白细胞过滤器去除血液中肿瘤细胞的研究

目的 探讨白细胞过滤器清除血液回收机漂洗后血液中残存肿瘤细胞的效果.方法 体外培养肠肿瘤细胞LOVO和胃肿瘤细胞SGC,并采集非肿瘤患者术野血液,制成浓缩红细胞.将肿瘤细胞计数后混入浓缩的红细胞中,用白细胞过滤器过滤,观察过滤对血样中肿瘤细胞的影响并与未经过滤处理的对照组进行比较.结果 过滤后的血样中未发现肿瘤细胞,而对照组血样中可见到肿瘤细胞.培养14d后观察,经白细胞过滤器过滤后的血样未见肿瘤细胞生长,而对照组血样中有大量肿瘤细胞生长.结论 应用自体血液回收机配合白细胞过滤器,可有效去除血液中的肿瘤细胞.     

自体血液回输在高原创伤失血性休克急诊手术中的应用

目的：自体血液回收技术在高原创伤失血性休克手术急救中的应用效果及价值。方法：采用自体-2000型血液回收机对50例不同类型的高原创伤失血性休克手术患者体腔内或手术创面的血液通过过滤、离心、清洗、净化处理,形成浓缩的红细胞,在手术中回输给患者。记录术中回收的原血量和血液回收机处理后的浓缩红细胞量,观察自体血回输前后的白细胞计数（WBC）、红细胞计数（RBC）、血红蛋白量（HB）、红细胞压积（HCT）、血小板计数（PLT）的变化情况,并观察有无输血反应。结果：本组50例,术中回收原血共43 970m L,经血液回收机处理后的浓缩红细胞是29 920m L。无1例出现输血反应和感染。结论：自体血液回收技术能有效减少术中血液丢失,血液回输后效果良好,无输血反应,术后并发症少。能缓解血源不足,避免输异体血带来的危害,值得临床推广。     

自体血液回收技术在手术中的应用

目的 了解自体血液回收技术在手术中的临床应用价值.方法 采用自体-3000P型血液回收机对60例患者体腔内或手术创面的血液通过过滤、离心、清洗、净化处理,形成浓缩红细胞,在手术中或手术后回输给患者.记录术中回收的原血量和经血液回收机处理后的浓缩红细胞量.观察自体血回输前后患者的血红蛋白量(HB)、红细胞计数(RBC)、血小板计数(PLT)、红细胞压积(HCT)、血浆凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、部分凝血活酶时间(AFIT)、血浆纤维蛋白原(nB)、国际标准化比值(INR)的变化情况,并观察有无输血反应等.结果 60例患者共回收原血145 637mL,平均每例(2327.49±1339.10)mL,共回输浓缩红细胞63 675mL,平均每例同收(1184.9±616.5)mL.异体妊娠、脾破裂患者采用自体血回输后,血小板显著减少(P<0.05).HB、HCT、RBC均有所回升,凝血功能无明显变化.其余手术患者输自体血后,HB、HCT、RBC、PLT较术前有明显降低(P<0.05);PT、TT、APTT均较术前有所延长,但所有结果均在可接受的正常范围.所有患者无输血反应.结论 自体血液回收技术能有效减少术中血液丢失,血液回输后效果良好,无输血反应,术后并发症少.它能缓解血源不足,避免输异体血带来的危害,值得临床推广和应用.     

自体血液回收技术在宫外孕手术的应用

由于血源困难和预防输血可能导致肝炎、艾滋病等传染病的传播 ,自身输血技术已广为应用。我科将国产２０００型自体血液回收机 (简称血液回收机 )应用于临床。现将宫外孕手术病人的应用结果总结如下。１资料与方法１．１一般资料应用血液回收机前的４９例宫外孕患者 (年龄２４～４４岁 )为对照组 (输用库血 ) ;应用血液回收机后的４８例宫外孕患者 (年龄２０～４３岁 )为观察组 (输用回收的浓缩红细胞 )。ＡＳＡＩ～Ⅲ级。分别统计出血量、围术期输库血量、术前与术后红细胞(ＲＢＣ)、血红蛋白 (Ｈｂ)、红细胞压积 (Ｈｃｔ)、血小板(Ｐｔ) ,…     

