人内皮细胞和4种细胞因子对下沉粉和再生障碍性贫血患者粒？…

通过人脐静脉内皮细胞为铺层的双层细胞培养,观察内皮细胞和几种细胞因子对正常人和再障患者粒系造血的影响。方法：以人内皮细胞作铺层,作体外骨髓ＣＦＵ－ＧＭ半固体双层培养,并在培养体系中加入细胞因子ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－６和ＬＡＫ细胞上清,观察内皮细胞和细胞因子对正常人和再障患者粒系造血的影响。结果在有内皮细胞的培养体系中ＣＦＵ－ＧＭ的产生率均显著高于无内皮细胞的相应培养体系。在无内皮细胞时,Ｉ     

神经生长因子对正常和放化疗复合损伤小鼠粒-巨噬系血发生的影响

目的 探讨神经生长因子(NGF)对小鼠粒-巨噬系血细胞发生的影响.方法 采用流式细胞术、祖细胞集落分析、血细胞计数、实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附分析法(ELISA),检测注射NGF对正常和经60Coγ射线照射 腹腔注射环磷酰胺(放化疗复合损伤)小鼠骨髓细胞(BMC)增殖周期、粒-巨噬系祖细胞集落(CFU-GM)产率、外周白细胞总数、骨髓细胞粒-巨噬系集落刺激因子(GM-CSF)mRNA的表达及血清中GM-CSF和IL-3浓度的影响.并观察在体外培养体系中加入不同浓度的NGF时CFU-GM集落产率的变化及与GM-CSF的关系.结果 在体外CFU-GM培养中,加入重组小鼠GM-CSF (rmGM-CSF)时,NGF剂量依赖性地提高集落产率.注射NGF[7.5 μg/(kg·d)或10 μg/(kg·d)]持续7 d,正常和放化疗复合损伤小鼠外周血白细胞总数、小鼠骨髓细胞中S G2/M期细胞比例、CFU-GM集落产率显著高于注射生理盐水的对照组;放化疗复合伤小鼠血清中的GM-CSF和IL-3也显著升高.结论 NGF可与体外培养体系中的造血刺激因子协同作用,促进正常和放化疗复合损伤小鼠CFU-GM的形成.NGF在体内可促进正常和放化复合损伤小鼠骨髓细胞进入有丝分裂,促进造血干细胞向粒-巨噬系方向分化,促进CFU-GM的形成,提高外周血白细胞数;NGF还可刺激放化疗复合损伤小鼠体内GM-CSF和IL-3的分泌,这可能是NGF促进放化疗复合损伤后粒-巨噬系造血恢复的途径之一.     

昆布多糖对大鼠骨髓巨噬细胞生物活性的影响

目的 研究昆布多糖对大鼠骨髓巨噬细胞生物活性的影响.方法 制备并体外培养大鼠骨髓造血干/祖细胞、巨噬细胞;制备昆布多糖作用后的骨髓巨噬细胞条件培养液,测定培养液中造血生长因子促红细胞生成素(EPO)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-3(IL-3)表达及活性;测定昆布多糖条件培养液作用后造血祖细胞的集落产率.结果 经昆布多糖诱导的骨髓巨噬细胞培养上清液可显著提高骨髓造血祖细胞的集落产率;经昆布多糖诱导后,骨髓巨噬细胞的EPO、GM-CSF和IL-3的表达增高.结论 昆布多糖可刺激骨髓巨噬细胞造血因子表达增高,从而促进髓系多向性造血祖细胞(CFU-Mix)、红系祖细胞(CFU-E)、粒一单系造血祖细胞(CFU-GM)的增殖分化.     

