雷公藤甲素调节佐剂关节炎大鼠滑膜、脾脏、胸腺组织细胞自噬的实验研究

目的观察雷公藤甲素（TP）对佐剂关节炎（AA）大鼠滑膜脾脏胸腺自噬相关基因（Atg）/自噬标记蛋白（LC3-Ⅱ）、Beclin1表达和血清细胞因子水平的影响。方法将大鼠随机分为4组:正常对照 (NC) 组,模型对照 (MC) 组,来氟米特（LEF）组,雷公藤甲素（TP）组,每组12只,后3组复制成AA大鼠模型。致炎后第13 d开始给药。NC组、MC组给予生理盐水灌胃,每天1 次;LEF组按5 mg/kg的剂量灌胃,每天1次;TP组按50 μg/kg的剂量,每天1次。连续给药30 d。观察大鼠关节及其病理形态学变化,ELISA法检测血清细胞因子B淋巴细胞刺激因子（BAFF）、白介素（IL）-1、肿瘤坏死因子（TNF）-α、IL- 15、IL-10表达,RT-PCR法检测大鼠滑膜、脾脏、胸腺组织 Atg5、 Atg7、 Atg12 mRNA,Western blot法检测大鼠滑膜、脾脏、胸腺组织LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达。结果 治疗后,TP组和LEP组大鼠足跖肿胀度（E）和关节炎指数较MC组降低。与NC组比较,MC组大鼠血清BAFF、IL-1、TNF-α升高,IL-15、IL-10降低,滑膜 Atg5、 Atg12mRNA降低,脾脏 Atg5mRNA降低,脾脏 Atg7、 Atg12mRNA及胸腺 Atg12mRNA升高,滑膜、脾脏、胸腺组织LC3-Ⅱ、Beclin1下降（P<0.05或0.01）。与MC组比较,TP组滑膜 Atg7、 Atg12 mRNA降低,脾脏 Atg5、 Atg7、 Atg12 mRNA及胸腺中 Atg5、 Atg7 mRNA降低, Atg12 mRNA升高;滑膜、脾脏、胸腺组织LC3-Ⅱ、Beclin 1升高（P<0.05）。与LEF组比较,TP组TNF-α、BAFF降低,E、IL-15升高（P<0.05或0.01）。TP组滑膜 Atg7mRNA及胸腺 Atg5、 Atg7 mRNA表达降低,胸腺 Atg12mRNA及脾脏 Atg5、 Atg7、 Atg12mRNA表达升高。结论TP通过调节滑膜、胸腺、脾脏组织细胞自噬,改善关节滑膜炎症反应。     

芍药苷通过激活Nrf2/Keap1信号通路改善脓毒症急性肺损伤的研究

  目的  探讨芍药苷（paeoniflorin, PF）对脓毒症所致急性肺损伤的影响及其与转录因子NF-E2相关因子2（nuclear factor erythyroid 2-related factor 2, Nrf2）/Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（Keap1）信号通路的关系。  方法  采用盲肠结扎穿孔（CLP）术诱导建立脓毒症大鼠模型。将大鼠随机分成假手术组（Sham）、模型组（Model）、低剂量PF组（L-PF,50 mg/kg）、高剂量PF组（H-PF,150 mg/kg）及高剂量PF+Nrf2抑制剂组（H-PF+ML385,150 mg/kg PF+30 mg/kg ML385）,每组10只。采用改良的脓毒症严重程度评分标准对大鼠脓毒症严重程度进行评分;HE染色观察大鼠肺组织病理变化;黄嘌呤氧化酶法测定大鼠肺组织超氧化物歧化酶（SOD）活性;硫代巴比妥酸法测定大鼠肺组织丙二醛（MDA）含量;ELISA法检测肺组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,白介素（IL）-1β和IL-6水平;Western blot和qRT-PCR分别检测肺组织中Nrf2、Keap1、血红素氧合酶1（HO-1）蛋白和mRNA的表达水平。  结果  与Sham组比较,Model组大鼠出现严重的脓毒症;肺组织出现严重炎症浸润,出现大量巨噬细胞,肺间质肿大;肺组织中促炎因子IL-1β、TNF-α、IL-6及氧化指标MDA含量均上升（P<0.05）,而抗氧化指标SOD含量下降（P<0.05）;Nrf2及HO-1蛋白和mRNA表达均降低（P<0.05）,Keap1蛋白和mRNA表达增加（P<0.05）。与Model组比较,PF给药组大鼠脓毒症程度均降低,肺组织损伤均得到改善,肺组织中IL-1β、TNF-α、IL-6及MDA含量均下降（P<0.05）,SOD活性均增加（P<0.05）;Nrf2及HO-1蛋白和mRNA表达均增加（P<0.05）,Keap1蛋白和mRNA表达降低（P<0.05）。与H-PF组比较,Nrf2抑制剂ML385干预后可抑制PF对脓毒症大鼠上述指标的改善。  结论  PF通过激活Nrf2/Keap1信号通路,降低组织氧化应激与炎症水平,改善脓毒症所致的急性肺损伤。     