血液回收机在肿瘤切除术中应用的临床观察

目的 评价在肿瘤切除术中使用血液回收机的节约用血效果及肿瘤细胞血行播散的风险性。方法 总结13例肿瘤切除术中使用血液回收机的节约用血效果及术后远期随访情况。结果 术中共回收浓缩红细胞42575ml,平均每例回收浓缩红细胞3275ml(400～15000m1),平均每例输库血1530ml(0～8000m1)。肿瘤切除术中使用血液回收机的病例数占同期使用血液回收机手术病例数的8．6％(13／152)。其中恶性肿瘤手术6例,包括肾癌根治、下腔静脉切开取癌栓4例、卵巢癌细胞减灭术、肾上腺皮质癌切除术各1例,分别占2．6%(4／152)、0．7％(1／152)和0．7％(1／152);良性肿瘤手术7例,包括脑膜瘤切除术5例,嗜铬细胞瘤切除术2例,分别占3．2%(5／152)和1．3％(2／152)。围术期病死率：7．7%(1／13)。术后肿瘤肝、肺转移率15．4％(2／13)。结论 肿瘤切除术中应用血液回收机可提高节约用血效果,但在恶性肿瘤切除术中应用血液回收机有可能导致肿瘤细胞经血液循环播散,不宜常规使用。     

术中使用血液回收机的节约用血效果及其对凝血功能的影响

目的观察术中使用血液回收机(cell saver,CS)的节约用血效果及其对患者血液学和凝血功能的影响.方法选择各类择期手术患者138例,使用CS行术野血液回收.分别测定术前、回收血液全部回输后及术后1 d血常规、生化及凝血功能指标.结果共回收浓缩红细胞悬液112 056ml,平均每例812 ml.自体输血量占输血总量的48%～89%,异体输血率为5%～100%.与术前相比,输入回收血液后和术后1 d血红蛋白浓度、血小板计数、总蛋白及血浆纤维蛋白原浓度显著降低(P＜0.05或P＜0.01),而凝血酶原时间显著延长(P＜0.05).结论术中使用CS可在一定程度上减少对库血的需求量,但大量输入回收的血液可影响凝血功能.     

自体血液回收技术在肝移植术中的应用研究

目的了解自体血液回收技术在肝移植术中的应用价值.方法随机选取术中采用自体血液回收技术的的肝移植患者20例,观察术中出血量和经血液回收机处理后的浓缩红细胞量,以及自体血回输前后患者的血红蛋白量(HB)、红细胞计数(RBC)、血小板计数(PLT)、红细胞压积(Hct)、凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT)、血浆纤维蛋白原(Fib)、血小板计数(Plt)、有无输血反应等.结果20例患者共回收血22952ml,平均每例1148ml.采用自体血回输后,HB、HCT、RBC均明显回升; PT、APTT、Fib、Plt等凝血指标均异常且无明显变化.所有患者无输血反应.结论自体血液回收技术能有效减少术中血液丢失,血液回输后效果良好,无输血不良反应.它能缓解血源不足,避免输异体血带来的危害,值得临床推广和应用.     

术中自体血回输在脊柱手术中的运用

目的 为了解决血源紧张以夏减少输血并发症，应用Medtwnicaul酵血液回收机共对48例脊柱痰忠手术患者进行术中自体血液回收并观察其效果。方法 选择择期预计出血量超过600ml，无自体血液回收禁忌证患者48例，术时接好血液回收机，在术中或手术结束时将浓缩红细胞回输给患者，与38例同期手术相对比。结果 ①自体血回收率达到65．3％，76．1％的患者术中不用再输库血；②98．4％的患者术后Hb及Hct测定趋于正常，术后7d基本恢复正常，与对照组比较差异有显著意义；③自体血回输对术后凝血功能影响不大。结论 应用自体血液回收机进行术中自体输血是安全而有效的。     

进口Elmd-500型血液回收机在肝移植手术中的应用

目的 :观察在肝移植手术中应用血液回收机的效果。方法 :应用血液回收机对 1 999年 1 2月～ 2 0 0 2年 2月的 3例肝移植患者进行自体血液回输 ,并对患者术后恢复进行观察。结果 :3例患者平均每例回收红细胞悬液 3 0 4 0ml。术后病人恢复顺利。结论 :在肝移植手术中应用血液回收机及时回收失血 ,维持有效循环 ,能减少异体输血合并症 ,提高肝移植成功率     

