局部晚期头颈部鳞癌患者血清肿瘤标志物水平对尼妥珠单抗近期疗效及预后的预测价值

目的：探讨血清肿瘤标志物水平变化对局部晚期头颈部鳞癌患者尼妥珠单抗治疗疗效及预后的预测价值。方法：回顾性分析160例接受尼妥珠单抗治疗的局部晚期头颈部鳞癌患者的临床资料,包括治疗后四周的RECIST1.1疗效评价、无疾病进展生存期（PFS）以及治疗前和疗效评价时的胸苷激酶1（TK1）、细胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）和人鳞状细胞癌相关抗原（SCC-Ag）水平。分析患者血清TK1、CYFRA21-1、SCC-Ag基线水平及治疗后变化与近期疗效以及PFS之间的关系。结果：160例局部晚期头颈部鳞癌患者治疗有效率【完全缓解（CR）+部分缓解（PR）】为33.13%（53/160）,靶向治疗前CR+PR患者血清TK1、Cyfra21-1、SCC-Ag基线水平高于疾病稳定（SD）、疾病进展（PD）患者（P<0.05）;靶向治疗后CR+PR患者TK1、Cyfra21-1水平降低,PD患者TK1、Cyfra21-1水平升高,SD患者TK1水平降低（P<0.05）。受试者工作特征（ROC）曲线显示TK1、Cyfra21-1、SCC-Ag变化率与影像学评效一致性的最佳截断点分别为0.265、0.357、0.393,曲线下面积（AUC）分别为0.774、0.683、0.660。160例患者平均随访时间为31.14个月,死亡23例（12.30%）。Kaplan-Meier生存分析显示,TK1较治疗前升高≤26.5%的患者PFS长于升高>26.5%的患者【22.524个月（95%CI：20.576~24.472） vs 18.793个月（95%CI：17.747~19.838）,P=0.002】,Cyfra21-1较治疗前升高≤35.7%的患者中位PFS长于升高>35.7%的患者【22.381个月（95%CI：20.294~24.468） vs 20.130个月（95%CI：17.755~22.505）,P=0.030】,SCC-Ag较治疗前升高≤39.3%与升高>39.3%的患者中位PFS比较无显著差异【20.773个月（95%CI：19.055~22.490） vs 18.947个月（95%CI：16.012~21.881）,P=0.078】。结论：TK1、Cyfra21-1、SCC-Ag水平对局部晚期头颈部鳞癌患者尼妥珠单抗治疗的近期疗效和预后有重要的预测价值。     

丙酮酸脱氢酶激酶-1在人结肠癌中的表达及意义

目的检测丙酮酸脱氢酶激酶-I(pyruvate dehydrogenase kinase-I,PDK1)在人结肠癌组织和细胞中的表达。探讨抑制PDK1对结肠癌细胞活性的影响。方法应用RT-PCR、荧光定量PCR和免疫荧光法、Western blot检测结肠癌组织、癌旁组织以及4种人结肠癌细胞PDK1基因的表达情况。在PDK1抑制剂(dichloroacetate,DCA)的诱导下,通过MTT法观察结肠癌细胞活性。结果PDK1基因在结肠癌组织中表达较癌旁组织中高;在4种人结肠癌细胞中明显表达。抑制PDK1能抑制结肠癌细胞增殖活性,抑制效应随药物浓度而递增,其中90 mmol/L DCA的活性细胞率分别为(23.90±2.79)%、(5.90±1.31)%、(32.82±4.50)%和(29.72±3.03)%。结论PDK1基因在结肠癌组织和细胞中高表达,在癌旁组织中低表达,抑制PDK1明显抑制结肠癌细胞增殖活性,PDK1可望成为结肠癌有效治疗靶点。     

基于TEM-8新型颗粒性疫苗的制备、鉴定和体外激发CTL杀伤活性的研究

目的 制备、鉴定基于肿瘤抗原TEM-8(tumor endothelial marker-8)的复合颗粒性疫苗,研究其在体外激发CTL杀伤活性.方法 在特定的条件下将阳离子肽和DNA制备成复合颗粒性的结构,以透射电镜、DNA阻滞试验、DNaseI保护试验、Western blot等对该疫苗进行制备和鉴定,同时进行体外激发CTL杀伤活性的标准(51)~Cr释放实验.结果 在NaCl浓度为87.5 mmol/L、电荷比为2的制备条件下,电镜扫描结果显示该疫苗能形成颗粒;Western blot鉴定其可有效介导TEM-8蛋白表达;该疫苗有明显的杀伤毒性,杀伤率为59.7%,与对照组性比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功制备了基于肿瘤抗原TEM-8的复合颗粒性疫苗,其在体外能够有效激发出特异性CTL应答.     

