热休克蛋白70对心脏移植大鼠供心心肌生化指标的影响

目的:观察应激情况下产生的热休克蛋白70对心脏移植大鼠供心心肌相关生化指标的影响。方法:实验于2006-04/09在青岛市市立医院中心实验室完成。①实验动物及分组:取成年SPF级雄性Wistar大鼠18只,按随机数字表法分为2组,每组9只。对照组腹腔注射生理盐水0.5mL,注射后24h取离体心脏,灌注HTK心脏保护液,并置于HTK液4℃保存3h后建立Langendorff离体心脏灌注模型,灌注K-H液2h。实验组腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素(溶于生理盐水中)3.1μmol/kg(0.53mg/kg),24h后取离体心脏,余处理步骤同对照组。②实验评估:应用全自动生化分析仪测定心肌肌酸激酶、乳酸脱氢酶含量;计算心肌肌酸激酶(乳酸脱氢酶)10min漏出率、心肌含水量;采用羟胺法测定超氧化物歧化酶活性,采用硫代巴比妥酸法测定丙二醛含量,采用双缩脲法测定组织蛋白含量;采用免疫组织化学法,以染色阳性面积占视野面积的百分比作为心肌组织热休克蛋白70的表达量。结果:18只大鼠全部进入结果分析,无脱失。①心肌组织热休克蛋白70含量:实验组高于对照组(t=17.96,P<0.01)。②相关生化指标:实验组大鼠心肌肌酸激酶、乳酸脱氢酶10min漏出率、心肌含水量及丙二醛含量显著均低于对照组(t=4.13～15.81,P<0.01),实验组大鼠心肌超氧化物歧化酶活性显著高于对照组(t=10.89,P<0.01)。结论:热休克蛋白70的高表达能减少氧自由基对供心心肌的损害,是热休克蛋白70发挥其供心心肌保护作用的可能途径之一。     

热休克蛋白70对缺血再灌注未成熟心肌间质的保护作用

目的观察热休克蛋白70在未成熟心肌中的表达及对缺血再灌注未成熟心肌间质的影响。方法①实验于2001-12/2002-06在华中科技大学同济医学院药理实验室完成。选用出生14～21d的健康新生长耳大白兔12只。随机将兔分为2组对照组和实验组,每组6只。②对照组腹腔注射生理盐水0.4m L,注射后24h取体外心脏,常规建立Langendorff体外心脏灌注模型,灌注15m in转为工作心15m in后停灌45m in,恢复灌注15m in改为工作心30m in;实验组腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素,24h后取体外心脏,方法同对照组。③采用蛋白印迹法测定心肌细胞中热休克蛋白70含量。按公式计算羟脯氨酸含量(样本A值/标准A值×10×稀释倍数×1/组织质量)。采用均相放射免疫竞争法直接测定血浆内皮素1水平。④计量资料差异比较采用t检验。结果兔12只均进入结果分析。①实验组心肌细胞中热休克蛋白70含量(A值)明显高于对照组(P<0.01)。②实验组兔心肌羟脯氨酸含量明显高于对照组(P<0.01),血清内皮素1水平明显低于对照组(P<0.01)。结论腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素诱导未成熟大白兔心脏热休克蛋白70表达,在注射24h后热休克蛋白70表达明显增多,热休克蛋白70可明显减轻未成熟心肌内皮素的释放和心肌胶原的降解。     

肾缺血预处理对未成熟心肌凋亡蛋白表达的影响

目的 :探讨肾缺血预处理 （RIP）对未成熟心肌细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法 :采用兔Langendorff模型 ,幼兔 2 4只随机分为 3组 ,对照组 （C ,n =8） :仅灌注KH液 180min ,然后取标本 ;缺血 /再灌组 （I/R ,n =8） :灌注 2 0min后 ,停灌 4 5min ,再灌 12 0min ;肾缺血预处理组 （RIP ,n =8） ,反复 2次阻断肾血流 5min/放开 5min ,建立Langendorff模型 ,然后重复I/R组缺血 /再灌方法。以凋亡细胞原位标记与半定量分析、琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段梯及Bcl 2、Bax、Fas基因蛋白的表达作为观察指标。结果 :凋亡细胞原位标记与半定量分析 :RIP组与I/R组比较 ,心肌细胞凋亡率显著减少 ;琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段梯 :RIP组与I/R组比较 ,光密度显著降低 ;RIP组与I/R组比较 ,Bcl 2表达明显增多 ,Bax、Fas表达显著减少。结论 :RIP可能通过调节Bcl 2、Bax、Fas蛋白的不同表达影响心肌细胞的凋亡。     

