海、水产品中污染霍乱弧菌的鉴定和分子特征分析

目的 了解调查年份不同种类海、水产品中分离的霍乱弧菌的血清学分型、噬菌体-生物分型及毒力因子携带情况,分析海水产品污染状况与疫情的关系,为疫情预测和制定防治对策提供参考。方法 应用血清学分型及噬菌体-生物分型方法分析所分离菌株的生物表型,应用PCR方法检测毒力基因的携带情况。结果 检测的64株菌株中0139型菌株占48．44％（31／64）,01群小川型占31．25％（20／64）,01群稻叶型占20．31％（13／64）;01群噬菌体-生物分型显示均为非流行株;对61株菌毒力基因检测结果显示：0139霍乱弧菌毒力基因的检出率（83．33％）远高于01群小川型霍乱弧菌（15．38％）和01群稻叶型霍乱弧菌（11．11％）。结论 0139型霍乱弧菌主要存在于甲鱼、甲鱼养殖水及甲壳类海水产品中,而且多为产毒株,这些海、水产品是预防和控制霍乱疫情的重要环节。     

浙江省海、水产品霍乱弧菌污染状况调查及分子生物学研究

目的：了解浙江省海、水产品霍乱弧菌污染情况及海、水产品中霍乱弧菌的毒力特征，并对其进行耐药性和同源性分析，研究其分子特征及流行病学意义。方法：2005年7～9月采集浙江省温州、宁波、舟山的海、水产品及杭州某批发市场的甲鱼，对检出的霍乱弧菌菌株进行耐药性分析，采用聚合酶链反应（PCR）方法进行霍乱弧菌肠毒素基因（Ctx）、小带联结毒素基因（Zot）、辅助霍乱肠毒素（Ace）的检测，并参照美国CDC PulseNet的统一方法进行脉冲场凝胶电泳（PF—GE）分型并作同源性分析。结果：从采集的990份海、水产品标本中检出14株霍乱弧菌，其中分离自青蛙1株、甲鱼9株、贝类1株、甲壳类1株、鱼类1株、其它1株。经耐药性分析，菌株对诺氟沙星、头孢噻肟100％敏感；对复方新诺明、萘啶酸耐药率最高，达64．3％，其次为庆大霉素、利福平，耐药率为35．7％。毒力基因检测表明，14株霍乱弧菌中3种毒力基因均阳性的有5株，占35．7％；携带Ctx的有7株，占50．0％；只携带Zot的有4株，占28．6％；另有3株毒力基因均阴性，占21．4％。脉冲场凝胶电泳分型显示，2株稻叶1f同源；2株小川1k同源；1株小川19k降解；9株0139群霍乱弧菌除1株死亡未作分析外，其余8株分为3个型。结论：此次海、水产品检测的霍乱弧菌血清型较多，但以0139群霍乱弧菌为主，其脉冲场凝胶电泳分型较多，这与浙江省近几年霍乱时有散发和多菌型并存的特点一致。耐药率及毒力基因携带情况与广州省有较大的差别。     

同餐者霍乱弧菌检测结果

目的：对霍乱弧菌病例的33名同餐者进行0139群霍乱弧菌检测。方法：按卫生部疾病控制司，霍乱防治手册（第5版）进行病原菌增菌、分离培养及鉴定等。结果：检测出4株0139群霍乱弧菌。结论：本次实验检出的4株0139群霍乱弧菌与相邻县疾病预防控制中心检出的菌株为同一型别。带菌率为12％。     

