Effects of cloned tumstatin-related and angiogenesis-inhibitory peptides on proliferation and apoptosis of endothelial cells

Background Tumstatin is a recently developed endogenous vascular endothelial growth inhibitor that can be applied as an anti-angiogenesis and antineoplastic agent. The study aimed to design and synthesize the small molecular angiogenesis inhibition-related peptide （peptide 21）, to replicate the structural and functional features of the active zone of angiogenesis inhibition using tumstatin and to prove that synthesized peptide 21 has a similar activity： specifically inhibiting tumor angiogenesis like tumstatin. Methods Peptide 21 was designed and synthesized using biological engineering technology. To determine its biological action, the human umbilical vein endothelial cell line ECV304, the human ovarian cancer cell line SKOV-3 and the mouse embryo-derived NIH3T3 fibroblasts were used in in vitro experiments to determine the effect of peptide 21 on proliferation of the three cell lines using the MTT test and growth curves. Transmission electron microscopy （TEM） and flow cytometry （FCM） were applied to analyze the peptide 21-induced apoptosis of the three cell lines qualitatively and quantitatively. In animal experiments, tumor models in nude mice subcutaneously grafted with SKOV-3 were used to observe the effects of peptide 21 on tumor weight, size and microvessel density （MVD）. To initially investigate the role of peptide 21, the effect of peptide 21 on the expression of vascular endothelial growth factors （VEGFs） by tumor tissue was semi-quantitatively analyzed. Results The in vitro Ml-r test and growth curves all indicated that cloned peptide 21 could specifically inhibit ECV304 proliferation in a dose-dependent manner （P 〈0.01）; TEM and FCM showed that peptide 21 could specifically induce ECV304 apoptosis （P 〈0.01）. Results of in vivo experiments showed that tumors in the peptide 21 group grew more slowly. The weight and size of the tumors after 21 days of treatment were smaller than those in the control group （P 〈0.05）, with a mean tumor inhibition rate of 67.86%; MVD     

三羟异黄酮对脐静脉内皮细胞ECV304增殖影响与VEGFR的关系

目的探讨三羟异黄酮(genistein)抗肿瘤血管生成的机制.方法通过绘制生长曲线和流式细胞仪检测三羟异黄酮和血管内皮生长因子(vaScular endothelial growth factor,VEGF)对脐静脉内皮细胞ECV304增殖的影响,应用免疫沉淀和激酶活性分析方法检测ECV304细胞血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growthfactor receptor,VEGFR)磷酸化水平和蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTK)活性.结果VEGF单独处理能使ECV304细胞增殖,VEGFR磷酸化水平和PTK活性升高,而三羟异黄酮单独处理能抑制ECV304细胞生长,细胞周期主要被阻止在G2/M期,并出现细胞凋亡现象,VEGFR磷酸化水平和PTK活性降低(P＜0.01),三羟异黄酮和VEGF同时处理时,细胞周期主要仍被阻止在G2/M期,但凋亡率下降,VEGFR磷酸化水平和PTK活性与VEGF单独处理组相比降低.结论三羟异黄酮能下调ECV304细胞VEGFR的磷酸化水平及PTK活性,从而阻断胞外生长刺激信号向胞内转导的级联反应,阻遏血管内皮细胞生长,抑制肿瘤血管生成.     

三氧化二砷抗肝癌血管新生作用

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)注射液抗肝癌血管新生的作用及其相关机制。方法:采用MTT法、透射电镜观察、免疫组化、鸡胚尿囊膜(CAM)血管形成实验等方法,观察As2O3注射液对人肝癌细胞株SMMC-7721和人脐静脉内皮细胞ECV304生长、超微结构、血管内皮生长因子(VEGF)和表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达以及对CAM血管形成的影响。结果:As2O3能显著抑制人肝癌细胞SMMC-7721和人脐静脉内皮细胞ECV304生长,用药后诱导其出现了典型的细胞凋亡超微结构改变;As2O3对SMMC-7721细胞和ECV304细胞VEGF、EGFR的表达均有抑制作用;As2O3能抑制CAM血管形成。结论:As2O3注射液具有显著抗肝癌血管新生作用,其机制与抑制血管内皮细胞生长、诱导血管内皮细胞凋亡、调控肿瘤血管新生相关因子VEGF和EGFR的表达密切相关。     