补肾泻肝方药对再生障碍性贫血患者骨髓造血祖细胞的影响

为研究补肾泻肝方药治疗再生障碍性贫血的机理,将25例再障患（其中肾阴虚14例,肾阳虚11例）的骨髓进行体外培养,观察不同中药复方[滋肾阴（Ⅰ）、泻肝炎（Ⅱ）、温肾阳（Ⅲ）、补肾泻肝（Ⅳ）]和细胞因子（IL-2、IRN-γ）对其红系、粒-巨噬系造血祖细胞（CFU-E、BFE-U、CFU-GM）集落形成的影响。结果：Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ方对CFU-E、BFU-E、CFU-GM均有促进作用,Ⅳ方的作用尤其明显,而Ⅱ方无此作用;IL-2、IFN-γ对上述指标有抑制作用;加入Ⅱ、Ⅳ方后能减除这种抑制,但Ⅰ、Ⅲ方无此作用。提示：补肾泻肝方药是治疗再障的有效处方,减除IL-2、IRN-γ对造血祖细胞的抑制、促进CFU-E、BFU-E、CFU-GM的形成是其治疗再障的重要机理。     

人参总皂苷体外定向诱导CD34+细胞分化为粒系血细胞的研究

目的研究人参总皂苷(TSPG)协同造血生长因子对CD34 细胞体外定向诱导分化为粒系血细胞的影响。方法应用阴性磁性分选策略,以StemsepTM系统从正常人骨髓细胞中分离CD34 造血干/祖细胞(HSC/HPC),通过甲基纤维素半固体培养法检测TSPG诱导CD34 HSC/HPC向粒系祖细胞集落(CFU-GM)增殖与分化的能力;在SCF IL-3 GM-CSF G-CSF(SIGG)液体培养体系中加入不同剂量的TSPG,检测对CD34 HSC/HPC增殖形成CFU-GM的影响以及CD33 细胞比例的变化。结果TSPG(10～50μg/mL)均能提高CD34 细胞形成CFU-GM的集落产率,以TSPG20μg/mL效果最为明显;不同质量浓度的TSPG协同造血生长因子在液体培养体系中诱导CD34 细胞2周,观察粒系血细胞的分化,TSPG10～70μg/mL均可不同程度地提高细胞总数、CFU-GM扩增倍数及CD33 细胞比例,TSPG20μg/mL是液体培养诱导CD34 细胞向粒系分化的最佳质量浓度。结论TSPG协同造血生长因子能促进CD34 细胞定向诱导分化为粒系血细胞。     

卵黄囊干细胞向粒-单系造血祖细胞的定向诱导分化

目的：观察卵黄囊干细胞向粒-单系造血祖细胞（CFU-GM）的定向诱导分化,稳定和优化检测卵黄囊CFU-GM的方法。方法：应用体外琼脂培养法,观察多种因素对小鼠卵黄囊干细胞形成粒-单系造血祖细胞集落形成单位的影响;应用染色压片法对所生成的集落性质作鉴定。结果：植入不同数量的E7.5~8.5 d的卵黄囊干细胞与CFU-GM生成数量之间呈高度正相关;在接种相同数量的卵黄囊细胞数的情况下,DMEM培养体系生成的CFU-GM数明显多于IMDM培养体系生成的集落数（P<0.01）;马血清（HS）组优于胎牛血清（FBS）组（P<0.01）;与GM-CSF相比,WEHI-3条件培养液（W3-CM）能明显促进卵黄囊CFU-GM的生成（P<0.01）。采用完整琼脂凝块压片法对卵黄囊细胞所形成的集落进行鉴定表明为粒-单系细胞集落。结论：卵黄囊干细胞具有向CFU-GM分化的能力;卵黄囊干细胞CFU-GM诱导体系中各组分变化均可影响CFU-GM的集落生成率;以DMEM,GM-CSF或W3-CM,HS为组分的体系可稳定地检测卵黄囊细胞CFU-GM的集落生成率。     

rhIL-3和rhGM-CSF对人正常骨髓造血干细胞体外维持的作用

应用重组人白细胞介素3(rhIL-3)和重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)对18例正常人骨髓造血干细胞体外悬浮培养1周后,用琼脂集落培养测定CFU-CM的增殖程度。rhIL-3组的CFU-GM增至4.9±1.9倍;rhGM-CSF组增至4.7±1.6倍;rhIL-3+GM-CSF组增至11.5±5.4倍,均高于对照组(P<0.001)。rhIL-3+GM-CSF组的CFU-GM增殖量明显高于rhlL-3组和rhGM-CSF组。结果表明:rhIL-3和rhGM-CSF均能促使造血干细胞在体外短期维持中大量增殖,二者联合应用有协同作用。     