水产品中霍乱弧菌污染状况的调查

目的：了解鞍山市水产品中霍乱弧菌的污染状况，为霍乱疫情预测提供实验依据。方法：依据GBl5984—1995《霍乱诊断标准及处理原则》和外环境标本分离霍乱弧菌程序操作。结果：共采集样品300份，其中涂抹类样品100份，水产品200份，自二份牛蛙涂抹样品中检出二株霍乱弧菌，经鉴定该二株菌为01群Eltor霍乱弧菌稻叶27L型。结论：本次检出的霍乱弧菌均为01群，由于01群霍乱弧菌的散发性及非爆发性，一直以来未受到人们的重视，近年来有报道称01群霍乱弧菌与非01群霍乱弧菌、0139霍乱弧菌的某些毒性基因有可能发生重组，成为另一种新的更强毒力的霍乱弧菌，因此其重要性被重新认识。     

四川省2005年霍乱分子流行病学特征

目的：分析四川省2005年霍乱弧菌分子特征,以及霍乱暴发疫情分离的菌株与菌株之间,疫情分离的菌株与海、水产品监测分离的霍乱弧菌之间的遗传相关性,查找霍乱传染来源,为预测疫情和制定防治措施提供依据.方法：利用聚合酶链反应（PCR）检测O139群霍乱弧菌特异性编码脂多糖基因（LPS）和霍乱毒力基因（ctxAB）;脉冲场凝胶电泳对菌株进行分子分型,所得结果以BioNumerics V4.0软件UPGMA方法进行聚类分析.结果：所试16株霍乱弧菌14株LPS阳性,为O139群霍乱弧菌;另2株为O1群稻叶型霍乱弧菌.2株稻叶型霍乱弧菌和1株O139群霍乱弧菌ctxAB阴性,其余13株菌均具有ctxAB,为产毒株.对16株菌以NotⅠ酶切后PFGE可分为5个型别.O139群霍乱弧菌优势流行株与从甲鱼分离的O139群霍乱弧菌PFGE型别一致,且同为产毒株.结论：甲鱼等海、水产品被O139群霍乱弧菌污染情况严重,甲鱼中分离的O139群霍乱弧菌与霍乱疫情分离菌株之间高度同源,被污染的甲鱼可能是本年度食源性霍乱暴发的主要传染来源之一,海、水产品的监测是近期霍乱防控的重点.     

珠江河口水体霍乱弧菌污染状况调查研究

目的:了解珠江河口水体01/0139群霍乱弧菌的污染情况,提出改善水体霍乱弧菌监测的建议,为采取针对性措施预防控制霍乱的发生和流行提供依据.方法:根据历年霍乱监测资料和疫点分布状况,在珠江水系广州段选择设立24个采样点,每月采集水体标本进行01/0139群霍乱弧菌分离培养,对分离得到的阳性菌株进行血清分型、噬菌体一生物分型、PCR检测毒力基因、K-B法药敏试验.结果:2006年3月～2007年2月共采取862份水体样本,其中有67份检出01或0139群霍乱弧菌,检出率为7.77%,血清型以01群为主,尤以稻叶型占优;01群菌株均为非流行株,2株0139群菌株检出ctx毒力基因;菌株耐药分析发现不同血清型菌株耐药谱有所差异.结论:01/0139群霍乱弧菌在珠江河口水体环境中广泛存在,常年均可从水体中分离获得.必须加强环境水体及海水产品霍乱弧菌监测,及时了解其污染状况,以便采取针对性措施预防控制霍乱的发生和流行.     

2005年上海市霍乱弧菌菌株表型及ctxA毒力基因分析

目的：分析本市2005年不同来源01群和0139群霍乱弧菌菌株表型和ctxA毒力基因特征。方法：以PCR方法，对所有菌株进行ctxA毒力基因检测。采用WHO推荐的改良K—B纸片法，对所有菌株均进行了12种抗菌药物的药敏试验。结果：从病人和外环境中分离出的0139群霍乱弧菌均为产毒株；从病人中分离出的01群霍乱弧菌流行株均产毒，外环境中分离出的非流行株少数也产毒。0139群霍乱弧菌菌株耐药谱较01群霍乱弧菌菌株广；两者对氨苄青霉素、强力霉素、庆大霉素、复方新诺明、利福平耐药率有显著差异。结论：本市2005年霍乱的流行株都是产毒株，但产毒株不一定是流行株。药敏结果显示，对01群和0139群霍乱弧菌应采取不同抗菌治疗，0139群霍乱弧菌多重耐药应引起重视。     