Effects of eukaryotic expression plasmid encoding human tumstatin gene on endothelial cells in vitro

摘要： 背景 肿瘤抑素（tumstatin）是一种新型的内源性血管生成抑制剂,目前的研究大都是用纯化的肿瘤抑素蛋白。本研究的目的是研究肿瘤抑素过表达质粒的体外抗血管生成作用,揭露其抑制血管内皮细胞生长的潜在机制,并寻找一种能够持续释放肿瘤抑素的方法。 方法：构建了肿瘤抑素真核表达质粒pcDNA-tumstatin并用它转染人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞和人肾癌细胞系ACHN细胞。采用RT-PCR和Western blot技术分别检测tumstatin在两种细胞中的表达情况。通过细胞增殖实验（CCK-8）和细胞周期分析评价tumstatin 过表达对ECV304细胞增殖的影响。为研究pcDNA-tumstatin 体外抑制血管内皮细胞的机制,采用western blot技术检测细胞周期蛋白D1的蛋白水平。 结果 DNA测序确认了pcDNA-tumstatin质粒构建成功。RT-PCR和western blot 结果表明tumstatin能在这两种细胞中有效表达。Tumstatin基因转入后,ECV304细胞生长受到明显抑制,细胞周期停滞于G1期。我们的研究也表明,pcDNA-tumstatin可能通过下调cyclin D1蛋白的水平来抑制血管内皮细胞增殖。 结论 pcDNA3.1+介导的tumstatin过表达能够特异性的抑制血管内皮细胞的增殖,这可能是由于cyclin D1下调导致的细胞周期阻滞于G1期导致的。此外,基因治疗或许是持续释放tumstatin的一种新的策略。     

Effects of eukaryotic expression plasmid encoding human tumstatin gene on endothelial cells in vitro

Background Tumstatin is a novel endogenous angiogenesis inhibitor which is widely studied using purified protein.The current study evaluates the antiangiogenic effects of tumstatin-overexpression plasmid in vitro, reveals the mechanism underlying the vascular endothelial cell growth inhibition and searches for a novel method administering tumstatin persistently.Methods The eukaryotic expression plasmid pcDNA-tumstatin encoding tumstatin gene was constructed and transfected to human umbilical vein endothelial cell ECV304 and human renal carcinoma cell ACHN.Expression of tumstatin in the two cell lines was determined by RT-PCR and Western blotting.Vascular endothelial cell proliferation was assessed by CCK-8 assay and cell cycle was analyzed by flow cytometry.To investigate the mechanism by which pcDNA-tumstatin inhibited vascular endothelial cell proliferation in vitro, cyclin D1 protein was detected by Western blotting.Results DNA sequence confirmed that pcDNA-tumstatin was successfully constructed.RT-PCR and Western blotting indicated that tumstatin could express in the two cell lines effectively.After tumstatin gene transfer, ECV304 cell growth was significantly inhibited and the cell cycle was arrested in G1 phase.And Western blotting showed that pcDNA-tumstatin decreased the level of cyclin D1 protein.Conclusions Overexpression of tumstatin mediated by pcDNA 3.1 （＋） specially inhibited vascular endothelial cells by arresting vascular endothelial cell in G1 phase resulting from downregulation of cyclin D1 and administration of tumstatin using a gene therapy might be a novel strategy for cancer therapy.     