氢溴酸加兰他敏介导AMPKα1/Nrf2/HO-1通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

  目的  研究氢溴酸加兰他敏（galantamine hydrobromide lycoremine,Gal）介导腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）α1/Nrf2/血红素加氧酶 (heme oxygenase-1, HO-1)通路对心肌缺血再灌注（I/R）大鼠内质网应激型凋亡、心肌凋亡和纤维化的影响。  方法  构建心肌I/R损伤大鼠模型,将大鼠随机分为5组:对照组、I/R 模型组、Gal 1 mg/kg组、Gal 2 mg/kg组、Gal 4 mg/kg组进行后续实验。多普勒超声检测各组大鼠左室射血分数（LVEF）、左心室舒张末期容积（LVEDV）、左心室收缩末期容积（LVESV）、左心室壁厚度（LVWT）、左室短轴缩短率（FS）;HE染色检测心肌组织病理损伤程度;免疫组化检测Caspase-3阳性表达率;RT-PCR检测心肌Caspase-3 mRNA表达;蛋白免疫印迹检测内质网应激因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)、cleaved Caspase-12、生长抑制和DNA损伤诱导蛋白(growth arrest and DNA damageinducible protein 34,GADD34)、免疫球蛋白重链结合蛋白(immunoglobulin heavy-chain-binding protein, BiP)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA )、Collagen Ⅰ、AMPKα1、Nrf2、HO-1蛋白表达水平;并加入AMPK的抑制剂Compound C进行验证。  结果  与I/R 模型组比较,Gal 各组心肌组织病理损伤程度明显改善,cleaved Caspase-3阳性表达率和Caspase-3 mRNA水平表达降低（P<0.05）;Gal 2 mg/kg、Gal 4 mg/kg组LVWT、FS、LVEF升高（P<0.05）,LVEDV、LVESV降低（P<0.05）,CHOP、cleaved Caspase-12、α-SMA、Collagen Ⅰ、AMPKα1、Nrf2、HO-1蛋白表达降低（P<0.05）,GADD34、BiP蛋白表达升高（P<0.05）。加入AMPK抑制剂Compound C后,与I/R模型组相比较,CC 组AMPKα1、Nrf2、HO-1、BiP蛋白水平降低（P<0.05）,CHOP、α-SMA、Collagen Ⅰ蛋白水平升高（P<0.05）,LVESV、FS降低（P<0.05）,Caspase-3 mRNA水平升高（P<0.05）。与CC组比较,CC+Gal 4mg/kg组AMPKα1、Nrf2、HO-1、BiP蛋白水平升高（P<0.05）,CHOP、α-SMA、Collagen Ⅰ蛋白水平降低（P<0.05）,LVESV、FS升高,Caspase-3 mRNA水平降低（P<0.05）。  结论  氢溴酸加兰他敏介导AMPKα1/Nrf2/HO-1通路可调节心肌缺血再灌注大鼠内质网应激型凋亡、心肌凋亡和纤维化。     