全生物化组织工程血管的体外构建

目的 探讨组织工程血管的体外构建:脱细胞血管基质的制备.血管平滑肌细胞和血管内皮祖细胞的体外诱导培养和种植方法.方法 处理猪胸主动脉来获得脱细胞血管基质,采用二步种植法先后种植体外培养的平滑肌细胞和内皮细胞.结果 动脉管壁细胞全部脱除,脱细胞基质胶原蛋白含量与新鲜动脉相似,胶原纤维、弹性纤维呈网状排列,无断裂,基质保持完好.脱细胞血管基质的极限应力比新鲜动脉绀织减小20%[新鲜动脉:(1.1510±1.2870)×10-2,脱细胞血管基质:(0.9215±1.7000)×10-2,t=34.137,P<0.01].种植的平滑肌细胞和内皮细胞生长良好.结论 平滑肌细胞和内皮细胞种植于脱细胞血管基质后生长良好,可体外构建组织工程血管.     

下肢缺血预处理对未成熟心肌细胞凋亡和内质网应激的影响

背景：近几年来研究发现内质网应激导致细胞凋亡在细胞缺血性损害中起重要作用,成为缺血心肌的研究热点。下肢缺血预处理对未成熟心肌具有明显保护作用,但下肢缺血预处理对未成熟心肌内质网应激细胞凋亡是否存在影响至今未知。目的：探讨下肢缺血预处理对未成熟心肌内质网应激和细胞凋亡的影响。方法：采用兔离体心脏Langendorff灌注模型,24只幼兔随机分为3组：对照组仅灌注KH液180 min;缺血再灌注组心脏灌注20 min后,停灌60 min,复灌100 min;下肢缺血预处理组,反复3次阻断双下肢血流5 min/放5 min,建立Langendorff模型,然后重复缺血再灌注组方法。TUNEL法检测心肌细胞凋亡率、Western blot检测GRP78、Bcl-2、Bax和Fas蛋白表达。结果与结论：下肢缺血预处理组与缺血再灌注组比较,心肌细胞凋亡率明显减少;Bcl-2表达明显增多,GRP78、Bax、Fas表达明显减少。结果表明下肢缺血预处理可能通过调控内质网过度应激GRP78表达以及Bcl-2、Bax、Fas蛋白的表达调控心肌细胞凋亡。     

不同缺血预处理对未成熟心肌细胞功能的影响

目的比较不同方法的缺血预处理对未成熟心肌细胞功能的影响。方法采用Langendorff离体心脏灌注模型。分为4组:缺血/再灌注(I/R)组,离体心脏灌注15min转为工作心15min后停灌45min,恢复灌注15min改为工作心30min;心脏缺血预处理(MIP)组:离体心脏灌注15min转为工作心15min后反复2次缺血5min/再灌注5min,然后重复I/R组缺血/再灌注方法;肾缺血预处理(RIP)组:反复三次阻断左肾动脉5min,放开5min,切取心脏,重复I/R组方法;双下肢缺血预处理(DLIP)组:反复3次捆扎双下肢5min,松开5min,切取心脏,重复I/R组方法。以血清肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、心肌组织三磷腺苷(ATP)和丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、心肌细胞内Ca2+含量、心肌线粒体Ca2+-ATPase活性及其Ca2+含量、心肌线粒体合成三磷腺苷能力[ATP]m作为观察指标。结果MIP、RIP及DLIP组ATP含量、SOD活性、心肌线粒体Ca2+-ATPase活性、[ATP]m均高于I/R组(P<0.01),MDA含量、CK、LDH漏出率、心肌细胞内Ca2+含量、心肌线粒体Ca2+含量均低于I/R组(P<0.01)。结论肾缺血预处理、双下肢缺血预处理与心脏缺血预处理有同等的心肌细胞保护作用。     