霍乱弧菌毒力基因检测与16S rRNA基因分型研究

目的：了解浙江省霍乱弧菌毒力基因携带情况和16SrRNA基因型状况，为霍乱防治提供科学依据。方法：利用16SrRNA基因探针分析了浙江省不同时期分离的88株霍乱弧菌经BglI消化的16SrRNA基因限制性酶谱，以多重PCR法对140株霍乱弧菌进行6种毒力相关基因（ctxA、rtxA、Ace、TcpA、Cri、Zot）检测分析。结果：发现各菌株的杂交片断范围为2～12Kb，每个菌株有6～9条杂交带不等。88株霍乱菌株可分为9个16SrRNA基因型（ribotype，RT），其中埃尔托型霍乱弧菌（el tor vibrio cholerae，EVC）可分为6个RT，0139群霍乱弧菌（vibrio cholerae 0139，VC 0139）分为3个RT；所有VC0139菌株均携带3种以上毒力基因，86．3％的菌株携带全部6种毒力基因，所有EVC流行株均携带2种以上毒力基因，79．1％的菌株携带全部6种毒力基因。结论：认为霍乱流行菌株基因型的变迁可能是引起新一次流行的原因。结合毒素基因检测结果，我们认为VC0139与EVC在遗传特征上有相近的特点，但又有所区别。     

郴州市海、水产品霍乱弧菌污染状况监测

目的 分析郴州市海、水产品霍乱弧菌污染状况及菌型特征。方法 采集市场销售的海、水产品，对其整体或部分及相应的体表、肛门或鳃部涂片进行增菌、分离、鉴定。用家兔小肠段结扎实验检测O139群肠毒素。结果 郴州市海、水产品霍乱弧菌带菌率为0．64％（2／311），两株霍乱弧菌均来自甲鱼（2／77），经鉴定分别为O1群和O139群，后者能产霍乱肠毒素（CT），还检出其他致病性弧菌9株。结论 郴州市水产品存在O139群霍乱弧菌污染，给我们提出了一个新的卫生学问题，建议在今后的监测中采用整体或部分采集法。     

武汉市硚口区2004-2013年水产品霍乱弧菌污染报告

目的分析武汉市硚口区水产品中霍乱弧菌的污染状况,为霍乱防治工作提供实验室依据。方法依据第6版《霍乱防治手册》和霍乱诊断标准WS289-2008中的有关要求进行霍乱弧菌的分离培养、生化鉴定、血清学检测、分子生物学检测。结果 2004-2013年共检测出15株霍乱弧菌,其中稻叶型霍乱弧菌毒力株5株、稻叶型霍乱弧菌无毒力株8株、检测出2株与O1、O139群血清有交叉凝集现象的O71群霍乱弧菌。结论近年来检测出的稻叶型霍乱弧菌虽然大部分无毒力基因,但仍应加强对水产品的主动监测,以明确霍乱防控工作重点,制定防控策略。基层实验室在遇到霍乱弧菌血清凝集实验阳性的可疑菌时,应及时送上级疾控部门做进一步的生化和分子生物学检测,以得到准确的结果。此外,水产品霍乱弧菌检出率与采样质量密切相关,标本采集人员应接受专门的采样培训。     

