实验室检测埃博拉病毒对诊疗的临床意义

【】目的 分析中国人民解放军援利埃博拉诊疗中心(China Ebola Treatment Unit, China ETU),实验室检测结果对埃博拉阳性患者诊疗的临床意义。方法 在2014年11月14日至2015年3月15日期间,中心共收治住院患者101例,送检172份标本,通过实验室RT-PCR检测病毒RNA及CT值。结果 共有10例埃博拉阳性患者,死亡4例,治愈6例,4例死亡病例中,PCR CT值均较低,表明其体内病毒载量较高,在6例治愈病例中,随着病情的好转,其埃博拉病毒核酸PCR CT值逐渐升高,表明病毒载量逐渐降低。结论 实验室检测结果及PCR CT值为临床诊断、治疗提供了指导意义。     

导管分离表皮葡萄球菌生物被膜形成能力相关研究

目的：探讨导管分离表皮葡萄球菌的生物被膜形成能力和耐受应激环境能力。方法采用结晶紫半定量法和细菌计数法检测表皮葡萄球菌的生物被膜形成能力和应激环境耐受能力。结果表皮葡萄球菌1457菌株和5株导管分离菌株均具有生物被膜形成能力,菌株之间生物被膜形成能力差异无统计学意义（ P＞0．05）;导管分离菌株与1457菌株的游离细菌和被膜细菌的生长能力、对高分子材料的黏附能力、对过氧化氢的氧化应激耐受能力和对乙醇耐受能力差异无统计学意义（P＞0．05）。结论表皮葡萄球菌导管分离菌株与产生生物被膜的表皮葡萄球菌1457菌株具有相近的生物被膜形成能力和耐受应激环境能力。     

结核杆菌的细菌学、分子生物学和免疫学检测方法评价

目的比较涂片法、荧光定量PCR方法和结核抗体检测法对结核病的诊断价值。方法选取2006年7月~2010年8月期间临床确诊或怀疑结核的检样326例,进行涂片抗酸染色、荧光定量PCR检测和采集血样进行结核抗体检查。结果 326例检样中,检出TB-DNA阳性107例,阳性率32.82%。其中脓液、支气管灌洗液和痰液最高,分别为48.84%（86例）、31.71%（82例）、30.39%（102例）。抗酸染色标本痰液阳性率为9.80%,脓液25.58%,支气管灌洗液15.85%。结核抗体阳性率52.45%。抗酸染色法与荧光PCR法的符合率81.60%,而结核抗体检测法与抗酸染色法的符合率61.97%,与荧光PCR检测法的符合率为80.37%。结论三种方法中,以结核抗体法阳性率最高,荧光PCR法次之,抗酸染色法阳性率最低。三种方法联合运用,可弥补单独采用1种方法阳性率低的缺点,几种方法之间可相互佐证,从而使准确性得以提高。     

2011～2013年屎肠球菌和粪肠球菌的检出特点和药物敏感性分析

目的了解医院2011~2013年临床分离的426株屎肠球菌和221株粪肠球菌的耐药性。方法采用生物梅里埃公司的VITEK2COMPACT全自动微生物分析仪对菌株进行鉴定和抗菌药物敏感性测定。结果屎肠球菌与粪肠球菌检出数量的比值为1.93,该比值近3年呈现逐渐上升的趋势。屎肠球菌和粪肠球菌对万古霉素、利奈唑烷和替加环素的敏感率均为100.00%,屎肠球菌除对喹奴普汀/达福普汀和四环素的敏感率显著高于粪肠球菌外(P<0.05),对呋喃妥因、氨苄西林、青霉素G、莫西沙星、环丙沙星、左氧氟沙星的敏感率均显著低于粪肠球菌(P<0.05)。结论肠球菌的检出呈现向屎肠球菌偏移的现象,且该现象呈现扩大的趋势。屎肠球菌和粪肠球菌对抗菌药物的敏感性存在较大差异,临床应根据两种细菌各自的特征结合种间耐药性差异制订治疗方案,目前万古霉素、利奈唑烷、替加环素为治疗屎肠球菌和粪肠球菌感染的最有效的抗菌药物。     