在人胎盘条件培养液中白细胞介素2对粒-巨噬系祖细胞生长的影响

在正常骨髓粒-巨噬系祖细胞(CFU-GM)常规培养体系中加入白细胞介索2(IL-2),所有18例CFU-GM的集落产率明显上升,平均上升46.37％,t=11.152,P<0.001。结果提示IL-2和人胎盘条件培养液(HPCM)之间具有协同作用,但IL-2单独并无刺激CFU-GM生长的作用。     

当归注射液对正常人和再生障碍性贫血患者造血祖细胞的 …

本文采用体外造血祖细胞集落形成技术，观察了当归注射液对正常人和再生障碍性贫血（再障）患者骨髓红系（ＣＦＵ－Ｅ，ＢＦＵ－Ｅ）、粒系（ＣＦＵ－ＧＭ）的刺激增殖作用。实验结果表明：在正常骨髓培养体系中加入当归注射液后ＣＦＵ－Ｅ、ＢＦＵ－Ｅ、ＣＦＵ－ＧＭ产率均明显提高，以终浓度为５０μｇ／ｍｌ时最佳，以此浓度加入再障患者骨髓常规培养体系中，后者的ＣＦＵ－Ｅ、ＢＦＵ－Ｅ、ＣＦＵ－ＧＭ产率分别提高３６．２％、     

商陆素－脾细胞条件培养基对小鼠骨髓造血祖细胞作用的研究

目的研究商陆素-脾细胞条件培养基(PWM-SCM)对小白鼠骨髓造血祖细胞的作用.方法用micro-ELISA方法测定PWM-SCM中IL-2、IL-3、IL-4和IL-6的含量,在CFU-GM和CFU-E培养体系中加入PWM-SCM,观察其对造血祖细胞的作用.结果PWM-SCM中4种细胞因子的含量IL-2为72.5±1.1 pg/ml,IL-3为433.3±11.6 pg/ml,IL-4为28.9±0.4pg/ml,IL-6为143.3pg/ml,其测定值均高于对照组RPMI-1640完全培养基中测定的含量(P＜0.05～0.01).骨髓造血祖细胞培养显示,PWM-SCM对CFU-GM无影响,但CFU-E的集落数由6.2±1.4增加到34.0±2.5,有非常显著性差异(P＜0.001).结论PWM-SCM中含有多种细胞因子,对小白鼠骨髓造血祖细胞有集落刺激活性,对CFU-E的形成有协同促进作用.     

人脐带间充质干细胞对再生障碍性贫血患者T细胞相关因子调节的体外研究

目的体外观察人脐带间充质干细胞对再生障碍性贫血患者和正常对照T细胞相关细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-17、IL-6的调节作用.方法采用组织块培养法从脐带分离、培养间充质干细胞.用流式细胞术鉴定脐带间充质干细胞的表型.分离再生障碍性贫血患者和正常对照外周血单个核细胞与脐带间充质干细胞共培养.用ELISA法测定外周血单个核细胞组和共培养组培养上清中细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-17和IL-6的水平.结果脐带来源间充质干细胞高表达CD29、CD44、CD105、HLA-I.人脐带间充质干细胞与再生障碍性贫血患者外周血单个核细胞共培养后上清中IL-2水平无明显变化（P〉0.05）而IFN-γ水平有所下降（P〉0.05）,IL-17水平和IL-6水平明显上升（P〈0.01）.人脐带间充质干细胞与正常对照外周血单个核细胞共培养后上清中IL-2和IFN-γ水平明显下降（P〈0.05）而IL-17水平无明显变化（P〉0.05）,IL-6水平明显上升（P〈0.01）.结论人脐带间充质干细胞明显可抑制正常外周血单个核细胞分泌IL-2、IFN-γ,其与外周血单个核细胞共培养后可升高IL-6水平.     

