RG-14260增强子宫内膜癌细胞化疗敏感性研究

目的:研究酪氨酸磷酸化抑制剂RG-14260(RG)单独或联合阿霉素、顺铂及紫杉醇对子宫内膜癌ishikawa细胞增殖的影响,为临床应用RG治疗子宫内膜癌提供理论依据。方法:应用10μmol.L-1RG与各1/2的IC50量的阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)及紫杉醇(PTX)联合,MTT法检测细胞增殖抑制率;RT-PCR法检测RG、阿霉素、顺铂及紫杉醇对细胞表皮生长因子受体EGFRmRNA表达影响;Western blot法检测10μmol.L-1RG作用6,12,24 h后细胞p21蛋白表达水平。结果:RG可显著降低细胞EGFR基因mRNA水平,上调p21蛋白表达。结论:RG通过抑制EGFR信号通路,上调p21蛋白表达,增强化疗药物对子宫内膜癌细胞的杀伤作用。     

联合靶向阻断EGFR和mTOR信号通路增强紫杉醇对子宫内膜癌细胞化疗敏感性

目的 观察紫杉醇联合阻断表皮生长因子受体(EGFR)信号通路抑制剂RG - 14260和阻断哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路抑制剂雷帕霉素(Rapamycin)对子宫内膜癌细胞株Ishikawa的影响.方法 紫杉醇、RG -14260、Rapamycin单独和联合处理Ishikawa细胞后,MTT法和细胞克隆形成法检测细胞增殖抑制率和存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期分布;Transwell法检测细胞体外侵袭力.结果 紫杉醇、RG -14260与Rapamycin均可抑制Ishikawa细胞增殖、诱导细胞凋亡、减少S期细胞数量、降低细胞侵袭力,三者联合应用呈协同效应(P＜0.01).结论 紫杉醇联合RG-14260及Rapamycin靶向治疗剂能协同性地抑制子宫内膜癌细胞生长、降低其侵袭力,这种作用可能是通过增加G1期细胞阻滞及凋亡来实现的.     

薯蓣皂苷元对人骨肉瘤细胞自噬的影响

目的 探讨薯蓣皂苷元对人骨肉瘤细胞自噬的影响。方法 MTT法检测薯蓣皂苷元对人骨肉瘤MG63和U2OS细胞增殖的影响,透射电镜技术观察细胞超微结构,免疫荧光法观察细胞自噬蛋白Beclin1表达,Western blot法检测细胞自噬分子标记物LC3、Beclin1和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达。薯蓣皂苷元联合PI3K通路抑制剂LY294002处理MG63和U2OS细胞,RT-qPCR法检测细胞Beclin1 mRNA表达;联合自噬抑制剂3-methyladenine(3-MA)处理MG63和U2OS细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,Western blot法检测细胞cleaved-caspase3蛋白表达,RT-qPCR法检测细胞caspase3 mRNA表达。结果 薯蓣皂苷元能抑制骨肉瘤MG63和U2OS细胞增殖,促使自噬体生成,增加LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表达(P<0.05,P<0.01),降低LC3 I蛋白表达(P<0.01),可抑制PI3K/Akt/mTOR通路蛋白磷酸化水平(P<0.05,P<0.01);联合自噬抑制剂干预后...     