去除白细胞对库存血流变学特性的影响

目的 观察去除白细胞后为存血流变特性的变化。方法 选择60例健康献血员,随机分为A、B两组,A组为去白细胞组,B组为对照组。应用去白细胞输血滤过器去除白细胞,常规保存,取新鲜血（采集后1h）、1周、2周及3周4个时相点。进行白细胞、红细胞计数及全血高切粘度、中切粘度、血浆粘度、血球压积及红细胞聚集指数（AI）和刚性指数（IR）检测。结果 滤过后白细胞显著减少（P＜0．01）。在3周保存时间内,白细胞、红细胞计数、血球压积无显著变化,两组高切粘度在第3周显著升高,而低切粘度下降。血浆粘度、AI和IR随保存时间延长进行性下降。两组间比较在第3周AI存在显著差异（P＜0．05）。结论 滤过能有效降低血流中的白细胞。去除白细胞训存血可能有利于保护红细胞的聚集性,对血液粘度及红细胞变形性无显著影响。     

肾癌伴下腔静脉癌栓手术中应用回收式自体输血联合白细胞滤器2例

术中自体血回输（intraoperative cell salvage,IOCS）技术可以避免异体输血带来的输血反应、血源性感染以及免疫抑制反应,在骨科、心脏外科、血管外科等手术中的应用趋于成熟。由于担心肿瘤手术IOCS存在混入肿瘤细胞而导致复发和转移的风险,IOCS在肿瘤患者中的应用存在争议。近年来,一些研究表明［1-3］ ,IOCS联合白细胞滤器（leukocyte depletion filter,LDF）能有效去除肿瘤细胞,明显降低肿瘤细胞再回输的风险,但国内尚未见临床相关报道。北京大学第三医院2016年8月至11月在2例肾癌伴下腔静脉瘤栓手术中应用了IOCS联合LDF技术,现报告如下。     

库存悬浮红细胞生化特点及预充策略

目的观察库存悬浮红细胞（悬红）的生化特点及作为婴幼儿体外循环（CPB）预充液的安全策略。方法随机选取50例婴幼儿CPB心内直视手术，预充库血前使用国产血液回收机（Cell Saver）对悬红进行清洗，分别对清洗前后悬红进行血气、电解质及生化指标检测，并观察围术期血气、电解质及生化指标的变化。结果清洗前Hct（0．42±0．04），K^＋（10．3±3．1）mmol／L，乳酸（8．6±3．5）mmol／L；清洗后Hct（0．47±0．05），K^＋（2．7±0．8）mmol／L，乳酸（4．3±1．2）mmol／L。清洗前后悬红血气、电解质及生化指标有明显差异。结论悬红中K^＋及乳酸含量随保存时间延长而显著升高，且明显高于正常生理值，经国产血液回收机清洗后K^＋及乳酸含量可降至或接近正常，可以安全地用于婴幼儿CPB预充液。     

IL-18基因转染对小鼠卵巢癌OVHM细胞体内成瘤的影响

目的分析转染IL-18基因后,对小鼠卵巢癌OVHM细胞体内成瘤的影响,初步探讨IL-18基因转染治疗卵巢癌的应用价值。方法将逆转录病毒携带的小鼠IL-18基因成功转染至OVHM(OVHM/IL-18),以空载体转染的OVHM(OVHM/LXSN)和野生型(OVHM)作为对照,于裸鼠皮下分别接种细胞,观察各组种植瘤生长情况,计算成瘤率;HE染色及电镜分别观察病理组织切片的形态学改变。结果三组裸鼠的成瘤率相同,但OVHM/IL-18组成瘤时间较晚,随瘤龄增长肿瘤生长缓慢;瘤组织较小、界限清楚,血供不丰富,瘤细胞数量少、恶性程度较低,可见中性粒细胞、淋巴细胞浸润及细胞凋亡、组织坏死现象。OVHM组和OVHM/LXSN组的瘤组织较大、与周围组织界限不清,血管丰富,瘤细胞密集、恶性程度较高。结论IL-18基因成功转染后,可能通过促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤血管形成及促进免疫浸润等机制,达到抑制肿瘤生长、降低卵巢癌恶性程度的抗瘤作用。     

