KSHV编码的趋化因子vMIPII在小鼠异体皮肤移植免疫排斥反应中的作用

目的　重组vMIPII在大肠杆菌中表达及其纯化。观察纯化的vMIPII蛋白对小鼠异体皮肤移植免疫排斥反应的抑制作用。方法　以 pET3 2a为vMIPII克隆基因的表达载体 ,以大肠杆菌BL2 1(DE3 ) plysS为表达菌 ,诱导表达出硫氧还蛋白 vMIPII的融合蛋白 (2 6× 10 3 D)。经金属离子亲和吸附、肠激酶消化以游离vMIPII、阳离子交换层析等步骤纯化目的蛋白。纯化的vMIPII从尾静脉连续 14d注入异体皮肤移植小鼠 (昆明鼠 /Balb/c)。结果　从 1L发酵菌液中可获得高纯度目的蛋白约 4mg。注射vMIPII的异体皮肤移植小鼠组移植皮存活时间较未注射对照组延长 7d。结论　纯化的重组vMIPII对小鼠异体皮肤移植免疫排斥反应有明显的抑制作用 ,能显著延长移植皮的存活时间     

益气活血安胎中药对异种皮肤移植急性排斥反应的影响

目的研究益气活血安胎中药对异种皮肤移植急性排斥反应的抑制作用。方法以SD大鼠为供体,昆明小鼠为受体,建立异种异体皮肤移植模型。术后将小鼠分为中药组、阳性对照组和阴性对照组,分别以中药醇提取物、醋酸地塞米松溶液和生理盐水灌胃,记录移植皮片的存活时间和存活情况,于移植后第5天和第10天取移植皮肤行病理切片。结果与阴性对照组相比,中药组和阳性对照组急性排斥反应明显较轻,移植皮片平均存活率和存活时间明显延长（P〈0．05）。结论益气活血安胎中药对异种异体皮肤移植的急性排斥反应可产生有效的抑制作用,减少炎性细胞浸润,延长皮片存活时间。     

CCR7基因修饰未成熟树突状细胞诱导小鼠皮肤移植免疫耐受的研究

目的 研究CCR7基因重组腺病毒体外转染未成熟树突状细胞(imDCs)对小鼠同种异体皮肤移植免疫耐受的影响.方法 小鼠骨髓细胞经梯度离心及rmIL-4、rmGM-CSF诱导培养未成熟树突状细胞;CCR7重组腺病毒经增强离心法转染未成熟树突状细胞;体外观察转染细胞混合淋巴细胞反应;取CCR7修饰imDCs于皮肤移植前2d、移植后第5天,经腹部注入受体小鼠,观察皮肤移植物存活时间和病理变化.结果 CCR7基因成功转染入imDCs;腺病毒转染后imDCs刺激T细胞增殖的能力较imDCs组增强但弱于mDCs组,IL-10可以明显降低刺激能力;CCR7腺病毒转染组皮肤存活时间长于转染前,IL-10能显著延长皮肤存活时间.结论 CCR7重组腺病毒转染imDCs后,imDCs刺激T细胞增殖的能力部分增强,皮肤移植物存活时间明显延长.     

病毒巨噬细胞炎性蛋白与趋化因子受体结合的效应分析

目的: 探讨人疱疹病毒8K6基因编码的产物病毒巨噬细胞炎性蛋白(viral macrophage inflamm atory protein,vMIP)是否具有结合趋化因子受体以及趋化作用。方法: 受体配体交联试验检测vMIP与受体结合能力。趋化实验及细胞内钙流检测判断vMIP的生物学活性。结果: vMIP可与外周血单个核细胞(PBMCs)膜上的趋化因子受体结合,抑制hMIP-1α对PBMC的趋化能力,EC₅₀为3.39 ng/ml。其本身只有较弱的趋化能力。钙流实验证实vM IP轻度升高胞内钙离子浓度,但可明显抑制hMIP-1α所引起的胞内钙离子高峰。结论: 重组vMIP与hMIP-1α受体(CCR5)结合后,可有效的阻断人源性趋化因子的结合与信号传导,但其本身对细胞未有明显的激活作用,因此可作为趋化因子受体的天然阻断剂,可用于免疫移植中的排斥反应或HIV-1病毒感染等。     

