原花青素对β-淀粉样肽25-35诱导PC12细胞par-4 和bcl-2基因表达的影响

目的探讨原花青素(PC)对β-淀粉样肽(Aβ25-35)诱导凋亡PC12细胞par-4和bcl-2基因mRNA和蛋白表达的影响。方法采用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst33258-PI荧光染色法检测细胞凋亡,RT-PCR方法检测PC12细胞par-4和bcl-2基因mRNA的表达,Westernblotting检测PC12细胞Par-4和Bcl-2蛋白表达。结果不同剂量(5、10、20、30mg/L)PC预处理PC12细胞1h可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的细胞凋亡,提高PC12细胞的存活率,减少Aβ25-35引起的PC12细胞核固缩、凝聚和碎裂,降低par-4基因mRNA表达及蛋白表达,增加bcl-2基因mRNA表达及蛋白表达。结论PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用,其机制可能与下调凋亡基因par-4和上调抗凋亡基因bcl-2表达有关。     

Par-4基因沉默对人骨髓间充质干细胞中Smac基因表达和半胱氨酸蛋白水解酶3酶活性的影响及其抗凋亡作用

目的 研究Par-4基因沉默对人骨髓间充质干细胞(hBMSC)中Smac基因表达和半胱氨酸蛋白水解酶(Caspase)3酶活性的影响及其抗凋亡作用.方法 原代培养hBMSC.谷氨酸诱导hBMSC凋亡.设计和合成两对针对Par-4基因mRNA的小RNA干扰(siRNA)序列(Par-4-SiRNA-1、2),构建真核细胞表达载体,用脂质体介导转染hBMSC,利用G418筛选稳定表达细胞株.实时荧光定量PCR法检测Par-4 mRNA表达水平.流式细胞术测定细胞凋亡百分率.Western印迹测定Smac蛋白表达量.比色法测定Caspase-3酶的活性.结果 设计的Par-4-SiRNA-1、2可显著诱导hBMSC中Par-4基因沉默,Par-4 mRNA水平分别被降低88%、67%,谷氨酸诱导hBMSC凋亡,凋亡百分率为(58.9±8.9)%.Par-4-SiRNA-1可显著拮抗谷氨酸的诱导凋亡作用,凋亡百分率降为(37.2±6.3)%(F=58.26,P＜0.01).Par-4-SiRNA-1对谷氨酸诱导的hBMSC中Smac蛋白表达上调(P＜0.01)和Caspase-3酶活性上调(P＜0.01)有显著的抑制作用(P＜0.01).结论 Par-4基因沉默能拮抗谷氰酸对hBMSC凋亡的诱导作用.其机制可能与Smac基因表达和Caspase-3酶活性被抑制有关.     

天麻素通过下调ERK1/2-p38信号通路保护谷氨酸损伤的PC12细胞

目的研究天麻素(gastrodin,Gas)通过调控ERK1/2-p38信号通路保护谷氨酸损伤的PC12细胞。方法建立谷氨酸损伤的PC12细胞模型;甲基噻唑基四唑比色法测定细胞活力;Hochest 33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态;罗丹明123染色流式细胞术检测细胞线粒体膜电位;Western blot法检测细胞内p38、ERK1/2、p-p38、p-ERK1/2蛋白表达。结果天麻素明显抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,在0.1～10μmol/L剂量范围内呈一定的量效关系;天麻素升高谷氨酸损伤引起的细胞线粒体膜电位的降低,下调p-p38、p-ERK1/2蛋白的表达。结论天麻素对谷氨酸损伤的PC12细胞具有保护作用,其机制可能与升高线粒体膜电位水平,下调p-p38、p-ERK1/2蛋白表达,抑制细胞凋亡有关。     