姬松茸多糖对D-半乳糖诱导的衰老模型小鼠的抗衰老作用及其Keap1/Nrf2/ARE信号转导途径机制

目的：研究姬松茸酸性多糖A级分（ABP-A）对D-半乳糖（D-Gal）所致衰老模型小鼠的抗衰老作用,并探讨姬松茸多糖（ABP）的抗衰老机制。方法：水提醇沉法提取姬松茸粗多糖,并进行DEAE-纤维素离子交换柱层析分级及成分分析,得到ABP-A。48只ICR雄性小鼠随机分为对照组、模型组、阳性药物（吡拉西坦）组和ABP-A组,每组12只。给药70 d后进行小鼠Morris水迷宫、避暗和跳台行为学实验;检测各组小鼠血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）水平、总抗氧化能力（T-AOC）、过氧化氢酶（CAT）活性和活性氧（ROS）水平,Western blotting法检测各组小鼠脑组织中Nrf2、Keap1和HO-1蛋白表达水平。结果：ABP的总糖含量为75.1%,DEAE-纤维素离子交换柱层析分级得到ABP-A。行为学实验,与模型组比较,ABP-A组小鼠避暗潜伏期明显延长（P<0.05）,错误次数明显减少（P<0.05）,跳台潜伏期明显延长（P<0.05）,错误次数明显减少（P<0.05）,定位航行潜伏期明显缩短（P<0.05）,进入平台次数明显增加（P<0.05）。生化指标检测,与模型组比较,ABP-A组小鼠血清中SOD和CAT活性升高（P<0.05）,T-AOC升高（P<0.05）,MDA和ROS水平降低（P<0.05）。Western blotting法,与模型组比较,ABP-A组小鼠脑组织中HO-1蛋白表达水平升高（P<0.05）,Nrf2和Keap1蛋白表达水平降低（P<0.05或P<0.01）。结论：ABP可改善衰老模型小鼠学习记忆能力,其机制可能与调节以Nrf2为核心的Keap1/Nrf2/ARE氧化应激通路相关因子Nrf2、Keap1和HO-1发挥抗衰老作用有关。     

基于Keap1/Nfr2/ARE信号通路研究机械相关性肺损伤分子机制

  目的  探索基于Keap1/Nfr2/ARE信号通路探索呼吸机相关肺损伤（ventilation induced lung injury,VILI）形成的分子机制。  方法  给予SD大鼠过度机械通气建造VILI模型;HE染色检测对照组、正常潮气量（VT）组（VT为8 mL/kg）、大VT组（VT为40 mL/kg）肺组织病理变化;检测各组肺组织湿重/干重（W/D）比值变化;BCA法检测各组支气管肺泡灌洗液（BALF）中总蛋白的变化;ELISA法检测各组BALF和血清中白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素-8（IL-18）以及肺组织中8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）的水平变化;TBA法检测肺组织中丙二醛（MDA）水平变化;Western bloting实验检测巨噬细胞中Nod样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、caspase-1蛋白以及肺组织中Keap1、Nrf2蛋白的变化;逆转录PCR检测各组肺组织中SOD mRNA、HO-1 mRNA表达变化。  结果  过度机械通气可损伤肺组织,导致肺泡破裂、炎症细胞浸润和红细胞增多;与对照组和正常VT组相比,大VT组肺组织W/D值、8-OHdG和MDA水平、BALF中总蛋白、IL-1β、IL-18以及血清中IL-1β、IL-18水平均显著上升（P均<0.05）,肺泡巨噬细胞中NLRP3、ASC、caspase-1蛋白以及肺组织中Keap1蛋白表达上升（P均<0.05）,肺组织中Nrf2蛋白、SOD mRNA、HO-1 mRNA表达下降。  结论  大VT通气可以使肺组织发生急性炎症性损伤并导致VILI的发生,其机制为过度通气引起Keap1/Nrf2-ARE通路抑制和活性氧（ROS）清除能力的下降,进而引起肺巨噬细胞产生NLRP3炎症小体,参与VILI的形成。     

