不同价态无机砷染毒大鼠尿液砷形态代谢产物构成比分析研究

目的 通过不同价态染砷大鼠尿液中砷形态含量及比例的分析,寻找不同价态砷代谢和转轨间的差异,为进一步探讨砷代谢产物与砷中毒作用机制间的关系提供基础数据.方法 70只大鼠被随机分为7组,即对照组;亚砷酸钠高、中、低剂量组;砷酸钠高、中、低剂量组,70只大鼠分别经口摄入去离子水、亚砷酸钠和砷酸钠1个月后,采集各组大鼠尿样.采用高效液相色谱-氢化物发生原子荧光光谱法测定各组染砷大鼠尿液中砷形态的含量,并比较不同价态染砷组的构成比.结果 中剂量组,亚砷酸钠染毒大鼠尿液中iAs3+∶iAs5+∶DMA为36.1%∶3.0%∶60.8%;而砷酸钠染毒大鼠尿液中iAs3+∶iAs5+∶DMA为55.9%∶0.8%∶43.4%;两者差异有统计学意义(χ2=8.463,P<0.05).高、低剂量组比较差异无统计学意义.结论 不同价态无机砷的体内代谢和转轨不完全相同.     

无机砷及其代谢产物诱导体外培养人皮肤成纤维细胞的增殖作用

目的 探讨无机砷(iAsⅢ)、单甲基胂酸(DMAⅤ)、二甲基胂酸(MMAⅢ)对人皮肤成纤维细胞增殖作用的影响.方法 原代培养的人皮肤成纤维细胞,通过直接细胞计数法和噻唑蓝(MTT)还原法检测iAsⅢ、DMAⅤ、MMAⅢ对人皮肤成纤维细胞生长的影响.结果 荧光倒置显微镜下观察原代、11～13代人皮肤成纤维细胞形态;与对照组比较,人皮肤成纤维细胞经不同浓度的iAsⅢ、DMAⅤ、MMAⅢ诱导后,吸光度值均有改变,存在剂量-效应关系(P<0.05).0.5～5.0 μmol/L浓度的iAsⅢ、DMAⅤ、MMAⅢ对人皮肤成纤维细胞有明显的增殖作用,而10～15 μmol/L浓度的iAsⅢ、DMAⅤ 、MMAⅢ产生明显的毒性作用,毒性比较MMAⅢ>iAsⅢ> DMAⅤ.MMAⅢ对人皮肤成纤维细胞有明显的增殖作用,且峰值出现在0～1 μmol/L.结论 低浓度无机砷及其代谢产物刺激人皮肤成纤维细胞增殖,高浓度具有细胞毒性.     

DMPS对砷中毒患者尿砷排泄量及其种类影响的研究

 : 目的 探讨口服驱砷剂2,3-二巯基-1-丙基磺酸钠（DMPS）对砷中毒患者尿砷排泄量及其种类的影响 。方法 用激发实验原理设计实验方案, 盲法测定样品。高效液相色谱-氢化物发生-原子吸收光谱法(HPLC-HG-AAS)分离并测定尿中无机砷（iAs）、一甲基砷酸（MMA）和二甲基砷酸（DMA）3种形态砷的含量;尿液经消化后用氢化物发生-原子吸收光谱法(HG-AAS)测定尿中总砷。结果 无论对照还是砷中毒患者,服DMPS后尿中总砷、无机砷、MMA和DMA的排出量均有显著增加（P0.05）,DMPS可使砷中毒患者比正常对照排出更多的无机砷（P<0.05）。结论 DMPS能够动员器官和组织中蓄积砷,增加经尿的排泄总量。所增加的尿砷排泄以无机砷和MMA为主。     