H_2O_2通过上调P38的活性而诱导PC12细胞凋亡

目的:探讨H2O2是否通过调节P38MAPK的活性而诱导PC12细胞凋亡。方法:碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡;Western-Blot测定磷酸化ERK1/2蛋白和磷酸化p38蛋白的表达。结果:作用PC12细胞24h后,20～80μmol/L的H2O2可呈浓度依赖性地诱导PC12细胞凋亡并增加PC12细胞P38磷酸化的水平;P38特异性抑制剂SB203580(10或20μmol/L)预处理30min可显著减轻40μmol/LH2O2对PC12细胞凋亡的诱导作用。结论:H2O2通过上调P38的活性而诱导PC12细胞凋亡。     

人神经干细胞微囊泡对谷氨酸诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的: 探究人神经干细胞微囊泡(human neural stem cell microvesicles, hNSC-MVs)对谷氨酸诱导PC12细胞损伤的作用及可能机制。方法: 采用谷氨酸处理大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC12细胞，建立兴奋性损伤模型；实验分为3组：对照组，PC12细胞未经任何处理；谷氨酸组，谷氨酸处理PC12细胞24 h；hNSC-MVs+谷氨酸组，200 mg/L hNSC-MVs预处理PC12细胞24 h，再加入谷氨酸处理24 h。MTT法检测各组PC12细胞存活率；免疫印迹实验检测细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达。结果： PC12细胞能内化hNSC-MVs。谷氨酸对PC12细胞具有毒性作用，其半数抑制浓度为25 mmol/L。与谷氨酸组相比，hNSC-MVs+谷氨酸组PC12细胞存活率明显增高(P<0.01)。与对照组相比，谷氨酸组Bax蛋白表达显著升高，Bcl-2蛋白表达显著降低，而与谷氨酸组相比，hNSC-MVs+谷氨酸组Bax蛋白表达明显下调，Bcl-2蛋白表达明显上调(P均<0.01)。结论： hNSC-MVs可能通过抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡，从而发挥保护作用。     

参附注射液对氧化应激血管内皮损伤及相关信号转导通路的影响

目的  研究参附注射液对氧化应激血管内皮损伤的作用及相关信号转导通路的影响。方法  培养血管内皮细胞ECV304,MTT法筛选H₂O₂造模和参附注射液的干预浓度;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量;Hoechst染色和流式细胞术检测评估细胞凋亡;Western blot法检测Cleaved Caspase-3、ERK、p-ERK、Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果  H₂O₂呈浓度依赖性诱导ECV304细胞死亡;H₂O₂促进ECV304细胞内ROS含量增加,参附注射液或N-乙酰半胱氨酸(NAC)可拮抗此过程;与对照组比较,H₂O₂能够诱导ECV304细胞凋亡,增加ERK和Caspase-3的活化,下调Bcl-2/Bax表达;与模型组比较,参附注射液或NAC能拮抗H₂O₂诱导的ECV304细胞凋亡,抑制ERK与Caspase-3的活化,上调Bcl-2/Bax表达(P < 0.05)。结论  参附注射液通过抑制ERK磷酸化和Caspase-3活化,上调Bcl-2/Bax表达,拮抗H₂O₂诱导的ECV304细胞凋亡。      

热休克蛋白27通过降低内质网应激抑制硼替佐米诱导的骨髓瘤细胞凋亡

目的 探讨多发性骨髓瘤(MM)细胞热休克蛋白27(HSP27)表达对硼替佐米诱导凋亡的影响及机制。 方法 人MM细胞株U266细胞暴露于硼替佐米,实时荧光定量PCR检测HSP27 mRNA,蛋白质印迹法检测HSP27、磷酸化-HSP27(p-HSP27)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(p-PERK)、活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3/9(cl-Caspase 3/9)表达。收集12例初治和10例复发MM患者骨髓瘤细胞,荧光原位杂交法检测染色体异常,比较HSP27 mRNA和蛋白表达差异。将U266细胞分为观察组和对照组,分别转染HSP27-siRNA和NC-siRNA,流式细胞术检测硼替佐米诱导的细胞凋亡率。慢病毒介导HSP27基因在U266细胞过表达,蛋白质印迹法检测硼替佐米诱导的GRP78和cl-Caspase 3表达。 结果 硼替佐米暴露显著上调U266细胞HSP27 mRNA和蛋白的表达(P<0.01),上调GRP78和p-PERK表达(P<0.05),活化Caspase-3和Caspase-9(P<0.05); 4-苯基丁酸预处理显著抑制硼替佐米诱导的Caspase-3和Caspase-9活化(P<0.01)。复发MM患者HSP27 mRNA和蛋白的表达显著高于初治MM患者(P<0.01)。沉默HSP27表达显著增加硼替佐米诱导的U266细胞凋亡(P<0.01)。慢病毒介导HSP27过表达显著抑制硼替佐米诱导的GRP78表达和Caspase-3活化(P<0.01)。 结论 HSP27负反馈抑制内质网应激,减少硼替佐米诱导的MM细胞凋亡。     

