不同年龄段成批烧创伤患者的临床救治与监护

目的 总结分析三批不同年龄段成批烧创伤患者的临床特点,为成批烧创伤的临床救治、监护及康复治疗提供经验.方法 对解放军第一八一医院2009年至2013年救治的三批26例不同年龄段成批烧创伤临床资料进行回顾性分析.结果 26例患者中学龄期儿童组2例患者和老年组1例特重度烧伤合并吸入性损伤患者均死于多脏器功能衰竭,其余23例患者治愈出院.结论 区域烧创伤救治网的建立、政府层面的行政协调、早期综合救治及监护方案的实施与系统康复训练的有效结合是成批烧创伤救治的关键,能提高救治成功率.     

新鲜人羊膜微粒与自体微粒皮混合移植对创面愈合的实验研究

目的观察新鲜人羊膜（简称羊膜）微粒混合自体微粒皮促进大鼠创面愈合的作用。方法在24只SD大鼠背部切取4 cm×4 cm全层皮肤,切下的皮肤用取皮鼓反向切取0.15 mm厚皮片,用微量电子天平称量0.1 g制作微粒皮,称取0.2 g、0.4 g羊膜制作羊膜微粒。按移植治疗方法的不同随机分为3组,即自体皮组、治疗1组、治疗2组,每组8只。①自体皮组,用0.1 g自体微粒皮治疗;②治疗1组,用0.1 g自体微粒皮混合0.2 g羊膜微粒治疗;③治疗2组,用0.1 g自体微粒皮混合0.4 g羊膜微粒治疗。移植术后第21、28天,对各组大鼠创面进行大体观察、组织病理检查并测定创面愈合率和收缩率。结果①移植后21天：3组未愈创面为肉芽组织,有少量渗出,3组创面收缩均不明显;与自体皮组比较,治疗1组、2组创面愈合面积大。创面愈合率：治疗2组大于治疗1组（P〉0.05）,治疗1、2组大于自体皮组（P〈0.05）。创面收缩率：治疗2组小于治疗1组（P〉0.05）,治疗1、2组小于自体皮组（P〈0.05）。组织学观察3组表皮层增生,真皮层毛细血管丰富,表-真皮连接处可见乳头,但自体皮组真皮层内成纤维细胞和毛细血管明显,胶原纤维排列稍乱,并有少量炎症细胞浸润。②移植后28天：治疗1组、2组创面基本愈合或痊愈,自体皮组创面愈合面积增大,裸露创面为肉芽组织且渗出较多,治疗1组、2组较自体皮组收缩小。与自体皮组比较,治疗1组、2组表皮层明显增厚,真皮层胶原纤维排列整齐,表-真皮交接处有明显钉突形成。创面愈合率：治疗2组大于治疗1组（P〉0.05）,治疗1、2组大于自体皮组（P〈0.05）。创面收缩率：治疗2组小于治疗1组（P〉0.05）,治疗1、2组小于自体皮组（P〈0.05）。组织学观察自体皮组真皮层内毛细血管较丰富,可见炎症细胞浸润,成纤维细胞增生明显。结论羊膜微粒与自体微粒皮混合移植可以促进创面愈合。     

人完整p53凋亡刺激蛋白家族抑制成员多克隆抗体的制备及鉴定

目的:p53凋亡刺激蛋白(ASPP)家族可调节p53抑癌功能,其抑制成员(iASPP)具有特异性抑制p53诱导细胞凋亡的能力.为了对iASPP进行系统研究,文中报道制备完整的iASPP分子多克隆抗体的方法.方法:在完整iASPP独有的N端选择3个免疫原肽段,制备了3个多克隆抗体.用ELISA检测抗体效价,Western blot比较3个抗体检测内源性抗原的效果,并用体外转录翻译系统制备的完整iASPP蛋白作为对照标准.结果:1号抗体效价＞1:32 000,2号和3号抗体效价＞1:16 000.Western blot确定100 000为完整iASPP蛋白的条带位置.结论:成功地制备了iASPP的多克隆抗体,为深入研究完整iASPP提供了有用的工具.     

ASPP家族成员mRNA在乳腺癌细胞株中的表达及意义

p53凋亡刺激蛋白(apoptosis-stimulating protein of p53,ASPP)家族包括ASPP1、ASPP2和iASPP(inhibitory member of the ASPP family)3个成员[1],它们在结构上极为相似,都具有3个典型的特征性结构:4个锚蛋白重复序列、SH3结构域和富含脯氨酸的结构域.本研究旨在了解ASPP家族成员在乳腺癌细胞株中的表达状况及其对细胞凋亡的影响,为进一步研究乳腺癌的靶向治疗奠定基础.     

