抗抗总黄曲霉毒素单抗F(ab’)2多克隆抗体的制备及特性

目的:以抗总黄曲霉毒素单抗2G2株F(ab’)2片段作为免疫原制备抗抗总黄曲霉毒素单抗独特型多克隆抗体。方法:制备抗总黄曲霉毒素单抗2G2株F(ab’)2片段,分别用F(ab’)2片段和F(ab’)2-KLH免疫日本大耳白兔,制备抗抗总黄曲霉毒素单抗独特型多克隆抗体。采用ELISA检测该抗体替代黄曲霉毒素B1(AFB1)的情况,并分析与其他单克隆抗体的交叉反应情况。用该多克隆抗体免疫BALB/C小鼠,采用间接非竞争ELISA检测小鼠血清,鉴定该抗体的亚型。结果:由2G2株F(ab’)2片段所得的抗抗总黄曲霉毒素单抗独特型多克隆抗体纯化后,替代游离AFB1达到20%、50%和80%竞争抑制时的质量浓度分别为1、4和25mg/L,分别相当于0.47、2.74和16.00μg/L游离AFB1;该抗体替代AFB1包被抗原达到20%、50%和80%竞争抑制时的质量浓度分别为1、4和19mg/L,分别相当于0.33、1.35和5.45μg/L游离AFB1。小鼠生物鉴定显示该多克隆抗体为Ab2β型。结论:成功制备了抗抗总黄曲霉毒素单抗独特型多克隆抗体,为研制AFB1无毒检测试剂盒提供了依据。     

黄曲霉毒素B加合物的研究进展

黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）在霉变的食物当中普遍存在,是黄曲霉毒素中致癌性最强的真菌毒素。原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是我国常见的高致死性肿瘤,而AFB1暴露被认为是HCC的主要危险因素之一。AFB1加合物是AFB1暴露的主要分子生物标志物,反映了AFB1终致癌物与细胞靶分子的相互作用,是靶分子受损后的直接产物及替代产物,并且与HCC的发生发展有密切联系。本文就近年来对AFB1加合物的研究进展进行综述。     

我国各地区粮食中黄曲霉产毒性能的调查研究

自17省、区524份粮食样品中分离的1660株黄曲霉,其产毒株的百分率以广西最高,甘肃未分离出产毒株;产毒菌株的平均产毒量也是广西最高,辽宁和吉林最低,总的趋势是华南、华中和华东地区高,华北较低,东北和西北最低;各地产毒菌的百分率与全国普查粮食中黄曲霉毒素B_1 的阳性率呈非常显著的等级相关,并与各地区肝癌死亡率呈相关关系。     

ST37型艰难梭菌的生长适应性研究

目的通过对临床分离的8株ST37型艰难梭菌的生存特性研究,为临床感染治疗提供初步实验依据及新的研究思路。方法将产毒型ST37艰难梭菌与不产毒ST39艰难梭菌1∶1等量混合后培养,应用实时荧光定量PCR方法检测毒素基因tcdB随培养时间延长相对表达量的变化,从而了解ST37型艰难梭菌与不产毒菌株共存时的生长适应性。同理将ST37型艰难梭菌与tcdA+tcdB+的ST54菌株等量混合后测定毒素基因tcdA相对表达量的变化,了解ST37型艰难梭菌与产双毒菌株共存时的特性。结果将ST37型艰难梭菌菌株与不产毒的艰难梭菌1∶1混合后培养,毒素基因tcdB在混合培养液中所占的比例随时间延长逐渐下降（P<0.05）,至第4天混合液中几乎检测不到tcdB。将ST37型艰难梭菌菌株与tcdA+tcdB+的ST54菌株混合培养后,毒素基因tcdA并未随时间延长而规律减少（P>0.05）。结论不产毒艰难梭菌菌株能抑制产毒的ST37型艰难梭菌的生长,然而只产tcdA毒素的ST37型艰难梭菌并不能抑制产双毒菌株艰难梭菌的生长。     

ELISA法测定部分种子和果实类中药黄曲霉毒素B1含量

目的 间接竞争酶联免疫吸附法(ELISA)法测定部分种子果实类黄曲霉毒素B1的含量.方法 间接竞争酶联免疫吸附法(ELISA法).结果 样品均有不同程度的污染黄曲霉毒素B1(AFB1),并且在贮藏过程中有发霉现象者含量较高.结论 建立黄曲霉毒素B1含量限度标准非常必要.     