千层纸素诱导人慢性粒细胞白血病K562的凋亡作用

探讨千层纸素对人慢性粒细胞白血病细胞K562的凋亡诱导作用及其可能机制。采用MTT法检测细胞存活率;电镜下观察细胞超微结构的改变;DAPI染色观察细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法分析凋亡相关蛋白caspase 9、survivin及ERK1/2的表达变化情况。结果表明千层纸素呈浓度依赖地抑制K562细胞的增殖作用,诱导K562细胞发生凋亡,上调 K562细胞中cleaved-caspase 9蛋白,下调survivin、pro-caspase 9及p-ERK1/2蛋白的表达水平。千层纸素可诱导K562凋亡,这可能与下调survivin蛋白表达,激活caspase 9蛋白,抑制ERK信号通路有关。     

越鞠丸对帕金森病体外模型的神经保护作用研究

目的?研究越鞠丸醇提物（YJ-E）对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶离子（MPP+）所致大鼠嗜铬细胞（PC12）损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法?PC12细胞给予1?mmol/L MPP+,制备帕金森病（PD）离体模型。应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞活力,Hoechst染色法观察细胞凋亡,观察YJ-E对PC12细胞的保护作用。应用Western blotting检测垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）的表达及细胞外调节蛋白激酶（ERK）、环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB）的磷酸化水平。结果?3个浓度1.0、2.0、4.0?mg/mL的YJ-E均能显著改善MPP+模型中PC12细胞的存活（P<0.01）,而对正常PC12细胞的存活无显著影响（P>0.05）。同时YJ-E可显著上调MPP+模型中PC12细胞PACAP的表达（P<0.01）,并且显著上调ERK、CREB的磷酸化（P<0.01）。结论?YJ-E对MPP+模型中的PC12细胞具有保护作用,其机制可能是通过上调PACAP的表达及其下游ERK、CREB的磷酸化。      

5-Fu抗结肠癌作用与细胞凋亡及P-gp蛋白表达的关系

目的探讨5-氟尿嘧啶(5-Fu)抗结肠癌作用中,细胞凋亡与P-gp(P-glycoprotein)蛋白表达的关系.方法应用琼脂培养MTT法,测定人结肠癌对抗代谢药的药物敏感性,同时观察5-Fu对结肠癌病人手术前化疗疗效;用S-P免疫组化和图像定量分析技术,测定34例人结肠癌组织中P-gp蛋白表达量;采用末端标记法(TUNEL),检测结肠癌细胞的凋亡指数.结果 (1)P-gp蛋白表达量与5-Fu抗药指数呈正相关(r=0.675,P<0.05).(2)凋亡率与5-Fu抗药指数呈负相关(r=-0.53,P<0.05).(3)以5-Fu抗药指数1.0为界,>1为耐药组,<1为敏感组,两组间P-gp蛋白表达量、凋亡指数差异均有显著性(P<0.05).结论 5-Fu通过诱导细胞凋亡产生抗结肠癌作用,而P-gp蛋白高表达阻碍5-Fu诱导的凋亡.     

