着床前遗传学筛查周期中不同受精来源囊胚发育速度与染色体整倍性分析

目的为了提高着床前遗传学筛查(PGT)周期患者体外授精-胚胎移植(IVF-ET)成功率和胚胎利用率,通过单核苷酸多态性-微阵列比较基因组杂交技术(array-SNP)分析PGT患者的2PN、0PN和1PN来源的胚胎染色体的整倍性,从而优化移植策略。方法回顾性分析2013—2018年在我中心行PGT助孕,其2PN、1PN和0PN来源的胚胎均有囊胚形成的患者,比较不同发育速度的2PN、0PN和1PN来源的活检囊胚的染色体整倍性。结果比较第5天不同受精来源的活检囊胚染色体整倍体率差异无统计学意义(P>0.05);第6天囊胚中,0PN来源的活检囊胚染色体整倍体率要低于2PN和1PN来源的活检囊胚整倍体率,差异有统计学意义(P<0.05);第5天和第6天的囊胚相比,不同受精来源的囊胚染色体整倍体率差异无统计学意义(P>0.05)。结论对于PGT周期患者,0PN以及1PN来源的胚胎培养后形成囊胚,通过芯片技术检测其染色体正常的囊胚仍占一定比例,可作为移植胚胎。不同发育速度的囊胚,其染色体的整倍体率差异并无统计学意义。     

无创胚胎植入前遗传学检测的现状与展望

利用滋养外胚层(TE)细胞活检对植入前胚胎进行遗传学筛查已经有20多年的历史, 但其在选择整倍体胚胎方面的优势仍然存在争议。近年来, 胚胎废弃培养液中游离脱氧核糖核酸(cfDNA)的发现, 为获得胚胎的细胞遗传学信息提供了一种潜在的无创替代方法。有研究报道胚胎cfDNA分析与TE、内细胞团(ICM)和整个囊胚(WB)的活检结果高度一致。然而, 在cfDNA成为可靠的胚胎基因组信息来源应用于临床之前, 仍然面临很多挑战。本文综述了基于培养液中的cfDNA的无创胚胎植入前遗传学检测(niPGT)的产生和现状, 并对其局限性和未来前景进行了探讨, 为niPGT应用于临床提供参考。     

血清学筛查联合胎儿染色体非整倍体无创基因检测的临床效果观察

目的探究分析血清学筛查联合胎儿染色体非整倍体无创基因检测的临床效果。方法选取本院收治的孕妇40例进行研究,以随机数字表法分为对照组(n=20)和观察组(n=20),对照组采用血清学筛查,观察组采用血清学筛查联合胎儿染色体非整倍体无创基因检测。对比两组检测效果。结果观察组在胎儿高风险、临界风险、无创产前诊断方面的占比率显著高于对照组,观察组中产前诊断胎儿染色体异常、非整倍体占比率显著高于对照组。结论在产前胎儿非整倍体诊断检查中运用血清学筛查联合胎儿染色体无创基因检测,临床诊断效果显著,降低胎儿染色体非整倍体病的发生率,临床诊断安全性高,患者接受程度高,在产科临床中可值得推广运用。     

微阵列基因芯片在新生儿遗传性耳聋筛查中的应用研究

背景　新生儿听力筛查在世界范围内广泛开展,在早期发现、诊断和干预方面发挥了重要作用。2012年1月北京市启动了新生儿听力和基因筛查同步工作,同时进行新生儿听力和基因筛查,将发挥重要作用。目的　应用微阵列基因芯片对新生儿进行遗传性耳聋筛查,评估新生儿中4个常见遗传性耳聋基因突变的频率、突变类型以及其与遗传性耳聋的相关性,为推广新生儿遗传性耳聋基因筛查提供临床研究证据。方法　选取2017年度北京大学第三医院妇产科生殖医学中心检测的17 824例新生儿,采集出生3 d后的足跟血,使用微阵列基因芯片进行4个常见遗传性耳聋基因9个突变位点的筛查,对阳性结果进行测序验证。结果　新生儿遗传性耳聋基因筛查17 824例,检出阳性890例,阳性率为4.99%。其中GJB2基因杂合突变型501例（2.81%）,SLC26A4基因杂合突变型290例（1.63%）,SLC26A4基因纯合突变型1例（0.01%）,线粒体DNA 12S rRNA突变型41例（0.23%）,GJB3基因杂合突变型41例（0.23%）,双杂合突变型16例（0.09%）。结论　新生儿常见遗传性耳聋基因突变以GJB2基因突变、SLC26A4基因突变为主,微阵列基因芯片可以及早有效地检出先天性耳聋、迟发性耳聋及药物性耳聋基因的携带情况。微阵列基因芯片筛查,快速、高效,对遗传性耳聋的早期诊断、早期干预及遗传咨询具有重要意义,提倡推广新生儿听力筛查联合基因筛查。     