C反应蛋白和血小板-单核细胞聚集物检测在输血的恶性肿瘤患者中的应用

目的观察恶性肿瘤患者输血前后C反应蛋白(C reactive protein,CRP)和血小板-单核细胞聚集物(platelet-monocyte aggregates,PMA)的变化,探讨输血的恶性肿瘤患者检测CRP和PMA的应用价值。方法分别检测41例肺癌、33例大肠癌和30例外伤后需输血患者输血前、输血后5天和输血后2周血浆超敏CRP(hs-CRP)和PMA水平,并进行统计分析。结果输血后5天,肺癌组、大肠癌组和对照组hs-CRP和PMA水平均显著高于输血前(P<0.01)。输血后2周,肺癌组、大肠癌组和对照组hs-CRP和PMA水平均显著低于输血后5天(P<0.01),但肺癌组和大肠癌组二者水平均显著高于输血前(P<0.01)。输血前后,有转移组hs-CRP和PMA水平均显著高于同期无转移组(P<0.01),输血后5天和2周,反复输血组和全血输注组hs-CRP和PMA水平均显著高于同期非反复输血组和洗涤红细胞输注组(P<0.01)。各组输血后5天hs-CRP和PMA水平显著高于输血前而输血后2周显著低于输血后5天(P<0.01),有转移组、反复输血组和全血输注组输血后2周二者水平显著高于输血前(P<0.01),无转移组、非反复输血组和洗涤红细胞输注组与输血前无显著差异(P>0.05)。结论输血与恶性肿瘤患者炎症反应和高凝状态的进展有密切关系,CRP和PMA可作为预测恶性肿瘤患者输血后病情程度的有用指标。     

乳腺癌MCF-7肿瘤细胞SP亚群初步分析

目的鉴定乳腺癌干细胞系MCF-7中是否包含肿瘤干细胞相关的SP(side popu lation)亚群。方法制备MCF-7细胞悬液,经Hoechst33342和PI染色(其中一组同时加入拮抗剂维拉帕米作为对照),流式细胞仪分析SP亚群。另取贴壁生长的MCF-7细胞,用Hoechst33342和羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)原位染色,荧光显微镜下观察细胞染色情况。结果SP亚群占MCF-7细胞的4%,维拉帕米阻断后减少为0.5%。荧光显微镜下见Hoechst33342阳性细胞约占95%。结论人乳腺癌细胞系MCF-7中存在SP亚群,即提示乳腺癌干细胞的存在;维拉帕米可抑制染料外排而减少SP细胞的比例。     

通过改良方法建立人口腔癌细胞系的探讨

目的:建立癌细胞系是非常困难的工作,通常需要经过多次失败才能成功,本研究旨在通过对传统建立癌细胞系方法的改进以探讨一种容易建立癌细胞系的方法。方法:将获取的癌瘤标本分成两部分,一部分按传统的方法直接培养,另一部分首先将肿瘤标本接种在裸小鼠皮下形成皮下移植瘤,当移植瘤直径达到1cm时,取出肿瘤再在裸小鼠体内连续传代,从第3代开始将移植瘤的一部分做细胞培养。结果:按传统方法培养没有获得所需要的癌细胞,经过裸小鼠传代后的肿瘤组织再做培养很容易获得第1代肿瘤细胞,并且培养周期较短。利用这种方法我们成功地建立了一株舌癌细胞系TSCCa。结论:经过裸小鼠体内连续传代后的肿瘤组织较其原肿瘤组织容易建立癌细胞系。     

水疱性口炎病毒对胃癌细胞的选择性感染和杀伤作用的研究

目的研究水疱性口炎病毒(VSV)对胃癌细胞的选择性感染和杀伤作用。方法用0.1PFU/细胞的VSV分别感染胃癌细胞株(SGC-7901、BGC-823)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC),应用标准噬斑测定技术滴定病毒在各类细胞中的产量,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,TUNEL法检测细胞凋亡。结果 0.1PFU/细胞的VSV与上述3种细胞共同培养48h后,各细胞VSV的产量分别为HUVEC(3.10±0.32)×104、SGC-7901(5.61±0.44)×105、BGC-823(6.32±0.36)×105。MTT结果显示除脐静脉内皮细胞外,其他细胞被大量杀死;TUNEL凋亡检测结果显示胃癌细胞部分凋亡,脐静脉内皮细胞则很少凋亡。结论 VSV对上述胃癌细胞有选择性感染和杀伤作用,能够诱导这些细胞凋亡,对正常细胞则影响不大。     