蠲痛饮对子宫内膜异位症大鼠PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白的影响

目的:探讨蠲痛饮对子宫内膜异位症(EMS)大鼠磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶分子(mTOR)信号通路蛋白的影响。方法:采用自体子宫内膜移植法建立EMS大鼠模型,随机将48只大鼠分为正常组、模型组、蠲痛饮低、中、高剂量组、通路阻滞剂组(LY294002) 6组,分别给予蠲痛饮高、中、低剂量(42. 9,14. 3,4. 8 g·kg~(-1))灌胃,通路阻滞剂组予PI3K通路阻滞剂LY294002(0. 04 g·kg~(-1))腹腔注射,正常组及模型组每天按照10 mL·kg~(-1)给予生理盐水灌胃,各组持续用药28 d。应用透射电镜观察大鼠异位内膜组织超微结构,免疫组化法检测异位内膜组织PI3K,Akt,mTOR蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测核糖体蛋白S6激酶(p70S6K) mRNA相对含量。结果:与正常组比较,模型组异位内膜PI3K,Akt,mTOR蛋白和p70S6K mRNA的表达都明显升高(P 0. 05);与模型组比较,蠲痛饮中、高剂量、通路阻滞剂组干预后PI3K,Akt,mTOR蛋白和p70S6K mRNA的表达明显降低(P 0. 05)。透射电镜下可见蠲痛饮低、中、高剂量组和通路阻滞剂组均能促进腺上皮细胞萎缩或欠整齐,微绒毛减少或消失,胞核固缩,胞内线粒体肿胀或减少,间质细胞凋亡。结论:PI3K/Akt/mTOR信号通路参与子宫内膜异位症发生;蠲痛饮可能通过下调PI3K/Akt/mTOR通路蛋白的表达及p70S6K mRNA表达,从而抑制上皮间质细胞活性,促进细胞凋亡,治疗子宫内膜异位症。     

mTOR信号通路调控糖尿病肾病肾小球肥大的机制及中药的干预作用

肾小球肥大(glomerular hypertrophy)是糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)早期阶段最主要的病理特征,其调控机制与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路活性密切相关。mTOR包括mTORC1和mTORC2,其中,mTORC1上游信号通路是磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/丝氨酸-苏氨酸激酶(serine-threonine kinase,Akt)/5-单磷酸腺苷活性蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK),其代表性的下游信号分子是4E结合蛋白(4E-binding proteins,4EBP)和70 kD核糖体S6激酶(phosphoprotein 70 S6Kinase,p70S6K)。一些中药提取物可以在体外通过干预PI3K/Akt/mTOR信号通路关键上、下游信号分子的表达而改善细胞增殖。对于肾小球系膜细胞和足细胞,mTOR通过调节细胞周期、能量代谢以及相关的基质蛋白合成等多种途径对肾小球固有细胞发挥着重要的调控作用。对于DN动物模型,mTOR抑制剂——雷帕霉素可抑制肾小球固有细胞肥大、增殖以及相应的肾小球基底膜增厚和系膜基质沉积。一些中药提取物在体内外可以通过干预DN肾组织或肾脏固有细胞mTOR信号通路的活性而减轻相应的肾小球病变。     

健脾消癌方对结肠癌细胞中Akt/mTOR信号通路的影响

目的:探讨健脾消癌方含药血清对人结肠癌HCT116细胞蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达的影响。方法:以15%健脾消癌方含药血清处理结肠癌HCT116细胞,采用Transwell侵袭实验检测HCT116细胞迁移、侵袭作用,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测HCT116细胞中Akt,磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),mTOR,磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR),核糖体S6蛋白激酶(S6K1),磷酸化核糖体S6蛋白激酶(p-S6K1),真核细胞始动因子4E结合蛋白(4EBP1),磷酸化真核细胞始动因子4E结合蛋白(p-4EBP1)等蛋白的表达,正常血清组设立相同浓度正常血清组(15%),10%胎牛血清组(FBS)。结果:与正常血清组比较,健脾消癌方含药血清组迁移细胞数与侵袭细胞数均显著降低(P 0. 01);与正常血清组比较,Akt蛋白表达无明显下调,p-Akt蛋白表达显著下调(P 0. 01);与正常血清组比较,mTOR蛋白表达无明显下调,p-mTOR蛋白表达显著下调(P 0. 01);与正常血清组比较,S6K1蛋白表达无明显下调,p-S6K1蛋白表达显著下调(P 0. 01);与正常血清组比较,4EBP1蛋白表达无明显下调,p-4EBP1蛋白表达显著下调(P 0. 01)。结论:健脾消癌方抗结肠癌复发转移的机制可能与抑制Akt/mTOR信号通路的激活有关。     