NT超声联合无创DNA对接受产前筛查孕妇胎儿染色体非整倍体异常诊断效能的影响

目的观察颈项透明层厚度(NT)超声联合无创DNA对接受产前筛查孕妇胎儿染色体非整倍体异常诊断效能的影响。方法选取兰考县中心医院4 280例接受产前筛查的孕妇,均行NT超声、无创DNA检查。以羊水穿刺检测结果为金标准,评估对比NT超声、无创DNA单独检查及联合检查的诊断结果,诊断胎儿染色体非整倍体的异常灵敏度、特异度、准确率。结果 4 280例胎儿中染色体非整倍体异常26例,NT超声检出38例,无创DNA检出41例,联合检出48例。NT超声联合无创DNA筛查产前胎儿染色体非整倍体异常的灵敏度(92.31%)高于NT超声(57.69%)(P<0.05),与无创DNA的73.08%比较,差异无统计学意义(P>0.05)。NT超声联合无创DNA筛查产前胎儿染色体非整倍体异常的特异度、准确率与NT超声、无创DNA单独检查比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。结论 NT超声联合无创DNA筛查产前胎儿染色体非整倍体异常可提高诊断灵敏度,具有较高诊断效能。     

无创胚胎染色体筛查在染色体非整倍体检测中的应用效果

目的探讨无创胚胎染色体筛查技术(NICS)在染色体非整倍体检测中的应用效果。方法收集2017年5月至2019年5月在安徽省妇幼保健院生殖中心拟行体外受精-胚胎移植的364例患者的囊胚培养液,并行NICS筛查。对单囊胚移植且临床确认妊娠的46例患者,根据其妊娠结局不同行不同染色体检查方法:对12例流产的患者行流产组织染色体检查,并以该检查结果为金标准,计算NICS的灵敏度和特异度;对继续妊娠的34例患者行外周血无创产前遗传学筛查(NIPS),比较NICS结果与NIPS筛查结果的差异。结果 12例流产的患者样本中,流产组织染色体检查与NICS检查为染色体非整倍体者均为3例,NICS筛查的灵敏度为100%;在流产组织染色体检查为整倍体的9例样本中,对应的NICS检出2例为非整倍体,其特异度为77.78%,两种筛查方法的一致性分析Kappa值为0.64。继续妊娠的34例患者样本中,NIPS筛查均未检出13、18、21号染色体为非整倍体胚胎,NICS对这3条染色体的筛查结果与NIPS一致。结论 NICS筛查染色体非整倍体有较好的灵敏度,但假阳性率偏高,需进一步技术优化以提高特异性。     

针对染色体易位携带者的微阵列比较基因组杂交-植入前遗传学诊断技术的建立与应用

目的:应用微阵列比较基因组杂交技术(array-CGH)对染色体平衡易位携带者进行胚胎植入前遗传学诊断,探讨其临床应用价值。方法:应用荧光原位杂交技术(FISH)对染色体易位携带者D3胚胎进行检测,对结果为异常且发育到囊胚的15枚胚胎应用array-CGH再次检测,建立array-CGH技术平台,再将array-CGH技术应用于染色体平衡易位携带者胚胎植入前遗传学诊断。结果:对经过FISH检测为异常且发育到囊胚的15枚胚胎进行全基因组扩增(WGA)后采用array-CGH技术进行检测,发现array-CGH技术不仅能够检测到FISH结果对应的数目异常和结构异常,还可以发现除FISH诊断的染色体异常外其他染色体异常。其对于相互易位病例不平衡易位断裂点检测的结果与对易位携带者的核型分析结果一致。应用array-CGH技术对5对染色体易位携带者夫妇的31枚胚胎进行胚胎植入前遗传学诊断,30枚获得检测结果 ,1对夫妇移植1枚整倍体胚胎后获得妊娠,羊水染色体分析提示胎儿染色体核型正常。结论:通过全基因组扩增以及array-CGH技术,对染色体平衡易位携带者胚胎进行植入前遗传学诊断,能够全面评估胚胎染色体的情况,具有良好的临床应用前景。     