白血病细胞雄激素受体基因启动子甲基化状态的研究

目的 检测白血病细胞雄激素受体基因启动子区CpG岛甲基化状态情况,初步探讨雄激素受体基因启动子区甲基化与白血病发病机制的可能联系.方法 应用甲基化特异性PCR技术(methylation specific PCR, MSP)检测3种白血病细胞株及15例患者骨髓标本雄激素受体基因甲基化状态.结果 白血病细胞株均出现甲基化和非甲基化带,呈部分甲基化状态,而作为对照的正常人白细胞均只出现非甲基化带.15例白血病患者全部检出甲基化状态. 结论 白血病细胞的雄激素受体基因启动子区存在高甲基化现象,可能为白血病的致病机制分析提供了一个新的方向,提示AR基因启动子CPG岛的甲基化有可能成为白血病的新的参考标记物.     

p53凋亡刺激蛋白基因5′端非编码区CpG岛高甲基化与其mRNA表达的改变

目的了解ASPP1和ASPP2基因5′端非编码区CpG岛在野生型p53肿瘤细胞中的甲基化状况及其与mRNA异常表达的关系.方法用RT-PCR方法测定mRNA表达,甲基化特异的PCR方法测定DNA甲基化.结果肿瘤细胞中ASPP1和ASPP2 mRNA表达减少,同时ASPP基因的5′端非编码区出现异常高甲基化.结论 ASPP基因的异常高甲基化可能是引起ASPP mRNA表达降低的影响因素之一.     

iASPP特异性RNAi表达载体的构建及其干扰效果鉴定

目的构建iASPP基因的RNA i真核表达载体PGCsilencerTMH1/Neo/GFP/RNA i,并观察其转染白血病细胞株Jurkat前后iASPP的表达变化以及其对细胞凋亡的影响。方法根据GenBank中iASPP的序列,设计特异性siRNA序列,将模板序列克隆至PGCsilencerTMH1/Neo/GFP质粒中,测序鉴定后,用脂质体将重组子转染至Jurkat细胞中,用RT-PCR方法检测iASPP的表达,用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。结果经测序,模板序列与设计序列完全正确,RT-PCR检测Jurkat细胞中iASPP表达在转染干扰质粒后有明显的下降,转染后Jurkat细胞凋亡由11.81%增加到33.15%。结论成功构建了iASPP基因的RNA i真核表达载体,且其对白血病细胞有一定的干扰效果,为下一步探讨iASPP对肿瘤细胞中p53的抑癌作用机制奠定了基础。     

