苦参碱对兔晶状体上皮细胞内胶原合成的影响

目的探讨苦参碱（Mat）对体外培养的兔晶状体上皮细胞（RLECs）内Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白合成的影响。方法 RLECs培养后分为3组：空白对照组以DMEM为培养基;重组人表皮生长因子（rhEGF）组以DMEM＋50μg/L rhEGF为培养基;Mat组以含50μg/L rhEGF和1.0 g/L Mat的DMEM为培养基。利用50μg/LrhEGF诱导RLECs增殖,加入1.0 g/L Mat培养24 h后,采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测RLECs内Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达。结果 50μg/L rhEGF作用后,RLECs内Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白浓度分别为57.65±4.54μg/L和1.59±0.19μg/L,较空白对照组明显升高（P〈0.01）。Mat作用后,RLECs内Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白浓度分别为21.74±3.96μg/L和0.56±0.21μg/L,较rhbFGF组和空白对照组明显下降（P〈0.01）。结论 Mat能抑制体外培养的RLECs内Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的合成。     

雷公藤内酯醇对牛晶状体上皮细胞增殖及胞浆内游离Ca2+浓度的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(Tri)对牛晶状体上皮细胞(1ens epithelial cell,LECs)增殖的影响及可能的机制.方法:取体外培养的第4代牛LECs,分5组培养.空白对照组:以DMEM培养;增殖对照组:以DMEM 50μg/L rhEGF培养;Tri高、中、低剂量组分别以含50μg/L rhEGF和40μg//L、20μg/L、10μg/L Tri的DMEM培养.分组培养6 h、12 h、24 h、48 h、72 h后用MTT比色法及流式细胞仪检测细胞增殖抑制率和增殖细胞核抗原(PCNA)阳性表达率;用荧光指示剂Fura-2/AM测定空白对照组、增殖对照组、Tri中剂量组分组培养48 h后胞内游离Ca2 浓度.结果:随着作用时间的延长和浓度的增加,Tri对rhEGF诱导的LECs增殖的抑制率逐渐增大;Tri各剂量组PCNA阳性表达率低于增殖对照组;Tri中剂量组胞内Ca2 浓度高于增殖对照组和空白对照组.结论:Tri对LECs的增殖有明显的抑制作用,该作用可能通过影响胞内Ca2 浓度来完成.     

菊花防护晶状体上皮细胞氧化损伤及信号转导机制的实验研究

目的通过菊花影响过氧化氢（H2O2）氧化损伤的晶状体上皮细胞（LEC）内钙（Ca^2＋）、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）信号转导的实验研究，探讨归肝经明目中药防治白内障的细胞和分子机制。方法将传代培养的牛LEC与H2O2共同孵育复制氧化损伤模型，同时加入菊花水提取液孵育后，四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测LEC活性、荧光分光光度法检测LEC内的钙离子浓度（[Ca^2＋]i）、放射免疫分析法检测LEC内cAMP和cGMP含量，探讨不同浓度菊花及孵育12h、24h和36h的影响。结果①H2O2组LEC活性下降，菊花使氧化损伤的LEC活性显著增高（P〈0．01），呈浓度依赖关系和时间依赖关系。（②H2O2组LEC的[Ca^2＋]i升高，菊花使氧化损伤所致的LEC的[Ca^2＋]i显著降低（P〈0.01），并呈时间-效应关系。③H2O2组LEC的cAMP浓度升高、cGMP浓度下降，菊花可使氧化损伤的LEC的cAMP水平显著降低（P〈0．01）、cGMP水平显著升高（P〈0．01），也呈时间-效应关系。结论通过[Ca^2＋]i、cAMP和cGMP信号转导系统及其相互作用调节生物学效应，可能是菊花防护LEC氧化损伤及减少细胞凋亡的细胞和分子生物学机制。     

