肿瘤学临床实习带教探讨

临床肿瘤学有其专业特殊性。在医学生临床肿瘤学实习带教过程中,应注重医学人文思想的熏陶、医患沟通技巧的提高、临床思维的培养和基本操作技能的训练。     

丙酮酸脱氢酶激酶-1在人结肠癌中的表达及意义

目的检测丙酮酸脱氢酶激酶-I(pyruvate dehydrogenase kinase-I,PDK1)在人结肠癌组织和细胞中的表达。探讨抑制PDK1对结肠癌细胞活性的影响。方法应用RT-PCR、荧光定量PCR和免疫荧光法、Western blot检测结肠癌组织、癌旁组织以及4种人结肠癌细胞PDK1基因的表达情况。在PDK1抑制剂(dichloroacetate,DCA)的诱导下,通过MTT法观察结肠癌细胞活性。结果PDK1基因在结肠癌组织中表达较癌旁组织中高;在4种人结肠癌细胞中明显表达。抑制PDK1能抑制结肠癌细胞增殖活性,抑制效应随药物浓度而递增,其中90 mmol/L DCA的活性细胞率分别为(23.90±2.79)%、(5.90±1.31)%、(32.82±4.50)%和(29.72±3.03)%。结论PDK1基因在结肠癌组织和细胞中高表达,在癌旁组织中低表达,抑制PDK1明显抑制结肠癌细胞增殖活性,PDK1可望成为结肠癌有效治疗靶点。     

99Tcm直接标记αvβ3受体拮抗剂环形RGD多肽

目的探讨^99Tc^m直接标记αvβ3受体配体——含2个二硫键的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）-九肽（RGD-4CK）的可行性和不同标记条件对标记率的影响。方法采用预锡化法^99Tc^m直接标记RGD-4CK，3MM色谱纸层析测定^99Tc^m-RGD-4CK的雕值，计算标记率与比活度。研究各种标记条件对^99Tc^m-RGD-4CK标记率的影响。通过高效液相色谱仪（HPLC）分析，Sep-Pak C18柱层析，进行体外稳定性实验、半胱氨酸置换实验以及血清蛋白结合实验，评价^99Tc^m-RGD-4CK的放射化学性质。结果^99Tc^m-RGD-4CK在以丙酮和V（氨水）：V（乙醇）：V（水）=1：2：5为流动相中的雕值分别为0与0．8～0．9，标记率为（97．8±0．4）％，基础标记条件下的比活度为（11．90±0．05）TBq／mmol。在以下条件下放化纯均〉95％：（1）酒石酸亚锡为150～300μg；（2）预锡化反应pH值为2．0～3．5，温度60℃，保温时间6h以上；（3）^99Tc^mO4^-活度为37～185MBq，体积在200μl内；（4）标记温度为95℃，标记时间30min.^99Tc^m-RGD-4CKHPLC的保留时间与其洗脱液的放射峰基本一致；^99Tc^m-RGD-4CK室温放置6h，放化纯仍〉95％；Sep—Pak C18柱层析测定的^99Tc^m O4^-峰仅比3MM纸层析高0．5％；标记物与300mmol／L半胱氨酸37℃保温1h，^99Tc^m O4^-峰仅增加1．88％；^99Tc^m-RGD-4CK与血清蛋白无明显结合。结论预锡化法^99Tc^m直接标记RGD-4CK方法简便、标记率高，无需分离纯化即可直接应用，还可用于制备冻干品药盒。标记产物^99Tc^m-RGD-4CK具有良好的放射化学性质。     