浙江沿海地区海及水产品霍乱弧菌污染状况调查分析

目的了解浙江省沿海地区的海及水产品霍乱弧菌污染状况和菌型特征,为制定海及水产品卫生管理措施和霍乱防治对策提供科学依据。方法选择3个沿海县市,分别在农贸市场、养殖场（或捕捞点）、餐馆等场所采集990份海及水产品标本,标本经碱性蛋白胨水增菌,4号培养基选择性培养,生化鉴定和血清、噬菌体分型,毒力基因检测。结果海及水产品带菌率为1．41％,其中甲鱼带菌率最高为8．9％。有稻叶型、小川型、O139群等3个血清型,各型菌株数分别为2株、2株、10株。12株菌株中9株有毒力基因,其中5株有3个毒力基因,1株只有CTX、ACE毒力基因,3株只有ZOT毒力基因。结论浙江省沿海地区海及水产品受到霍乱弧菌污染,霍乱弧菌3种菌型全有,大多具有毒力基因,能引起霍乱暴发的危险。     

从肠道门诊送检标本中检出7株霍乱弧菌

目的：对海盐县内各医院、卫生院肠道门诊腹泻病人标本进行霍乱弧菌检测，为当前霍乱防治工作提供可靠的实验室依据。方法：按照卫生部疾病控制司编写的第5版《霍乱防治手册》（1999年）进行细菌的增菌和分离鉴定，药敏试验用K—B法，用标准的参比菌株大肠埃希菌（ATCC25922）进行质量控制，对2005年5月-12月全县各医院、卫生院肠道门诊送检标本3048份进行检测。结果：从3048份标本中检出7株霍乱弧菌，检出率为0．23％，其中4株为01群霍乱弧菌稻叶型，1株为01群霍乱弧菌小川型，2株为0139群霍乱弧菌。结论：海盐县引起人类腹泻的霍乱弧菌呈现多样性，须高度重视霍乱流行病学监测，常年开设肠道门诊，将疫情控制在萌芽状态。     

活自水鱼体表检出O139群霍乱弧菌

目的了解奉贤区海水产品中霍乱弧菌的污染状况，为霍乱防治工作提供实验依据。方法依据《霍乱防治手册》第5版进行霍乱弧菌分离培养、生化及血清学鉴定，同时用PCR方法进行检测。结果从活白水鱼体表检出1株O139剪群霍乱弧菌。结论本次检出的1株O139势群霍乱弧菌为流行株，具有引起流行和大流行的潜力，因此要加强对海水产品的主动监测，预防霍乱的散发和暴发流行。     

温州市龙湾区海水产品霍乱弧菌污染调查

为了解我市部分地区海、水产品霍乱弧菌污染的状况和菌型特征，2005年我们按中国CDC统一规定的检测方法及卫生部《霍乱防治手册》的标准，在霍乱多发季节对本辖区内不同区域，不同种类的海、水产品进行了霍乱弧菌监测。结果 从一批海、水产品中分离鉴定出6株霍乱弧菌，并对这些霍乱弧菌的形态及生化特性进行了观察，现报告如下。     

应用PCR技术检测霍乱肠毒素

聚合酶链反应(PCR)是一种快速检测霍乱弧菌肠毒素(CT)的方法。用PCR法检测从水和水产品分离的8株O1群霍乱弧菌CT，结果均为阴性。CT的检测对了解水和水产品中分离株是否对公共卫生构成威胁有重要意义。O1群霍乱弧菌的霍乱肠毒素A亚单位(ctxA)基因引物也能扩增0139。     

脉冲场凝胶电泳用于霍乱弧菌分子流行病学研究

目的：从分子生物学基础上了解同一次流行、不同来源的霍乱弧菌之间的遗传相关性，为有效控制传染源提供依据。方法：采用PCR技术对2005年分离的70株霍乱弧菌检测CT基因后，进行PFGE分型研究。结果：分离自患者01、0139群霍乱弧菌均有CT基因，而分离自外环境1株01群稻叶菌株及1株0139菌株CT基因为阴性。所试菌株PFGE分型共呈3大亚类8种带型。结论：霍乱流行期间分离于患者的霍乱弧菌PFGE图谱基本一致，与外环境分离的非流行株在分化关系上较远。     