1414株铜绿假单胞菌临床分布与耐药性分析

目的：了解铜绿假单胞菌（PAE）感染的临床分布及耐药情况。方法采用VITEK2-compact检测系统对分离菌株进行鉴定和药敏试验检测,回顾性分析 PAE菌株临床分布特点及耐药性。结果共检出1414株PA E ,以痰液检出最多[1126株（79．63％）],其次为伤口分泌物[88株（6．22％）]。PA E对头孢他啶、头孢吡肟、庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素、哌拉西林／他唑巴坦、亚胺培南的耐药率分别为31．61％、22．98％、33．73％、14．07％、31．40％、31．61％、34．23％,对氨苄西林、呋喃妥因、头孢替坦、头孢唑啉、氨苄西林／舒巴坦、复方磺胺甲噁唑均高度耐药,耐药率大于95．00％。2012年妥布霉素、哌拉西林／他唑巴坦耐药率较2011年明显下降（ P＜0．05）。结论氨基糖苷类、头孢他啶、头孢吡肟、哌拉西林／他唑巴坦、亚胺培南可作为治疗PA E感染的经验用药。     

雌二醇对大鼠骨髓基质细胞过氧化物酶增殖活化受体γ2基因表达的影响

背景:雌二醇能否改变骨髓基质细胞分化过程中过氧化物酶增殖活化受体γ2-mRNA的表达进而影响其向成骨细胞分化有待研究。目的:观察骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中,17β-雌二醇对其过氧化物酶增殖活化受体γ2mRNA及蛋白表达的影响。设计:对比观察实验。单位:成都军区总医院中心实验室,德阳市人民医院检验科,成都百奥生物技术有限公司。材料:选用1只雌性SD大鼠,3月龄,清洁级,体质量(200±20)g,由成都中医药大学实验动物研究中心提供(动物许可证号码11)。DMEM培养液购自Hyclone,1,25一双羟维生素D3、地塞米松和雌二醇购自Sigma公司,引物用Jellyfish软件设计,由大连宝生物技术有限公司合成。RT-PCR试剂盒和RNA提取试剂盒均由大连宝生物提供。兔抗山羊多抗(北京中山生物技术有限公司),山羊抗鼠PPARγ2抗体和Western Blotting增强化学发光试剂均购自Santa Cruz公司。方法:实验于2001-04/2002-07在成都军区总医院中心实验室和成都百奥生物技术有限公司完成。①无菌条件下分离大鼠骨髓基质细胞,1,25一双羟维生素D3和地塞米松诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化,观察细胞生长情况。②用0,0.1,10和1000nmol/L不同浓度雌二醇对细胞分化过程进行干预3d。培养细胞用Tris-Triton X-100缓冲液加超声粉碎裂解细胞,在Beckman CX-7生化分析仪上测定碱性磷酸酶的活性,观察不同浓度雌二醇条件下细胞产生碱性磷酸酶的情况。③100g/L中性甲醛固定培养于24孔板的骨髓基质细胞,Weigert苏木素染液染色10min,自来水冲洗,5g/L盐酸乙醇分化,Van Gieson染色,体积分数为0.95乙醇分化脱水,二甲苯透明,显微镜下观察并照相,观察细胞胶原合成情况。④应用半定量RT-PCR及Northern blot、Western blot技术,观察不同浓度雌二醇对骨髓基质细胞分化过程中PPAR-γ2mRNA及蛋白表达的影响。主要观察指标:①骨髓基质细胞生长情况、细胞胶原合成情况。②不同浓度雌二醇条件下细胞产生碱性磷酸酶的情况。③不同浓度雌二醇对骨髓基质细胞分化过程中PPAR-γ2mRNA及蛋白表达的影响。结果:①骨髓基质细胞接种后4h开始贴壁,24～72h可见贴壁细胞明显增大且分裂增殖,细胞呈三角形,多角形或梭形。3d后首次换液,贴壁细胞体积增大,呈集落生长,10d左右融合成遍。多次传代的骨髓基质细胞呈有序的成纤维细胞样分布。②随着雌二醇浓度的增加,胞浆染色越淡,由鲜红、淡红到黄色。胞浆呈红色说明有胶原合成,红色越深,表明胶原越多。③不同浓度雌二醇条件下细胞均能产生碱性磷酸酶,其活性随雌二醇浓度增加而降低,雌二醇浓度从0nmol/L增加到1000nmol/L时,碱性磷酸酶从(710.1±41.7)nkat/g降至(60.0±11.7)nkat/g(t=29.0,P<0.01)。④雌二醇浓度为0.1,10和1000nmol/L时,PPAR-γ2mRNA的表达量均明显高于雌二醇0mol/L组(t=6.1,7.2,11.5,P<0.01),Northern blot结果显示雌二醇浓度为0.1,10和1000nmol/L时PPAR-γ2mRNA表达量分别为(4.0±0.4)%,(1.7±0.2)%,(2.8±0.2)%,明显高于雌二醇0mol/L组[(1.5±0.1)%,t=5.4,105.0,14.2,P<0.01]。⑤Western Blot检测结果显示雌二醇能明显增加骨髓基质细胞PPAR-γ2蛋白的表达。雌二醇浓度为0.1,10和1000nmol/L时,PPAR-γ2蛋白的表达量分别为(2.2±0.2)%,(2.6±0.2)%,(4.1±0.2)%,明显高于雌二醇0mol/L组[(1.2±0.10)%,t=6.6,8.5,13.2,P<0.01]。结论:雌二醇能明显抑制体外培养的骨髓基质细胞碱性磷酸酶的表达,同时促进骨髓基质细胞内过氧化物酶增殖活化受体γ2mRNA和蛋白的表达。     

