8 Hz/130 dB次声对大鼠海马细胞内钙离子浓度的影响

目的: 探讨8 Hz,130 dB次声作用对海马细胞内钙离子浓度的影响. 方法: 将48只SD大鼠随机分为6个组,即对照组、次声作用1 d组、次声作用7d组、次声作用14 d组、次声作用21 d组、次声作用28 d组. 采用急性细胞分离技术,通过钙离子荧光探针及激光共聚焦显微镜观察大鼠脑海马细胞内钙离子浓度变化. 结果: 频率8 Hz,声压级130 dB次声分别作用2 h/d后,海马细胞内钙离子浓度于1 d组即有增高(P<0.01),7 d组仍呈增高趋势,至14 d组达高峰并呈现细胞内钙离子超载征象,至28 d组已回落. 结论: 8 Hz,130 dB次声作用不同时间可导致海马细胞内钙离子浓度不同程度增高,随作用时间延长,海马细胞对次声作用呈现适应性.     

人骨髓间充质干细胞缝隙连接通讯功能的研究

目的研究人骨随间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)的细胞间缝隙连接通讯(gap junctional intercellular communication,GJIC)功能.方法透射电镜观察细胞缝隙连接结构,应用荧光光漂白恢复(fluorescence redistribution after photobleaching,FRAP)技术,5,6-CFDA荧光负载hMSCs,激光淬灭细胞内荧光,通过激光共聚焦显微镜测定体外培养的hMSCs的GJIC功能.结果细胞内荧光被淬灭后可通过缝隙连接通道恢复,hMSCs平均荧光漂白恢复率为(35.26 0.76)%.结论缝隙连接是间充质干细胞间的重要通讯方式.     

甘油三酯对体外培养大鼠胰岛细胞功能及细胞内游离钙的影响

目的:观察甘油三酯对体外培养大鼠胰岛细胞分泌功能及对细胞内钙离子平均荧光强度的影响。方法:体外分离SD大鼠胰岛细胞进行单层细胞培养,与不同浓度甘油三酯(0、0.25、2.5、5.0、10.0mmol/L)共同孵育72小时,进行葡萄糖负荷试验,放射免疫法检测培养液中胰岛素水平,以评价胰岛细胞功能变化;采用Flou-3/AM荧光染色法,共聚焦显微镜下观察细胞内钙离子荧光强度的强弱,以间接反映细胞内游离钙的水平。结果:5.0、10.0mmol/L甘油三酯可抑制胰岛细胞的高糖刺激下的胰岛素分泌(p<0.05);甘油三酯组(2.5、5.0、10.0mmol/l)细胞内钙离子平均荧光强度均明显增强,与对照组比较有显著性差异(p<0.05)。结论:甘油三酯可以导致胰岛细胞内游离钙水平异常升高,影响细胞的分泌功能。     

黄芪总苷对缺氧/复氧诱导损伤细胞外信号调节蛋白激酶的影响

目的 观察黄芪总苷(AST)在缺氧/复氧所致海马神经元凋亡的影响,探讨其抗损伤的作用机制.方法 原代培养海马神经元细胞,建立缺氧/复氧损伤的海马神经元凋亡模型.采用DNA琼脂糖电泳和流式细胞术检测细胞凋亡;激光共聚焦显微镜检测细胞内游离钙离子浓度;Western blot 法检测ERK和磷酸化ERK蛋白的表达.结果 海马神经元细胞经缺氧/复氧后发生了明显凋亡形态学的改变,凋亡率增加,AST(20、40 mg/L)能明显降低模型大鼠海马神经元凋亡百分率和胞质钙离子浓度,且促进磷酸化ERK蛋白水平的表达.结论 黄芪总苷对脑缺血/再灌注所致损伤有一定的保护作用,其机制可能与抑制细胞钙超载、激活细胞ERK信号存活通路有关.     

用Fura-2双波长荧光法测定小鼠海马细胞内游离钙

目的:探讨小鼠海马细胞分离及细胞内钙离子浓度([Ca2 ]i)的测定.方法:低浓度胰蛋白酶消化、分离海马细胞,采用Ca2 荧光指示剂Fura-2双波长荧光法测定[Ca2 ]i.结果:海马细胞存活率超过95%.细胞外Ca2 1.0 mmol/L时,静息状态下海马细胞[Ca2 ]i为(210±10.7)nmol/L.30 mmol/L KCl可显著增加[Ca2 ]i,并且KCl的这种效应呈一定的剂量依赖关系.结论:低浓度胰蛋白酶消化分离小鼠海马细胞简单、可靠;Fura-2建立的双波长荧光法灵敏、可靠.     