抗Thy-1单克隆抗体能延长小鼠同种皮肤移植的存活时间

目的: 观察局部应用抗小鼠Thy-1单克隆抗体对小鼠皮肤移植存活时间的影响. 方法: 采用间接免疫荧光法检测脾T淋巴细胞亚群的改变及移植皮片的组织学观察作为排斥反应的监测指标. 结果: 抗Thy-1单克隆抗体局部应用可显著延长小鼠同种移植皮片存活时间,CD4 /CD8 比值下降和倒置可以作为预测皮肤移植排斥反应发生的有效指标. 结论: 应用抗Thy-1单克隆抗体为大面积烧伤自体皮源不足需要异体皮移植患者延长异体皮肤移植存活时间,提供了一个参考依据.     

棘球蚴抗原B诱导小鼠皮肤移植免疫逃避的实验研究

目的:探索棘球蚴抗原B对小鼠皮肤移植的影响.方法:以近交系C57雄性小鼠60只为供体,Balb/c雄性小鼠100只为受体建立尾部皮肤移植实验模型.将100只受体小鼠随机分为5组,每组20只,于术后经肌肉注射给药.空白组给予生理盐水;实验组给予纯化后抗原B(100 μg/10 g);阳性对照组给予FK506(3 μg/10 g);手术Ⅰ组行同系间的皮肤移植(不予干预);手术Ⅱ组单纯切取与前几组相同大小的创口,不做移植操作.移植后观察移植皮片的存活时间及病理变化.结果:空白组皮片生存时间为(6.75±1.282) d,阳性对照组为(12.50±1.309) d,实验组为(10.25±1.669) d,三组生存时间比较,差异有统计学意义;空白组、阳性对照组、实验组移植皮片病理分析示差别有统计学意义(P<0.05).结论:棘球蚴抗原B作用于小鼠皮肤移植可以延长移植皮片的存活时间,病理结果显示其可以延缓移植排斥的发生.     

vMIP对细胞膜上趋化因子受体亲和力的结合特性研究

目的通过病毒巨噬细胞炎性蛋白(vMIP)对外周血中单个核细胞(PBMC)膜上趋化因子受体结合的比较性研究,阐明vMIP与受体的结合能力。方法通过放射性配体受体结合实验,利用饱和实验、动力学实验和特异性分析,鉴定vMIP的受体结合能力。结果vMIP与人、食蟹猴PBMC膜上受体结合的Kd分别为11.1、14.3nmol/L,对趋化因子受体CCR5和CXCR4竞争结合的IC50分别为3.4、4.5nmol/L。结论提示了vMIP与膜上受体有较高的亲和力,并对CCR5和CXCR4具有高度特异性,可能对防治炎症及HIV1感染等具有重要意义。     

vMIP对细胞膜上趋化因子受体亲和力的结合特性研究

目的通过病毒巨噬细胞炎性蛋白(vMIP)对外周血中单个核细胞(PBMC)膜上趋化因子受体结合的比较性研究,阐明vMIP与受体的结合能力.方法通过放射性配体受体结合实验,利用饱和实验、动力学实验和特异性分析,鉴定vMIP的受体结合能力.结果 vMIP与人、食蟹猴PBMC膜上受体结合的Kd分别为11.1、14.3 nmol/L,对趋化因子受体CCR5和CXCR4竞争结合的IC50分别为3.4、4.5 nmoL/L.结论提示了vMIP与膜上受体有较高的亲和力,并对CCR5和CXCR4具有高度特异性,可能对防治炎症及HIV-1感染等具有重要意义.     