5株O139群霍乱弧菌生物学性状研究

目的研究从病人和水产品中分离到的5株O139群霍乱弧菌的生物学性状。方法参照《霍乱防治手册》对5株菌的生长特征、生化特征、血清学反应及药物敏感性进行鉴定；应用多重PCR方法对所试菌株进行毒力相关基因检测，用Vero细胞测定方法检测ctxA阳性菌株霍乱肠毒素的表达。结果5株O139群霍乱弧菌生物学性状和血清学反应与阳性对照菌体O139群霍乱弧菌MO45基本相同；2株来自重型病人和1株来自水产品的菌株ctxA、zot、ace、tcpA、tcpI、hlyA、rtxA、rtxC、ompU、tarR 11种毒力相关基因全部阳性。经Vero细胞测定，其霍乱肠毒素效价达到1：160；在2株来自轻型病人的菌株中仅hlyA、rtxA、rtxC、toxR 4种毒力相关基因为阳性。结论O139群霍乱弧菌致病(泻)的决定基因簇并非仅为ctxA、zot、ace、cep等毒力相关基因。     

从海、水产品中检出3株霍乱弧菌的报告

目的:了解奉贤区海水产品中霍乱弧菌的污染状况,为霍乱防治工作提供实验依据。方法:依据《霍乱防治手册》第五版进行霍乱弧菌分离培养,生化及血清学鉴定,同时用PCR方法进行检测。结果:从20件样品中检出霍乱弧菌3株,其中1株为O1群霍乱弧菌稻叶27L型,另外2株分别为O1群霍乱弧菌小川9L型和15d型。结论:本次检出的3株霍乱弧菌均为非流行株,但仍需加强对海水产品的主动监测,预防霍乱流行株的出现而导致霍乱的散发和暴发流行。     

广州市水产品监测中霍乱弧菌分离株的分子特征研究

目的　了解广州市水产品监测中霍乱弧菌分离株的毒力特征,对其菌株进行同源性分析,研究其分子特征及流行病学意义。方法　2 0 0 4年6月采集广州市3家较大的水产品交易市场的海、水产品以及广州以往水型霍乱流行沿海地区的河水和珠江入海口海水,采用聚合酶链反应(PCR)方法对样本检出的霍乱弧菌分离株进行霍乱肠毒素基因(ctx)、小带联结毒素基因(zot)、辅助霍乱肠毒素基因(ace)和毒力协同菌毛蛋白亚单位基因(tcpA)这4种毒力基因的检测,用随机扩增多态性分析(RAPD)结合SPSS软件对以上菌株进行多态性分析,对霍乱弧菌毒力进行快速测定并进行分子分型。结果　共采集海、水产品样本16 0份、水体样本90份,从样本中检出34株霍乱弧菌,其中分离自青蛙12株、虎纹蛙6株、牛蛙5株、养殖水5株、罗氏虾3株,其他3株,根据流行病学调查证实均为海南输入株。毒力基因检测表明,34株霍乱弧菌均未检出ctx和tcpA基因;14株菌(41% )可同时检出ace和zot基因,另有2株菌(6 % )只检出ace基因。所有34株霍乱弧菌的RAPD结果经聚类分析可分为2个聚类群,其中31株属于同一来源,只有3株菌与其他菌株的同源性有差异,但亲缘关系较近。结论　该次水产品监测的霍乱菌株均为非流行株,但仍需加强监测,预防霍乱流行株的出现而导致的霍乱散发和暴发流     

活白水鱼体表检出O139群霍乱弧菌

目的 了解奉贤区海水产品中霍乱弧菌的污染状况,为霍乱防治工作提供实验依据.方法 依据<霍乱防治手册第5版进行霍乱弧菌分离培养、生化及血清学鉴定,同时用PCR方法进行检测.结果 从活白水鱼体表检出1株O139剪群霍乱弧菌.结论 本次检出的1株O139剪群霍乱弧菌为流行株,具有引起流行和大流行的潜力,因此要加强对海水产品的主动监测,预防霍乱的散发和暴发流行.