曲尼司特减轻松木屑烟雾吸入性损伤大鼠肺组织胶原沉积的研究

目的观察曲尼司特对松木屑烟雾致大鼠肺组织损伤后胶原蛋白合成的影响,为曲尼司特防治松木屑烟雾吸入性损伤致肺组织胶原沉积乃至纤维化提供可行性。 方法将72只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常组、对照组、治疗组、盐水组,每组18只。对照组、治疗组和盐水组大鼠吸入松木屑烟雾共15 min(每间隔5 min吸烟1次,每次5 min,共吸烟雾3次),对照组不给予任何治疗,治疗组和盐水组于吸入烟雾后6 h,分别每天经腹腔注射1次曲尼司特(200 mg·kg^-1)和0.9%氯化钠溶液0.5 mL,正常组大鼠不予致伤、治疗。伤后7、14、28 d,各组取肺组织行苏木精-伊红、Masson染色,并行组织病理评分和计算胶原沉积率(CVF),碱水解法测定肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量,对数据行单因素方差分析、t检验。 结果(1)苏木精-伊红染色：松木屑烟致伤后7 d,对照组和盐水组大鼠肺组织中均可见不同程度炎性细胞浸润、充血、肺间质水肿,随着观察时间的延长,肺组织炎性细胞浸润增加、出血增多,肺间隔逐渐增宽。伤后7、14、28 d,治疗组肺组织病理评分[(2.60±0.63)、(4.05±0.20)、(3.80±0.23)分]分别低于对照组[(3.20±0.28)、(5.00±0.40)、(8.48±0.51)分]和盐水组[(3.20±0.16)、(5.20±0.33)、(8.20±0.52)分],差异均有统计学意义(t＝-1.732、-1.837、-4.025、-5.745、-16.673、-15.556, P<0.05),除伤后7 d,治疗组与正常组[(2.20±0.23)分]比较差异无统计学意义(t＝1.188, P>0.05),伤后14、28 d,治疗组均高于正常组,差异有统计学意义(t＝12.438、9.798, P<0.05);(2)胶原沉积：伤后7 d,对照组和盐水组大鼠小气道周围胶原纤维沉积增加,随着观察时间的延长,肺间质逐渐出现大面积的胶原沉积。伤后7、14、28 d,治疗组的CVF[(5.22±0.26)%、(6.66±0.59)%、(4.86±0.44)%]均低于对照组[(6.21±0.31)%、(11.64±0.39)%、(36.17±2.24)%]和盐水组[(6.20±0.56)%、(11.11±1.01)%、(33.72±4.41)%],差异均有统计学意义(t＝-4.893、-3.170、-8.476、-10.184、-27.491、-13.014,P<0.05),且除伤后28 d,治疗组CVF与正常组[(4.54±0.23)%]差异无统计学意义(t＝3.860, P>0.05),伤后7、14 d的治疗组均高于正常组[(4.54±0.23)%、(4.54±0.23)%],差异均有统计学意义(t＝1.275、6.646, P<0.05);(3)HYP表达：伤后7、14 d,治疗组[(0.77±0.01)、(0.97±0.01) μg/mL]、对照组[(0.93±0.01)、(1.27±0.18) μg/mL]和盐水组[(0.92±0.01)、(1.23±0.16) μg/mL]大鼠肺组织中HYP表达均高于正常组[(0.66±0.06)、(0.66±0.06)μg/mL],差异均有统计学意义(t＝3.619、9.134、8.918、10.739、6.309、6.652,P<0.05),且伤后14、28 d治疗组[(0.97±0.01)、(0.83±0.02) μg/mL]显著低于对照组[(1.27±0.18)、(1.43±0.16) μg/mL]和盐水组[(1.23±0.16)、(1.42±0.15) μg/mL],差异均有统计学意义(t＝-3.232、-3.230、-7.699、-7.913,P<0.05),伤后28 d,治疗组[(0.83±0.02) μg/mL]与正常组[(0.66±0.06) μg/mL]低于对照组[(1.43±0.16) μg/mL]和盐水组[(1.42±0.15) μg/mL],差异均有统计学意义[(t＝-7.699、-7.913、-9.326、-9.564, P<0.05),且治疗组与正常组间比较差异无统计学意义(t＝5.720, P>0.05)。 结论曲尼司特减轻了松木屑烟雾吸入性大鼠肺组织病理损伤程度,减少胶原沉积和HYP的表达。     

不同层级重度蒸汽吸入性损伤动物模型的建立

目的建立严重、危重与极危重3个层级重度蒸汽吸入性损伤兔模型。方法随机将136只新西兰大白兔分为假伤组(n=34)与致伤组(n=102)。致伤组按蒸汽吸入致伤时间分为0.25、0.50、1.00 s组(均n=34),0.25、0.50、1.00 s组兔用自动控时调压烫伤仪[11-12]控制蒸汽压力0.02 MPa/cm2、温度105℃条件下通过气管切开处分别致伤,假伤组兔除不予吸入蒸汽致伤外其它处理同致伤组。0.25、0.50、1.00 s组与假伤组于伤后1、4、12、24 h各取兔6只检测或观察动脉血氧分压(Pa O2)与二氧化碳分压(Pa CO2)、肺组织病理、肺组织含水率变化,各组另取10只兔观察伤后6、12、24 h死亡率。结果 1.00 s组伤后1 h即出现明显的肺充血水肿和出血、缺氧以及炎症细胞浸润状况并逐渐加重,伤后6 h兔死亡率达100%。0.50 s组伤后1 h也出现肺充血水肿和出血、缺氧,至伤后4 h加重并出现炎症细胞浸润,伤后1、4 h的Pa O2较1.00 s组高,差异有统计学意义(P<0.05),0.50 s组兔伤后12、24 h死亡率分别为25%、75%。0.25 s组在伤后4 h出现肺充血水肿、缺氧,伤后12 h肺充血水肿加重并出现出血、炎症细胞浸润,伤后4、12、24 h Pa O2均小于60 mm Hg(1 mm Hg=0.133 k Pa),较0.50 s组同时相点高,差异有统计学意义(P<0.05),较假伤组同时相点低,差异均有显著性统计学意义(P<0.01),0.25 s组伤后24 h兔死亡率为25%。结论在蒸汽压力为0.02 MPa/cm2,温度105℃条件下,致伤时间1.00、0.50、0.25 s可分别造成兔极危重、危重和严重吸入性损伤。