雷公藤内酯醇对牛晶状体上皮细胞内Ca~(2+)浓度的影响及在细胞增殖中的意义

目的:探讨雷公藤内酯醇(triptolide,Tri)抑制体外培养的牛晶状体上皮细胞(bovine Lens epithelial cell,BLECs)增殖及其机制。方法:取第4代BLECs,用MTT比色法检测增殖抑制率,观察Tri浓度为20μg/L,不同时间(6,12,24,48,72h)对细胞增殖的影响,用荧光指示剂Fura-2/AM测定Tri对胞浆内游离Ca2+的影响。结果:同一浓度的Tri,于不同时间作用在处于增殖状态LECs,均出现明显的增殖抑制作用,其增殖抑制率升高呈现明显的时间依赖性。而增殖抑制组细胞内Ca2+浓度明显升高。结论:Tri对晶状体上皮细胞增殖有明显的抑制作用,它影响细胞增殖的作用机理之一可能是通过胞浆内游离Ca2+。     

雷公藤内酯醇对牛晶状体上皮细胞增殖的抑制及其胞浆内cGMP浓度的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(Triptolide, Tri)抑制体外培养的牛晶状体上皮细胞(bovine lens epithelial cell, BLECs)增殖及其细胞内cGMP浓度变化的机制.方法:取第4代BLECs,分3组培养.空白对照组:以DMEM培养;增殖对照组:以DMEM 50 μg/L rhEGF培养;雷公藤内酯醇组:增殖对照组 20 μg/L雷公藤内酯醇.用MTT比色法检测增殖抑制率来测定Tri 20 μg/L对细胞增殖的影响,用放射免疫法测定BLECs内cGMP浓度.结果:浓度为20 μg/L的Tri、作用在处于增殖状态的BLECs时间分别为6,12,24,48,72 h,均出现明显的增殖抑制作用, 其增殖抑制率升高呈现明显的时间依赖性.而雷公藤内酯醇组细胞内cGMP含量比增殖对照组明显降低.结论:Tri对晶状体上皮细胞增殖有明显的抑制作用,而该作用可能通过降低细胞内cGMP浓度来完成.     

新型姜黄素纳米粒对Lewis肺癌细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨一种新型的姜黄素纳米粒(curcumin nanoparticles,Cur-NPs)对Lewis肺癌细胞LLC增殖与凋亡的影响。方法游离姜黄素(curcumin,Cur)和Cur-NPs分别作用于LLC细胞24 h,MTT检测其对LLC细胞的增殖抑制作用。20μmol/L的药物作用于细胞24 h后,流式细胞术检测Cur-NPs对细胞周期、细胞凋亡、细胞内活性氧、细胞内钙离子浓度、细胞线粒体膜电位的影响,并与Cur进行对照。结果 Cur-NPs可以明显增强Cur对LLC细胞的增殖抑制,IC50从34.91μmol/L降为10.65μmol/L(P<0.05)。Cur-NPs明显提高了Cur诱导LLC细胞凋亡(P<0.05)、抑制细胞周期于S期(P<0.05)、升高细胞内钙离子浓度(P<0.05)、升高细胞活性氧浓度(P<0.05)、降低细胞线粒体膜电位(P<0.05)的能力。结论新型姜黄素纳米粒可明显提高游离姜黄素对LLC细胞的体外增殖抑制作用,可能与其促进细胞凋亡有关。     

HL-60细胞内游离钙对环核苷酸水平的影响

目的 藉离子霉素提高细胞内游离钙浓度（[C^2 ]i），观察其对急性白血病HL－60细胞内环核苷酸水平的影响。方法 在IBMX抑制磷酸二酯酶作用后加入离子氯素提高[C^2 ]i，比较[C^2 ]i升高对静息水平和肾上腺素刺激水平的HL－60细胞内cAMP,cGMP水平的影响，cAMP,cGMP水平以环核苷酸的累积量表示。结果 [C^2 ]i升高可使静息和肾上腺素刺激水平的cAMP累积量明显降低，cGMP累只量无明显改变，[C^2 ]i升高对硒诱导分化后的HL－60细胞环核苷酸的影响同分化前一致。结论 [C^2 ]i升高能够降低HL－60细胞内cAMP水平，对cGMP水平无影响，这种作用不因细胞分化而改变。     