硫化氢通过抑制ROS介导的内质网应激改善脓毒症心肌损伤的研究

  目的  探讨硫化氢（H₂S）对脓毒症心肌损伤中活性氧（ROS）介导的内质网应激的影响。  方法  采用盲肠结扎穿刺术（CLP）诱导SD大鼠脓毒症模型,将大鼠随机分成假手术（sham）组、脓毒症（CLP）组、脓毒症+硫氢化钠（NaHS）（CLP+NaHS）组。超声心动图观察各组大鼠左心室功能,检测大鼠血浆H₂S的水平;通过乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）水平检测以及ROS染色评估大鼠心肌氧化应激水平;HE染色观察大鼠心肌组织形态变化,透射电子显微镜观察心肌细胞线粒体超微结构;Western blot检测细胞内源性硫化氢合成酶半胱硫氨酸-γ-裂解酶（CSE）、3-巯基丙酮酸硫转移酶（3-MST）表达变化,内质网应激标志性蛋白:磷酸化（p）-激酶蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、p-细胞翻译启始因子2α（eIF2α）、p-肌醇需要酶1α（IRE1α）、活化转录因子（ATF）4和C/EBP同源蛋白（CHOP）的表达变化;TUNEL染色观察大鼠心肌细胞凋亡变化。   结果  脓毒症大鼠左室射血分数（LVEF）、左心室缩短分数（LVFS）降低（P<0.05）,血浆H₂S降低（P<0.05）,血浆H₂S与LVEF和LVFS呈线性相关（r2=0.62、r2=0.64,P均<0.05）。脓毒症组大鼠ROS水平明显增强,LDH水平增高（P<0.05）,MDA表达增强（P<0.05）,GSH表达下降（P<0.05）;在HE染色中可见炎性细胞浸润,心肌细胞水肿,透射电子显微镜可观察到线粒体明显损伤,可见线粒体水肿,嵴结构溶解等情况;Western blot结果显示,CSE、3-MST表达水平有所下降（P<0.05）,内质网应激标志性蛋白p-PERK、p-eIF2α、IRE1α、ATF4和CHOP蛋白表达水平升高（P<0.05）;TUNEL染色结果显示心肌细胞凋亡水平明显增加（P<0.05）。NaHS处理后,LVEF和LVFS升高（P<0.05）,血浆H₂S升高（P<0.05）。心肌氧化应激水平降低,HE与透射电镜显示心肌形态学有改善,线粒体损伤减轻,CSE、3-MST水平升高（P<0.05）,p-PERK、p-eIF2α、IRE1α、CHOP蛋白表达下降（P<0.05）,心肌细胞凋亡水平有所下降（P<0.05）。  结论  H₂S通过抑制ROS介导的内质网应激,减少脓毒症心肌细胞凋亡,从而改善脓毒症心肌功能障碍。     