肝癌高发地区人群黄曲霉毒素暴露水平的评估

目的：通过对我国原发性肝癌高发区居民进行较为全面的黄曲霉毒素（AFT）暴露水平的评估，为进一步研究AFT与肝癌的关系提供依据。方法：选择甲地（广西扶绥县竹琴村）、乙地（江苏启东通兴乡）丙地（启东天汾镇）作为调查地区，应用AFT生物标记物的检测，对人群AFT暴露水平进行评估。结果：食物结构调查表明，甲地居民以玉米为主食，乙地和丙地居民则以大米为主食，粮食中黄曲霉毒素B1（AFB1）的污染水平以甲地最为严重，居民膳食中AFB1的摄取量即AFT外暴露水平，血清中AFB1-白蛋白（AFB1-ALB）加合物水平，肝癌发病率均以甲地最高，丙地最低，且有显著性差异。结论：AFT外接触水平高的居民，AFB1-ALB加合物水平，尿中AFM1水平亦高，说明两者是反映AFB1外接触剂量的良好指标，在现有膳食结构条件下，AFT暴露仍是肝癌危险因素之一。     

ELISA 试剂盒定量检测中药材和中成药的黄曲霉毒素B1

为评价中药材和中成药的黄曲霉毒素 B1 (AFB1 )污染程度 ,采用了 EL ISA试剂盒定量检测 AFB1 ,对一批中药材和中成药进行检测 ,发现 AFB1 检出率和含量很高     

超高效液相色谱法检测食品黄曲霉毒素

目的 建立一种快速、灵敏、简便的超高效液相色谱法(UPLC)同时测定食品中黄曲霉毒素B1(AFB1)、B2(AFB2)、G1(AFG1)、G2(AFG2)水平的方法.方法 样品用乙腈水(84:16)提取液提取后过滤,滤液经黄曲霉毒素多功能净化柱(MFC)净化,纯化液经浓缩挥干后,加三氟乙酸(TFA)衍生后,用带有荧光检测器的超高效液相色谱仪测定.结果 4种黄曲霉毒素5min完全分离,线性范围质量浓度分别为0.10～100.00μg/L(AFB1、AFG1)、0.05～50.00μg/L(AFB2、AFG2),最低检出质量分数分别为0.04μg/kg(AFB1、AFG1)、0.02μg/kg(AFB2、AFG2),大米、玉米、花生、油炸面点回收率为80.0%～101.2%,相对标准偏差＜5%,r≥0.999.结论 该方法简单、快速、灵敏度高,适用于食品中4种黄曲霉毒素水平的同时测定.     

污染油茶子的霉菌及其毒性

本文指出油茶种子即使外观无破损、无霉变仍有20％被霉菌污染。这些污染菌隶属10个属27个种(或群),其中有11个种(或群)是可能的产毒菌,占全部被分离菌株的36.6％。在分离的黄曲霉菌中有36.3％的菌株可以产生黄曲霉毒素B_1。     

XRCC3基因多态性对AFB1-DNA加合物水平的影响

[摘要] 目的 探讨DNA修复酶基因X线修复交叉补体因子3（x-ray repair cross-complementing group 3, XRCC3) codon 241多态性对黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）高污染区广西人群AFB1-DNA加合物水平的影响。方法 应用竞争性酶联免疫吸附法检测研究对象（966例）AFB1-DNA加合物水平,而XRCC3基因型分析则通过PCR-RFLP来完成。结果 (1)带有codon 241 Met等位基因的 XRCC3基因型（XRCC3-Thr/Met,XRCC3-Met/Met）与高AFB1-DNA加合物水平相关,其风险值分别为1.43 (1.08～1.89)和2.42 (1.13～5.22);(2) XRCC3多态性与长时间的AFB1暴露在AFB1-DNA加合物形成过程中存在协同作用(OR = 11.00,P < 0.01)。结论 AFB1在带有易感基因型XRCC3-Thr/Met和XRCC3-Met/Met的人群更易诱导产生DNA损伤（AFB1-DNA加合物）。     