糖皮质激素对哮喘豚鼠血浆及淋巴细胞内cAMP和cGMP的影响

实验采用豚鼠模拟哮喘发作症状,检验周围血淋巴细胞内和血浆中cAMP、cGMP浓度。结果表明:(1)哮喘发作时血浆cAMP升高,随时间的推移而下降,淋巴细胞内的变化则相反;激素干预后血浆cAMP明显下降,而淋巴细胞内cAMP则上升且有时间依存性;(2)哮喘发作后血浆cGMP升高,淋巴细胞内无变化;激素干预后血浆cGMP下降,而淋巴细胞内上升。推论糖皮质激素通过增加cAMP和cGMP水平、调整cAMP/cGMP比值参与抑制哮喘的发病过程。     

吗啡长时程作用对新生鼠TM神经细胞cAMP和cGMP的影响以及青藤碱的干预作用

目的观察体外原代培养的新生鼠下丘脑结节乳头核(TM)神经细胞在吗啡长时程作用下胞内cAMP及cGMP水平的变化以及青藤碱对它的影响。方法采用原代培养7d的TM神经细胞,加入含100μmol/L吗啡的培养液培养48h,形成类吗啡依赖神经细胞,经100μmol/L纳洛酮戒断后,用EIA法测定细胞内cAMP和cGMP含量。不同剂量的组胺或青藤碱在纳洛酮戒断前30min作用于细胞,同时测定药物对正常TM细胞内cAMP和cGMP水平的影响。结果以100μmol/L吗啡作用于新生鼠TM细胞48h后,胞内cAMP及cGMP含量明显升高,经100μmol/L纳洛酮戒断后,胞内cAMP含量出现反弹性超高现象,而cGMP含量则明显下降,cAMP与cGMP比值明显增大。30、100μmol/L青藤碱及40μmol/L组胺对正常TM神经细胞的cAMP及cGMP含量无明显影响,300μmol/L青藤碱及80μmol/L组胺可使正常细胞内cAMP含量明显升高。三个剂量的青藤碱及40μmol/L组胺预先作用可明显降低吗啡依赖的TM细胞经纳洛酮戒断时的cAMP超高水平,同时明显升高cGMP水平,使细胞内增大的cAMP与cGMP比值减小。结论在吗啡(100μmol/L)长时程(48h)作用下,TM神经细胞内cAMP及cGMP水平发生了明显的变化,中枢组胺能神经系统可能参与了吗啡依赖的形成与戒断过程。青藤碱可显著降低吗啡依赖细胞戒断时的cAMP超高水平,同时升高cGMP水平,使两者比值趋于正常。     

Genistein影响人催乳素瘤细胞增殖及机制

目的 研究genistein对人催乳素瘤细胞的增殖代谢和DNA合成的影响,并深入探讨genistein影响催乳素瘤细胞增殖作用的机制,观察genistein作用后催乳素瘤细胞内蛋白激酶C（PKC）及cAMP/cGMP的变化。方法 采用MMT和[^3H]TdR掺入实验检测genistein对人催乳素瘤细胞增殖和DNA合成的影响;通过PKC活性及cAMP和cGMP含量测定。深入探讨genistein影响催乳素瘤细胞增殖分化的分子机制。结果 ①Genistein抑制催乳素瘤细胞的增殖和DNA合成,并呈剂量依赖性;②与空白处理组相比,使用PKC的激动剂PMA处理培养的人催乳素瘤细胞时可使胞膜和细胞总PKC活性浓度均升高,但genistein（10μmol/L）作用15min后,胞浆、胞膜和细胞总PKC活性均下降;③Genistein作用于人催乳素瘤细胞15min后,胞内cAMP水平显著升高,而cGMP没有明显改变。结论 实验结果为探讨genistein抑制催乳素瘤细胞增殖的分子机制提供了重要线索,同时提示,genistein对催乳素瘤细胞增殖分化的调控作用是细胞内多信息系统相互整合的结果。     