重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子体外抗血管内皮细胞增殖的活性

目的：研究重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子（VEGI）体外抗血管内皮细胞增殖的活性。方法：MTT法检测重组人可溶性VEGI对血管内皮细胞及肿瘤细胞增殖的抑制活性。结果：在体外,重组人可溶性BEGI可强烈抑制人脐静脉内皮细胞ECV304、大鼠肺源毛细血管内皮细胞（MPCEC）及新生牛主动脉内皮细胞（BAEC）的增殖,不能报制黑色素瘤细胞B－16和小鼠成纤维细胞L－929的增殖。结论：重组人可溶性VEGI能作用于不同来源的血管内皮细胞,而对肿瘤细胞增殖无抑制作用,提示其可能通过抗肿瘤新生血管生成而发挥抗肿瘤作用。     

β-榄香烯对血管内皮细胞成血管能力、细胞凋亡及MMP-2、MMP-9活性的影响

  目的 观察β-榄香烯对血管内皮细胞成血管能力、细胞凋亡及基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9活性的影响,探讨β-榄香烯对肿瘤血管生成的抑制作用。方法 人血管内皮细胞株ECV304体外培养,Matrigel胶检测血管内皮细胞的成血管能力,Annexin-Ⅴ/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡,明胶酶谱实验检测血管内皮细胞中MMP-2和MMP-9的活性。结果 接种于Matrigel胶的ECV304细胞经β-榄香烯作用后,形成管腔数目明显减少。随着β-榄香烯浓度增加及作用时间延长,ECV304细胞凋亡明显增多。明胶酶谱实验结果显示,β-榄香烯可明显抑制内皮细胞中MMP-2和MMP-9的活性。结论 β-榄香烯可以促进体外培养的血管内皮细胞凋亡,抑制血管内皮细胞的成血管能力,使血管内皮细胞在Matrigel胶中形成的管腔数目减少,同时β-榄香烯能够抑制血管内皮细胞中MMP-2和MMP-9的活性。     

Effects of TNF-α and curcumin on the expression of VEGF in Raji and U937 cells and on angiogenesis in ECV304 cells

Background To better understand the possibilities of antiangiogenic tumor therapy and to assess possible side effects, we investigated the effect of tumour necrosis factor （TNF）-α and curcumin on the expression of vascular endothelial growth factor （VEGF） in U937 and Raji cell lines and their effect on angiogenesis in a human umbilical vein endothelial cell （HUVECs）-derived cell line （ECV304）, and also the relationship between Notchl and VEGF. The aim of this study was to elucidate potential mechanisms controlling tumor neovascularization. Methods VEGF secreted by U937 and Raji cell lines was determined by ELISA. Angiogenesis was tested by network formation of endothelial cells on Matrigel. Levels of VEGF mRNA in U937 and Raji cells and Notchl mRNA levels in EV304 cells were determined by RT-PCR. Results Secretion of VEGF by U937 and Raji cells was increased by TNF-α treatment and suppressed by curcumin （P 〈 0. 01 ）. The mRNA expression of VEGF165 and VEGF121 （containing 165 and 121 amino acid residues, respectively） were detected in any fractions. TNF-α augmented the expression of VEGF165 and VEGF121 mRNA and curcumin reduced the expression （P 〈0. 01 ）. No networks or cords formed in control and curcumin groups. There was tube formation on matrigel in the supernatants of the Raji culture group and the supernatants groups treated by VEGF group and TNF-α in Raji cell. Notch1 mRNA was detected but there was no significant change in the VEGF group compared with control （P 〉 0. 05）. Conclusions Expressions of VEGF mRNA in U937 and Raji cells were increased by TNF-α and suppressed by curcumin. VEGF and TNF-α can induce angiogenesis, and curcumin can inhibit angiogenesis in ECV304 cells.     

