RNA干扰Bcl-xL基因表达对大肠癌细胞侵袭的影响

 目的 探讨Bcl-xL基因对大肠癌细胞侵袭的影响及可能机制。方法 应用Bcl-xL基因小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）转染处理人大肠癌HT29细胞后,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测Bcl-xI基因mRNA和蛋白水平,分别采用软琼脂集落培养试验和Boydcn小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力。另外,采用Western blot方法检测癌细胞尿激酶纤溶酶原激活物（urokinase-type plasminogen activator,uPA）蛋白变化。结果 转染组癌细胞Bcl-xL基因mRNA和蛋白水平明显被抑制,且与时间和浓度相关。与对照组比较,转染组细胞所形成的软琼脂集落数和穿膜细胞数明显减少,且呈浓度依赖性门转染组癌细胞uPA蛋白水平明显下降,且与浓度相关。结论Bcl-xL基因在大肠癌细胞侵袭中起着重要的作用;以siRNA下调Bcl-xL基因表达,可明显抑制大肠癌细胞恶性侵袭,其机制可能与下调uPA表达有关。     

siRNA沉默S100A4基因表达抑制甲状腺癌细胞侵袭的研究

目的 探讨S100A4基因对甲状腺癌细胞侵袭的影响和可能机制.方法 采用S100A4基因小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）转染处理人甲状腺癌ARO细胞后,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测S100A4基因和基质金属蛋白酶-2mRNA和蛋白水平;分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力.结果 siRNA转染组S100A4基因mRNA和蛋白水平明显下调,且呈浓度依赖性（P＜0.000 1）.siRNA转染组软琼脂集落形成数和穿过滤膜的细胞数均明显下降,且呈浓度依赖性（P＜0.005;P＜0.005）.S100A4转染组MMP-2基因mRNA和蛋白水平明显下调.结论 采用S100A4 siRNA转染可抑制甲状腺癌细胞侵袭转移,其机制可能与下调MMP-2表达有关.     

促肝细胞再生磷酸酶-3基因对大肠癌细胞侵袭和失巢凋亡的调控

目的 探讨促肝细胞再生磷酸酶(phosphatase of regenerating liver cell-3,PRL-3)基因对大肠癌细胞侵袭的影响及可能机制.方法 应用PRL-3基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染处理人大肠癌HCT116细胞后,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测PRL-3 mRNA和蛋白水平,分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力,采用琼脂糖凝胶电泳和TUNEL检测癌细胞失巢凋亡情况.结果 转染组癌细胞PRL-3 mRNA和蛋白水平明显被抑制,且与时间和浓度相关.与对照组比较,转染组细胞所形成的软琼脂集落数和穿膜细胞数明显减少,且呈时间和浓度依赖性.琼脂糖凝胶电泳和TUNEL结果显示,转染组细胞出现明显的凋亡现象:凋亡指数增加,出现明显的DNA条带.结论 PRL-3基因siRNA转染可明显抑制大肠癌细胞的锚着不依赖性增殖和恶性侵袭,其机制可能与诱导失巢凋亡有关.     

siRNA联合预照射对肺癌细胞survivin基因表达影响

目的 探讨小干扰RNA(siRNA)联合预照射对肺癌细胞survivin基因表达的影响。方法 在肺癌A549细胞中转染survivin基因的siRNA,分别用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western Blotting方法检测survivin基因mRNA和蛋白的表达。将肺癌A549细胞分为单纯放射组、单纯转染组、转染+放射组,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用细胞集落形成实验检测细胞增殖情况,采用CCK8测细胞生长曲线。结果 siRNA能抑制肺癌细胞survivin基因mRNA和蛋白的表达。siRNA联合预照射较单纯转染和单纯放射能显著增加细胞凋亡率,降低细胞的集落形成,抑制细胞生长。结论 预照射可以增强siRNA对肺癌细胞survivin基因的抑制作用。     