评估体外循环过程中三种血液回收设备对红细胞功能的影响

目的评估三种血液回收设备在体外循环（CPB）回收清洗过程中对红细胞功能的影响。方法将30例CPB的成年患者随机分配3组：C组（CellSaver5^＋;Haemonetics,n=10）,M组（Autolog;Medtronic,n=10）和F组（CATS;FreseniusHe-moCa．re,n=10）。分别从回收罐及清洗后的输血袋中采血样。对其进行红细胞聚集指数（AI）,变形性指数（DI）,红细胞比容（Hct）并校正的全血黏度（HV）,2,3-二磷酸甘油酸（2,3-DPG）,Het,血红蛋白（Hb）,葡萄糖（Glu）,乳酸（Lac）,血尿素氮（BUN）,游离血红蛋白清除率（AFHB）的比较。结果经血液处理后,AI值在三组之间没有统计学差异（P〈0．05）。DI值c组和M组与F比较有相对较高的DI值（P〈0．05）。同时M组有最低的HV（P〈0．05）。△2,3-DPGc组较低,与M组和F组比较有极显著差异（P〈0．01）。Hct和HbF组〉C组〉M组。C组和M组具有较高AFHB,于F组相比均有显著统计学差异（P〈0．05）。结论三种血液回收设备具有相同的以离心为基础的工作原理,但基于其设计的不同,对处理过的红细胞功能的影响,以及对有害物质的清除效果在不同的设备之间却有明显的差异。     

肿瘤患者造血干细胞来源的树突状细胞的制备及鉴定

目的:以经动员富集的肿瘤患者外周血单个核细胞(MNC)为来源,建立体外诱导培养临床级树突状细胞(DC)的方法并其形态、表型及功能的鉴定。方法:以化疗联合皮下注射G-CSF对肿瘤患者进行外周血干细胞动员,血细胞分离机分离富集外周血MNC,聚苯乙烯细胞培养板贴壁纯化后,加入无血清培养液X-vivo15,以GM-CSF和IL-4联合诱导DC分化,诱导d5加入TNF-α促进DC成熟,观察DC形态及表型变化;并检测其刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力。结果:以该法诱导的患者DC显示出典型的树突细胞形态表型特征,同时具有较强的刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力。结论:以经动员富集的肿瘤患者外周血MNC为来源,联合应用GM-CSF、IL-4及TNF-α,在体外可诱导培养出临床级具有典型形态、表型及免疫活性的DC。     

不同方法建立的人大细胞肺癌裸鼠移植瘤模型的生物学特点

目的 比较三种常用的皮下移植瘤造模方法建立的人大细胞肺癌NCI-H460裸鼠移植瘤模型的不同生物学特点,为不同的研究寻找合适的造模方法提供实验依据.方法 分别用NCI-H460细胞,NCI-H460移植瘤组织块和移植瘤匀浆液对于BALB/c-nu/nu裸鼠建立皮下移植瘤模型,运用一般生物学指标观察三种移植瘤的成瘤率、瘤重、倍增时间和组织形态;采用全自动生化分析仪检测其外周血中丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、血糖(Glu)、尿素氮(BUN)和肌酐(CREA)等生化指标;利用血球分析仪检测白细胞总数(WBC)并进行分类,最后体外对其腹腔巨噬细胞吞噬活性和NK细胞活性进行了考察.结果 本实验中细胞法和匀浆法的成瘤率及肿瘤生长速率显著高于埋块法且其生长更为均一,差异较小.接种5周后,与正常裸鼠比较,三组荷瘤小鼠血液中ALT、AST显著升高,BUN、CREA显著降低,埋块组的AST和BUN两项指标显著高于其他两荷瘤组.此外,接种2周后,荷瘤裸鼠的GLU显著低于正常裸鼠,匀浆液组的GLU降得最低.白细胞中,三种方法组荷瘤小鼠血液中LYM％、MN％、HGB均有降低,匀浆液组和细胞培养组的荷瘤小鼠血液中WBC、NEUT％、PLT显著高于埋块组.免疫细胞活性方面,两种细胞均呈现出正常细胞组＞匀浆组＞细胞组＞埋块组的趋势.结论 细胞培养法接种数量可控,肿瘤生长均匀,适合建立不同实验需求的移植瘤模型,组织块移植法适于建立中药抗肿瘤筛选的动物模型,而匀浆液移植法则不推荐使用.裸鼠的生理生化状态和免疫功能与肿瘤的生长有密切的关系.