反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对喉癌细胞Hep-2增殖的影响

目的:检测端粒酶的反义寡核苷酸对喉癌细胞的影响。Hep-2方法:采用法及平板集落形成实验检测靶向于端MTT粒酶的反义寡核苷酸对喉癌细胞株增殖的抑制作用。用法检测反义寡核苷酸对喉癌细胞株细胞内端粒Hep-2 PCR-ELISAHep-2酶活性的影响。结果:反义寡核苷酸明显抑制了喉癌细胞的增殖,此作用有剂量、时间依赖性。反义寡核苷酸可抑制喉Hep-2癌细胞端粒酶活性,此作用有浓度依赖性。结论:靶向于端粒酶的反义寡核苷酸能抑制喉癌细胞的增殖。Hep-2     

Mcl-1反义寡核苷酸调控Hela细胞生物学功能及对化疗敏感性的影响

目的:探讨髓样细胞白血病-1(myeloid leukemia-1,Mcl-1)基因对宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的调控作用及其对宫颈癌化疗敏感性的影响.方法:通过脂质体瞬时转染Mcl-1反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,AS-ODN)至Hela细胞;用Western印迹检测Mcl-1表...     

前列腺凋亡应答蛋白4促凋亡和肿瘤特异性抑制作用的研究进展

前列腺凋亡应答蛋白4（Par-4）作为促凋亡因子,最先在雄性激素不依赖型前列腺癌细胞（AT-3）中发现。内源性Par-4使癌
细胞对凋亡刺激更敏感化,但是外源性Par-4可选择性地直接导致癌细胞凋亡,并通过基因突变实验发现该活性依赖于它的核
心结构域SAC。Par-4和SAC可特异性地导致癌细胞凋亡,因此是潜在的癌症靶点治疗药物。本文综述了Par-4的发现、结构、
功能及其在细胞内信号通路,最后讨论了Par-4和SAC在癌症临床治疗中的应用前景以及在基础研究和临床应用中存在的问题。     

环氧合酶2反义寡核苷酸对胰腺癌新生血管生成的抑制作用

目的 研究环氧合酶-2反义寡核苷酸（COX-2 AS-ODN）对胰腺癌新生血管生成的抑制作用,探讨前列腺素E2（PGE2）在胰腺癌新生血管生成中的调节作用。方法 设计、合成特异性靶向COX-2 AS-ODN。人胰腺癌PC-3细胞进行体外培养,转染COX-2 AS-ODN后0、12、24、40和72h以荧光显微镜观察细胞情况。第二批PC-3细胞用于研究量-效关系,分为5组：对照组、Lipo组（接种Lopofectin脂质体）、C1组（1μg COX-2 AS-ODN Lipo/孔）。第三批PC-3细胞用于研究时-效关系,接种3μg COX-2 AS-ODN Lipo/孔后观察0、12、24、48和72h。用RT-PCR观察COX-2 mRNA的表达。以Western印迹观察分别加入3μg和9μg COX-2 AS-ODN/瓶后PC-3细胞COX-2蛋白质的表达。18只鸡胚分3组,其绒毛尿囊（CAM）分别接种PC-3细胞以及Lipo、Lipo COX-2 AS-ODN、Lipo COX-2 AS-ODN 前列腺素E2（PGE2）,另6只鸡胚仅接种PC3细胞用作对照。用Leica体视显微镜观察新生血管生成情况。结果 RT-PCR示随转染COX-2 AS-ODN浓度的增加,PC3细胞的COX-2 mRNA表达逐渐下调（直到COX-2 AS-ODN浓度为0.2μmol/L时）。COX-2 AS-ODN的作用于12h后最强,以后渐弱,48h后基本消失。Western印迹表明COX-2 AS-ODN转染组的COX-2蛋白质表达受抑制,9μg COX-2 AS-ODN/瓶组的抑制强于3μg COX-2 AS-ODN/瓶组。Lipo COX-2 AS-ODN组鸡胚CAM移植肿瘤中的新生血管生成密度明显低于Lipo组;Lipo COX-2 AS-ODN PGE2组的新生血管密度介于以上两组之间。结论 COX-2 AS-ODN显著抑制胰腺癌新生血管的生成。内源性COX-2参与对胰腺癌新生血管生成的调节,PGE2在该过程中起重要的介导作用。     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的：探讨乙酰肝素酶(HPA)反义寡脱氧核苷酸(AS-ODN)对人胃癌细胞株SGC-7901细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：设计合成HPAAS-ODN．用脂质体介导法转染SGC-7901细胞,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染前后细胞HPA-mRNA及p53、bcl-2基因的表达;用倒置相差显微镜及扫描电镜观察转染前后细胞的形态学变化;用DNA末端原位标记染色法(TUNEL)检测转染前后细胞的凋亡指数;用流式细胞仪检测转染前后细胞凋亡率的变化。结果：HPAAS-ODN转染后,SGC-7901细胞内HPA-mRNA表达下降,p53的表达量升高,bcl-2的表达量降低;细胞凋亡指数和凋亡率升高;出现了典型的凋亡细胞的形态学变化。结论：HPAAS-ODN可有效地抑制胃癌细胞HPA mRNA的表达：并通过下调bcl-2,上调p53的表达,诱导胃癌细胞凋亡。     