特异性siRNA沉默TDGF-1基因表达对乳腺癌细胞迁移侵袭的影响

目的 探讨RNA干扰（RNA interference,RNAi）沉默TDGF-1基因表达对乳腺癌细胞侵袭的影响.方法 根据TDGF-1基因序列特点设计3个小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）后,转染人乳腺癌MDA-MB-468细胞,用荧光实时定量RT-PCR筛选出效果最好的siRNA.以该siRNA转染处理乳腺癌MDA-MB-468细胞后,分别采用实时定量RT-PCR和western blot检测TDGF-1基因mRNA和蛋白水平,以划痕试验方法评测癌细胞迁移能力;用Boyden模型观察癌细胞侵袭能力.结果 根据TDGF-1基因序列特点设计的3个siRNA均能抑制TDGF-1基因mRNA水平,以S1效果最好.S1 siRNA转染组TDGF-1 mRNA和蛋白水平明显下调,且呈浓度和时间依赖性（P＜0.001,P＜0.001）.体外试验发现,TDGF-1 siRNA转染可有效抑制乳腺癌细胞集落生长、侵袭和迁移能力,且与浓度相关（P＜0.005,P＜0.005,P＜0.005）.结论 TDGF-1在乳腺癌细胞迁移、侵袭中起着重要的作用;采用TDGF-1 siRNA转染可抑制乳腺癌细胞侵袭.     

骨桥蛋白基因对大肠癌细胞增殖、侵袭及Akt磷酸化的影响

目的探讨骨桥蛋白（osteopontin,OPN）基因对大肠癌细胞侵袭的影响及机制。方法以人大肠癌Colo 205细胞为模型,应用OPN基因小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）转染处理后,采用荧光实时定量PCR检测OPN基因mRNA水平,采用软琼脂集落培养试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖能力,采用Boyden小室模型方法检测癌细胞侵袭能力,采用蛋白质印迹检测癌细胞Akt磷酸化水平。结果 OPN转染组癌细胞OPN mRNA和蛋白水平明显被抑制,且与时间和浓度相关。与空白对照组比较,OPN转染组细胞所形成的软琼脂集落数和穿膜细胞数明显减少,且呈浓度依赖性。蛋白质印迹检测发现,OPN转染组细胞Akt磷酸化水平明显下调。结论 OPN基因转染可明显下调大肠癌细胞的增殖和恶性侵袭能力,下调Akt磷酸化水平,是OPN基因转染下调癌细胞的增殖和恶性侵袭能力重要机制之一。     

干扰整合素转接激酶表达对口腔鳞癌细胞迁移侵袭影响研究

目的 研究干扰整合素转接激酶(ILK)表达对口腔鳞癌细胞迁移和侵袭能力的影响及机制。方法 以口腔鳞癌SCC-25细胞为研究对象,细胞转染小干扰RNA阴性对照(siRNA control)和ILK小干扰RNA(ILK siRNA)分别记为si-NC组和ILK siRNA组,同时以没有转染的SCC-25细胞作为对照组。RT-PCR和Western blot法检测转染效果;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖;细胞划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室检测细胞侵袭;Western blot法检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达。结果 si-NC组ILK mRNA水平和蛋白水平、细胞存活率、细胞迁移率、细胞侵袭数目以及细胞中的MMP-9、MMP-2蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。ILK siRNA组ILK mRNA水平和蛋白水平、细胞存活率、细胞迁移率、细胞侵袭数目和细胞中MMP-2、MMP-9蛋白表达水平明显低于对照组和si-NC组(P<0.05)。结论 干扰ILK能够下调口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。     

RNAi沉默PRL-1基因对肺癌细胞侵袭能力的影响

目的:探讨RNA干扰(RNAinterference,RNAi)沉默促肝细胞再生磷酸酶1(phosphatase of regenerating liv-er cell-1,PRL-1)基因对肺癌细胞侵袭力的影响。方法:应用PRL-1基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染处理肺癌A549细胞后,分别采用实时定量RT-PCR和蛋白质印迹检测PRL-1基因mRNA和蛋白水平,分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力。结果:与对照组比较,siR-NA转染组PRL-1 mRNA和蛋白水平明显下调,且呈浓度和时间依赖性(P<0.05,P<0.05)。体外试验发现,PRL-1siRNA可有效抑制肺癌细胞集落生长和侵袭能力,且与浓度相关(P<0.05,P<0.05)。结论:PRL-1基因在肺癌侵袭中起着重要的作用,采用PRL-1 siRNA转染可抑制肺癌细胞侵袭。     