肠杆菌科细菌SDD菌株特征及替加环素药敏结果分析

目的 分析医院肠杆菌科细菌剂量依赖性敏感(SDD)菌株的药物敏感性情况和检出分布特征,并检测产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对替加环素的敏感性,以指导临床对SDD菌株的抗菌药物及对ESBLs产酶株替加环素的选择.方法 采用VITEK 2 COMPACT全自动微生物分析仪进行细菌鉴定及仪器法抗菌药物敏感性试验.对50株ES-BLs阳性大肠埃希菌和50株肺炎克雷伯茼分别采用微量肉汤稀释法、MTS测试条法、Vitek2仪器检测法、纸片扩散法检测替加环素的敏感性.结果 采用M100-S24标准头孢吡肟判断为敏感的肠杆菌科细菌有3.58％～12.50％的菌株为SDD菌株;ESBLs阳性大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的SDD菌株检出率分别为13.31％和8.60％,显著高于ESBLs阴性菌株(P＜0.05);所有肠杆菌科细菌SDD菌株最低抑菌浓度(MIC)4 mg/L菌株检出率显著高于SDD菌株MIC 8 mg/L茼株检出率(P＜0.05);ESBLs阳性大肠埃希菌和肺炎克雷伯采用微量肉汤稀释法和MTS测试条法的敏感率均为100％.结论 当肠杆菌科细菌头孢吡肟MIC为4 mg/L或8 mg/L时,实验室应在检验报告提示SDD菌株的检出.替加环素对ESBLs阳性大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的敏感率为100％.     

烟曲霉的微管蛋白基因鉴定及唑类抗真菌药物的耐药性研究

目的建立烟曲霉临床分离菌株的微管蛋白基因鉴定方法,并分析烟曲霉对唑类抗真菌药物的耐药性。方法对表型鉴定为烟曲霉的菌株,采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)方法提取烟曲霉菌株DNA,并采用对微管蛋白基因进行PCR扩增和测序的方法对烟曲霉菌株进行分子生物学鉴定,采用琼脂稀释法检测烟曲霉菌株对伊曲康唑和伏立康唑的耐药性。结果 91株临床分离株表型鉴定为烟曲霉,这些菌株在35℃和48℃生长。其中88株(96.70%)经微管蛋白基因鉴定为烟曲霉。87株烟曲霉菌株对4μg/mL伊曲康唑和1μg/mL伏立康唑敏感,检出1株对4μg/mL伊曲康唑和1μg/mL伏立康唑耐药菌株。结论微管蛋白基因鉴定方法可以对烟曲霉进行准确鉴定。     

临床分离鲍曼不动杆菌生物被膜形成能力研究

目的 研究鲍曼不动杆菌(AB)临床分离菌株生物被膜形成能力,为医院感染AB生物被膜检测平台的建立奠定基础,为AB医院感染的预防和控制提供依据.方法 采用半定量结晶紫染色法,检测临床标本分离的AB生物被膜形成能力.结果 (1)100株AB中,81株具有生物被膜形成能力,其中形成能力弱阳性14株(17.28％),阳性21株(25.93％),强阳性46株(56.79％);另19株生物被膜形成检测试验阴性.(2)不同标本来源的AB均具有生物被膜形成能力.(3)AB生物被膜形成能力与体外抗菌药物耐药性呈负相关.结论 AB生物被膜形成能力较强.半定量结晶紫染色法简便易操作,无需特殊设备,可以作为监测医院感染AB生物被膜形成能力的常规方法.