丙泊酚对肺动脉平滑肌细胞跨膜钙离子移动影响的实验研究

目的 探讨丙泊酚对肺动脉平滑肌细胞跨膜钙离子移动的影响.方法 SD大鼠麻醉后迅速取出心肺,分离肺动脉平滑肌细胞.进行体外培养.应用Fluo-3/AM进行荧光标记.采用激光共聚焦显微镜观察并测定有或无丙泊酚时,氯化钾(KCI)以及去氧肾上腺素(PE)对细胞内钙离子浓度的影响.结果 KCI(60mmol/L)及PE(10 6mol/L)均能诱发体外培养的肺动脉平滑肌细胞内游离钙离子浓度的升高:加入50μmol/L丙泊酚后细胞荧光值由22.0±9.2降至16.4±8.0(P＜0.01).丙泊酚可显著抑制KCI及PE诱发的细胞内钙离子浓度的升高,荧光强度倍率分别由7.11±3.56降至3.43±0.79、1.35±0.14.结论 丙泊酚对肺动脉平滑肌细胞膜上钙离子通道存在一定的抑制作用.     

雌二醇及雌酮对人子宫内膜细胞GJIC及连接蛋白的影响

【目的】 探讨雌二醇(E2)及雌酮(E1)对体外培养的人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞间隙连接细胞间通讯(GJIC)及连接蛋白(Cx)43?32表达的影响?【方法】 采用划痕染料标记示踪技术及激光共聚焦显微镜扫描技术(LSCM),观察E2及E1对原代培养的20例人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞GJIC的影响,采用激光共聚焦显微镜扫描技术,观察E2及E1对Cx 43?Cx 32表达的影响?【结果】 5 × 10-5 mol/L雌二醇作用48 h后间质细胞及腺上皮细胞GJIC功能没有明显变化(P > 0.05),2.5 × 10-5 mol/L雌酮作用间质及腺上皮细胞48 h后,细胞GJIC功能有所下降(P 0.05)?【结论】 E1抑制细胞GJIC功能,提示其在子宫内膜增殖性病变的阶段扮演重要角色;E1及E2均未影响子宫内膜细胞Cx43?Cx32的表达,提示Cx表达量不能完全反映GJIC功能?     

转基因鼠C6细胞内在缝隙连接通讯功能测定及其化学调控

目的研究Q细胞转染单纯疱疹胸苷激酶基因（herpes simplex virus—thymidine kinase,HSV-TK）前后缝隙连接通讯（GJIC）功能及其化学调节变化。方法用划痕标记染料示踪技术检测不同组别（C6组,C6-TK^-组,C6-TK^＋）C6细胞的GJIC功能以及加用缝隙连接蛋白上调剂apigenin后的功能变化。结果用药前C6组,C6-TK^-组及C6-TK^＋组荧光自伤沿列细胞传递未超过邻近的1列细胞内;用药后3组细胞在荧光显微镜下均可见划痕后的荧光染料可传递至比邻3—4列细胞。结论C6细胞间通讯微弱,基因转染对其无明显影响;Apigenin则可显著增强C6细胞间连接通讯从而提高其GJIC功能及“旁观者效应”。     

丹曲林钠对类缺血小鼠皮质神经元的[Ca2+]i和细胞活力的影响

目的: 观察类缺血后神经元内钙离子浓度及细胞活性的变化,探讨缺血性神经元的损伤与细胞内钙离子的关系及丹曲林钠(Dantrolene)的作用. 方法: 采用孕小鼠皮层神经元培养技术,应用相差显微镜观察培养的神经元形态,激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内钙离子浓度. 结果: 给予神经元类缺血处理5 min后,神经元内钙离子浓度与丹曲林钠组无显著差异(P>0.05). 类缺血处理10 min后再灌注15 min细胞损伤程度较丹曲林钠干预组[Ca2+]i和MTT有显著性差异(P<0.01). 结论: 丹曲林钠可抑制神经元细胞内钙离子浓度的升高,降低缺血性神经元损伤的程度.     