靶向cripto siRNA转染对裸鼠实验性大肠癌细胞肝转移的影响

 目的 研究cripto基因对人大肠癌细胞迁移、侵袭和肝转移的影响。方法 以cripto基因mRNA小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）转染人大肠癌SW480细胞后,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测cripto基因mRNA和蛋白水平,以划痕试验方法评测癌细胞迁移能力;用Boyden模型观察癌细胞侵袭能力。以脾切除法建立裸鼠大肠癌肝转移模型,以cripto siRNA转染48 h后的癌细胞接种裸鼠,观察对大肠癌细胞体内肝转移的影响。结果 siRNA转染组cripto基因mRNA水平明显降低,且呈浓度和时间依赖性（P<0.001,P<0.001）。体外实验发现,cripto siRNA转染组癌细胞迁移距离和穿膜细胞数目明显低于对照组,且呈浓度依赖性（P<0.05）。体内实验发现,cripto基因siRNA转染组SW480细胞转移率和肿瘤结节数均明显低于对照组（P<0.05,P<0.05）。结论 cripto基因在大肠癌肝转移中起着重要的作用;以siRNA下调cripto基因表达,可抑制大肠癌细胞肝转移。     

siRNA干扰survivin对人胃癌SGC-7901细胞的影响

目的 探讨siRNA沉默survivin基因表达对人胃癌SGC-7901细胞用期、增殖、凋亡的影响及其作用机制的初步探讨.方法 针对survivin mRNA序列设计合成siRNA,转染SGC-7901细胞.MTT法检测SGC-7901细胞增殖;RT-PCR法检测survivin、caspase-3基因表达;Western blot检洲survivin、caspase-3表达;细胞免疫组织化学检测survivin表达;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况.结果 survivin siRNA能有效抑制胃癌SGC-7901细胞中survivin的表达,与空白对照组比较.survivin siRNA组SGC-7901细胞生长、增殖速度减缓(P＜0.05);survivin在mRNA和蛋白表达水平均显著下调(P＜0.05),caspase-3在mRNA水平变化不明显(P＞0.05),而在蛋白表达水平明显升高(P＜0.05);survivin siRNA组细胞凋亡率增高(P＜0.05).结论 survivinsiRNA可以下调胃癌SGC-7901细胞survivin基因的表达,抑制细胞的生长活性,并促进其凋亡.     

脑胶质瘤survivin表达及其反义核酸对U251细胞的作用

目的:观察脑胶质瘤患者脑组织生存素(survivin)的表达及其反义寡核苷酸(survivin ASODN)对脑胶质瘤U251细胞生长和凋亡的影响。方法:RT-PCR法检测脑胶质瘤患者脑组织survivin mRNA表达,脂质体介导下,分别以100、300、500 nmol/Lsurvivin ASODN作用于脑胶质瘤U251细胞48 h后,观察细胞形态学,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:脑胶质瘤患者脑组织有survivin mRNA表达,阳性率为76.7%。不同浓度survivin ASODN转染48 h后,细胞生长抑制率分别为(52.24±6.59)%、(36.14±4.01)%和(24.14±5.57)%,凋亡指数分别为(19.46±3.85)%、(38.6±1.85)%和(55.34±3.16)%,与对照组及不同浓度组间比较差异有统计学意义(P<0.05~P<0.01)。结论:脑胶质瘤患者脑组织有survivin mRNA表达,survivin ASODN以剂量依赖方式抑制脑胶质瘤U251细胞生长,诱导细胞凋亡。     

胶质瘤中Survivin及Ki-67的表达意义

目的探讨胶质瘤中Survivin的表达及其与恶性程度的关系,及与Ki-67相关性。方法胶质瘤77例,其中Ⅰ级19例、Ⅱ级25例、Ⅲ-Ⅳ级33例。用免疫组化染色检测瘤组织中Survivin和Ki-67的表达情况。结果Survivin蛋白在胶质瘤细胞中有阳性表达,其阳性表达率分别为Ⅰ级26．3％、Ⅱ级48．0％、Ⅲ-Ⅳ级69．7％,随着肿瘤级别的增高Survivin蛋白的表达增强。胶质瘤中Survivin的表达与胶质瘤细胞Ki-67指数呈正相关。Survivin蛋白表达阳性的胶质瘤细胞Ki-67指数明显高于Survivin蛋白表达阴性的相应胶质瘤细胞的Ki-67指数。结论胶质瘤细胞中Survivin蛋白的表达与肿瘤的恶性程度和Ki-67指数呈明显正相关;Survivin蛋白的表达与细胞增殖密切相关。     