阿魏酸钠对小鼠H22肝癌生长的抑制作用及其机制研究

目的 观察注射用阿魏酸钠对小鼠H22肝癌生长及血管生成抑制作用及其对血管内皮生长因子(VEGF)Mrna转录的影响.方法 昆明小鼠前腋下皮下接种H22小鼠肝癌细胞,腹腔注射阿魏酸钠,每3 d测量1次肿瘤体积.用免疫组化法测定VEGF及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.MTT法检测阿魏酸钠对H22肿瘤细胞及血管内皮细胞(ECV304)增殖的影响,RT-PCR法测定肿瘤组织的VEGF Mrna的转录.结果 阿魏酸钠组小鼠H22肿瘤体积、重量增长明显较对照组缓慢(P＜0.05),同时阿魏酸钠组的肿瘤微血管密度及VEGF、PCNA阳性细胞较对照组显著减少(P＜0.05).阿魏酸钠组VEGF Mrna转录比对照组显著减少(P＜0.05).体外实验,阿魏酸钠对ECV304及H22细胞的增殖均无显著抑制作用.结论 阿魏酸钠可以显著抑制小鼠H22肿瘤的生长及血管生成,且能抑制VEGF的表达,但不能抑制ECV304及H22细胞的增殖.阿魏酸钠对肿瘤组织VEGF表达的抑制作用可能是其抗H22肿瘤及抗血管生成的一个重要机制.     

参附注射液对氧化应激血管内皮损伤及相关信号转导通路的影响

目的  研究参附注射液对氧化应激血管内皮损伤的作用及相关信号转导通路的影响。方法  培养血管内皮细胞ECV304,MTT法筛选H₂O₂造模和参附注射液的干预浓度;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量;Hoechst染色和流式细胞术检测评估细胞凋亡;Western blot法检测Cleaved Caspase-3、ERK、p-ERK、Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果  H₂O₂呈浓度依赖性诱导ECV304细胞死亡;H₂O₂促进ECV304细胞内ROS含量增加,参附注射液或N-乙酰半胱氨酸(NAC)可拮抗此过程;与对照组比较,H₂O₂能够诱导ECV304细胞凋亡,增加ERK和Caspase-3的活化,下调Bcl-2/Bax表达;与模型组比较,参附注射液或NAC能拮抗H₂O₂诱导的ECV304细胞凋亡,抑制ERK与Caspase-3的活化,上调Bcl-2/Bax表达(P < 0.05)。结论  参附注射液通过抑制ERK磷酸化和Caspase-3活化,上调Bcl-2/Bax表达,拮抗H₂O₂诱导的ECV304细胞凋亡。      

中药白芨提取物抑制肿瘤血管生成机制的实验研究

目的　探讨中药白芨提取物抑制肿瘤血管生成的机制。方法　应用细胞培养方法 ,比较空白组、对照组及不同浓度白芨胶组之间人肝癌细胞系 (Hep G2 )细胞增殖率、凋亡率、血管内皮生长因子 (VEGF)分泌水平的差异 ,并观察细胞培养上清对人脐静脉内皮细胞系 (ECV 30 4)生长的影响。对Walker 2 5 6移植性肝癌大鼠行经动脉化疗栓塞治疗 ,分为对照组、单纯化疗组、碘油栓塞组及白芨微球栓塞组 ,每组 2 0只大鼠。栓塞术后 2周 ,用免疫组织化学法检测肿瘤细胞Ⅷ因子 [用以计算微血管密度 (MVD) ]、VEGF及碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)表达情况。结果　细胞培养各组之间Hep G2细胞增殖率、凋亡率及上清液中VEGF浓度的差异无显著意义 ,但经白芨胶处理后的Hep G2细胞上清液可明显抑制ECV 30 4内皮细胞的增殖 ,当白芨胶浓度为 0 5、1 0、2 0、4 0、8 0 μg/ml时 ,内皮细胞生长抑制率分别为 5 7 6 %、6 6 7%、86 4%、87 5 %、94 8% ,呈剂量依赖性。动脉化疗栓塞实验中 ,白芨微球栓塞组肿瘤MVD(血管计数 /视野 )为 5 9± 34,明显低于对照组 ( 81± 2 4)、单纯化疗组 ( 83±2 0 )及碘油栓塞组 ( 85± 2 4) (F =5 177,P =0 0 0 3) ;VEGF、b FGF的表达各组间差异无显著意义。结论白芨提取物可能通过抑制肿瘤血管内     