大黄对脂多糖致RAW264.7细胞炎症模型mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路的影响

目的观察大黄对脂多糖致RAW264.7细胞炎症模型mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路的影响,探讨其作用机制。方法实验细胞分为正常组、模型组、雷帕霉素组和大黄低、中、高剂量组,MTT法检测细胞毒性后,ELISA检测白细胞介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,实时荧光定量PCR检测缺氧诱导因子-lα(HIF-1α)、p70S6K1和eIF4E mRNA表达,Western blot检测雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组细胞TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显升高(P<0.05,P<0.01),HIF-1α、eIF4E和p70S6K1 mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01),HIF-1α和VEGF蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,大黄各剂量组细胞TNF-α、IL-6和IL-1β含量降低,HIF-1α、p70S6K1和eIF4E mRNA表达降低,HIF-1α、VEGF蛋白表达降低。结论大黄可下调炎症因子水平,其机制可能与其下调HIF-1α、VEGF蛋白表达及HIF-1α、eIF4E、p70S6K1 mRNA表达水平有关。     

mTOR信号通路与肿瘤靶向治疗研究进展

mTOR接受上游信号激活后通过调控其下游的靶分子4E-BP1和p70S6K而发挥作用,该信号通路在调节细胞生长、细胞周期进程及蛋白质合成等过程中发挥重要作用。该通路的异常也与恶性肿瘤的活化及形成密切相关。目前,针对该通路的靶向抑制剂已应用于临床,因此对mTOR信号通路的深入研究对恶性肿瘤的靶向治疗中具有重要的意义。     

雷公藤甲素对子宫内膜癌Ishikawa细胞的影响

目的探讨雷公藤甲素对子宫内膜癌Ishikawa细胞的影响。方法 MTT法检测雷公藤甲素对Ishikawa细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测雷公藤甲素对Ishikawa细胞周期的影响,Western blot检测PI3Kp85、p-AkT、AkT、 p-mTOR、mTOR蛋白表达,荧光定量PCR检测PI3Kp85、AkT、mTOR、LC3ⅡmRNA表达。结果雷公藤甲素对Ishikawa细胞增殖有明显抑制作用,可显著减低PI3Kp85、p-AkT、p-mTOR蛋白和mRNA表达(P0.05,P0.01),显著升高Ishikawa细胞S期和G2/M期比例、LC3ⅡmRNA表达(P0.05,P0.01)。结论雷公藤甲素可能基于PI3K-AkT-mTOR通路阻滞子宫内膜癌Ishikawa细胞周期,从而抑制肿瘤细胞生长。     

白藜芦醇对TNF-α诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的影响

目的:观察白藜芦醇(Res)对TNF-α诱导类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖及凋亡的影响,探讨其对PI3K/Akt/BAD信号通路作用。方法:MTT比色法测定Res对TNF-α诱导RA FLS生长的抑制作用。流式细胞仪检测Res对RA FLS细胞周期及凋亡率的影响。Western-blot方法分析Res对TNF-α诱导RA FLS中磷酸化Akt蛋白及其下游效应分子磷酸化BAD蛋白表达的影响。结果:Res对TNF-α诱导RA FLS增殖具有抑制作用,呈时间剂量依赖性。随着Res浓度增加,RA FLS凋亡率增加,G0/G1期细胞增多,G2/M期及S期细胞减少,与TNF-α组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。Res可抑制TNF-α诱导RA FLS磷酸化Akt蛋白以及磷酸化BAD蛋白的表达。结论:Res通过阻滞RA FLS细胞周期、下调PI3K/Akt信号通路Akt磷酸化水平发挥抑制增殖、诱导凋亡作用,Res具有治疗RA的潜在价值。     

寿胎丸对反复自然流产小鼠母胎界面CD4^＋T细胞STAT信号转导途径的影响

目的观察寿胎丸对反复自然流产小鼠母胎界面CD4^＋T细胞STAT信号转导途径的影响。方法采用CBA／J×BALB／C建立正常妊娠小鼠模型,CBA／JxDBA／2建立反复自然流产小鼠模型。流产模型小鼠随机分为对照组及寿胎丸组,给药14d后取其蜕膜和胎盘组织,分离CD4^＋T细胞,Springbi0720点抗体芯片检测STAT信号转导途径蛋白磷酸化水平。结果寿胎丸可上调STAT信号转导途径的STAT3和STAT6蛋白的磷酸化水平,同时下调STAT1蛋白的磷酸化水平。结论STAT3和STAT6信号转导途径的激活可能是寿胎丸治疗反复自然流产的重要分子机制之一。     