survivin、caspase-3在脑胶质瘤的表达及suvivin ASODN对U251细胞的影响

目的：观察脑胶质瘤患者脑组织survivin、caspase-3的表达情况及survivin ASODN对脑胶质瘤U251细胞survivin和caspase-3表达的影响,探讨两者与脑胶质瘤发病及预后的相关性。方法：免疫组化法检测脑胶质瘤患者survivin和caspase-3蛋白表达,RT-PCR检测脑胶质瘤组织survivin mRNA表达,以脑胶质瘤U251细胞为研究对象,转染不同剂量survivin ASODN（100nmol/L、300nmol/L、500nmol/L）,并于培养不同时间（24h、48h、72h）后,RT-PCR检测U251细胞survivin和caspase-3的表达。结果：脑胶质瘤患者脑组织survivin蛋白高表达（阳性率69.6%）,而caspase-3低表达（阳性率50.7%）,且两者表达的阳性率与肿瘤的恶性程度有关。U251细胞在不同浓度survivin ASODN转染不同时间后,以500nmol/L survivin ASODN转染72h对U251 survivin mRNA的抑制率达62.06%,与对照组及不同浓度组间比较差异均有统计学意义（P〈0.05-P〈0.01）。免疫组化结果显示转染后survivin表达下调,而caspase-3表达上调。结论：脑胶质瘤患者脑组织高表达survivin蛋白,而低表达caspase-3蛋白,survivin ASODN可诱导U251细胞株survivin mRNA及蛋白表达下调,而caspase-3蛋白表达水平上调。     

Survivin反义核酸真核表达载体的构建及在胶质瘤细胞中的表达

目的构建survivin反义核酸真核表达载体pIRES2-EGFP-SVVas,并检测其在恶性胶质瘤细胞SHG-44中的表达。方法构建survivin反义核酸真核表达载体pIRES2-EGFP-SVVas,并用脂质体介导转染入SHG-44细胞,通过RT-PCR及western blot检测细胞中survivin mRNA和蛋白的表达。结果构建了survivin反义核酸真核表达载体pIRES2-EGFP-SWas,并成功导入SHG-44细胞中,且有效表达,使SHG-44细胞中survivin mRNA和蛋白表达水平均降低。结论Survivin反义核酸真核表达载体pIRES2-EGFP-sVVas可以降低SHG-44细胞survivin基因的表达。     

PTTG与survivin在脑胶质瘤中的表达及相关性探讨

目的探讨垂体肿瘤转化基因(PTTG)与生存素(surviving)在脑胶质瘤中的表达水平及二者的相关性。方法应用免疫组织化学SP法检测PTTG与survivin蛋白在60例脑胶质瘤组织中及12例正常脑组织中的表达。结果 (1)脑胶质瘤中PTTG、survivin表达阳性率显著高于正常脑组织,并随着病理级别的增高而增高,各组间有显著性差异(P0.05);(2)脑胶质瘤中PTTG与survivin表达呈显著正相关(r=0.411,P0.05)。结论 PTTG、survivin在脑胶质瘤中的异常表达可能与脑胶质瘤的发生、发展有密切的关系。     

Survivin在2株人脑胶质瘤细胞系中的表达

目的:探讨凋亡蛋白抑制因子(IAP)Survivin mRNA及蛋白在人脑胶质瘤细胞系BT325和SHG-44中的表达水平及意义. 方法:采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化方法分别检测Survivin mRNA及蛋白在BT325和SHG-44细胞系中的表达水平. 结果:BT325细胞高表达Survivin mRNA及蛋白,并表达少量的Survivin剪接变异体Survivin-2B,Survivin蛋白定位于瘤细胞的胞质. Survivin mRNA及蛋白在SHG-44细胞中均无表达. 结论:Survivin对于维持BT325细胞株的生物学特性具有重要作用;BT325和SHG-44细胞株可分别作为Survivin基因抑制和基因转移研究的良好细胞模型.     

Survivin及Bak蛋白在人脑胶质瘤的表达及相关性研究

目的 探讨Survivin及Bak蛋白在人脑胶质瘤的表达,并分析二者的相关性.方法 采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法(SP法),检测Survivin及Bak蛋白在80例人脑胶质瘤组织中的表达,与10例正常脑组织进行对照.结果 Survivin及Bak蛋白在人脑胶质瘤组织阳性表达率分别为62.50%、63.75%,明显高于正常脑组织阳性表达率(P＜0.05),其中在Ⅰ和Ⅱ、Ⅱ和Ⅲ、Ⅲ和Ⅳ级胶质瘤间表达无显著性差异(P＞0.05),在Ⅰ、Ⅱ级和Ⅲ、Ⅳ级之间阳性表达率有显著性差异(P＜0.05),Survivin及Bak蛋白在人脑胶质瘤组织中的阳性表达呈负相关(r=-0.4303,P＜0.05).结论 Survivin及Bak蛋白在人脑胶质瘤的发生发展中起拮抗作用,二者可以作为肿瘤相关抗原来诊断和治疗胶质瘤.     