匹那地尔对大鼠缺血心肌钙调控的作用

目的 :探讨大鼠缺血心肌再灌注 (I- R)损伤的钙调控机制及匹那地尔对心肌 I- R损伤的保护作用机理。方法 :取 SD大鼠 ,心室肌细胞酶解分离 ,心肌细胞静息 1～ 2 h后随机分为 4组 :对照组、高钾停搏液组、匹那地尔强化组、格列苯脲拮抗组。 4组细胞在 2 4℃下保存 2 h后 ,复氧、复灌 2 0 min同时测定 [Ca2 + ]i 瞬态变化、肌浆网内贮钙释放功能。结果 :经匹那地尔强化处理的心肌细胞在 I- R过程中 [Ca2 + ]i 瞬态变化恢复率明显高于高钾停搏液组 (90 .2 7%～ 95 .5 7% vs6 7.0 5 %～ 80 .11% ,P<0 .0 1)。肌浆网内贮钙释放能力 (173.15 %± 2 6 .0 1% )明显高于高钾停搏液组 (112 .0 0 %± 16 .93% ) (P<0 .0 1)。经匹那地尔强化处理的心肌细胞在咖啡因诱导的钙释放后 ,胞内钙离子浓度从高水平回复到舒张末静息水平的时间为 (3.2 0± 0 .71) ms,显著短于高钾停搏液组 (3.93± 0 .4 6 ) ms(P<0 .0 5 )和对照组 (4 .6 8± 0 .77) ms(P<0 .0 1)。结论 :匹那地尔通过肌浆网和细胞膜 Na+ /Ca2 +交换体功能来调节钙瞬态变化 ,减少细胞内钙超载使心肌细胞在 I- R过程中保持较好的钙调控功能。     

Ca~(2+)、cAMP、cGMP在硒化壳聚糖诱导的NB_4细胞凋亡中的作用

目的研究硒化壳聚糖对NB4细胞第二信使的影响,探讨其抑制NB4细胞生长,诱导其凋亡的机制。方法流式细胞法观察药物对细胞内钙离子的影响;放免法检测药物对细胞内cAMP和cGMP含量的影响。结果硒化壳聚糖作用24h,NB4细胞内钙离子和cAMP含量明显升高,cGMP含量明显降低,cAMP/cGMP比值增大。结论硒化壳聚糖可通过升高细胞钙离子和cAMP含量,降低cGMP含量,增大cAMP/cGMP比值来抑制NB4细胞生长,诱导其凋亡。     

姜黄素对2型糖尿病大鼠血糖的影响

目的:探讨姜黄素对糖尿病大鼠血糖的干预效应. 方法: 采用高脂高糖饲料诱导4周加链脲佐菌素注射建立糖尿病大鼠模型,姜黄素200mg/kg 进行干预给药6周,实验结束后,分别检测大鼠的血糖和尿量.结果:姜黄素对正常大鼠的血糖没有影响,但是能降低糖尿病大鼠的血糖;姜黄素治疗组实验前后比较血糖有明显下降(P<0.05), 且实验后姜黄素血糖与阳性对照组比较,差异有非常显著性意义(P<0.01).同样,姜黄素治疗组大鼠尿量与阳性对照组比较差异有显著性意义(P<0.01).结论:姜黄素能有效改善II型糖尿病的血糖水平和减少尿量,同时也为糖尿病的临床治疗提供了新的途径与思路.     

C-型利钠利尿多肽对平滑肌细胞钙化的影响

目的 :在大鼠血管平滑肌细胞上观察C -型利钠利尿多肽 (C -typenatriureticpeptide ,CNP)对钙化的影响 ,探讨CNP对血管钙化的作用机制。方法 :β -磷酸甘油诱导培养的大鼠VSMCs钙化 ;通过VonKossa染色 ,细胞钙含量 ,45 Ca2 + 聚集 ,碱性磷酸酶活性测定 ,判断钙化程度 ,放射免疫分析方法测定VSMCs培养液中cAMP和cGMP含量。结果 :①β -磷酸甘油刺激平滑肌细胞生长、增殖和钙化 (P <0 .0 1) ;②CNP可降低钙化的VSMC的钙含量、4 5 Ca2 + 聚集、碱性磷酸酶活性 (P <0 .0 1) ;③CNP可以上调培养液中cGMP含量 ;④PKG抑制剂 -H8明显抑制CNP的效应。结论 :CNP主要是通过cGMP/PKG途径减轻 β -磷酸甘油诱导的VSMC钙化     