健脾解毒方介导p38MAPK信号转导下调幽门螺杆菌诱导的胃癌细胞环氧合酶2启动子活性

目的:探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)对人胃癌MKN45细胞环氧合酶2(Cyclooxygenase-2,COX-2)启动子荧光素酶报告基因重组质粒(pGL3-Basic-COX-2-promoter)活性的影响和健脾解毒方对其的调控作用及可能的机制。方法:将构建的pGL3-Basic-COX-2-promoter转染MKN45细胞,观察H.pylori对其活性的影响。运用p38MAPK特异性抑制剂SB203580阻断p38MAPK信号通路,观察H.pylori对MKN45细胞COX-2启动子活性的影响。Western blot法检测健脾解毒方对H.pylori感染的MKN45细胞p38MAPK信号通路及其下游激活转录因子-2(ATF-2)表达的影响。结果:H.pylori可增加COX-2启动子活性;抑制p38MAPK信号通路后,COX-2启动子活性明显下调;健脾解毒方能够抑制H.pylori诱导的p38MAPK及ATF-)的活性。结论:H.pylori通过p38MAPK信号通路上调胃癌细胞COX-2启动子活性;健脾解毒方通过调控p38MAPK/ATF-2信号通路,抑制COX-2启动子活性,是其防治H.pylori诱发胃癌的机制之一。     

Chrysophanic acid blocks proliferation of colon cancer cells by inhibiting EGFR/mTOR pathway

Inactivation of epidermal growth factor receptor (EGFR) is a prime method used in colon cancer therapy. Here it is shown that chrysophanic acid, a natural anthraquinone, has anticancer activity in EGFR-overexpressing SNU-C5 human colon cancer cells. Chrysophanic acid preferentially blocked proliferation in SNU-C5 cells but not in other cell lines (HT7, HT29, KM12C, SW480, HCT116 and SNU-C4) with low levels of EGFR expression. Chrysophanic acid treatment in SNU-C5 cells inhibited EGF-induced phosphorylation of EGFR and suppressed activation of downstream signaling molecules, such as AKT, extracellular signal-regulated kinase (ERK) and the mammalian target of rapamycin (mTOR)/ribosomal protein S6 kinase (p70S6K). Chrysophanic acid (80 and 120 μm) significantly blocked cell proliferation when combined with the mTOR inhibitor, rapamycin. These findings offer the first evidence of anticancer activity for chrysophanic acid via EGFR/mTOR mediated signaling transduction pathway.     

不同浓度苦参碱对肝癌细胞增殖及JAK-STAT信号通路的影响

目的:观察不同浓度苦参碱对肝癌细胞SMMC-7721增殖和JAK-STAT通路的影响。方法:苦参碱作用于肝癌SMMC-7721细胞,用MTT法检测不同浓度苦参碱对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用;RT-PCR法检测不同浓度苦参碱对SMMC-7721细胞stat3、stat5、c-jun mRNA的影响,Western blot法检测不同浓度苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞STAT3、STAT5、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN蛋白表达的影响。结果:苦参碱能够抑制SMMC-7721细胞增殖,呈时间-剂量依赖性。苦参碱能下调stat3、stat5、c-jun mRNA表达水平,降低STAT3、STAT5、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN蛋白表达量,有剂量依赖性。结论:苦参碱不仅能直接杀伤肿瘤细胞,而且能抑制JAK-STAT信号通路,从而抑制肿瘤细胞的增殖。     