P21和survivin蛋白在脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义

目的:探讨不同级别人脑胶质瘤组织和正常脑组织中P21和survivin蛋白的表达情况,分析其临床意义。方法:按2007年WHO制定的病理分级标准,将41份脑胶质瘤组织标本分为Ⅰ级9份、Ⅱ级14份、Ⅲ级10份和Ⅳ级8份,另外12份正常脑组织作为对照组,采用免疫组织化学法检测脑胶质瘤和正常脑组织中P21和survivin蛋白的表达情况,并分析两者表达的关系。结果:在正常脑组织和脑胶质瘤组织中P21及survivin蛋白阳性表达率分别为91.7%和53.7%及0%和51.2%,不同组织中P21和survivin蛋白的阳性表达率比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Ⅰ-Ⅱ和Ⅲ-Ⅳ级脑胶质瘤组织中P21蛋白阳性表达率分别为69.6％及33.3%,而survivin蛋白阳性表达率分别为34.8%和72.2%,Ⅲ-Ⅳ级脑胶质瘤组织中P21蛋白阳性表达率明显低于Ⅰ-Ⅱ级,而survivin蛋白的阳性表达率明显高于Ⅰ-Ⅱ级(P<0.05)。结论:P21蛋白的表达缺失和survivin蛋白的过度表达与脑胶质瘤恶性程度有关联,P21蛋白有抑制脑胶质瘤发生发展的作用,而survivin蛋白在脑胶质瘤的恶变过程中起促进作用。     

胶质瘤U251细胞及其干细胞抗凋亡与多重耐药基因的关系

目的利用培养成功的U251胶质瘤干细胞,探讨其抗凋亡和耐药基因的表达差异。方法WST-8法检测胶质瘤干细胞增殖活性,实时荧光定量RT-PCR技术检测Livin、Livinα、Livinβ、Survivin和MRP1、MRP3 mRNA的表达。结果单层培养的U251细胞比胶质瘤干细胞表现出更强的增殖活性;U251胶质瘤干细胞Livin、Livinα、Livinβ、Survivin和MRP-1 mRNA表达量较U251单层培养细胞表达量都有不同程度的升高,而MRP-3 mRNA表达量降低。结论U251胶质瘤干细胞抗凋亡和MRP-1 mRNA表达量较U251单层培养细胞表达量有不同程度的升高,提示胶质瘤干细胞比较其同源的肿瘤细胞具有更强的耐药性,这可能是肿瘤耐药的机制。     

生存素在细胞核及细胞质中的表达与脑胶质瘤患者预后的关系

目的分析生存素（survivin）在细胞核、细胞质中的表达与脑胶质瘤患者各临床病理学参数及预后的关系。方法应用组织芯片技术结合免疫组织化学方法检测94例胶质瘤患者中survivin蛋白质细胞核、细胞质的表达情况,并结合临床随访资料进行分析。结果94例胶质瘤患者中有21例（22．3％）为survivin细胞核阳性表达,82例（87．2％）为survivin细胞质阳性表达。病理Ⅰ～Ⅱ级与Ⅲ～Ⅳ级的survivin细胞核阳性表达率分别为7．3％、34．0％（P〈0．01）;复发与无复发胶质瘤的survivin细胞核阳性表达率分别为29．8％、10．8％（P〈0．05）。survivin细胞核表达阳性组与阴性组的5年总生存率分别为0％、39．50％（P〈0．01）,3年无进展生存率分别为0％、27．52％（P〈0．05）;survivin浆表达阳性组与阴性组的5年总生存率分别为43．60％、13．85％（P〉0．05）,3年无进展生存率分别为23．88％、0％（P〉0．05）。多因素分析显示：survivin细胞核表达是总生存率的独立预后因子。结论survivin细胞核表达与胶质瘤分化程度呈负相关,是胶质瘤患者总生存率和无进展生存率预后的不利因素;而survivin细胞质表达与胶质瘤的预后无关。