丙泊酚后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的改善作用及其机制

目的 探讨丙泊酚后处理对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的改善作用及其对脑线粒体损伤的保护作用,阐明其作用机制。 方法 24只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和丙泊酚后处理组,每组8只。模型组和丙泊酚后处理组大鼠采用结扎颈动脉法建立大脑中动脉阻塞局灶性脑缺血再灌注模型,丙泊酚后处理组大鼠于再灌注即刻股静脉输注20 mg·kg^－1·h^－1丙泊酚2 h,假手术组和模型组大鼠给予等量生理盐水。各组大鼠于再灌注24 h后进行神经功能缺损评分,采用HE染色法观察各组大鼠海马组织病理形态表现,采用相关试剂盒检测各组大鼠海马组织中氧化应激相关因子活性和水平,采用活性氧（ROS）荧光探针检测各组大鼠脑海马组织中ROS水平,采用TUNEL法检测各组大鼠海马组织中TUNEL阳性细胞率,采用Western blotting法检测各组大鼠海马组织中线粒体裂变、融合和生物发生相关蛋白及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸酯氧化酶4（Nox4）和核因子E2相关因子2（Nrf2）蛋白表达水平,免疫荧光法检测各组大鼠海马组织中Nrf2蛋白表达水平。 结果 与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分明显升高（P<0.05）,大鼠海马组织病理损伤明显,海马组织中超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性和总抗氧化力（T-AOC）水平明显降低（P<0.01）,丙二醛（MDA）和ROS水平及TUNEL阳性细胞率明显升高（P<0.05）,动力相关蛋白1（DRP1）、裂变蛋白1（Fis1）、Nox4和Nrf2蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,视神经萎缩症蛋白1（OPA1）、线粒体融合蛋白2（Mfn2）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α（PGC-1α）和线粒体转录因子 A（TFAM）蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;与模型组比较,丙泊酚后处理组大鼠神经功能缺损评分明显降低（P<0.05）,大鼠海马组织病理损伤明显改善,大鼠海马组织中SOD及GSH-Px活性和T-AOC水平明显升高（P<0.05）,MDA 水平、ROS水平和TUNEL阳性细胞率明显降低（P<0.05）,DRP1、Fis1和Nox4蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,OPA1、Mfn2、PGC-1α、TFAM和Nrf2蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。 结论 丙泊酚后处理可抑制脑缺血再灌注损伤大鼠海马组织细胞凋亡和氧化应激,促进线粒体融合和生物发生并抑制线粒体裂变,改善大鼠神经功能损伤,其机制可能与调控Nox4/Nrf2信号通路有关。     

苍艾挥发油对左心室重构大鼠的改善作用研究

  目的   采用7T心脏磁共振组织追踪成像（CMR-TT）评估苍艾挥发油（CAVO）对异丙肾上腺素（ISO）所诱导的左心室重构（LVR）模型大鼠的改善作用,并初步探讨其对LVR内皮功能障碍的影响。   方法   将35只SD雄性大鼠随机分成两组,即正常对照组（8只）和实验组（27只）,通过ISO 10 mg·kg?1·d?1连续10 d 皮下多点注射建立LVR大鼠模型。造模结束后将实验组存活大鼠（24只）再次随机分为空白实验组、苍艾挥发油组、麝香保心丸组（每组8只）,各组连续给予相应药物或等量生理盐水灌胃28 d,分别在造模结束后和灌胃结束后行7T CMR电影序列扫描,并应用后处理软件CVI42进行图像分析,对比各组大鼠用药前后左心室结构和功能参数的变化。磁共振扫描结束后处死大鼠,摘取心脏行病理学检查,ELISA检测血清生化指标。   结果   苍艾挥发油可明显提高LVR大鼠的左心室射血分数和整体心肌应变参数,降低左心室容积、质量和血清中内皮功能指标水平,同时病理染色显示心肌细胞肥大、坏死以及间质纤维化也得到明显改善。   结论   CAVO通过对心肌血管内皮功能的调控,可明显改善LVR大鼠心功能,延缓心室重构进程,对大鼠心脏结构和功能具有一定的保护作用。     