Effect of essential oils on Aspergillus spore germination,growth and mycotoxin production: a potential source of botanical food preservative

ObjectiveTo investigate effect of essential oils on Aspergillus spore germination, growth and mycotoxin production.MethodIn vitro antifungal and antiaflatoxigenic activity of essential oils was carried out using poisoned food techniques, spore germination assay, agar dilution assay, and aflatoxin arresting assay on toxigenic strains of Aspergillus species.ResultsCymbopogon martinii, Foeniculum vulgare and Trachyspermum ammi (T. ammi) essential oils were tested against toxicogenic isolates of Aspergillus species. T. ammi oil showed highest antifungal activity. Absolute mycelial inhibition was recorded at 1 μl/mL by essential oils of T. ammi. The oil also showed, complete inhibition of spore germination at a concentration of 2 μl/mL. In addition, T. ammi oil showed significant antiaflatoxigenic potency by totally inhibiting aflatoxin production from Aspergillus niger and Aspergillus flavus at 0.5 and 0.75 μl/mL, respectively. Cymbopogon martinii, Foeniculum vulgare and T. ammi oils as antifungal were found superior over synthetic preservative. Moreover, a concentration of 5 336.297 μl/kg body weight was recorded for LC50 on mice indicating the low mammalian toxicity and strengthening its traditional reputations.ConclusionsIn conclusion, the essential oils from T. ammi can be a potential source of safe natural food preservative for food commodities contamination by storage fungi.     

Fluoroquinolone resistance and mutation patterns in <Emphasis Type="Italic">gyrA</Emphasis> and <Emphasis Type="Italic">parC</Emphasis> genes in <Emphasis Type="Italic">Neisseria gonorrhoeae</Emphasis> isolates from Shanghai,China

In order to study the resistance of Neisseria （N.） gonorrhoeae to the fluoroquinolone and detect mutation patterns of quinolone resistance-determining regions （QRDRs） of clinical isolates in Shanghai, China, a total of 80 clinical isolates of N. gonorrhoeae were consecutively collected from Shanghai. The MIC of fluoroquinolone for the isolates was examined by using the agar dilution method and the mutation profiles of the QRDRs of gyrA and parC were analyzed by sequencing and restriction fragment length polymorphism （RFLP）. Chi-square test was used for comparison of the t：nutation patterns. The results showed that： （1） High percentages of the 8 isolates were resistant to ciprofloxacin （95.0%）, ofloxacin （95.0%） and lomefloxacin （97.5%）, only one strain was susceptible to the ciprofloxacin. （2） Sensitive strains had a substitute of Asp95→Ala in the gyrA, and all isolates that were resistant or intermediated to the ciprofloxacin, had a double mutation in the gyrA （Ser91, Ala 92 and Asp95）. Some strains also had a mutation in the parC. （3） The MICs of these isolates were significantly associated with the mutation patterns in the gyrA and parC. A double mutation of gyrA combined with parC87 mutation was a predominant pattern in Shanghai and could mediate high level resistance to ciprofloxacin. It suggests that mutations in the QRDRs of gyrA and parC may be responsible for the fluoroquinolone resistance. And fluoroquinolone could not be used as the first line antibiotics for gonorrhea treatment any more in Shanghai, China.     