PGT-A及PGT-SR在辅助生殖中的应用

目的探讨胚胎植入前遗传学检测(preimplantation genetic testing,PGT)在辅助生殖中应用的价值,为PGT的临床应用提供依据。 方法回顾性分析行非整倍体筛查（PGT for aneuploidies,PGT-A）和染色体结构异常检测（PGT for structural rearrangements,PGT-SR）助孕夫妇的临床资料、实验室资料及妊娠结局资料。采用囊胚期外滋养层细胞活检及基因检测技术,挑选检测结果正常的胚胎行单囊胚移植。比较年轻女性（＜35岁）组与高龄女性（≥35岁）组的一般资料、胚胎培养情况、胚胎活检结果及妊娠结局。 结果共纳入PGT-A 194个周期,635个胚胎,101个移植周期;共纳入PGT-SR 92个周期,399个胚胎,40个移植周期。PGT-A及PGT-SR中≥35岁组获卵数均少于＜35岁组(P＜0.05),胚胎发育情况差异无统计学意义(P＞0.05),PGT-A及PGT-SR中≥35岁组正常胚胎率明显低于＜35岁组(P＜0.05)。随着年龄的增加,PGT-A胚胎活检正常率逐渐下降;PGT-A 101个移植周期中活产44例（43.56%）,各组间妊娠结局差异无统计学意义（P＞0.05）;PGT-SR 40个移植周期中活产19例（47.50%）,妊娠结局差异无统计学意义（P＞0.05）;子代均健康。 结论PGT是解决复发性流产、高龄女性、染色体异常夫妇的有效治疗手段,能够有效改善高龄女性的生育状况,但40岁以后的女性是否行PGT助孕,应权衡利弊后决定。     

462例无创产前基因检测结果分析

目的:探讨无创基因检测技术在筛查高危孕妇胎儿常见染色体非整倍体中的应用价值。方法:应用高通量测序技术对462例高危孕妇外周血进行胎儿21-三体、18-三体及13-三体检测分析,筛查阳性者,进行羊水穿刺检查确诊。结果:行产前无创基因检测的462例样本中,发现胎儿非整倍体阳性者11例,其中21-三体9例,18-三体1例,13-三体1例,经羊水穿刺确诊阳性病例9例,假阳性2例,其余病例出生后随访,未发现漏诊病例。结论:无创产前基因检测是一项很好的筛查胎儿染色体非整倍体畸形的筛查技术,临床实用性高,筛查时间早,漏诊率低,而且可以使一部分孕妇免受羊水穿刺等有创产前检查。     

无创胚胎植入前非整倍体筛查的诊断有效性分析

探讨无创胚胎植入前非整倍体筛查（niPGT-A）的诊断有效性。     

单枚冻融囊胚移植周期中植入前遗传学检测后单胎活产围产期结局

胚胎植入前遗传学检测(PGT)是一种在卵胞浆内单精子注射(ICSI)过程中选择正常胚胎进行移植的技术, 适用于基因缺陷、染色体异常、高龄女性、复发性流产、反复种植失败和严重畸形精子症。自首例PGT成功至今已有30余年, PGT技术在临床应用上有了长足的发展, 为患有遗传疾病及不孕不育患者带来了生育健康后代的希望。本研究旨在探讨单枚冻融囊胚移植周期, 以确定与IVF/ICSI相比, PGT是否与更高的不良围产期结局风险有关。     

胚胎植入前遗传学检测降低高龄冻融胚胎移植患者早期自然流产率的研究

目的：探讨胚胎植入前遗传学检测（preimplantation genetic testing,PGT）对高龄患者冻融胚胎移植（frozen?thawed embyo transfer,FET）周期临床妊娠早期自然流产率的影响。方法：回顾性分析2015年4月1日—2020年7月30日南京大学医学院附属鼓楼医院生殖医学中心≥35岁行PGT?FET的103个周期与常规FET的1 495个周期的患者资料,采用1∶2倾向性评分匹配的方法匹配出具有相似基线特征的患者队列,对匹配后的两组进行临床妊娠率、早期自然流产率、活产率等临床指标进行比较。结果：经1∶2倾向性评分匹配,PGT?FET组中103例患者和常规FET组的206例患者成功配对,两组患者基线资料相似,差异无统计学意义。PGT?FET 组早期自然流产率显著低于常规FET组（11.11% vs. 27.18%,P＜0.05）,差异有统计学意义;PGT?FET组活产率高于常规FET组（43.69% vs. 32.52%,P=0.05）,但差异无统计学意义;两组生化妊娠率、临床妊娠率、晚期自然流产率、多胎分娩率差异均无统计学意义。PGT的3个亚组胚胎植入前染色体非整倍体检测（preimplantation genetic testing for aneuploidy,PGT?A）组、胚胎植入前染色体结构重排检测（preimplantation genetic testing for structural rearrangements,PGT?SR）组、胚胎植入前单基因病遗传学检测（preimplantation genetic testing for monogenic disease,PGT?M）组生化妊娠率、临床妊娠率、早期自然流产率、晚期自然流产率、活产率、多胎分娩率差异均无统计学意义。结论：PGT可以降低高龄FET患者临床妊娠早期自然流产率,可能与PGT技术可以筛除高龄所致的增多的非整倍体胚胎有关。     