染砷家兔皮肤抗氧化水平与砷代谢关联研究

目的探讨亚砷酸钠(i As3+)染毒对家兔皮肤抗氧化水平的影响及其与砷代谢的关系。方法选取成年健康雄性家兔30只,随机分为5组,每组6只;各梁毒组家兔经口染毒,染毒剂量分别为低(L)(0.075 mg·kg-1·w-1)、中低(ML)(0.15 mg·kg-1·w-1)、中高(MH)(0.375 mg·kg-1·w-1)、高(H)(0.75 mg·kg-1·w-1),对照组(C)饮用去离子水。采用自由饮水法染毒,根据动物日饮水量配制染毒水溶液,自由饮水染毒12 w。12 w后处死动物,取同一部位皮肤组织用2.5%戊二醛固定后进行扫描电镜观察。取家兔背部皮肤组织进行匀浆,检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)、超氧化物歧化酶(SOD)活力。采用高效液相色谱-氢化物发生原子荧光光谱法(HPLC-HGAFS)测定尿液中砷形态代谢产物含量。结果与对照组相比,染毒组家兔体质量基本呈现增加的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。电镜结果显示染毒组家兔皮肤角质层有不同程度的改变。随着Na As O2染毒剂量的增加,GSH-Px活力降低,GST活力升高,差异有统计学意义(P<0.05);SOD差异无统计学意义(P>0.05)。尿液中DMA、MMA的含量随着染毒剂量的增加而升高,差异有统计学意义(P<0.05)。无机砷(i As3+、i As5+)与GSH-Px、GST无相关。GSH-Px与MMA呈负相关(r=-0.507,P<0.05),与DMA呈负相关(r=-0.562,P<0.05)。GST与MMA呈正相关(r=0.395,P<0.05),与DMA呈正相关(r=0.414,P<0.05)。结论砷的体内代谢过程和家兔皮肤组织的氧化与抗氧化平衡破坏有密切关系。     

不同价态饮水砷暴露对小鼠肝脏的损伤作用

目的:比较不同价态的饮水砷暴露对小鼠肝脏的损伤作用,探讨其可能的损伤机制.方法:60只雄性昆明种小鼠随机分为对照组(饮用蒸馏水)、300 mg/L iAs3 暴露组(iAs3 组)和300 mg/L iAs5 暴露组(iAs5 组),饮水砷暴露10个月后处死小鼠,检测各组小鼠肝功能、肝组织总砷含量,H-E染色及胶原特殊染色(Masson染色)观察各组小鼠肝组织病理学变化;实时荧光定PCR测定各组小鼠肝组织中TNF-α、IL-6、GSH-Px、MMP-8、Col Ⅰ和Col Ⅲ mRNA的表达.结果:iAs3 组小鼠肝组织中砷蓄积量高于iAs5 组(P＜0.05);iAs3 组小鼠肝功能差于iAs5 组(P＜0.05);H-E染色及Masson染色结果表明iAs3 组小鼠肝组织损伤及纤维化程度重于iAs5 组.与对照组相比,iAs3 、iAs5 组小鼠肝组织TNF-α、IL-6、Col Ⅲ mRNA表达明显升高(P＜0.05), MMP-8 mRNA表达明显下降(P＜0.05);与iAs5 组相比,iAs3 组小鼠肝组织TNF-α、IL-6、Col ⅠmRNA表达升高(P＜0.05).结论:长期饮水砷暴露可能通过促进肝脏炎症介质及ECM分泌诱导慢性肝损伤、肝纤维化,肝损伤程度与砷的价态及蓄积量有关,且iAs3 损伤作用强于iAs5 .     

应用三氧化二砷治疗白血病患者尿中砷水平的变化及其与不良反应的关系

目的检测应用三氧化二砷治疗白血病患者的尿中砷化物水平,探讨砷代谢情况及对肝功能、血常规的影响。方法观察12例住院应用三氧化二砷治疗的患者,于用药前、用药后10 d及20 d留取晨尿,检测尿中无机砷(iAs)、一甲基砷(MMA)和二甲基砷(DMA)的水平,并检测肝功能及血常规等各项临床指标,采用重复测量的方差分析及相关分析进行研究。结果治疗前、治疗后10 d及20 d尿中iAs、MMA、DMA水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。患者治疗前、治疗后10 d及20 d的总蛋白、清蛋白、天冬氨酸氨基转移酶水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);而丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。患者治疗前后血常规各项指标水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。患者治疗后10 d尿中iAs水平与ALT水平呈正相关(r=0.65,P<0.05)。结论三氧化二砷治疗后患者ALT水平与无机砷水平有关,而对肝脏其他功能及血液系统无不良反应,为一种安全有效的药物。监测尿中砷化物的水平可有效反映砷在体内的代谢情况,必要时可进行驱砷治疗。     

无机砷及其代谢产物与DNA甲基化的研究现状

砷及其化合物已被世界卫生组织(WHO)下属的国际癌症研究机构[1]等诸多国际权威机构公认为人类已确定的致癌物,无机砷(inorganic arsenic,iAs)可通过体内的甲基化进行生物转化作用.无机砷在体内经过氧化还原和甲基化过程,产生多种甲基化砷的代谢产物、氧化型和还原型的单甲基胂酸(Monome thylarsenic acid,MMA)和二甲基胂酸(Dimethyl arsinic acid,DMA)有3价(MMA3+、DMA3+)和5价(MMA5+、DMA5+)的化学形态.     