改良抗酸染色法在结核性浆膜炎临床诊断中的价值

目的 应用改良的抗酸染色法(改良法)对确诊的结核性浆膜炎患者进行回顾性诊断,并与传统的抗酸染色法(传统法)相比较,以评估改良法对结核性浆膜炎的临床诊断价值。 方法 48例确诊结核性浆膜炎患者的浆膜腔积液同时送检改良法和传统法。其中,胸腔积液33例,腹腔积液15例。全部患者浆膜腔积液均为首次采集,采集时未经抗结核治疗(未治疗)患者28例,已进行抗结核治疗(已治疗)患者20例。 结果 48例患者改良法和传统法抗酸杆菌检出率分别为58.33%(28/48)和6.25%(3/48),两者差异有统计学意义(P=0.000);28例未治疗患者改良法抗酸杆菌检出率为71.43%(20/28),显著高于传统法3.57%(1/28,P=0.000);已治疗患者改良法抗酸杆菌检出率为40%(8/20),明显低于未治疗患者(P<0.05)。改良法和传统法阳性标本细胞外均检出抗酸杆菌,改良法检出胞内菌,传统法则均未检出。 结论 改良法显著提高了抗酸杆菌的检出率。而胞内菌的检出,对于判定细菌的存在则更具特异性。改良法极大地提高了诊断率,对于结核性浆膜炎患者的早期诊断和治疗,具有很高的临床应用价值。     

盐胁迫对胶霉毒素生物合成基因gliT表达的影响

从烟曲霉菌株F3中克隆得到gliT基因（胶霉毒素生物合成基因簇成员之一）,其编码产物GliT是一个假定的硫氧还蛋白还原酶,含有保守的Pyr_redox和TrxB结构域,与来自于烟曲酶菌株Af293的GliT在氨基酸水平上的同源性高达97%。不同盐浓度培养条件下,烟曲霉菌株F3中gliT基因的表达变化与发酵液中胶霉毒素的含量变化之间存在着明显的相关性,均在盐浓度70g/L培养条件下达到峰值,提示gliT基因在胶霉毒素生物合成过程中的作用可能与盐胁迫有关。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的分布与耐药性分析

目的 了解耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）的分布特点及其耐药性,为指导临床合理使用抗菌药物提供依据。方法 收集2014年1月至2017年12月临床分离的CRKP菌株,采用自动化仪器法和纸片扩散法（K-B法）对上述菌株进行药物敏感性试验,药物敏感性结果严格按照美国临床和实验室标准化协会（CLSI）和美国食品药品管理局（FDA）标准判定。采用WHONET软件和SPSS 20.0软件对数据进行统计分析。结果 共收集临床分离CRKP菌株403株,主要标本来源为痰/支气管肺泡灌洗液（169株,占41.9%）。CRKP首次分离标本来源不同,后续CRKP血流感染的发生率也不同,差异有统计学意义（P<0.05）。CRKP来源科室位列前3位的分别为烧伤重症监护病房（30.0%,121/403）、消化科（8.4%,34/403）和急诊重症监护病房（7.2%,29/403）。药物敏感性试验结果显示CRKP除对替加环素和磷霉素耐药率较低外,对其余抗生素的耐药率均>60.0%。结论 CRKP对多数常用抗生素呈现高度耐药。应加强对CRKP的耐药性监测,尤其是烧伤重症监护病房等重点科室,并采取有效措施预防和控制CRKP的传播。     

南昌市水体、水(海)产品中霍乱弧菌污染状况调查和流行病学分析

目的通过对南昌市水体、水(海)产品中霍乱弧菌的系统监测,了解南昌市水体水(海)产品霍乱弧菌的污染状况,为制订霍乱防制策略提供依据。方法在霍乱可能发生流行的季节按月定期在南昌市范围内开展水体、水产品霍乱弧菌的监测,采用聚合酶链反应(PCR)方法对检出的霍乱弧菌的毒力特征进行分析,了解菌株的生物学性状,是否为产毒株,是否有致病力,采用核酸脉冲电泳场技术(PFGE)对水体、水产品中O139型分离株和同一年的霍乱病人及带菌者中的O139型分离株进行同源性分析比较,了解其分子生物学及流行病学特征。结果散发病例中的分离株均为非产毒株,同样有致病力,与外环境的水体、水(海)产品中的分离株无关联,暴发疫情的病例中的分离株均为产毒株,与常规监测的水(海)产品中的分离株有一定相关性,常规监测水体中的分离株均为非产毒株,在表型及基因水平上与病例中的分离株差异较大,不是病例发生的致病菌。结论霍乱疫情输入区散发病例具有偶然发生的特点,常常表现为"来无影、去无踪"的特点,被产毒株污染的水(海)产品是导致暴发疫情发生的主要原因。     

