组织<增生性瘢痕组织<瘢痕疙瘩组织的特点且差异均具有统计学意义(P<0.05).结论:瘢痕组织中IGF-1 mRNA及其受体mRNA的表达水平高于正常组织,核酶具有阻断IGF-1 mRNA及其受体mRNA表达的作用,可能在抑制瘢痕的形成中发挥作用.     

部分喉切除术后喉狭窄瘢痕组织中TGF-β1和α-SMA的表达

 【目的】研究喉狭窄瘢痕组织的病理变化，了解转化生长因子β1（TGF-β1）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在喉狭窄瘢痕组织中表达及意义。【方法】垂直喉部分切除术后2～3个月出现喉狭窄10例和未狭窄16例喉瘢痕肉芽组织为实验组及10例正常声带组织为对照组，进行免疫组化染色，观察组织切片中TGF-β1和α-SMA的表达，并在KONTRONIBAS2．5全自动图像分析系统下进行阳性细胞计数。【结果】TGF-β1阳性表达主要分布于炎症细胞及成纤维细胞的胞浆，α-SMA阳性表达的主要分布于肌成纤维细胞胞浆。比较非狭窄喉瘢痕组织及正常声带组织，喉狭窄瘢痕组织的TGF-β1和α-SMA的表达均明显增强，阳性细胞数量差异有统计学意义（P〈0．05）。【结论】喉狭窄瘢痕组织的TGF-β1及α-SMA高表达，这些改变可能是喉狭窄发生重要内在因素。     

部分喉切除术后喉狭窄瘢痕组织中TGF-β1和α-SMA的表达

【目的】研究喉狭窄瘢痕组织的病理变化，了解转化生长因子β1（TGF-β1）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在喉狭窄瘢痕组织中表达及意义。【方法】垂直喉部分切除术后2～3个月出现喉狭窄10例和未狭窄16例喉瘢痕肉芽组织为实验组及10例正常声带组织为对照组，进行免疫组化染色，观察组织切片中TGF-β1和α-SMA的表达，并在KONTRONIBAS2．5全自动图像分析系统下进行阳性细胞计数。【结果】TGF-β1阳性表达主要分布于炎症细胞及成纤维细胞的胞浆，α-SMA阳性表达的主要分布于肌成纤维细胞胞浆。比较非狭窄喉瘢痕组织及正常声带组织，喉狭窄瘢痕组织的TGF-β1和α-SMA的表达均明显增强，阳性细胞数量差异有统计学意义（P〈0．05）。【结论】喉狭窄瘢痕组织的TGF-β1及α-SMA高表达，这些改变可能是喉狭窄发生重要内在因素。     

黏着斑激酶在增生性瘢痕中的作用研究

目的探讨黏着斑激酶(FAK)在整合素与TGF-β受体介导的瘢痕增生和挛缩过程中的作用.方法取10例增生性瘢痕标本进行成纤维细胞原代培养,通过荧光定量PCR法(FQ-PCR),测定经FAK抗体阻断后培养的瘢痕成纤维细胞中整合素β1、TGF-β受体Ⅰ(TGF-βRⅠ)以及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达量的变化.结果经FAK抗体阻断后培养的成纤维细胞整合素β1、TGF-βR Ⅰ以及α-SMA的基因拷贝数均较阴性对照组明显下降(P<0.05).结论FAK可能是整合素和TGF-βR两条信号传导途径的交汇点,调节整合素、TGF-βR、α-SMA的基因表达和蛋白合成,在瘢痕增生和挛缩过程中具有重要作用.     

β-胡萝卜素对肝纤维化大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白和转化生长因子-β_1表达的影响

目的探讨β-胡萝卜素对肝纤维化大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法将48只大鼠随机分为对照组、肝纤维化模型组和肝纤维化β-胡萝卜素干预组,SABC法免疫组织化学染色显示α-SMA及TGF-β1,HE染色显示肝的显微结构,透射电镜观察肝超微结构。结果肝纤维化模型组、对照组和β-胡萝卜素干预组α-SMA和TGF-β1表达的平均灰度值比较均有显著性差异(P<0.01)。电镜结果显示,对照组肝星形细胞内充满脂滴,其周围无明显胶原纤维沉积;肝纤维化组肝星形细胞内的脂滴较对照组减少;肝纤维化β-胡萝卜素干预组肝星形细胞内脂滴的量介于对照组与肝纤维化组之间。结论β-胡萝卜素抑制α-SMA和TGF-β1的表达,能降低由CC l4诱导的大鼠肝纤维化的程度,其作用途径与抑制肝脏星形细胞中的脂滴丢失有关。     

早、晚期增生性瘢痕组织内β_1、α_1整合素表达研究

目的 :了解早、晚期增生性瘢痕组织内 β1 、α1 整合素粘附分子表达水平及在瘢痕增生发展中的作用和意义。方法 :制备早、晚期增生性瘢痕组织石蜡切片标本 ,借助整合素粘附分子单克隆抗体 ,通过免疫组织化学染色技术检测组织内 β1 、α1 整合素的表达情况。结果 :在早、晚期增生性瘢痕组织中 ,β1 、α1 整合素粘附分子的表达有着较为明显的差异。主要表现为在增生早期瘢痕组织内β1 、α1 整合素粘附分子表达较为广泛 ,无论是表皮基底细胞 ,还是瘢痕浅层、深层以及接近正常皮肤组织边缘的成纤维细胞均有较强的阳性信号表达。而在增生晚期的瘢痕组织中 ,β1 、α1 整合素粘附分子的表达一般局限于表皮基底细胞和部分瘢痕成纤维细胞膜上 ,同时 β1 、α1 的信号强度也比瘢痕增生早期弱。结论 :早、晚期增生性瘢痕组织内 β1 、α1 整合素粘附分子表达差异一方面反映了在瘢痕增生发展过程中组织内成纤维细胞的活性变化 ,另一方面也提示了整合素粘附分子积极参与增生性瘢痕结缔组织的构建。     