平喘宁对哮喘大鼠肺组织cAMP/cGMP及TGF-β1 mRNA表达的影响

目的:研究平喘宁对寒性哮喘大鼠肺组织中cAMP/cGMP及TGF-β1表达水平的影响。方法:雄性Wistar大鼠70只,随机分为空白对照组、模型组、地塞米松组、桂龙咳喘宁组以及平喘宁高、中、低剂量组。以卵蛋白致敏及寒冷刺激复制大鼠哮喘模型,造模7 d后,各治疗组开始给药,空白对照组、模型组每天给予等量蒸馏水灌胃。4 w后取出肺组织,采用ELISA法检测大鼠肺组织cAMP、cGMP含量,并计算cAMP/cGMP;采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)半定量检测TGF-β1 mRNA表达丰度。结果:与模型组比较,平喘宁高、中、低剂量组cGMP含量降低,cAMP/cGMP上升,TGF-β1 mRNA表达水平降低(P<0.01,P<0.05)。结论:平喘宁可明显减轻哮喘大鼠气道炎症反应,逆转气道重构。     

氯胺酮对脓毒症大鼠血清一氧化氮及心肌组织第二信使的影响

目的研究氯胺酮（KET）对腹腔感染脓毒症大鼠血清一氧化氮（NO）和心肌环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）的影响．方法将230只SD大鼠随机分为3组．（1）模型组（CLP，rt=30）；（2）假手术组（SHAM，rt=100）；（3）氯胺酮组（KET＋CLP，rt=100）．测定各组动物血清NO和心肌组织cAMP、cGMP．结果（1）氯胺酮组与模型组血清NO显著升高（P〈0．01），氯胺酮组升高程度显著低于模型组（P〈0．01）．（2）与假手术组比较，氯胺酮组和模型组心肌cAMP显著降低（P〈0．01），心肌cGMP明显升高（P〈0．01）；氯胺酮组心肌cAMP较同期模型组明显升高（P〈0．01），cGMP则显著低于模型组（P〈0．01）．结论一定剂量的KET（50mg／kg）可通过抑制血清NO和心肌cGMP，增加心肌cAMP，从而降低腹腔感染脓毒症大鼠死亡率．     

内皮素对肺动脉平滑肌细胞第二信使系统的影响

在培养的猪肺动脉平滑肌细胞上观察内皮素-1 对第二信使系统的影响。实验发现内皮素-1促进肺动脉平滑肌细胞内钙释放,继之以外钙内流;使三磷酸肌醇骤增后下降;对细胞内环腺苷酸和环鸟苷酸量无明显影响。     

肺、脑动脉内皮和平滑肌细胞急性缺氧时某些第二信使的变化

目的研究急性缺氧时细胞内第二信使系统的变化。方法培养猪肺、脑动脉内皮细胞与平滑肌细胞,测定在急性缺氧时胞浆游离钙、磷酸肌醇和环核苷酸的变化。结果肺动脉内皮细胞缺氧时有Ｃａ内流增加、ＩＰ３和ｃＡＭＰ无明显变化,ｃＧＭＰ于缺氧４ｍｉｎ升至高峰,随即回降;而脑动脉内皮细胞缺氧时不仅有Ｃａ内流,且有内钙释放、ＩＰ３和ｃＡＭＰ增多,ｃＧＭＰ浓度在缺氧８ｍｉｎ时仍继续上升。肺与脑动脉平滑肌细胞间缺氧时第二信使的变化,仅有ｃＧＭＰ不同。结论内皮细胞的异质性可能与两血管反应性差异有关。