核受体PXR与耐药相关基因在结肠癌中的表达及意义

目的检测核受体PXR和耐药相关基因在人结肠癌中表达,初步探讨其相互关系在肿瘤免疫和肿瘤耐药中意义。方法分别用RT-PCR和western blot方法检测PXR、MRP2、MRP3、ABCG2、MDR1和CYP3A4在17例结肠癌组织中的表达,并进行半定量统计分析。结果与相应正常组织相比,结肠癌组织中PXR、MRP2和MRP3 mRNA水平和蛋白水平均显著增强(P<0.05)。而结肠癌组织中ABCG2、MDR1和CYP3A4 mRNA水平与相应正常组织相比没有显著差异。在癌组织和正常组织中,MRP3 mRNA水平与PXR mRNA水平呈正相关性(P<0.05)。结论 PXR、MRP2和MRP3可能在结肠癌耐药中具有重要作用,PXR调控MRP3表达可能涉及其耐药机制。     

RNA干扰PDK-1对5-FU诱导结肠癌细胞凋亡的促进作用

目的探讨以丙酮酸脱氢酶激酶-1(pyruvate dehydrogenase kinase isozyme 1,PDK-1)为靶标的短发夹RNA(shRNA)与化疗药5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用对人结肠癌LS174T细胞的促凋亡作用。方法针对PDK-1序列设计3段干扰序列及1个阴性对照,分别构建pGenesil.1-PDK-1重组质粒表达载体及pGenesil.1-NC阴性对照载体,利用脂质体分别将质粒转染入LS174T,并用G418对细胞进行药物筛选,并通过Real-time PCR和Western blot检测有干扰序列的有效性。MTT实验检测5-FU对干扰组和对照组细胞生长、增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 Real-time PCR和Western blot证实3个干扰组均抑制PDK-1表达,其中最大敲减效率超过70%。MTT实验结果显示,经5-FU同样处理48 h后,PDK-1干扰的LS174T细胞生长抑制率较对照组显著增高(P<0.05);流式细胞仪结果显示,干扰组细胞凋亡率较对照组增高(P<0.05)。结论 PDK-1 shRNA能特异性下调LS174T细胞中PDK-1的表达,PDK-1干扰联合5-FU可促进结肠癌细胞化疗诱导凋亡。     

重组人血管内皮抑制素对淋巴管内皮细胞骨架及淋巴管生成的影响

目的：研究重组人血管内皮抑制素（Ｅｎｄｏｓｔａｒ,恩度）对淋巴管内皮细胞的作用及淋巴管生成的影响。方法：磁珠分选小儿包皮真皮淋巴管内皮细胞进行培养,并在光镜下观察和采用细胞特异性标记物检测。设立对照组和恩度实验组,应用免疫荧光法和体外三维培养法来判定恩度对淋巴管内皮细胞有无抑制作用。结果：恩度实验组淋巴管内皮细胞骨架中微丝排列极性减弱或消失,微管无明显改变。恩度实验组淋巴管内皮细胞体外形成管状分支数量及管状结构形成能力较对照组明显下降（Ｐ＜０.０５）。结论：重组人血管内皮抑制素（恩度）对淋巴管内皮细胞的细胞骨架和体外成管能力有明显的抑制作用。     

基于TEM-8新型颗粒性疫苗对结肠癌小鼠模型免疫治疗的作用

目的:用基于TEM-8(tumor endothelialmarker-8)真核表达的颗粒性疫苗免疫荷结肠癌小鼠,探讨该疫苗的免疫治疗作用。方法:用阳离子肽[K]16-tat49-57与带有负电荷的真核表达质粒结合成颗粒性疫苗,用透射电镜和免疫印迹法鉴定,酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测疫苗所诱导的特异性CTL分泌IFN-γ,并对荷瘤Balb/c小鼠进行免疫治疗后,观察荷瘤体积和小鼠生存率,用免疫组化方法(抗CD31)观察肿瘤组织血管生长情况,并计算肿瘤微血管密度。结果:在电荷比为r=2的制备条件下,所构建的颗粒性疫苗进行电镜扫描,显示疫苗能形成颗粒,转染COS-7细胞后可有效介导TEM-8蛋白表达。ELISPOT检测显示在体内疫苗能有效激发抗原特异性CTL效应,可诱导CTL产生IFN-γ等细胞因子,肿瘤治疗实验证实,颗粒性疫苗能有效抑制肿瘤的生长速度,提高荷瘤小鼠的生存率,与对照组相比差异有统计学意义,P<0.05。结论:基于TEM-8的新型抗肿瘤血管生成疫苗能有效激发出特异性CTL应答,并在荷瘤小鼠模型中有效抑制肿瘤血管生成,提高荷瘤小鼠的生存率,为新型结肠癌治疗性疫苗的设计提供了新思路。     

