RNA干扰对HT29细胞PIDD蛋白表达及细胞耐药性影响的研究

目的观察氟尿嘧啶（5-FU）刺激后PIDD蛋白在结肠癌HT29细胞中分布的改变,以及小干扰RNA（siRNA）干扰PIDD蛋白前后,HT29细胞耐药性的变化。方法用siRNA干扰HT29细胞内PIDD蛋白的表达,用5-FU刺激HT-29细胞。West-ern blotting法检测干扰前后细胞PIDD的表达,并比较5-FU刺激后干扰与未干扰HT-29细胞内PIDD在细胞中分布的变化。MTT比色法检测siRNA干扰前后细胞对5-FU的敏感性,并计算各组细胞的IC50值。结果未受5-FU刺激前,PIDD蛋白主要分布于细胞质中；受5-FU刺激后,PIDD蛋白迁移至细胞核。siRNA干扰后细胞中PIDD表达总量有所下降,胞质及胞核中的表达均降低,受5-FU刺激后PIDD的表达也未见升高,迁移至胞核的PIDD也未增加。MTT检测证明5-FU对转染组（PIDD-360转染12h后的HT29细胞）的IC50值为0.23±0.06μg/ml,与正常组（未作处理的HT29细胞,IC50为2.71±0.70μg/ml）和对照组（阴性对照试剂转染12h后的HT29细胞,IC50为2.78±1.03μg/ml）比较显著降低（P〈0.05）。结论经siRNA干扰PIDD蛋白后,HT29细胞的耐药性明显下降,推测其机制与胞核中PIDD降低导致的NF-κB活性降低,细胞凋亡增多有关。     

有的放矢地提高医学院校教师的外语水平

随着我国改革开放政策的执行,在全国范围内出现了一个自发的、经久不衰的学习各种外语、特别是学习英语的热潮。医学院校的教师有重视外语学习的传统,因此学习自觉性较高,效果较好.笔者现就医学院校教师外语学习的动机进行分析,并根据其不同的情况建议采取不同的教学措施以便有的放矢地提高师资队伍的外语水平。 (一)学习外语的动机美国著名的外语教学法专家FraidaDubin博士曾提出“将任何一门知识当作学科来学习时都会涉及到动机和兴趣的问题”,外语学习也不例外。根据十年来的教学实践,现将医学院校各级教师(包括临床医师在内)学习外语的动机归纳如     

中西医结合治疗复发性尖锐湿疣86例

笔者从1999-2000年用中西医结合方法治疗复发性尖锐湿疣86例，取得较好疗效，现报告如下。     

人HCT116结肠癌细胞系中CD133+结肠癌干细胞分离及鉴定

目的 从人结肠癌细胞系(HCT116)中分离鉴定结肠癌干细胞,并观察其体外生物学特性.方法 利用RT-PCR、免疫荧光、流式细胞等技术检测HCT116细胞中CD133的表达情况;利用免疫磁珠分选技术分选CD133+细胞;采用无血清培养基培养分选后的CD133+细胞鉴定其体外增殖特性;采用含血清培养基诱导干细胞克隆球分化并采用免疫组化检测CK20表达情况鉴定其分化特性.结果 HCT116细胞系中存住CD133+细胞,免疫磁珠能有效的分选CD133+细胞,分选后的阳性含量为91.92%,分选后的阳性细胞具有典型干细胞的体外增殖、分化特性.结论 CD133+结肠癌干细胞在体外具有和普通干细胞类似的无限增殖、自我更新和分化能力,同时它们也表达ABCG2等耐药相火蛋白.     

稳定干扰αｖ整合素表达的ＨＴ-２９细胞系的建立

目的　探讨逆转录病毒介导ＲＮＡ干扰（ＲＮＡｉ）稳定抑制αｖ整合素表达的有效性,并建立稳定抑制αｖ整合素表达的结肠癌ＨＴ-２９细胞系。方法　设计并合成３对针对αｖ整合素基因的短发夹ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）序列,构建逆转录病毒质粒;脂质体转染逆转录病毒质粒至结肠癌细胞株ＨＴ-２９;Ｇ４１８筛选,局部消化法挑选阳性克隆;Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测蛋白表达水平。结果　琼脂糖凝胶电泳结果显示,构建成功的逆转录病毒载体被ＨｉｎｄⅢ限制性内切酶切为两个分别长１９５０ｂｐ与５８００ｂｐ片段。测序结果显示,针对αｖ整合素基因的３对ｓｈＲＮＡ序列皆成功插入逆转录病毒质粒;转染逆转录病毒载体的ＨＴ-２９细胞持续表达绿色荧光蛋白,并对Ｇ４１８具抗性;Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ结果显示逆转录病毒介导的ｓｈＲＮＡ能有效地抑制αｖ整合素表达。结论　逆转录病毒介导的ｓｈＲＮＡ能够高效、稳定地抑制αｖ整合素表达,进而可以建立稳定干扰αｖ整合素表达的结肠癌ＨＴ-２９细胞系。     

FAK靶向RNAi重组体的构建及其抗多细胞球体形成效应

酶切和测序鉴定证实插入序列完全正确;靶向干扰FAK后,其mRNA和蛋白表达分别显著下调(79.20±2.97)%和(78.47±4.39)%,且细胞不易聚集形成MCSs.结论 成功构建FAK靶向RNAi重组载体,显著地抑制FAK表达,并能有效地抑制MCSs的形成.     