人外周血淋巴细胞AS3MT基因相对表达与尿砷甲基化产物的关系研究

目的观察饮水无机砷暴露人外周血淋巴细胞中As3MT基因在表达与尿砷甲基化产物的关系。方法选取饮水型砷暴露者18俐,采用实时定量ET-PCR技术测定研究对象的测淋巴细胞中ASSMT mgNA的表达．采用AFS-SAP10检测尿iAs,MMA,DMA浓度,应用Pearson相关法分析ASSMT mRNA表达与MMA％,DMA％,PMI．SMI的关系。结果AS3MT mRNA表达与MMA％相关有统计学意义（r=0.485,p=0.046）,与DMf相关有统计学意义（r=0．476,P=0．046）;但与DMA％相关无统计学意义（r=0．187,p=0．459）,与SMI相关无统计学意义（n=0.210,P=0.404）。结论人外周血淋巴细胞ASSMT mgNA表达对无机砷在体内的甲基化过重中有重要的作用。     

六神丸可溶性砷形态的HPLC-ICP-MS研究

目的:建立中药复方中亚砷酸盐(AsⅢ)、砷酸盐(AsⅤ)、一甲基砷(MMA)和二甲基砷(DMA)的HPLC-ICP-MS方法。方法:采用Hamilton PRP-X100阴离子交换柱,15mmol/L(NH4)2HPO4为流动相(pH6.0),建立了同时分析中药中AsⅢ,AsⅤ、MMA和DMA的HPLC-ICP-MS方法,并对六神丸和雄黄中可溶性砷的形态进行了检测。结果:该分析方法在1~100ng/mL范围内线性关系良好,精密度和重复性良好,回收率为93%~106%。六神丸中几种药材与单味雄黄混合后,测得的可溶性砷含量均低于单味雄黄中的可溶性砷含量。蟾酥、牛黄、麝香、冰片、珍珠与雄黄混合后,砷溶出量比单味雄黄的砷溶出量依次减少93.6%,86.4%,71.3%,27.6%和14.7%。结论:六神丸复方中的几种单味药均有抑制雄黄中砷溶出的作用,推测是降低雄黄毒性作用的可能途径之一。     

砷致小鼠肝纤维化模型的建立

目的 探讨不同价态水砷暴露及高脂饲料加水砷暴露小鼠肝纤维化模型的建立方法,并进行比较.方法 小鼠240只,随机分为正常对照组、亚砷酸钠(iAs3+)组、砷酸钠(iAs5+)组、高脂饲料对照组、高脂饲料+iAs3+组和高脂饲料+iAs5+组6个组,每组40只.正常对照组和高脂饲料对照组(饮用自来水),iAs3+组和高脂饲料+iAs3+组(饮用300 mg/L iAs3+水),iAs5+组和高脂饲料+iAs5+组(饮用300 ms/L iAs5+水).饮水砷暴露3、6、10个月后处死小鼠,检测各组小鼠血清肝功能,HE染色及胶原特殊染色(Masson染色)观察各组小鼠肝组织病理学变化.结果 造模3个月时,正常对照组、iAs3+组、iAs5+组、高脂饲料+iAs3+组和高脂饲料+iAs5+组的血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平分别为(36.7±5.7)U/L和(110±22)U/L、(55.6±4.6)U/L和(249±41)U/L、(52.6±8.8)U/L和(161±15)U/L、(311.3±19.7)U/L和(484±15)U/L、(515.0±60.8)U/L和(671±24)U/L,各砷组均高于对照组(均P<0.05).各砷组动物肝组织HE染色就显示有不同程度肝损伤,表现肝细胞水样变性、脂肪样变性,点状或灶性坏死及炎性细胞浸润,并有不同程度的肝细胞再生及纤维增生,随着暴露时间的延长,各砷组肝组织病理损伤逐渐加重.10个月Masson染色显示汇管区及中央静脉区纤维条索状增生,正常对照组、iAs3+组、iAs5+组、高脂饲料+iAs3+组和高脂饲料+iAs5+组小鼠肝脏纤维组织面积的均值分别为0.1333、0.5584、0.5250、0.7534、0.7200,各砷组与对照组相比差异有统计学意义(均P<0.05).结论 成功建立了不同价态水砷暴露及高脂饲料加水砷暴露小鼠肝损伤、肝纤维化的模型,并进行了评价,为砷致肝损伤、肝纤维的研究提供了较理想的动物模型.     