Effects of Serum from Aplastic Anemia patients on the Expression of Cyclin D3 Isoform in Umbilical Cord Blood CD34~ Cells

Aplasticanemia (AA )isabonemarrowfailuresyndrome .Recentstudiesindicatethatimmune me diatedsuppressionofhematopoiesisplaysanimpor tantroleinmostcasesofAA ,namely ,abnormallyactivatedTcellsand/orsomesolublecytokinesinhibitproliferationofhematopoieticstem/p…     

成人脂肪源间充质干细胞培养上清对人脐血间充质干细胞体外培养及扩增的支持作用

目的：研究人脂肪间充质干细胞培养上清对人脐带血（HUCB）中所含有间充质干细胞（MSCs）的影响。方法：取脐带血,肝素抗凝,Percoll淋巴细胞分离液分离出单个核细胞,低糖DMEM培养获得贴壁细胞层。与人脂肪源间充质干细胞培养上清共孵育。流式细胞仪检测表面抗原。结果：脐带血的单个核细胞与人脂肪源间充质干细胞培养上清共孵育经体外培养贴壁后出现形似纤维状细胞形态并表达与MSCs相关的抗原（CD13,CD44,CD71,CD166）,但不表达造血细胞抗原（CD34,CD45）,这与源于骨髓的MSCs一致。结论：人脐血间充质干细胞与脂肪源间充质干细胞培养上清共孵育,对脐血间充质干细胞体外分离培养及扩增有支持作用。     

人脐带沃顿胶间充质干细胞对重型再生障碍性贫血调节性T细胞及Foxp3基因的影响

目的研究脐带沃顿胶间充质干细胞(WJCs)对重型再生障碍性贫血(SAA)患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞及Foxp3基因表达水平的影响,探讨WJCs对SAA患者T淋巴细胞(TLCs)免疫调节作用的可能机制。方法从人脐带中分离培养WJCs,通过流式细胞术检测其表面标记并进行鉴定;采用密度梯度离心法从SAA患者外周血中分离TLCs;在植物凝集素(PHA)刺激下,将SAA患者TLCs(1×105个)进行体外培养,实验组加入不同数量级WJCs(1×103、1×104、1×105个)共培养,3 d后采用MTT法检测淋巴细胞抑制率;流式细胞仪检测实验组及正常对照组SAA患者TLCs中CD4+CD25+T细胞比例的变化,RT-PCR方法检测Foxp3基因mRNA水平的变化。结果 WJCs能明显抑制SAA患者TLCs增殖,且抑制作用与WJCs呈剂量依赖性;实验组CD4+CD25+T细胞比例以及Foxp3基因表达水平均比对照组明显增加,且与TLCs增殖水平呈负相关。结论 WJCs对SAA患者TLCs的抑制作用呈剂量依赖性,通过上调Foxp3的表达而发挥CD4+CD25+调节性T细胞的免疫调节作用可能是其机制之一。     

Effects of Serum from Aplastic Anemia patients on the Expression of Cyclin D3 Isoform in Umbilical Cord Blood CD34＋ Cells

The pathogenesis of aplastic anemia (AA) was explored and the effects of AA serum on the expression of crucial cyclin D isoform (cyclin D3) in umbilical cord blood hematopoietic stem/progenitor cells were observed. The CD34 cells were isolated from the cord blood with MIDIMACS Semi-solid methylcellulose culture technique was used to measure the formation of CFUGM; The expression level of cyclin D3 was assayed by semi-quantitative RT-PCR and Western-blot after the hematopoietic stem/progenitor cells were incubated in AA serum. The results showed that the AA serum could inhibit the formation of CFU-GM and down regulate the expression level of the cyclin D3 at the mRNA and protein level respectively. In conclusion, the AA serum could inhibit the proliferation of hematopoietic stem cells and down regulate level of cyclin D3, which might be one mechanism of hematopoiesis inhibition in AA.     

再生障碍性贫血患者血清抑制CFU-MK的增殖及调控

目的:探讨再生障碍性贫血(再障)患者血小板减少的原因,建立模型并寻找治疗对策。方法:应用甲基纤维素半固体体外培养法建立CFU-MK培养体系;混合再障血清进行培养建立再障患者血小板减少的模型;使用不同的造血细胞生长因子进行组合观察模型中CFU-MK集落生成情况和集落中巨核祖细胞的含量。结果:经过14d的培养,模型组CFU-MK集落、集簇数量明显低于正常对照组,以TPO/IL-3/IL-11/FL细胞因子组合使模型组CFU-MK的数量恢复及巨核细胞的扩增效果最好。结论:本实验建立了CFU-MK体外培养体系及再障血小板减少的模型,体外试验表明治疗再障血小板减少以TPO/IL-3/IL-11/FL为最佳组合。     