猪脱细胞血管基质的制备及其生物学性状检测

背景：目前脱细胞血管基质的制备方法有酶消化法和去污剂法。十二烷基硫酸钠为离子型去垢剂，脱细胞效果强，但易引起较多蛋白纤维损伤，影响血管的结构和力学特性。Triton X-100为柔和的非离子型去垢剂，两者联合应用可减少纤维损伤。 目的：采用酶、非离子型和离子型去垢剂联合法制备猪脱细胞血管基质，并检测其生物学性状。 设计、时间及地点：对比观察的细胞学实验，于2007-08／2008—05青岛市市立医院心脏中心实验室完成。 材料：雄性幼猪1只，取其胸主动脉用于制备脱细胞血管基质。 方法：采用含双抗的0．125％胰蛋白酶、1％Triton X-100、1％十二烷基硫酸钠逐步处理猪胸主动脉。 主要观察指标：苏木精-伊红染色观察细胞脱除情况。扫描电镜、透射电镜观察细胞脱除情况及胶原纤维和弹性纤维情况。测定脱细胞血管基质中胶原蛋白含量，检测血管脱细胞血管基质的伸长比、极限应力。 结果：经该法处理的猪血管内细胞全部脱除，胶原纤维、弹性纤维无断裂，细胞外基质保持完好，其胶原蛋白含量和力学性状与新鲜组织无明显差别。 结论：酶、非离予型和离子型去垢剂联合法是制备脱细胞血管基质的较好方法，制备获得的脱细胞血管基质生物学性状保持良好。     

急性心肌梗死合并室间隔穿孔外科治疗

目的探讨急性心肌梗死伴室间隔穿孔的外科治疗的时机和方法。方法 2009年8月至2010年10月共收治4例急性心肌梗死并室间隔穿孔患者,其中男3例,女1例;年龄57～75岁,平均年龄67.5岁;合并高血压病3例,前壁心肌梗死3例(75%),其中前壁合并侧壁心肌梗死1例(25%);2例术前IABP辅助。4例患者均行室间隔穿孔修补术及冠状动脉旁路移植术,移植血管1～3支,平均1.75支。结果围术期死亡2例,其中1例术后死于多器官功能衰竭,1例死于严重败血症。其余2例患者均治愈出院,出院时心功能分级(NYHA)Ⅱ级。结论室间隔穿孔是冠心病急性心梗最严重并发症之一,保守治疗死亡率极高,外科手术能够较好的降低患者的病死率,改善预后。     

激光心房迷宫术治疗心房纤颤的研究

目的 探讨用Ｎｄ：ＹＡＧ激光照射热凝代替手术切开，行改良的迷宫术Ⅱ治疗心房纤颤。方法 ８条犬右锭端安放起搏电极行心房Ｂｕｒｓｔ刺激，或在静滴氯化乙酰胆碱每分钟１μｇ／ｋｇ体的基础上加用心房Ｂｕｒｓｔ刺激诱发房颤，建立持续性房颤模型后以改良的激光心房迷宫术Ⅲ治疗。术后以同样条件刺激，观察是否还可引出房颤。结果 ８条犬在激光心房迷宫术后以同样条件刺激均不能再诱发出房颤，平均心跳停时间为２４ｍｉｎ。结论     

急性心肌梗死并发心源性休克急诊冠状动脉旁路移植术体会

目的:总结急性心肌梗死(AMI)并发心源性休克(CS)急诊冠状动脉旁路移植术(CABG)治疗效果。方法:9例AMI并发CS患者急诊在全麻体外循环下实施CABG。结果:治愈6例,死亡3例,2例死于顽固性低心排血量综合征,1例死于肾功能衰竭和上消化道出血。结论:急诊CABG可以有效提高AMI并发CS患者的生存率。