燃煤污染型砷中毒患者外周血及口腔黏膜细胞相关基因表达的研究

目的 燃煤污染型砷中毒是一种严重危害人体健康的地方病.本研究旨在观察贵州燃煤污染型砷中毒患者口腔黏膜脱落细胞及外周血相关基因表达的变化,探讨燃煤污染型砷中毒患者体内生物学标志,有助于地方性砷中毒的诊治与监控.方法 2008年收集贵州省兴仁县交乐乡燃煤污染型砷中毒伴有皮肤表现的患者及非病区正常人外周全血及口腔黏膜脱落细胞,提取mRNA,以荧光实时定量PCR(realtime-PCR)方法比较研究砷中毒患者及健康正常人口腔黏膜脱落细胞及全血相关基因表达,同时采取外周静脉血检测肝功能变化.结果 燃煤污染型砷中毒患者在仅有皮肤病变时肝功能检测已出现血清酶学改变,丙氨酸转氨酶明显升高[(36.9±17.4)/(25.8±2.4),t=0.019,P<0.05].与正常对照组比较,患者1=1腔黏膜脱落细胞中角蛋白10(K10)基因表达明显增加(3.6±0.9/1.8±0.7,t=0.041,P<0.05),MT-1基因表达明显降低(0.8±0.5/3.9±0.4,t=0.028,P<0.05);c-myc、COX2、ER-α、AFP基因表达虽然也有所增加,但差异无统计学意义.结论 口腔黏膜脱落细胞K10基因、MT-1基因表达改变可作为一个敏感的生物学标志物应用于燃煤污染型砷中毒的防治与监测,加强病区现症患者肝功能保护应成为燃煤型砷中毒防治工作中值得注意的重要环节.     

长沙市各水厂水砷含量分析

目的:通过对长沙市各大水厂不同时点水源水与出厂水砷浓度监测结果的分析,了解各水厂水源水砷污染情况、各水厂出厂水砷含量、各水厂对重金属处理效果,同时为各水厂制水工艺进行改进提供参考依据。方法:2006年1月6日至8日对长沙市以湘江为取水口的各大水厂的水源水和出厂水不同时点砷浓度进行应急监测,用二乙基二硫代氨基甲酸银分光光度法对砷浓度进行检测,用excel与spss13.0建立数据库,并进行统计描述与分析。结果:各水厂水源水砷浓度均高于地表水国家标准(P<0.05);各水厂出厂水砷与饮用水砷国家标准比较,均明显增高(P<0.05);各水厂砷平均清除量经方差分析差异具统计学意义(P<0.05);各水厂砷平均清除量的LSD两两比较:三水厂与四水厂、三水厂与八水厂比较、四水厂与八水厂比较,无显著性差异,而一水厂与五水厂、一水厂分别与三、四、八水厂,五水厂分别与三、四、八水厂之间两两比较(P<0.05),差异均具统计学意义。结论:长沙市各水厂出厂水砷浓度均符合国家标准,各水厂对源水砷清除能力存在差异,五水厂清除能力最好,三、四、八、一水厂次之。     

Blood Pressure Associated with Arsenic Methylation and Arsenic Metabolism Caused by Chronic Exposure to Arsenic in Tube Well Water

Objective The effects of arsenic exposure from drinking water, arsenic metabolism, and arsenic methylation on blood pressure (BP) were observed in this study.Methods The BP and arsenic species of 560 participants were determined. Logistic regression analysis was applied to estimate the odds ratios of BP associated with arsenic metabolites and arsenic methylation capability.Results BP was positively associated with cumulative arsenic exposure (CAE). Subjects with abnormal diastolic blood pressure (DBP), systolic blood pressure (SBP), and pulse pressure (PP) usually had higher urinary iAs (inorganic arsenic), MMA (monomethylated arsenic), DMA (dimethylated arsenic), and TAs (total arsenic) than subjects with normal DBP, SBP, and PP. The iAs%, MMA%, and DMA% differed slightly between subjects with abnormal BP and those with normal BP. The PMI and SMI were slightly higher in subjects with abnormal PP than in those with normal PP.Conclusion Our findings suggest that higher CAE may elevate BP. Males may have a higher risk of abnormal DBP, whereas females have a higher risk of abnormal SBP and PP. Higher urinary iAs may increase the risk of abnormal BP. Lower PMI may elevate the BP. However, higher SMI may increase the DBP and SBP, and lower SMI may elevate the PP.     