金丝桃苷通过激活Keap1/Nrf2/HO-1通路保护小鼠GC-2细胞的氧化损伤

目的 从Keap1/Nrf2/HO-1通路角度研究金丝桃苷（Hyp）对H2O2所诱导的小鼠精母细胞（GC-2）氧化损伤的保护作用。方法 将GC-2细胞随机分为正常组、模型组、氮乙酰半胱氨酸组（阳性组,NAC,2.5 mmol/L)以及金丝桃苷组（50、100、200 μmol/L）,各组按剂量孵育48 h后,除正常组外其余各组细胞加入H2O（2 150 μmol/L）处理2 h,正常组给予等容量培养基。采用CCK-8法检测细胞的活力,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,酶联免疫法检测超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、过氧化氢酶（CAT）活力以及丙二醛（MDA）含量,Western blot和RT-qPCR检测Nrf2、Keap1、HO-1蛋白及mRNA的相对表达水平,免疫荧光法检测Nrf2核转位水平。结果 150 μmol/L H2O2干预2 h可制备GC-2细胞氧化损伤模型。与正常组比较,模型组GC-2细胞增殖率以及SOD、GSH、CAT活力显著降低,MDA含量、细胞凋亡率,Keap1和Nrf2 mRNA表达显著升高（P<0.05）以及Keap1蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,NAC组和金丝桃苷200 μmol/L组细胞增殖率和SOD、GSH-PX、CAT活力显著升高,MDA含量、细胞凋亡率显著下降（P<0.05）;金丝桃苷200 μmol/L组Keap1 mRNA表达显著下降,HO-1 mRNA表达显著升高（P<0.01）;金丝桃苷200 μmol/L组Nrf2核蛋白（NEs-Nrf2）以及HO-1的蛋白表达显著升高（P<0.05）,Keap1蛋白表达显著下降（P<0.01）;金丝桃苷组出现了明显的核转位现象（P<0.05）。结论 金丝桃苷可能通过激活Keap1/Nrf2/HO-1信号通路,对H2O2诱导的GC-2细胞氧化损伤具有保护作用。     

定量组织速度成像技术评价罗格列酮对心力衰竭大鼠的防治作用

目的利用定量组织速度成像技术评价过氧化酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）配体罗格列酮（ROS）对实验性心力衰竭大鼠的防治作用。方法60只雄性Wistar大鼠分三组：①心力衰竭模型组（CHF,n=25）,阿霉素2.5 mg/kg,尾静脉注射,每周1次,连续10周;②心力衰竭模型＋罗格列酮治疗组（ROS,n=25）,ROS 3 mg/kg,每天1次,灌胃治疗;③正常对照组（CON,n=10）。12周时进行M型超声和定量组织速度成像技术及血流动力学检测,放射免疫法检测血浆肿瘤坏死因子-α、血管紧张素Ⅱ及醛固酮水平。结果ROS组较CHF组死亡率明显降低（分别为20%和40%,P〈0.01）。与CON组相比,CHF组大鼠左室舒张末期内径（LVEDD）及收缩末期内径（LVESD）增加,心功能明显下降,表现为左室短轴缩短率（FS）、二尖瓣环收缩期长轴方向峰值运动速度（Vs）、左室压最大上升速率（＋dp/dtmax）、左室内压最大下降速率（-dp/dtmax）明显降低,左室舒张末期压（LVEDP）升高（P〈0.01）;ROS组左室内径增加程度降低,心功能各项指标改善。CHF组血浆肿瘤坏死因子-α、血管紧张素Ⅱ及醛固酮水平较CON组升高（P〈0.01）,而ROS治疗组降低（P〈0.01）。结论定量组织速度成像技术可无创评价PPARγ配体罗格列酮逆转心力衰竭大鼠左室重构改善心功能的作用。     

UHRF1调控雌激素受体表达对甲状腺乳头状癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

  目的  观察泛素样含PDH和环指域1 (UHRF1)对雌激素受体（ER）α和ERβ表达比率的影响,探讨UHRF1影响甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移的机制。  方法  应用Western blot、实时荧光定量（qRT）-PCR检测正常甲状腺细胞Nthy-ori3-1和甲状腺乳头状癌细胞BCPAP中UHRF1、ERα和ERβ的蛋白及mRNA表达。分别用Scrambled siRNA、UHRF1 siRNA处理BCPAP细胞,qRT-PCR检测各组细胞中ERα和ERβ的mRNA表达;MTT、Transwell分别检测各组细胞增殖、侵袭和迁移。  结果  与Nthy-ori3-1细胞相比,BCPAP细胞中UHRF1和ERα蛋白及mRNA表达水平上调（P<0.05）,而ERβ蛋白和mRNA表达水平下调（P<0.05）。与空白对照组和Scrambled siRNA组相比,转染UHRF1 siRNA的BCPAP细胞中ERα mRNA表达降低（P<0.05）,ERβ mRNA表达升高（P<0.05）;转染UHRF1 siRNA的BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移降低（P<0.05）。  结论  UHRF1可上调ERα/ERβ的表达比率,促进甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移。     