CD34+干细胞的分化及其在人工血管内皮化中的应用

目的:探讨外周血、骨髓和脐血中CD34 细胞作为人工血管内皮化的种子细胞来源问题.方法:采集犬外周血和骨髓及人脐血,经免疫磁珠分离出内皮细胞祖细胞,内皮细胞生长因子(VEGF)诱导分化为内皮细胞并扩增,光镜、扫描电镜和免疫细胞化学鉴定;将培养细胞种植于人工血管,扫描电镜观察.结果:经流式细胞仪测定,分离后的细胞中CD34 细胞:外周血(26.30±2.42)% 、骨髓(41.84±3.65)%、脐血(74.62±4.46)%,骨髓和脐血中CD34 细胞数量明显多于外周血,且增殖、分化能力强;CD34 细胞培养2周细胞长满瓶底并达到增殖高峰,细胞呈"铺路石"状排列.Ⅷ因子,CD31免疫细胞化学染色均为阳性,透射电镜细胞胞浆内可见W-P小体;扫描电镜下,内皮细胞平铺于人工血管表面,成单层排列,细胞排列无轴向性.结论:外周血、骨髓和脐血经免疫磁珠分离系统可分离出CD34 细胞,CD34 细胞经VEGF诱导可定向分化为内皮细胞.骨髓和脐血CD34 细胞可作为人工血管内皮化的种子细胞来源.     

四种不同组织来源LAK细胞的体外扩增及抗肿瘤作用的比较

目的：比较四种不同组织来源LAK细胞的体外扩增及抗肿瘤作用。方法：选用脐带血制备LAK细胞，并与临床常用的外周血、胎脾及胸腺LAK细胞在体外扩增及抗肿瘤作用方面比较。结果：脐带血的扩增能力显著高于其余3种LAK细胞（P＜0．01），每份脐带血LAK细胞总数可增殖至2．5×1010；抗肿瘤活性以脐带血LAK对SMMC-7221肝癌细胞出现最早（第3d）、活性最强（85％±3％），明显强于其余三者（P＜o．01）；对K562的杀伤作用仍属脐带血LAK最强；而胸腺LAK的活性最弱。结论：脐带血LAK细胞体外增殖快，杀伤活性强，可用于肿瘤的过继性免疫治疗。     

再生障碍性贫血患者造血祖细胞及免疫机制的研究

目的探讨再生障碍性贫血(再障)的发病机制。方法采用甲基纤维素及胶原半固体培养法对56例再障骨髓CFU-GM、CFU-E、BFU-E及CFU-M K、BFU-M K进行培养;采用APAAP法及双抗体夹心酶联免疫吸附法(EL ISA)对再障患者外周血T细胞亚群、血清sIL-2R进行检测。结果再障患者CFU-GM、CFU-E、BFU-E及CFU-M K、BFU-M K集落数均低于对照组,且严重型再障集落数减少程度与慢性再障相近;再障患者CD 3亚群细胞无变化,CD 4亚群细胞减低,CD 8亚群细胞增高,CD 4/CD 8降低,重型再障患者血清sIL-2R中水平高于正常对照组与慢性再障。结论骨髓造血祖细胞数量减少是再障发病的重要因素,其减少程度与再障的病情有关;细胞免疫功能异常及造血负调控因子可能在再障发病中起一定的作用。     

再生障碍性贫血患者骨髓CFU-GM及血清细胞毒试验18例临床分析

目的 :探讨再生障碍性贫血 (简称再障 )的体液免疫抑制发病机理。方法 :对 18例再障患者 (急性再障 6例、慢性再障 12例 )进行骨髓CFU GM培养及血清细胞毒试验。结果 :16例骨髓CFU GM培养集落数明显低于正常对照组(P <0 0 1) ,15例存在有造血干细胞缺陷、细胞和体液免疫异常及微环境异常 ,病人血清经 5 6℃ 30min水浴灭活前后对正常骨髓CFU GM的刺激作用明显不一 ,而且在同属于造血干细胞缺陷的病例中急性再障与慢性再障比较也有显著性差异。结论 :骨髓CFU GM及血清细胞毒试验在对再障体液免疫抑制发病机理研究中起有协同作用。