病毒趋化因子vMIP封闭人趋化因子受体作用及其应用研究

来源于人疱疹病毒8的巨噬细胞炎性蛋白(viralmacrophage inflammatory proteins,vMIP)能广谱结合CCR1、CCR3、CCR5和CXCR4等多种趋化因子受体,但不激活受体,可作为这些受体的封闭剂。由于CCR5、CXCR4是HIV在人体内感染靶细胞的主要共受体,vMIP作为CCR5、CXCR4的抑制因子可拮抗H     

移植前诱导抗独特型抗体对小鼠皮肤排斥反应的抑制作用

目的　探讨抗独特型抗体诱导对异品系小鼠皮肤移植排斥反应的影响.方法　以C57BL/6小鼠脾细胞免疫BALB/c小鼠制备抗同种异品系抗体(Ab1).将Ab1与KLH交联后,免疫BALB/c小鼠诱导产生抗独特型多克隆抗体(Ab2),并以之为受体,观察Ab2对小鼠皮肤移植排斥反应的影响.结果　Ab1交联KLH加弗氏佐剂免疫可有效地诱导抗独特型抗体(Ab2)产生.与对照组相比较,Ab2诱导组小鼠移植物存活时间明显延长.结论　移植前在受体体内诱导产生以移植物抗原为模拟抗原的抗独特型抗体,可对移植排斥反应产生有效的抑制作用移植前诱导抗独特型抗体对小鼠皮肤排斥…     

泡状棘球蚴感染纯系小鼠诱导免疫耐受的实验研究

目的探讨感染泡球蚴的小鼠皮肤移植后免疫系统的变化对移植物的影响。方法采用小鼠尾部皮肤移植建立小鼠皮肤移植模型。将64只C57BL/6小鼠及64只BALB/c小鼠各随机分为4组,每组各16对小鼠,其中16只C57BL/6小鼠为供体,16只BALB/c小鼠为受体。A组:空白对照组(非同系移植不予以任何干预);B组:实验组1,以健康C57BL/6小鼠尾部皮肤移植至BALB/c小鼠(感染泡球蚴1个月后);C组:药物对照组,采用非同系移植加药物[西罗莫司(商品名:雷铂霉素)]干预,皮肤移植术后5d每日给予西罗莫司1.5mg/kg干预;D组:实验组2,以健康C57BL/6小鼠尾部皮肤移植至BALB/c小鼠(感染泡球蚴3个月后)。术后观察BALB/c小鼠尾部移植皮肤生长情况。每组留8只用于观察BALB/c小鼠术后尾部移植皮肤生存期,每组于术后3、5、7、9d4个时间点各取2只小鼠尾部移植皮片,用于观察小鼠尾部移植皮肤病理变化情况。结果 A、B、C、D组移植皮肤存活时间平均为(6.00±0.76)、(7.50±0.93)、(13.25±1.04)、(11.5±0.93)d。C组小鼠移植皮片存活时间较D组长,差异有统计学意义(P<0.05)。C、D组移植皮肤存活时间较A、B组延长,差异有统计学意义(P<0.01)。组织病理学检查:A、B组移植皮片均在术后1周左右发生明显的逐渐加重的急性免疫排斥反应,C、D组移植皮片的免疫排斥反应较A、B组轻。结论小鼠感染泡状棘球蚴后有利于同种异体移植皮片的存活,可以延长移植皮片的生存时间。该模型为研究感染泡球的免疫实验研究提供了良好的实验平台,为进一步研究泡球蚴感染后机体免疫状态的变化提供了理论依据。     

阻断ICOS对小鼠移植胰岛功能影响的实验研究

目的：在小鼠胰岛移植模型基础上，通过阻断可诱导共刺激分子（ICOS）。探讨ICOS单克隆抗体（ICOSmAb）对移植胰岛功能的影响。方法：供体为近交系昆明小鼠，受体为C57小鼠。受体小鼠随机分成5组，每组10只。假手术组：受体小鼠仅行开腹手术，不行胰岛移植；对照组：单纯胰岛移植，不给ICOS mAb；实验1、2、3组：分别于胰岛移植后1、3、5d腹腔内注射ICOSmAb50、100、200μg/kg。观察小鼠胰岛移植后移植物存活时间和移植胰岛病理改变，流式细胞仪检测ICOS在T淋巴细胞上的表达。结果：实验2组小鼠移植胰岛存活时间和实验3组相同，统计学分析无显著性差异，而较对照组及实验1组明显延长（P〈0．05）。ICOS在移植术后7d受体小鼠T淋巴细胞上表达明显上调。结论：ICOS分子在小鼠同种异体胰岛移植排斥反应中表达上调。参与了排斥反应的发生。ICOSmAb通过阻断ICOS共刺激信号途径，诱导小鼠同种异体胰岛移植免疫耐受，减轻排斥反应，延长移植胰岛有功能存活时间。ICOS mAb的最佳给药剂量为100μg/kg。     