海马脑片LTP中钙变化的激光共聚焦扫描技术测定方法

目的 探讨采用激光共聚焦扫描技术来测定海马脑片LTP诱出过程中锥体细胞内游离钙的变化。方法 海马脑片的常规孵育及LTP的诱出，通过间隙灌流法负载荧光剂Fluo-3AM的海马脑片内游离钙的激光共聚焦测定。结果 直接用Fluo-3AM孵育脑片，可得到轮廓清晰的神经元共聚焦图像，条件刺激诱出LTP这后，海马锥体细胞胞内游离钙显著增高。结论 所述方法对实时测定LTP诱出过程中海马锥体细胞内游离钙的动态变化具有较好的效果。钙离子参与了LTP过程中的信号传递。     

烧伤后心肌细胞间隙连接通讯变化的机制研究

目的：探讨烧伤后心肌细胞间隙连接通讯功能变化的病理生理机制。方法：采用缺氧,烧伤血清损伤培养心肌细胞模型,用划痕标记染料示踪技术检测ＣＪＩＣ功能,同时测定心肌细胞活力、胞浆游离钙及跨膜钙内流的变化。结果：缺氧及烧伤血清损伤后,心肌细胞活力明显降低,跨膜钙内流明显增加,同时伴胞浆游离钙浓度明显增加,正常心肌细胞培养后具有ＣＪＩＣ功能,ＬＹ荧光传递达划痕标记附近４例细胞,缺氧,缺氧加烧伤血清损伤后１ｈ     

全反式维甲酸对脑胶质瘤细胞缝隙连接细胞间通讯功能的影响

目的 观察大鼠脑胶质瘤C6细胞缝隙连接细胞间通讯（GJIC)功能，并研究全反式维甲酸(ATRA)对C6细胞GJIC功能的影响。方法 (1)全反式维甲酸(ATRA)上调(36胶质瘤细胞GJIC功能；(2)划痕荷载染料传输实(SLDT)检测C6细胞ATRA处理前、后的细胞GJIC功能强弱；(3)光学显微镜观察ATRA处理前、后的细胞形态学变化。结果 (1)C6细胞GJIC功能低下；(2)ATRA上调C6胶质瘤细胞GJIC功能；(3)上调C6胶质瘤细胞GJIC功能后细胞增殖受到抑制。结论 (1)ATRA是C6细胞GJIC功能上调剂之一；(2)GJIC功能强弱可影响肿瘤细胞增殖。     

Cx43蛋白在宫颈癌细胞中的表达及其对细胞通讯功能的影响

探讨细胞间隙连接蛋白Ｃｘ４３在人子宫吕细胞系ＨｅＬａ中表达,及其对细胞间隙连接通讯的影响。方法应用流式细胞仪以及ＬｕｃｉｆｅｒＹｅｌｌｏｗ划痕记荧光舆技术,研究维甲酸作用对ＨｅＬａ细胞Ｃｘ４３蛋白表达,以及细胞生长状态和间隙连接通讯功能的调节作用。     

微囊藻毒素、佛波酯和苯巴比妥钠对细胞间隙通讯和细胞内Ca2+浓度的影响

目的:探讨细胞间隙通讯和细胞钙离子信号传导系统在非遗传毒性致癌物的遗传外致癌过程中的作用.方法:应用划痕染料示踪技术(SLDT)和fluo-3荧光标记法,测定微囊藻毒素、佛波酯(TPA)、苯巴比妥钠3种非遗传毒性致癌物对BALB/c 3T3细胞间隙通讯功能和细胞内游离Ca2+离子浓度的影响.结果:3种非遗传毒性致癌物均可不同程度抑制细胞间隙通讯功能,并呈良好的剂量效应关系.TPA和微囊藻毒素可明显诱导细胞内游离钙离子浓度升高,但在试验剂量下苯巴比妥钠未见引起细胞内Ca2+离子浓度的明显改变.结论:细胞间隙通讯系统可能是3种非遗传毒性致癌物的共同作用位点,对细胞Ca2+系统的影响以TPA类非遗传毒性致癌物为主.     

Mechanism of changes in gap junctional intercellular communication in myocardial cells after burns

Ourpreviousstudieshaveshownthatunevenlesionsoccurredinthemyocardiumafterburnsll].Thisisanimportantcontributortoincoordinatecontractionandrelaxationofthemyocardium,contradictionofventricularwallmotionandinternaldisturbanceofthemyocardialmechanics.Thegapjunctionalintercellularcommunication(GJIC)isaformofintercellularadjacentcommunicationthatmainlytransmitsgeneticmessagesintissuesandcells.Itplaysavitalroleinmodulationofnormalproliferation,differentiationandmetabolicfunctionofthecellsandhomeosta…     

Genotoxic and nongenotoxic effects of glycidyl methacrylate on human lung fibroblast cells