胃肠道间质细胞瘤p53基因表达与增殖、凋亡及血管形成的关系

目的研究胃肠道间质细胞瘤(GIST)中p53基因表达与增殖、凋亡及血管形成的关系.方法我们研究了86例GIST,采用免疫组织化学法检测p53基因表达,采用胶银及免疫组织化学法检测核仁组成区嗜银蛋白(AgNORs)、增殖细胞核抗原(PCNA)、抗人增殖细胞抗体Ki-67(Ki-67)来反映细胞的增殖,采用原位末端标记法检测细胞凋亡指数(API)来反映细胞的凋亡,采用免疫组织化学法检微血管密度(MVD)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)来反映血管形成.结果 p53阳性、阴性表达组的AgNORs,pCNA和Ki-67表达分别为(5.96±2.05)、(3.35±1.48)(P＜0.01)、(24.14±6.15)、(8.11±3.12)(P＜0.01)、(8.46±2.14)、(2.36±1.12)(P＜0.01);p53阳性、阴性表达组的API分别为(5.74±3.15)、(15.12±7.89)(P＜0.01);p53阳性、阴性表达组的MVD、VEGF表达分别为(19.82±7.15)、(10.78±3.89)(P＜0.01)、68.09%、35.90%(P＜0.01).结论突变型p53基因能够促进GIST增殖、抑制凋亡、增加血管形成,与肿瘤的形成、发生与发展密切相关.     

Tumstatin肽对视网膜微血管内皮细胞增殖及ERK蛋白表达的影响

目的 观察Tumstatin肽对体外培养的视网膜微血管内皮细胞增殖及细胞外信号调节激酶(ERK) 蛋白表达的影响。方法　采用MTT比色法测定Tumstatin肽（T8肽）对血管内皮生长因子（VEGF）诱导下的恒河猴视网膜血管内皮细胞（RF/6A细胞）增殖的干预作用；采用Western-blot检测T8肽对VEGF刺激后15min、30min、45 min和60min的RF/6A细胞ERK1/2蛋白表达水平的变化。 结果　T8肽浓度在5μg/ml 以上时对RF/6A细胞有抑制作用，且抑制作用随着浓度的增大而增高，各组OD值和抑制率比较差异均有显著性意义（P均<0.05）；T8肽可抑制VEGF对RF/6A细胞的促增殖作用；在1～40μg /ml相同浓度条件下，T8肽对VEGF条件下的RF/6A细胞增殖抑制率显著大于无VEGF条件下的抑制率（P均<0.01）。VEGF可刺激RF/6A细胞ERK1/2蛋白表达增加，T8肽可抑制VEGF诱导的RF/6A细胞ERK1/2蛋白的表达。 结论　Tumstatin抑制视网膜微血管内皮细胞的增殖，机制可能与VEGF信号转导通路上的ERK1/2细胞信号转导通路有关。     

小檗碱衍生物B-119抑制肿瘤及血管内皮细胞增殖的作用

目的探讨小檗碱衍生物B-119对肿瘤细胞的增殖抑制作用及对血管内皮细胞增殖、迁移和小管形成的影响。方法MTT法检测B-119对瘤细胞株MDA-MB-231、B16、K562、LLC、HT29、SMMC-7721、Colo205、HL60和血管内皮细胞ECV304的增殖抑制作用;划痕法测定B-119对血管内皮细胞ECV304迁移的影响;观察B-119对血管内皮细胞ECV304小管形成的影响。结果 B-119对8株肿瘤细胞具有不同程度的抑制作用,IC50值为0.76～26.83mg/L;B-119对ECV304的增殖抑制作用表现为时间、浓度依赖性,24,48,72h的IC50分别为59.22,12.08,3.31mg/L;药物干预组ECV304细胞迁移数减少,且随B-119浓度的增加,迁移抑制作用越强,B-119浓度为1.25,2.5,5mg/L干预24h后,细胞迁移数渐次减少,抑制率分别为49.29%,59.71%和71.94%(P<0.01);B-119对ECV304小管形成有明显的抑制作用,浓度为10,20,30mg/L时的小管形成抑制率分别为35.71%,57.14%和67.86%(P<0.01)。结论 B-119可抑制肿瘤细胞的增殖,并抑制血管内皮细胞的增殖、迁移和小管形成。     