核受体PXR与耐药相关基因在结肠癌中的表达及意义

目的检测核受体PXR和耐药相关基因在人结肠癌中表达,初步探讨其相互关系在肿瘤免疫和肿瘤耐药中意义。方法分别用RT-PCR和western blot方法检测PXR、MRP2、MRP3、ABCG2、MDR1和CYP3A4在17例结肠癌组织中的表达,并进行半定量统计分析。结果与相应正常组织相比,结肠癌组织中PXR、MRP2和MRP3 mRNA水平和蛋白水平均显著增强(P<0.05)。而结肠癌组织中ABCG2、MDR1和CYP3A4 mRNA水平与相应正常组织相比没有显著差异。在癌组织和正常组织中,MRP3 mRNA水平与PXR mRNA水平呈正相关性(P<0.05)。结论 PXR、MRP2和MRP3可能在结肠癌耐药中具有重要作用,PXR调控MRP3表达可能涉及其耐药机制。     

ERCC5基因+25A＞G多态性与晚期结直肠癌铂类药物疗效的相关性

目的 探讨切除修复交叉互补基因5(ERCC5)基因单核苷酸多态性与中国汉族晚期结直肠癌患者铂类药物疗效的相关性.方法 应用PCR-LDR法检测以奥沙利铂为主化疗的105例晚期结直肠癌患者ERCC5基因位点+25A＞G (rs751402)、+202C＞T (rs2296147)及+372C＞T (rs2296148)的...     

人结肠癌细胞系肿瘤干细胞特性的初步研究

目的:本研究对8种人结肠癌细胞系的干细胞特性进行初步检测,以寻找适合分选结肠癌干细胞的细胞系.方法:利用流式细胞术,RT-PCR检测8种结肠癌细胞中CD133的表达情况;利用条件培养观察8种细胞系的肿瘤细胞在无血清培养基中的生物学特性;利用裸鼠成瘤模型检测成瘤能力和转移能力.结果:CD133在8种细胞系中的表达有显著差异,最高的HCT116细胞系中CD133+细胞含量为(91.4±5.0)%;各种细胞系细胞均能在无血清培养基中增殖,但只有HCT116细胞能形成典型的"神经球样结构"且具有较高的成瘤能力和转移能力.同等细胞浓度下移植瘤体积HCT116(1.06±0.13) cm3, LOVO(0.22±0.09) cm3, P=0.01, 差异具有统计学意义.结论:相对于其他7种细胞系,HCT116细胞具有多种肿瘤干细胞的生物学特性,更适合于结肠癌干细胞的研究.     

结直肠癌中ＦＡＫ、ＦＡＫｐＹ３９７、Ａｋｔ、ＮＦ-κＢ表达及相关性研究

目的：检测黏着斑激酶（ＦＡＫ）、磷酸化ＦＡＫ（ＦＡＫｐＹ３９７）、Ａｋｔ和细胞核因子（ＮＦ-κＢ）在结直肠癌组织中的表达,并探讨其相关性。方法：采用免疫组织化学ＳＰ法,检测７４例结直肠癌组织与１０例正常结肠组织中ＦＡＫ、ＦＡＫｐＹ３９７、Ａｋｔ和ＮＦ-κＢ的表达。结果：结直肠癌组织标本中ＦＡＫ、ＦＡＫｐＹ３９７、Ａｋｔ和ＮＦ-κＢ的阳性率分别为８２.４３％、４５.９５％、５２.７０％和５９.４６％,除ＦＡＫｐＹ３９７外,ＦＡＫ、Ａｋｔ、ＮＦ-κＢ均与正常结肠壁组织表达的差异显著（Ｐ＜０.０５）。ＦＡＫ表达与分化程度、淋巴结转移有关（Ｐ＜０.０５）,但不受患者性别、年龄、肿瘤的大小及位置、Ｄｕｋｅｓ'分期的影响。Ａｋｔ阳性表达与分化程度显著相关（Ｐ＜０.０５）,ＮＦ-κＢ表达与淋巴结转移显著有关（Ｐ＜０.０５）,并且Ａｋｔ、ＮＦ-κＢ表达与ＦＡＫ表达呈显著正相关（Ｐ＜０-０５）。结论：ＦＡＫ、Ａｋｔ、ＮＦ-κＢ在结直肠癌组织中均高表达,且Ａｋｔ、ＮＦ-κＢ表达与ＦＡＫ有显著正相关性,提示生存信号传导通路ＦＡＫ／Ａｋｔ／ＮＦ-κＢ在结直肠癌的发生、演进中起重要作用。