Objective To evaluate the genotoxic and nongenotoxic effects of short-term exposure to glycidyl mathacrylate (GMA) on human lung fibroblast cells (2BS cells) in vitro. Methods DNA strand breakage was determined by single cell gel electrophoresis, and DNA ladder formation assay and flow cytometric analysis were carded out to detect apoptic responses of cells to GMA exposure.The HPRT gene mutation assay was used to evaluate the mutagenicity, and the effect of GMA on gap junctional intercellular communication (GJIC) in the exposed cells was examined with the scrape loading/dye transfer technique. The ability of GMA to transform 2BS cells was also tested by an in vitro cell transformation assay. Results Exposure to GMA resulted in a dose-dependent increase in DNA strand breaks but not apoptic responses. GMA was also shown to significantly induce HPRT gene mutations and morphological transformation in 2BS ceils in vitro. In contrast, GMA produced a concentration-dependent inhibition of GJIC. Conclusions GMA elicits both genotoxic and nongenotoxic effects on 2BS cells in vitro. The induction of DNA damage and gene mutations and inhibition of GJIC by GMA may casually contribute to GMA-induced cell transformation.     

荧光光漂白恢复技术在检测膀胱平滑肌细胞间通讯功能中的应用

目的　探讨膀胱平滑肌细胞间通讯的功能变化。方法　利用荧光光漂白恢复 (FRAP)技术检测膀胱平滑肌细胞GJIC功能。结果　在相同的时间内 ,对实验组和对照组膀胱平滑肌细胞漂白后平均荧光恢复率相比较 ,实验组显著高于对照组 (P <0 0 5 )。结论　FRAP技术可以从功能上研究缝隙连接介导的细胞间通讯     

异位和正常子宫内膜间质细胞对上皮细胞间隙连接细胞间通讯的影响

目的 研究体外异位和正常子宫内膜间质细胞对内膜上皮细胞间隙连接细胞间通讯(gap junctional intercellular communication, GJIC)功能的不同影响.方法 取24例卵巢处子宫内膜异位灶以及10例正常子宫内膜,分离、纯化上皮细胞和间质细胞,建立体外上皮细胞单独培养、上皮细胞与间质细胞共培养模型.在激光共聚焦显微镜下采用荧光漂白后恢复技术分别检测各组上皮细胞的GJIC功能.结果 ①异位内膜上皮、间质细胞纯度分别为92%、95%,对照组内膜上皮、间质细胞纯度分别为95%、98%;②单独培养的异位内膜上皮细胞与单独培养的正常内膜上皮细胞的GJIC功能无显著性差异(P＞0.05);③与正常间质细胞共培养后,上皮细胞中GJIC功能明显上调,而与异位内膜间质细胞共培养的上皮细胞中GJIC功能未见明显变化.结论 异位间质细胞丧失了调节上皮细胞GJIC的能力,这种调节能力的异常可能与子宫内膜异位症发生有关.     

环境致癌物阻断NIH3T3细胞间隙连接通讯与细胞内游离钙离子关系初探

选用环境致癌物芥子气（ＭＧ）、苯并（ａ）芘（Ｂ（ａ）ｐ）、４－硝基喹啉－１－氧化物（４ＮＱＯ）、二甲基亚硝胺（ＤＥＮ）、环磷酰胺（ＣＰ）、雌二醇（Ｅｓｔ）、四氯化碳（ＣＣｌ４），作用于该细胞１２ｈ后，用划痕标记染料示踪技术（ＳＬＤＴ）检测其对该细胞间隙连接通讯（ＧＪＩＣ）功能的阻断作用，同时测定该细胞内［Ｃａ２＋］ｉ的变化，结果表明，环境致癌物阻断细胞ＧＪＩｃ与［Ｃａ２＋］ｉ变化密切相关。     

大鼠肝脏缝隙连接蛋白/细胞间缝隙连接通讯在急性肝功能衰竭不同阶段的表达

目的 研究缝隙连接蛋白/细胞间缝隙连接通讯(CX/GJIC)在急性肝功能衰竭(AHF)大鼠肝脏不同阶段的变化规律.方法 雄性Wistar大鼠30只为对照组,选择造模后成活的同种大鼠30只为模型组,分别在造模后1、3、7、10、14d 5个时间点开腹,采取肝组织行免疫组化、切开标记荧光染料传输(IL/DT)和RT-PCR检查.结果 (1)模型组肝组织Cx32较对照组明显减少,并随时间延长呈进行性增加的趋势.(2)模型组的荧光染料传输能力比对照组显著减低,差异有高度统计学意义(P<0.01),此后虽逐渐恢复,但第14天与对照组间的差异仍有高度统计学意义(P<0.01).(3)模型组Cx32 mRNA转录在前3d明显少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 大鼠肝细胞间的CX/GJIC在急性肝功能衰竭早期呈现下调现象,此后逐步恢复.