卡培他滨或贝伐单抗用于结直肠癌维持治疗的回顾性分析

目的 分析卡培他滨或贝伐单抗用于转移性结直肠癌维持治疗的疗效和安全性.方法 回顾性分析2012年1月至2016年5月在我院病理诊断为“任何原发肿瘤”(primary tumor,T)、“任何区域淋巴结”(regional lymph nodes,N)、“远处转移”(distant metastasis,M)1期(TXNXM1)的结直肠癌接受维持治疗的患者病例资料.予以一线标准方案化疗,待病情缓解或稳定后,按照维持治疗方案的不同分为卡培他滨维持治疗组和贝伐单抗维持治疗组,评价两组患者维持治疗的疗效及不良事件.结果 本研究共纳入病例66例,卡培他滨组41例,贝伐单抗组25例.卡培他滨维持化疗组中位无疾病进展生存时间(progression-free survival,PFS)为5.6个月,贝伐单抗维持治疗组中位PFS为7.7个月,两组比较无统计学差异(HR:1.171,95％ CI:0.701 ～1.966P＞0.05).卡培他滨维持治疗组中位总生存时间(overall survival,OS)为28.2个月,贝伐单抗维持治疗组中位OS为31.9个月,两组比较无统计学差异(HR:1.143,95％ CI:0.602 ～2.180,P＞0.05).两组均无Ⅳ级不良事件发生,卡培他滨维持治疗组手足综合征发生率较高(P＜0.05),贝伐单抗维持治疗组出血发生率较高(P＜0.05),其他不良反应差异无统计学意义(P＞0.05).结论 贝伐单抗用于转移性结直肠癌维持治疗相较卡培他滨显示出更长的疾病控制时间和总生存时间,但无统计学差异;有出血风险的患者建议选择卡培他滨进行维持化疗.     

基于TEM-8新型颗粒性疫苗的制备、鉴定和体外激发CTL杀伤活性的研究

目的 制备、鉴定基于肿瘤抗原TEM-8(tumor endothelial marker-8)的复合颗粒性疫苗,研究其在体外激发CTL杀伤活性.方法 在特定的条件下将阳离子肽和DNA制备成复合颗粒性的结构,以透射电镜、DNA阻滞试验、DNaseI保护试验、Western blot等对该疫苗进行制备和鉴定,同时进行体外激发CTL杀伤活性的标准(51)~Cr释放实验.结果 在NaCl浓度为87.5 mmol/L、电荷比为2的制备条件下,电镜扫描结果显示该疫苗能形成颗粒;Western blot鉴定其可有效介导TEM-8蛋白表达;该疫苗有明显的杀伤毒性,杀伤率为59.7%,与对照组性比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功制备了基于肿瘤抗原TEM-8的复合颗粒性疫苗,其在体外能够有效激发出特异性CTL应答.     

纤维粘连蛋白EDA片段调控结肠癌SW480细胞的增殖、凋亡

目的研究纤维粘连蛋白EDA片段对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡的影响。方法慢病毒感染结肠癌SW480细胞干扰纤维粘连蛋白EDA片段表达,建立纤维粘连蛋白EDA片段低表达的SW480细胞。利用MTT检测干扰前后细胞增殖的变化,并采用流式细胞术检测干扰前后细胞凋亡的变化。同时使用Western blot分别检测干扰前后凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达变化。结果慢病毒感染结肠癌SW480细胞后,纤维粘连蛋白EDA片段持续低表达。MTT法结果显示,干扰纤维粘连蛋白EDA片段24、48、72、96 h后细胞生长速度明显降低。转染组与未转染组及空载体组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术显示未转染组、空载体组及转染组的细胞凋亡率分别为(3.09±1.13)%、(3.71±0.42)%、(47.76±1.51)%,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot的结果显示干扰纤维粘连蛋白EDA片段后促凋亡因子Bax表达上调,同时,凋亡抑制因子Bcl-2表达降低。结论纤维粘连蛋白EDA片段对结肠癌SW480细胞具有促增殖、抗凋亡作用。     