抗整合素αⅤβ3单抗抑制上皮性卵巢癌血管及肿瘤生成的实验研究

目的探讨抗整合素αⅤβ3单抗诱导血管内皮细胞凋亡,抑制上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)血管及肿瘤生长的作用效应.方法将EOC细胞株TYK细胞接种于鸡胚尿囊膜(chickchorioallantcic member,CAM)建立EOC CAM模型,细胞接种后12 h,分别加入抗整合素αⅤβ3抗体(实验组)和生理盐水(对照组).5 d后,应用图像分析系统检测2组CAM血管数目(number,N)、血管面积(area,A)、血管面积比(vessel area,VA/A)及肿瘤组织面积(tissue,T).脐静脉内皮细胞株(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)ECV304接种于玻连蛋白(vitronectin,Vn)表面,2 h后加入抗αⅤβ3抗体,计数0、12 h、24 h、48 h、72 h细胞凋亡率.结果实验组N、A、VA/A及T分别为(16.80±0.71)根;(10.02±4.48)mm2;25.50±11.41;(8.25±4.15)mm2,显著小于对照组的(42.20±15.32)根;(26.15±8.35)mm2;66.62±17.64;(34.26±15.83)mm2(P<0.05).抗αⅤβ3单克隆抗体诱导HUVEC时间依赖性细胞凋亡,其24 h、48h和72 h的凋亡率显著高于IgG对照组.结论抗整合素αⅤβ3单抗通过诱导血管内皮细胞凋亡而抑制卵巢癌血管及肿瘤生长,整合素αⅤβ3可作为卵巢癌治疗的一个有效靶点.     

胰腺癌血管内皮生长因子表达及与微血管生成的关系

目的　探讨胰腺癌血管内皮生长因子 (VEGF)表达及与微血管生成、临床分期、病理分级的关系。方法　用免疫组织化学方法检测 30例胰腺癌组织中VEGF表达和微血管密度 (MVD)。结果　胰腺癌组织中VEGF表达阳性率 6 3.3% (19/ 30 ) ;VEGF阳性者MVD显著高于阴性者 (P <0 .0 5 ) ;Ⅲ～Ⅳ期组VEGF表达率显著高于Ⅰ～Ⅱ期组 (P <0 .0 5 ) ;VEGF表达及MVD与病理分级无关。结论　胰腺癌组织中VEGF高表达 ,VEGF使微血管大量生成 ,促进肿瘤生长、转移 ,VEGF和MVD可作为反映胰腺癌生物学行为的一个参考指标。     

双歧杆菌对实验性大肠癌血管形成的影响

目的 从血管形成这一角度探索青春型双歧杆菌的抑瘤机理。方法 以大肠癌裸鼠移植瘤为动物模型,用免疫组化法检测大肠癌组织血管内皮生长因子(VEGF)的表达及其微血管密度(MVD)。结果 双歧杆菌注射组大肠癌VEGF的阳胜细胞密度和MVD的数量均明显低于肿瘤对照组(P<0.01)。结论青春型双歧杆菌能抑制大肠癌的血管形成,其途径可能是下调VEGF的表达。     

大肠癌ET-1表达及其与肿瘤细胞增殖和微血管形成的关系

目的研究ET-1在大肠腺癌中的表达及其与肿瘤细胞增殖和微血管形成的关系,探讨ET-l在大肠癌发生中的作用机制。方法应用免疫组化SABC法检测41例大肠腺癌及20例大肠腺瘤组织中ET-1表达、PCNA标记指数(PCNALI)及肿瘤微血管密度(MVD),分析ET-1表达与PCNALI以及MVD的关系。结果ET-1主要分布于大肠腺癌细胞胞浆,ET-1阳性表达肿瘤组织基质中血管内皮细胞也有增强表达,而癌旁组织及阴性表达的肿瘤组织基质中血管内皮细胞仅有较弱表达。腺癌的ET-1表达率及强度显著高于腺瘤(P<0.001)。等级相关分析表明,ET-1表达与PCNALI及MVD均密切相关(P<0.001),PCNALI与MvD亦呈正相关(P<0.001)。结论ET-1可能通过促进大肠癌微血管形成来影响肿瘤恶性生长。     