北五味子总木脂素对H2O2诱导PC12细胞凋亡的影响

目的： 探讨北五味子总木脂素(SCL)对过氧化氢(H₂O₂) 诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)凋亡的保护作用及其机制。方法： PC12细胞分为对照组、模型组及SCL高（SCL₁）、低（SCL₂）剂量组,用H₂O₂刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位的变化,免疫组化方法检测与凋亡相关蛋白bcl-2和bax的表达。结果：与模型组比较,SCL组随着剂量的增加PC12细胞存活率升高（P<0.05),凋亡率下降（P<0.01),线粒体膜电位回升（P<0.01), bcl-2表达增加(P<0.05),bax的表达降低(P<0.05)。结论:SCL可抑制H₂O₂诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制线粒体途径的细胞凋亡有关。     

ET-1AS-ODN对糖尿病大鼠心肌重构效应的保护作用

目的探讨内皮素-1反义脱氧寡核苷酸（ET-1AS-ODN）对链脲佐菌素（streptozocin,STZ）诱导的糖尿病大鼠心肌重构效应的保护作用及其机制。方法一次性腹腔注射STZ（60mg.kg-1）,建立大鼠糖尿病模型,并观察ET-1AS-ODN预防性给药对大鼠糖尿病心肌重构效应的保护作用。结果实验动物饲养5周后,与生理盐水对照（NC）组相比,糖尿病模型组大鼠体重明显减轻（P〈0.05）,心肌细胞重构明显,表明糖尿病心肌病变（diabetic cardiomyopathy,DC）模型已构建;与DC组比较,ET-1AS-ODN各治疗组心脏指数和心室指数均减小;大鼠心肌VG染色观察仅见心肌细胞间有少量胶原纤维沉积,但大部分心肌纤维结构完整,横纹清楚。结论内皮素-1反义寡核苷酸可减轻STZ诱导的糖尿病大鼠的心肌重构效应,对心肌组织具有保护作用。其机制可能与ET-1 AS-ODN降低糖尿病大鼠内源性ET水平,减少胶原合成,从而改善心肌重构效应有关。     

蒺藜总皂苷对H2O2诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的: 探讨蒺藜总皂苷(GSTT)对过氧化氢(H₂O₂) 诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12) 凋亡的保护作用及其机制。方法：PC12细胞分为对照组、模型组及蒺藜总皂苷高（GSTT₁）、低（GSTT₂）剂量组。用H₂O₂刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞活性,流式细胞仪检测PC12细胞亚二倍体峰比率及线粒体膜电位的变化,免疫组织化学方法检测与凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax。结果：与模型组比较,蒺藜总皂苷组随着剂量的增加PC12细胞存活率提高（P<0.001),凋亡比率下降（P<0.01),线粒体膜电位回升（P<0.01),Bcl-2表达增加(P<0.05),而Bax的表达降低(P<0.05)。结论：蒺藜总皂苷可抑制H₂O₂诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制线粒体途径的细胞凋亡有关。