紫杉醇、紫杉醇脂质体和白蛋白结合型紫杉醇在头颈肿瘤中的疗效比较

目的 探讨紫杉醇（paclitaxel,PTX）、PTX脂质体（paclitaxel liposome,L-PTX）和白蛋白结合型PTX（albumin bound paclitaxel,nab-PTX）在头颈肿瘤中的疗效。方法 采用回顾性研究,收集整理2017年1月-2018年6月69例宁波市医疗中心李惠利医院头颈恶性肿瘤患者的临床资料,其中31例PTX联合卡铂治疗为PTX组,26例L-PTX联合卡铂治疗为L-PTX组,12例nab-PTX联合卡铂治疗为nab-PTX组。比较3组患者近期临床疗效以及不良反应情况。结果 Nab-PTX组患者的近期疗效优于PTX组（66.67%vs 32.26%,χ²=4.209,P=0.040）。L-PTX组患者中性粒细胞减少发生率高于PTX组（χ²=4.079,P=0.043）,白细胞减少发生率高于PTX组（χ²=4.422,P=0.035）和nab-PTX组（χ²=5.640,P=0.018）;nab-PTX组患者脱发、恶心呕吐、腹泻等不良反应发生率低于PTX组（χ²=5.530,P=0.019;χ²=6.423,P=0.011;χ²=4.438,P=0.035）和L-PTX组（χ²=5.025,P=0.025;χ²=5.025,P=0.025;χ²=5.088,P=0.024）,周围神经炎发生率低于PTX组（χ²=4.711,P=0.030）。结论 Nab-PTX联合卡铂治疗头颈肿瘤的近期疗效显著,患者不良反应明显减少。     

护航编队官兵长航前后血清钙、镁含量的变化及与血脂的关系

目的分析护航编队官兵长航前后血脂及血清钙、镁含量的变化及其之间的关系,为控制血脂及预防高脂血症提供新的方法。方法于长航前3 d及后3 d分别抽血,检测血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、载脂蛋白A-1(ApoA-1)和载脂蛋白B(ApoB)及血清钙、镁浓度,并用统计学方法进行分析。结果长航后TC、TG、LDLC、ApoB均较长航前升高,血清钙、HDLC和ApoA-1较前降低;血清钙与TC、LDLC呈明显负相关,与HDLC正相关,与其他因素相关性不大;血清镁与TC、TG呈明显正相关,与HDLC负相关,与其他因素相关性不大。结论护航官兵在长航期间容易出现血脂异常,而血清钙、镁浓度是该变化的重要影响因素,在官兵长航过程中适当调整钙和镁的摄入有助于控制血脂水平。     

重组人血管内皮抑素对人结肠癌淋巴管内皮细胞成管抑制作用机制的探讨

目的:研究重组人血管内皮抑素(商名品:恩度)是否可通过抑制结肠癌细胞EDA表达从而影响结肠癌淋巴管生成。方法:分别用单纯培养和经重组人血管内皮抑素处理的SW480细胞培养上清液处理人淋巴管内皮细胞(hLECs),三维培养观察hLECs体外成管能力的差异,蛋白质印迹法检测hLECs中integrinα9的表达差异。结果:SW480细胞高表达EDA蛋白片断,重组人血管内皮抑素呈浓度依赖性地抑制EDA片断在SW480中的表达。单纯培养的SW480培养上清液(条件培养基Ⅰ)可促进hLECs体外成管,SW480经重组人血管内皮抑素处理后其培养上清液(条件培养基Ⅱ)促hLECs体外成管的效应被削弱,hLECs小管形成数量明显减少,各实验组小管形成数量差异有统计学意义,P<0.01。与之对应地,条件培养基Ⅱ处理组中hLECsEDA受体integrinα9的表达水平较条件培养基Ⅰ中hLECs下降(P<0.05)。结论:EDA在肿瘤淋巴管生成中具有重要作用,重组人血管内皮抑素可通过EDA-integrinα9途径有效抑制hLECs体外成管能力。