大黄素在小鼠皮肤移植中的免疫抑制作用的实验研究

目的：研究大黄素对小鼠皮肤移植的免疫抑制作用,探讨其可能的作用机制。方法：建立小鼠C57BL／6→BALB／c异体皮肤移植模型。以大黄素和环孢素A（CsA）分别灌胃,观察不同药物及药物浓度对小鼠皮肤移植物存活时间的影响。采用ELISA法检测大黄素和CsA对皮肤移植小鼠血浆IL-2表达水平的影响,组织学观察不同药物浓度对移植物病理变化的影响。结果：大黄素显著降低小鼠血浆内IL-2的浓度,同时伴有移植物的存活时间的延长,组织学观察发现大黄素可以减轻移植排斥反应的强度,其作用表现出量效依赖性,并与CsA具有协同性。结论：大黄素能够减轻C57BL／6→BALB／c异体皮肤移植的排斥反应强度,其作用机制可能与抑制IL-2的分泌有关。     

来氟米特对大鼠不同器官移植排斥反应的抑制作用

目的：验证来氟米特(leflunomide)对同种异体急性排斥反应的抑制作用。方法：60只成年Lewis雄性大鼠作为受体,ACI大鼠作为供体,分别行原位肝脏、小肠、肾脏以及异位心脏、胰腺移植。除对照组外,给予每只受体来氟米特5 mg．kg-1．d-1治疗14 d。结果：与对照组比较,来氟米特可显著延长受体及移植物存活时间。其中,来氟米特可将2/6肾移植受体及5/5肝移植受体存活时间延长至100 d以上。结论：来氟米特可显著延缓大鼠同种异体小肠、心脏及胰腺器官移植排斥反应;可有效控制肝脏及肾脏移植排斥反应。     

病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ的研究进展

病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ(viral macro-phage inflammatory protein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ)也称vCCL2,是由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染者或移植病人用免疫抑制剂后卡波肉瘤的病原体卡波西肉瘤相关孢疹病毒,即人疱疹病毒-8 K4基因编码的小分子蛋白质,与人CC类趋化因子巨噬细胞炎性蛋白Ⅰ在氨基酸序列上有较高的同源性[1],是人趋化因子的类似物.这种蛋白质有其独特性,即使在不同亚科之间,也可广泛结合趋化因子受体:结合CCR 1、CCR 2、CCR 5、CXC趋化因子受体(CXCR 4)发挥拮抗作用,结合CCR3和CCR8则挥激活效应[2].     

CTLA4Ig延长同种异体大鼠耳廓移植存活的实验研究

研究CTLA4Ig对异体复合组织移植的免疫抑制作用。方法 :以BN大鼠为供体 ,Lewis大鼠为受体进行异体耳廓移植 ,术后分组应用不同剂量CTLA4Ig治疗 ,观察移植耳廓的排斥反应及存活时间 ,检测术后血清IL - 2含量变化。结果 :对照组平均存活 (7.8± 1.9)d ,CTLA4Ig 0 .1mg/kg·d治疗组存活 (8.1± 1.6 )d ,与对照组比无明显差异 (P >0 .0 5 ) ;1.0mg/kg·d组与 5 .0mg/kg·d组分别为 (15 .5± 2 .3)d与 (2 8.8± 3.6 )d ,异体耳廓的存活时间显著延长 (P <0 .0 1) ,且IL - 2含量较对照组明显下降。结论 :CTLA4Ig能延长异体耳廓复合组织移植后的存活 ,其疗效与剂量相关。     