左室内血流传播速度对高血压患者左室舒张功能的评价

目的:应用彩色M型多普勒超声心动图测量舒张早期左室内血流传播速度(Vp),评价高血压(EH)患者左室舒张功能,以寻求一种可靠客观的评价高血压左室舒张功能的方法。方法:采用放免法测定19例正常人和41例EH患者(伴心肌肥厚者19例和不伴心肌肥厚者22例)的血清Ⅰ型前胶原(PCⅠ)和Ⅲ型前胶原(PCⅢ)的浓度,用彩色M型多普勒超声心动图测量左室内血流传播速度(Vp),并用血流多普勒法检测二尖瓣口舒张期血流速度E峰、A峰及E/A值,比较两种方法测值与PCⅠ、PCⅢ的相关性。结果:1.EH患者非左室肥厚组(non-LVH)与左室肥厚组(LVH)PCⅠ、PCⅢ明显高于正常对照组(P<0.01),其中LVH组PCⅠ明显高于non-LVH组(P<0.05)。2.EH患者非左室肥厚组(non-lVH)与左室肥厚组(LVH)二尖瓣血流参数,Vp均明显低于正常对照组(P<0.05)。3.EH患者non-LVH组与LVH组间E、E/A无明显差别(P>0.05),但LVH组Vp明显低于non-LVH组(P<0.05)。4.EH患者non-LVH组血清PCⅠ、PCⅢ与E/A及Vp均呈负相关(r=-0.58P<0.01,r=-0.61P<0.01及r=-0.67P<0.01,r=-0.51P<0.05);而LVH组血清PCⅠ、PCⅢ与Vp亦呈负相关(r=-0.69P<0.05,r=-0.65P<0.01);与E/A无明显相关(r=-0.41P>0.05,r=0.02P>0.05)。结论:左室内血流传播速度与反应心肌纤维化程度的血清PCⅠ、PCⅢ浓度相关良好,不受心脏负荷及年龄的影响,作为评价高血压病人左室舒张功能的指标有临床意义。     

氧化砷对MR2细胞耐药分子表达的影响

目的:探讨三氧化二砷(As_2O_3)对肿瘤耐药分子的作用。方法:以耐全反式维甲酸(ATRA)早幼粒白血病细胞株MR_2为研究对象,以非耐药急性早幼粒白血病细胞株NB_4为对照组,用免疫组化法观察P-糖蛋白(Pgp)、谷胱甘肽S转移酶(GST)的表达。结果:MR_2细胞Pgp表达(30％～40％)较NB_4细胞(10％～20％)明显增强(P<0.001),MR_2细胞GSTπ表达(60.4±4.0)～(66.5±4.4)较NB_4细胞(28.3±5.6)～(31.2±5.1)明显增强(P<0.05)。0.5～2.0μmol/L As_2O_3能显著降低MR_2细胞Pgp、GSTπ表达,而对GSTα、GSTμ无影响。结论:Pgp、GSTπ表达的下调,可能是As_2O_3克服耐药的敏感性指标,而GSTα、GSTμ则否。全反式维甲酸(ATRA)可能是Pgp转运底物和GSTπ催化作用底物。     

活性氧（ROS）在三氧化二砷诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡中的作用

目的：利用Mn（Ⅲ）TBAP能特异性清除细胞内活性氧（reactiveoxygenspecies,ROS）,观察不同浓度三氧化二砷（As2O3）单独和联合Mn（Ⅲ）TBAP作用于人肝癌HepG2细胞后细胞内活性氧（ROS）的变化和对凋亡的影响,探讨活性氧（ROS）在三氧化二砷（As2O3）诱导肝癌细胞株HepG2凋亡中的作用。方法：实验分3组：对照组,不同浓度三氧化二砷（As2O3）组,三氧化二砷（As2O3）＋Mn（Ⅲ）TBAP组。用四甲基偶氮唑盐（MTr）比色法测定细胞生长增殖活性;激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内ROS的变化;AnnexinV／PI双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：2、4、8μol／L三氧化二砷（As2O3）处理HepG2细胞后各组细胞增殖抑制率高于对照组（P〈0．05）,细胞增殖抑制率随As2O3浓度的增加及作用时间的延长而升高（P〈0．05）;HepG2细胞内ROS的水平随As2O3浓度的增加而升高（P〈0．05）,As2O3处理组HepG2细胞内ROS水平高于空白对照组（P〈0．05）,As2O3＋Mn（Ⅲ）TBAP组HepG2细胞内ROS的水平低于As2O3组（P〈0．05）,但高于对照组（P〈0．05）。细胞早期凋亡率随As2O3浓度的增加及作用时间的延长而升高（P〈0．05）,且均高于Mn（Ⅲ）TBAP＋As2O3组和对照组,Mn（Ⅲ）TBAP＋As2O3组高于对照组。结论：三氧化二砷作用于HepG2细胞促进了细胞内ROS的产生,ROS水平的提高增加了三氧化二砷促HepG2细胞凋亡的敏感性。