PGT周期中嵌合体胚胎移植的妊娠结局分析

目的分析在辅助生殖的胚胎植入前遗传学检测(PGT)周期中,移植嵌合体胚胎的妊娠结局,初步探讨嵌合体胚胎的移植价值。方法选择2017年4月-2020年10月广东省妇幼保健院生殖医学中心25个嵌合体胚胎移植周期作为研究组,根据研究组患者的一般临床资料按照1∶4匹配97个整倍体胚胎移植周期作为对照组,比较分析其移植后的妊娠结局。移植的胚胎通过二代测序技术(NGS)检测其染色体整倍性。结果共12例移植嵌合体胚胎的患者获得临床妊娠,但研究组临床妊娠率显著低于移植整倍体胚胎的对照组(48.00%vs. 69.07%),差异有统计学意义(P0.05),生化妊娠率(12.00%vs. 6.19%)和早期流产率(4.00%vs. 10.31%)差异无统计学意义(P0.05)。结论应优先移植整倍体胚胎,在无整倍体胚胎的情况下,嵌合体胚胎可作为移植的可选项,并能获得相对良好的妊娠结局。     

男性染色体复杂平衡易位携带者助孕2例并文献复习

目的 探讨男性染色体复杂平衡易位(CCRs)携带者的适宜助孕手段。方法 2例男性CCRs携带者通过胚胎植入前染色体重排检测(PGT-SR)助孕,其中1例夫妇同时行携带者筛查。结果 2例CCRs携带者夫妇均获得可移植胚胎并生育健康子代。其中1例患者联合携带者筛查技术,移植1枚非携带型胚胎,确保生育携带正常核型的后代。2例携带者夫妇的胚胎整倍体率为8.82%(3/34)。结论 PGT-SR可有效帮助CCRs携带者筛选可移植胚胎。携带者筛查技术可进一步筛选非携带型整倍体胚胎,阻断亲代染色体异常向子代的传递。     

不同检测方法筛查高危孕妇胎儿染色体非整倍体结果对比及妊娠结局分析

目的探讨对高危孕妇行超声颈部半透明层厚度(NT)、血清学筛查与无创产前基因检测(NIPT)联合筛查胎儿染色体非整倍体结果对比以及妊娠结局的应用价值。方法选取我院2015年12月至2016年2月收治的高危孕妇240例,对其行超声NT、血清学筛查与NIPT联合筛查。结果对240例高危孕妇进行超声NT筛查,其中4例胎儿显示为畸形;NIPT筛查结果提示异常17例(18-三体高风险7例,21-三体高风险10例),妊娠结局:8例引产,9例胚胎停止发育,终止妊娠。结论在高危孕妇胎儿染色体非整倍体检查中行超声NT、血清学筛查与NTPT筛查,有效地降低高危产妇进行侵入性产前诊断的数量,改变了高危孕妇妊娠人为终止的结局,降低了胎儿流产的危险。     

无创产前检测在胎儿23对染色体非整倍体筛查中的应用

目的:探讨无创产前检测(Non-invasive prenatal testing,NIPT)在筛查胎儿全部染色体非整倍体中的应用价值。方法:采用高通量测序技术对孕妇外周血中胎儿游离DNA进行测序并结合生物信息分析,得出胎儿全部染色体非整倍体结果。NIPT高风险的孕妇再用羊膜腔穿刺术进行产前诊断。结果:共检测5 909例孕妇外周血标本,其中7例(0.12%,7/5909)检测失败,余5 902例中共检测出48例(0.81%,48/5902)染色体数目异常:13三体高风险6例(4例假阳性),18三体高风险4例(3例假阳性),21三体高风险25例(1例假阳性),性染色体数目异常9例(6例假阳性),16号染色数目异常4例(4例假阳性)。结论:NIPT检测胎儿13、18和21三体具有高敏感性和特异性,但是对于其他染色体非整倍体筛查准确度不高; NIPT筛查的高风险结果存在不少假阳性,仍需进行有创性产前诊断。     