异体皮肤移植后MIP-3α的表达及其抗体延长存活的研究

目的　研究异体皮肤移植后表皮MIP 3α的表达及其抗体延长移植皮肤存活的作用。方法　进行同种异体小鼠皮肤移植 ,免疫组化测定移植皮肤组织内MIP 3α的表达 ;局部应用MIP 3α抗体 ,观察其对移植皮肤存活的影响。结果　移植术后表皮MIP 3α表达增加 ,分别于术后 2 4h及第五天出现两个高峰 ,真皮及其皮下组织未见MIP 3α的表达 ;异体皮肤平均存活时间为 (7 5± 0 9)d ,MIP 3α单抗局部注射 1μg/ml治疗组存活 (8 3± 1 2 )d ,与对照组相比无明显差异 (P >0 0 5 ) ;10 μg/ml组与 5 0 μg/ml组分别为 (15 3± 2 3 )d与 (2 1 8± 1 6)d ,二者均显著延长移植皮肤的存活时间 (P <0 0 1)。结论　异体皮肤移植后表皮MIP 3α分泌增加 ,促进郎格罕细胞的迁移以进行抗原递呈 ,是移植排斥反应启动与进展的重要因素 ;应用MIP 3α抗体可有效延长异体移植皮肤的存活     

趋化因子受体CCR5胞外段重组蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定

目的:构建趋化因子受体5(CCR5)胞外段重组蛋白(命名为:rCCR5)原核表达载体,并进行诱导表达.对表达产物进行纯化和鉴定.方法:截取CCR5胞外结构4个片段N-Term,ECL1, ECL2和ECL3的氨基酸序列,应用柔性linker分别串联,模拟CCR5胞外结构,依据大肠杆菌偏爱密码子人工合成基因.运用基因重组方法在大肠杆菌中进行表达,表达产物经纯化、复性后进行Western blot鉴定.结果:目的蛋白以包涵体形式存在,经包涵体洗涤、变性溶解,SephacrylS-300凝胶过滤层析及SephacrylS-100凝胶柱复性获得了纯化的蛋白质,目的蛋白能与CCR5 mAb特异性结合.结论:获得了大量纯化的rCCR5重组蛋白,可作为研制CCR5自体蛋白疫苗以阻断HIV-1感染的候选抗原蛋白.     

趋化因子受体CCR5胞外段重组蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定

目的：构建趋化因子受体5（CCR5）胞外段重组蛋白（命名为：rCCR5）原核表达载体，并进行诱导表达．对表达产物进行纯化和鉴定．方法：截取CCR5胞外结构4个片段N-Term，ECL1，ECL2和ECL3的氨基酸序列，应用柔性linker分别串联，模拟CCR5胞外结构，依据大肠杆菌偏爱密码子人工合成基因．运用基因重组方法在大肠杆菌中进行表达。表达产物经纯化、复性后进行Westernblot鉴定．结果：目的蛋白以包涵体形式存在，经包涵体洗涤、变性溶解，SephacrylS-300凝胶过滤层析及SephacrylS-100凝胶柱复性获得了纯化的蛋白质，目的蛋白能与CCR5 mAb特异性结合．结论：获得了大量纯化的rCCR5重组蛋白，可作为研制CCR5自体蛋白疫苗以阻断HIV-1感染的候选抗原蛋白。     

创面局部应用CTLA4Ig重组腺病毒延长异体皮移植存活期的临床应用

目的　观察创面局部应用CTLA4Ig重组腺病毒延长异体皮存活期的临床效果。方法　 12例大面积烧伤切痂创面应用CTLA4Ig重组腺病毒自体微粒皮和异体皮移植。临床观察异体皮存活时间、微粒皮封闭创面情况、用EP Ⅰ型水蒸仪测定创面水分蒸发量及组织学观察。结果　创面应用CTLA4Ig重组腺病毒能显著延长异体皮移植物的成活期 [对照组 ( 16.9± 3 .7)d ,实验组 ( 2 5 .6± 5 .5 )d] ,淋巴细胞浸润较少 ,自体微粒皮移植创面愈合率明显增高 ;实验部位水分蒸发量保持较低水平 ,而对照部位于术后 9d逐渐升高。结论　局部应用CTLA4Ig 重组腺病毒是一种有效延长烧伤创面异基因移植皮肤存活期的方法。