十全大补汤对荷瘤小鼠结肠癌原发肿瘤切除后转移瘤生长及血管生成的影响、

目的：探讨十全大补汤对小鼠结肠癌原发肿瘤（先前接种肿瘤）切除后皮下移植瘤、肝内转移瘤及切口种植瘤生长及血管生成的影响,阐明十全大补汤抑制原发瘤切除引起的转移瘤生长的内在机制。方法：构建3种荷瘤小鼠原发肿瘤切除模型,随机分为原发瘤切除组、原发瘤未切除组、十全大补汤组。分别采用原发瘤切除及十全大补汤治疗10d,摘除眼球取血,剥离瘤体,并测量其大小和质量。酶联免疫吸附测定法（enzyme—linkedimmunosorbentassay,ELISA）检测治疗后小鼠血清中血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor,VEGF）、血管抑素（angiostatin,AS）和内皮抑素（endostatin,ES）水平。应用组织切片苏木素伊红染色法观察肿瘤转移灶情况;链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结免疫组织化学法检测转移瘤微血管密度（microvasculardensity,MVD）及细胞增殖;采用末端脱氧核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase—mediated dUTPnick—end—labeling,TUNEI．）法检测细胞凋亡指数。结果：原发肿瘤切除后,皮下转移瘤模型中,十全大补汤组平均转移瘤体积与原发瘤切除组比较明显变小（P〈O．01）,转移瘤发生率为50％;肝转移瘤模型中,十全大补汤组平均肝转移结节个数与原发瘤切除组比较明显减少（P〈0．01）,转移瘤发生率为40％;切口移植瘤模型中,十全大补汤组平均转移瘤体积与原发瘤切除组比较明显变小（P〈0．01）,转移瘤发生率为30％。在皮下、肝脏、切口转移瘤模型中,与原发瘤切除组比较,十全大补汤组肿瘤组织Ki67明显降低（P〈0．01）,TUNEL指数明显增高（P〈O．01）,MVD明显降低（P〈O．01）。ELISA检测显示,与原发瘤切除组比较,十全大补汤能够降低血清中VEGF及上调ES的表达,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：原发瘤切除可使荷瘤小鼠体内的VEGF、AS和ES比例失衡,有利于肿瘤血管生成及促进转移。十全大补汤能明显抑制小鼠原发瘤切除后转移瘤生长,明显抑制转移瘤血管生成以及与之相关的血管生成调节因子的作用,并且可抑制转移瘤细胞增殖,促进细胞凋亡。故原发瘤切除后及时应用十全大补汤对降低转移瘤发生具有重要意义。     

抗VEGF抗体对骨肉瘤OS-732细胞血管生成及其肿瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的：探讨阻断血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF)的血管生成作用对骨肉瘤OS-732细胞及血管内皮细胞增殖、凋亡的影响。方法：应用鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）模型,通过解剖显微镜血管计数,光镜HE染色,原位末端标记及PC-NA免疫组化检测观察VEGF抗体对骨肉瘤血管生成及肿瘤增殖,凋亡状态的影响。结果：VEGF抗体组肿瘤区血管数目及瘤细胞数显著低于PBS对照组,肿瘤细胞凋亡指数显著高于PBS对照组,增殖指数两组差异不明显,同时VEGF抗体组凋亡的微血管内皮细胞增多,增殖期微血管内皮细胞少见。结论：VEGF抗体能显著抑制骨肉瘤OS-732血管生成,抑制内皮细胞增殖,促进内皮细胞凋亡,可能是VEGF抗体发挥抗血管生成作用的途径之一,并可能通过抑制血管形成而促进肿瘤细胞凋亡,最终达到抑制瘤细胞生长的作用。