阿托伐他汀通过Nrf2/HO-1改善慢性心力衰竭大鼠心功能的作用及机制研究

目的 研究阿托伐他汀通过核因子 E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)改善慢性心力衰竭(CHF)大鼠心功能的作用及机制研究。方法 将成年SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术(SHAM)组、CHF组、阿托伐他汀组、二甲基亚砜(DMSO)+SHAM组、DMSO+CHF组、DMSO+阿托伐他汀组、Nrf2抑制剂(ML385)+阿托伐他汀组,每组各8只大鼠。采用腹主动脉缩窄法建立CHF模型或进行假手术操作,造模后给予10 mg/kg阿托伐他汀、30 mg/kg Nrf2抑制剂ML385或等体积的DMSO溶剂灌胃干预。给药8周后采用超声仪检测各组大鼠心功能参数左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、左心室舒张末期内径(LVEDD),左心室收缩末期内径(LVESD),观察心脏大体形态并检测心脏质量、心脏体质量比,取左心室心肌组织检测丙二醛(MDA)、8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHdG)、总抗氧化力(T-AOC)的水平及Nrf2、HO-1的表达。结果 腹主动脉缩窄法造模后,CHF组的LVEDD、LVESD、心脏质量、心脏体质量比及心肌中MDA、8-OHdG的水平均高于SHAM组,LVEF、LVFS、心肌中T-AOC水平及Nrf2、HO-1表达水平均低于SHAM组(P<0.05);经阿托伐他汀干预后,阿托伐他汀组的LVEDD、LVESD、心脏质量、心脏体质量比及心肌中MDA、8-OHdG的水平均低于CHF组,LVEF、LVFS、心肌中T-AOC水平及Nrf2、HO-1表达水平均高于CHF组(P<0.05);阿托伐他汀干预的同时给予Nrf2抑制剂ML385,ML385+阿托伐他汀组的LVEDD、LVESD、心脏质量、心脏体质量比及心肌中MDA、8-OHdG的水平均高于DMSO+阿托伐他汀组,LVEF、LVFS、心肌中T-AOC水平及Nrf2、HO-1表达水平均低于DMSO+阿托伐他汀组(P<0.05)。结论 阿托伐他汀对CHF大鼠的心功能具有改善作用,这一作用可能与激活Nrf2/HO-1通路、减轻氧化应激反应有关。     

金雀异黄酮对糖尿病大鼠心肌Nrf2/HO-1通路的影响

目的：观察金雀异黄酮(genistein,Gen)对糖尿病大鼠心肌组织核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/血红素氧化酶1(heme oxygenase-1,HO-1)通路的影响。 方法：将32只雄性SD大鼠随机分为 4组：正常对照(NC)组、糖尿病对照(DM)组、低剂量Gen治疗(L-Gen)组和高剂量Gen治疗(H-Gen)组(n=8)。采用腹 腔注射55 mg/kg链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型。造模成功后,L-Gen组和H-Gen组大鼠分别灌胃给予Gen溶液10 和50 mg/kg。8周后,测定各组大鼠左心室动力学指标和空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)水平;测定心肌组织丙 二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)水平;采用透射电镜观察心肌超微结构变化;RT-PCR检测心肌组织 HO-1 mRNA表达,蛋白质印迹法检测Nrf2和HO-1蛋白表达。结果：与NC组比较,DM组左心室收缩压(left ventricular systolic pressure,LVSP),左心室内压最大上升/下降速率(maximal rise/fall rate of left ventricular pressure,±dp/dtmax), GSH-Px,SOD和CAT水平明显降低(均P<0.01);左心室舒张末期压(left ventricular end-diastolic pressure,LVEDP), FBG和MDA水平明显增高(均P<0.01);心肌超微结构损伤明显,心肌组织Nrf2和HO-1表达明显降低(均P<0.01)。与 DM组比较,L-Gen组FBG无显著差异,±dp/dtmax和LVSP明显升高(均P<0.05),LVEDP和MDA水平明显下降(P<0.05或 P<0.01),GSH-Px,SOD和CAT活性明显增高(P<0.05或P<0.01),心肌超微结构损伤减轻,Nrf2和HO-1表达升高(均 P<0.01);H-Gen组上述指标改善更明显(P<0.05或P<0.01)。 结论：金雀异黄酮可减轻糖尿病大鼠心肌氧化应激损伤, 其机制与调节心肌Nrf2/HO-1通路,提高抗氧化酶活性相关。     