240例耳聋患者常见耳聋基因筛查分析

目的 分析非综合征型耳聋患者常见耳聋基因突变情况,探讨遗传性耳聋基因芯片检测的临床意义。方法 2013年3-8月来自沈阳市和平区残联的非综合征型耳聋患者240例,患者或监护人签署知情同意后提取被检者外周静脉血基因组DNA,采用晶芯？遗传性耳聋基因检测试剂盒对常见的4个耳聋基因（GJB2、GJB3、SLC26A4以及线粒体12S rRNA）的9个突变位点进行检测。结果 240例受检者中,102例存在被检测基因突变,其中GJB2基因突变44例（18.33%,44/240）,SLC26A4基因突变38例（15.83%,38/240）,线粒体12S rRNA基因突变17例（7.08%,17/240）,GJB3 538 C〉T 1例（0.39%,1/240）。明确诊断为遗传性耳聋60例,提示遗传性耳聋42例,占全部耳聋患者的42.5%（102/240）。结论 非综合征型耳聋患者耳聋基因携带率较高,对高危人群进行耳聋基因突变的筛查和遗传咨询是防止和控制遗传性耳聋、优生优育的重要步骤。     

胚胎植入前遗传学诊断在平衡易位携带者中的作用

目的:胚胎植入前遗传学诊断目前已是一项确定的技术,为那些可能将严重遗传病传递给后代的高风险患者提供了产前诊断的机会。胚胎植入前遗传学诊断已经用于诊断那些可能生育单基因遗传性疾病或X连锁染色体疾病患儿的高风险夫妇,筛查与年龄增长相关的非整倍体疾病及夫妇自身为携带平衡染色体重排的患者。目的:对经胚胎植入前遗传学诊断确定的病例做一概述,双亲为平衡易位患者,经胚胎植入前遗传学诊断筛查易位体及非整倍体后,确定适合移植的胚胎数目。设计:本文为回顾性研究,报道某一中心6对夫妇通过荧光原位杂交技术进行胚胎植入前遗传学诊断…     

大规模并行基因组测序技术应用于无创产前诊断染色体非整倍体的研究

目的利用大规模并行基因组测序技术检测孕妇外周血浆中的游离DNA,行胎儿染色体非整倍体的无创产前诊断。方法选择2009年1月到2010年7月在深圳市人民医院产前诊断中心就诊,孕龄在8～30周之间高龄妊娠、唐氏综合征生化筛查高风险和(或)彩超显示胎儿异常等同意介入产前诊断的孕妇941例,抽取孕妇外周静脉血,提取血浆DNA,制备测序文库,应用Illumina HiSeq2000高通量基因测序仪检测,测得的基因序列与人类的参考基因组比对并作统计分析。同时采集胎儿羊水或脐血,经细胞培养后行羊水或脐血细胞染色体核型分析确定染色体非整倍体。结果①941例孕妇血浆样本处理后经大规模并行基因组测序技术检测判定胎儿为唐氏综合征高风险共27例,非唐氏综合征914例;以羊水或脐血染色体核型分析的结果为金标准进行结果对照,检测出的27例唐氏综合征高风险中2例误诊,其中一例核型为47,XXY,一例核型分析正常。经统计分析胎儿唐氏综合征的检出率为100%,检出正确率99.78%,误诊率0.22%;②941例样本中,检出18-三体高风险14例,18-三体低风险927例。与染色体核型分析相比,统计分析显示无创产前基因检测18-三体胎儿的检出率为93.33%(14/15),漏诊率为6.67%(1/15)、误诊率为0。结论利用大规模并行基因组测序技术检测孕妇外周血浆中的游离DNA行无创产前诊断胎儿染色体非整倍体,其敏感性、特异性与染色体核型分析技术具有较高的一致性。该技术具有无创性、高准确性、高通量等优势,具有临床实际应用价值。     

胚胎植入前非整倍体筛查的研究进展

胚胎植入前非整倍体筛查是选择染色体数目正常的胚胎用于体外受精/单精子卵胞浆内显微注射周期的移植,目前采用荧光原位杂交方法可以分析5条或9条染色体。本文主要概述胚胎植入前非整倍体筛查在高龄待孕妇女、早期不明原因习惯性流产、反复植入失败者中应用,在这些情况中发生非整倍体的概率较高,正常胚胎鉴定和非整倍体的排除有利于提高体外受精-胚胎移植的胚胎植入率和妊娠率。其外简明介绍其他的新方法在胚胎植入前非整倍体筛查中研究进展。