基于TEM-8新型颗粒性疫苗对结肠癌小鼠模型免疫治疗的作用

目的:用基于TEM-8(tumor endothelialmarker-8)真核表达的颗粒性疫苗免疫荷结肠癌小鼠,探讨该疫苗的免疫治疗作用。方法:用阳离子肽[K]16-tat49-57与带有负电荷的真核表达质粒结合成颗粒性疫苗,用透射电镜和免疫印迹法鉴定,酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测疫苗所诱导的特异性CTL分泌IFN-γ,并对荷瘤Balb/c小鼠进行免疫治疗后,观察荷瘤体积和小鼠生存率,用免疫组化方法(抗CD31)观察肿瘤组织血管生长情况,并计算肿瘤微血管密度。结果:在电荷比为r=2的制备条件下,所构建的颗粒性疫苗进行电镜扫描,显示疫苗能形成颗粒,转染COS-7细胞后可有效介导TEM-8蛋白表达。ELISPOT检测显示在体内疫苗能有效激发抗原特异性CTL效应,可诱导CTL产生IFN-γ等细胞因子,肿瘤治疗实验证实,颗粒性疫苗能有效抑制肿瘤的生长速度,提高荷瘤小鼠的生存率,与对照组相比差异有统计学意义,P<0.05。结论:基于TEM-8的新型抗肿瘤血管生成疫苗能有效激发出特异性CTL应答,并在荷瘤小鼠模型中有效抑制肿瘤血管生成,提高荷瘤小鼠的生存率,为新型结肠癌治疗性疫苗的设计提供了新思路。     

99Tcm标记多肽VEGF125-136及其生物学分布

目的 探讨一种理想的99Tcm标记小分子多肽VEGF125-136的方法,并研究标记物的生物学分布.方法 在合成多肽的过程中直接完成多肽VEGF125-136与双功能螯合剂MAG3的偶联,然后采用正交设计探讨99Tcm的最佳标记条件,并研究标记物稳定性和小鼠体内分布.结果 ①简化了偶联步骤,提高了偶联产率;②最佳标记条件下标记率约78%,经HPLC纯化后放化纯度＞95%,且在室温条件下稳定性好;③ 99mTc-VEGF125-136-MAG3在正常小鼠的血液中清除较快,在肾、肝中摄取较高.结论 以MAG3为螯合剂用99Tcm标记VEGF125-136有良好的标记率.     

脂肪酰胺水解酶在结直肠癌中的表达及临床意义

目的检测脂肪酰胺水解酶(fatty acid amide hydrolase,FAAH)在结直肠癌及正常肠黏膜中的表达,探讨其临床意义。方法应用Western blot和组织芯片技术结合免疫组化法检测结直肠癌组织以及对应正常肠黏膜中FAAH蛋白的表达。结果 FAAH在结直肠癌组织中的表达低于正常肠黏膜,169例结直肠癌组织中FAAH的阳性表达率显著低于正常肠黏膜(56.8%vs 97.4%,P<0.01),并与肿瘤的分化程度密切相关(P<0.01)。结论 FAAH在结直肠癌组织中低表达,在正常肠黏膜中高表达,在结直肠癌的恶性增殖中发挥着重要作用。     

RNA干扰PDK-1对5-FU诱导结肠癌细胞凋亡的促进作用

目的探讨以丙酮酸脱氢酶激酶-1(pyruvate dehydrogenase kinase isozyme 1,PDK-1)为靶标的短发夹RNA(shRNA)与化疗药5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用对人结肠癌LS174T细胞的促凋亡作用。方法针对PDK-1序列设计3段干扰序列及1个阴性对照,分别构建pGenesil.1-PDK-1重组质粒表达载体及pGenesil.1-NC阴性对照载体,利用脂质体分别将质粒转染入LS174T,并用G418对细胞进行药物筛选,并通过Real-time PCR和Western blot检测有干扰序列的有效性。MTT实验检测5-FU对干扰组和对照组细胞生长、增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 Real-time PCR和Western blot证实3个干扰组均抑制PDK-1表达,其中最大敲减效率超过70%。MTT实验结果显示,经5-FU同样处理48 h后,PDK-1干扰的LS174T细胞生长抑制率较对照组显著增高(P<0.05);流式细胞仪结果显示,干扰组细胞凋亡率较对照组增高(P<0.05)。结论 PDK-1 shRNA能特异性下调LS174T细胞中PDK-1的表达,PDK-1干扰联合5-FU可促进结肠癌细胞化疗诱导凋亡。