基于ROS-NLRP3通路探讨麦粒灸治疗佐剂性关节炎大鼠的作用及机制

目的 探讨麦粒灸通过调控ROS-NLRP3炎性通路从而对类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis, RA)发挥抗炎镇痛效应的分子机制。方法 将47只雄性SD大鼠通过SPSS软件随机程序分为空白组、模型组、模型艾灸组、ROS过表达组、ROS过表达艾灸组。其中空白组7只,其余4组每组10只。对空白组大鼠从右后足垫进行皮内注射无菌生理盐水,其余通过右后足垫皮内注射弗氏完全佐剂(Freund’s complete adjuvant, FCA)诱导关节炎(Adjuvant arthritis, AA)大鼠模型。FCA造模后,ROS过表达组和ROS过表达艾灸组于造模后第2天皮下注射鱼藤酮油溶液(1.5 mg·kg^-1)制备ROS过表达模型。模型艾灸组和ROS过表达艾灸组造模后7 d取大鼠足三里穴、肾俞穴进行麦粒灸治疗,各穴5壮,两侧交替。艾灸治疗6天为1个疗程,疗程之间休息1 d,共治疗3个疗程。空白组、模型组及ROS过表达组按同法固定,不予艾灸治疗。造模、治疗前后观察大鼠足跖肿胀度、热痛阈及屈腿嘶鸣评分变化;治疗结束后取材,采用ELISA法检测大鼠血清中IL-...     

KLF4上调角质形成细胞中Keratin 17表达的分子机制

  目的  通过探讨转录因子KLF4在调节角蛋白17（Keratin 17, KRT17）表达中的作用,揭示银屑病患者皮损中KRT17过度表达的分子机制。  方法  以18例寻常型银屑病患者皮损组织为银屑病组,10例健康人皮肤为对照组。采用实时荧光定量PCR和Western blot检测银屑病皮损组织及正常皮肤标本中KLF4的表达水平,检测HaCat细胞中KLF4过表达叠加组蛋白乙酰转移酶EP300（E1A binding protein p300,EP300）干扰后KRT17的表达水平。染色质免疫共沉淀（chromatin immunoprecipitation, ChIP）检测银屑病皮损组织及正常皮肤样本中KRT17启动子区KLF4结合水平及组蛋白H3乙酰化水平,检测HaCat细胞中KLF4过表达叠加EP300干扰后KRT17启动子区KLF4结合水平及组蛋白H3乙酰化水平。免疫共沉淀（co-immunoprecipitation, Co-IP）检测KLF4与EP300的相互作用。  结果  银屑病组皮损组织KLF4表达水平、KRT17启动子区KLF4结合水平及组蛋白H3乙酰化水平均高于对照组皮肤标本（P<0.01）。与转染对照组相比,KLF4过表达组KRT17表达水平升高（P<0.01）;KLF4过表达叠加EP300干扰组KRT17表达水平低于KLF4过表达组（P<0.01）和转染对照组（P<0.05）。与转染对照组相比,KLF4过表达组KRT17启动子区组蛋白H3乙酰化水平升高（P<0.01）;KLF4过表达叠加EP300干扰组KRT17启动子区组蛋白H3乙酰化水平低于KLF4过表达组（P<0.01）和对照组（P<0.01）。Co-IP证实KLF4与EP300能形成蛋白复合体。  结论  过度表达的KLF4通过协同EP300上调KRT17启动子区组蛋白H3乙酰化水平,介导银屑病患者皮损中KRT17的过度表达。