转化生长因子-β1与表皮生长因子在成人增生性瘢痕中的表达及意义

目的:初步探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)在成人增生性瘢痕发生中可能的作用,为临床防治提供一定的依据。方法:通过SP法定性和ELISA法定量检测TGF-β1和EGF在成人增生性瘢痕和成人正常皮肤中的表达情况。结果:TGF-β1、EGF在成人增生性瘢痕中呈高表达,二者在成人增生性瘢痕中表达水平呈正相关。结论:TGF-β1、EGF在成人增生性瘢痕中均呈高表达,TGF-β1和EGF在成人增生性瘢痕中的表达水平呈正相关,这为研究临床预防、治疗皮肤增生性瘢痕提供新思路。     

TNF-αR1 mRNA和Caspase-10 mRNA在增殖期增生性瘢痕组织中的表达及意义

目的从基因水平探讨肿瘤坏死因子（TNF-αR1）及半胱氨酸蛋白10（Caspase-10）在增生性瘢痕组织中的作用,为增生性瘢痕的基因治疗提供理论依据。方法利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCT）法分别检测12例增殖期增生性瘢痕组织、12例正常皮肤对照组织中成纤维细胞TNF-αR1 mRNA及Caspase-10 mRNA的表达情况。结果在增生性瘢痕组织中,TNF-αR1 mRNA及Caspase-10 mRNA表达的相对值分别为（1.31±0.27）和（1.19±0.23）,均明显低于正常皮肤组织（P〈0.05）。结论TNF-αR1及Caspase-10在伤口愈合过程中起着重要的作用,增生性瘢痕的形成可能与组织中TNF-αR1 mRNA及Caspase-10 mRNA表达低下有关。     

扩张兔皮肤肌动蛋白、肌球蛋白和α-平滑肌肌动蛋白的变化

目的：了解兔皮肤扩张后皮肤肌动蛋白(actin)、肌球蛋白(myosin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的变化。方法：选用2--3kg新西兰大白兔64只分为2大组，快速扩张组和常规扩张组。每组32只，每大组再分为4组。为扩张完成后即时、1周、12周、24周组，每组8只，其中4只为实验组，另4只植入扩张器不扩张作为对照组。通过免疫组织化学和原位杂交的方法观察扩张后即时、1周、12周、24周皮肤中actin、myosin、α-SMA的变化。结果：扩张后兔皮肤中的actin、α-SMA阳性细胞数明显增多，快速扩张组与常规扩张组各时段比较差异有统计学意义。myosin快速扩张与常规扩张组差异无统计学意义。免疫组化和原位杂交的结果相同。结论：扩张刺激可使成纤维细胞转化为肌成纤维细胞；快速扩张组α-SMA阳性细胞高于常规扩张组可能是扩张越快挛缩越严重的理论基础。     

染料木素对尿毒症大鼠残余肾组织α-平滑肌肌动蛋白沉积的影响

目的 观察染料木素对尿毒症大鼠残余肾组织α-平滑肌肌动蛋白沉积的影响并探讨其机制.方法 5/6肾切除术建立尿毒症大鼠模型,将模型鼠分为染料木素组(G)和对照组(C),假手术组(S)作为正常对照.术后各组正常饮食,G组同时给予染料木素15 mg/(kg·d)灌胃,C组予等量生理盐水灌胃.检测实验各组术前和术后第4、8周尿蛋白、生化等指标.第8周观察肾组织病理变化情况.免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白沉积情况.应用RT-PCR法、Western Blot法分别检测肾组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA转录、蛋白质表达情况.结果 染料木素组与对照组相比,尿蛋白排泄量减少,血清尿素氮、肌酐水平明显下降,差异有统计学意义(P<0.01).肾小球内α-平滑肌肌动蛋白沉积明显减少,肾小球硬化明显减轻.TGF-β1 mRNA、蛋白质表达减弱,差异有统计学意义(P<0.05).结论 染料木素可以降低尿毒症大鼠残肾组织α-平滑肌肌动蛋白的沉积,对肾脏有保护作用,机制可能与抑制TGF-β1的表达有关.     

形态异常的人单核细胞株THP-1中β-肌动蛋白mRNA的表达

目的探讨形态异常的人单核细胞株THP-1中β-肌动蛋白(β-actin)mRNA表达的特点。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测THP-1细胞和形态异常的THP-1细胞中β-actin mRNA的表达。结果RT-PCR产物长度为256 bp和580 bp的β-actin片段在传代5次以内的THP-1细胞中均有表达,但RT-PCR产物长度为256 bpβ-actin片段在传代20次以上、形态异常的THP-1细胞中未见表达。结论传代次数较多、形态异常的THP-1细胞中β-actin的基因可能发生了变异。