桃儿七内生真菌分离及其抑菌活性初步研究

目的 探明桃儿七内生真菌资源多样性及其抑菌活性特征。方法 通过组织块法对内生真菌进行分离,并选择5种植物病原真菌和4种细菌作为指示菌,采用对峙法和改进的菌块法测定抑菌活性。结果 从桃儿七根、茎、叶中分离出49株内生真菌,根部最多,22株,其次为茎部,18株,叶部最少,9株;经形态学分类鉴定归于2个目,3个科,9个属,梭孢霉属为优势菌属;有22株菌对1种或多种供试植物病原真菌有不同程度的抑制作用,占分离菌株数的44.8%,有8株菌对2种或多种供试植物病原真菌有明显的抑制作用,其占所分离菌株总数的16.3%,有3株菌对4种或多种供试植物病原真菌有明显抑制作用,2株内生真菌分别对2种供试指示细菌具有明显的抑制作用。结论 桃儿七内生真菌具有多样性和明显的抗外源真菌活性,抑菌活性菌株主要分布在曲霉属、单孢枝霉属、梭孢霉属,其内生真菌的研究和开发具有重要的生态和经济意义。     

Hibiscus sabdariffa extract inhibits in vitro biofilm formation capacity of Candida albicans isolated from recurrent urinary tract infections

Objective

To explore the prevention of recurrent candiduria using natural based approaches and to study the antimicrobial effect of Hibiscus sabdariffa (H. sabdariffa) extract and the biofilm forming capacity of Candida albicans strains in the present of the H. sabdariffa extract.

Methods

In this particular study, six strains of fluconazole resistant Candida albicans isolated from recurrent candiduria were used. The susceptibility of fungal isolates, time-kill curves and biofilm forming capacity in the present of the H. sabdariffa extract were determined.

Results

Various levels minimum inhibitory concentration of the extract were observed against all the isolates. Minimum inhibitory concentration values ranged from 0.5 to 2.0 mg/mL. Time-kill experiment demonstrated that the effect was fungistatic. The biofilm inhibition assay results showed that H. sabdariffa extract inhibited biofilm production of all the isolates.

Conclusions

The results of the study support the potential effect of H. sabdariffa extract for preventing recurrent candiduria and emphasize the significance of the plant extract approach as a potential antifungal agent.     

育龄妇女分离无乳链球菌对氟喹诺酮类抗生素的耐药性及耐药机制研究

目的 研究5年来分离育龄妇女的无乳链球菌对氟喹诺酮类抗生素的耐药性及耐药机制,为临床上合理使用抗菌药物提供理论依据。 方法 收集笔者医院2009年1月~2014年1月5年间就诊的育龄妇女分离的无乳链球菌253株,回顾性调查无乳链球菌引起感染的类型,采用Vitek-2 compact全自动细菌鉴定和药敏系统对菌株MIC进行测定。用PCR分别扩增氟喹诺酮类耐药菌株的parC和gyrA基因,并进行测序和序列分析。 结果 253株无乳链球菌中,187株来自女性宫颈分泌物,占73.9%;其余菌株来自尿液、血液和脓液等标本。药敏结果回顾性分析,对头孢噻肟、头孢曲松、头孢吡肟和万古霉素的敏感度均为100%,对青霉素和氨苄西林的敏感度较高,分别为98.4%和93.3%,对四环素的耐药率高达94.1%, 对左氧氟沙星不敏感均为71.1%。57.5%左氧氟沙星耐药无乳链球菌同时存在parC(ser79/Tyr)和gyrA(Ser8l/Leu)基因突变,73.3%中介菌株检测到单独parC(ser79/Tyr)基因突变。而仅15.1%敏感菌株检测到单独parC(ser79/Tyr)基因突变。此外,另有10株耐药和5株中介菌株未检测到parC和gyrA基因突变。 结论 左氧氟沙星不敏感无乳链球菌parC基因和gyrA基因的突变类型均分别以ser79/Tyr和Ser8l/Leu突变为主,应加强对育龄妇女进行无乳链球菌的筛查工作,加强无乳链球菌的耐药性监测。