黄芩苷对结肠癌HT-29细胞移植瘤小鼠IL-6/STAT3信号转导通路的影响

目的:探讨黄芩苷对结肠癌HT-29细胞移植瘤小鼠IL-6/STAT3信号转导通路的影响。方法:选取SPF级健康雄性昆明种小鼠96只,采用人结肠癌HT-29细胞悬液右前肢腋窝处皮下注射建立结肠癌移植瘤模型。将小鼠随机分为对照组、模型组、黄芩苷低剂量组、黄芩苷中剂量组、黄芩苷高剂量组及阳性对照组,各16只,均腹腔注射给药10 ml/kg、1次/d,连续14 d。检测比较各组肿瘤体积、肿瘤质量、抑瘤率,肿瘤组织细胞凋亡指数(AI),血清IL-6、IL-10水平,以及肿瘤组织IL-6、STAT3、p-STAT3、Bcl-2蛋白表达水平。结果:与模型组比较,各组小鼠抑瘤率、肿瘤组织AI较高,且黄芩苷低剂量组<黄芩苷中剂量组<黄芩苷高剂量组<阳性对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。与模型组比较,各组小鼠肿瘤体积和质量、血清IL-6、IL-10水平、肿瘤组织IL-6、p-STAT3、Bcl-2蛋白表达水平较低,且黄芩苷低剂量组>黄芩苷中剂量组>黄芩苷高剂量组>阳性对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:黄芩苷能剂量依赖性的抑制结肠癌HT-29细胞移植瘤小鼠肿瘤生长,促进肿瘤细胞凋亡,其作用可能与抑制IL-6/STAT3信号转导通路活性有关。     

中医药干预相关信号通路防治肝癌研究进展

肝癌的发生、发展及微环境中存在着多种信号通路的异常。细胞信号通路的异常持续激活或抑制,调控细胞的增殖、凋亡及迁移,进而影响炎症、血管生成和肿瘤迁移。中医药可通过干预相关信号通路的转导发挥防治肝癌的作用,主要包括刺猬信号通路、IL-6/STAT3信号通路、NF-κB信号通路、PI3K/Akt/mTOR信号通路、MAPK信号通路、TLR信号通路、Wnt信号通路等。现阶段中医药防治肝癌作用确切,但具体机制尚未完全阐明,中医药调控肝癌相关信号通路的研究仍需继续探索。     

中药抗肝癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的信号通路研究进展

从信号转导通路方面综述中药抗肝癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的研究进展。中药和中药提取物可通过调控肝癌相关信号通路,如MAPK信号转导通路、PI3K/AKT信号转导通路、JAK-STAT通路、Caspase途径、Wnt信号通路等,改变肝癌细胞特性发挥抑制肝癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的效果。     

化瘀解毒方含药血清通过JAK2/STAT3通路抑制人肺癌H1299细胞侵袭迁移

目的:探讨化瘀解毒方含药血清(HJRMS)对人肺癌细胞(H1299细胞)的增殖、侵袭与迁移的影响及其机制。方法:通过细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测化瘀解毒方含药血清对肺癌细胞增殖的抑制能力;利用划痕实验和Transwell小室法检测肺癌细胞的侵袭与迁移作用;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测蛋白酪氨酸激酶2(JAK2),信号传导及转录激活因子3(STAT3),磷酸化JAK2(p-JAK2)和磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测JAK2,STAT3 mRNA表达水平。结果:(1)与空白组比较,1%~16%化瘀解毒方含药血清分别处理24,48 h,H1299细胞增殖能力受到显著抑制(P<0.01),并呈一定的浓度依赖性。(2)H1299细胞在经化瘀解毒方含药血清处理24 h,与空白组比较,4%,8%化瘀解毒方含药血清组细胞划痕愈合能力受到抑制(P<0.05,P<0.01)。(3)在侵袭实验和迁移实验中,与空白组比较,2%,4%,8%化瘀解毒方含药血清肺癌细胞透膜数均明显减少(P<0.05,P<0.01)。(4)Western blot显示,与空白组比较,4%,8%化瘀解毒方含药血清组均对肺癌H1299细胞中JAK2/STAT3信号通路相关蛋白(JAK2,p-JAK2,STAT3,p-STAT3)表达具有抑制作用(P<0.05,P<0.01)。(5)与空白组比较,使用8%化瘀解毒方含药血清处理肺癌H1299细胞24 h,JAK2,STAT3mRNA表达水平均下降(P<0.05)。结论:化瘀解毒方含药血清能够抑制肺癌H1299细胞的增殖、侵袭与迁移,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。