热休克蛋白70对缺血再灌注未成熟心肌间质的保护作用

目的：观察热休克蛋白70在未成熟心肌中的表达及对缺血再灌注未成熟心肌间质的影响。方法：①实验于2001-12／2002-06在华中科技大学同济医学院药理实验室完成。选用出生14-21d的健康新生长耳大白兔12只。随机将兔分为2组：对照组和实验组，每组6只。②对照组：腹腔注射生理盐水0．4mL，注射后24h取体外心脏，常规建盘Langendofff体外心脏灌注模型，灌注15min转为工作心15min后停灌45min，恢复灌注15min改为工作心30min；实验组：腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素，24h后取体外心脏，方法同对照组。⑧采用蛋白印迹法测定心肌细胞中热休克蛋白70含量。按公式计算羟脯氨酸含量（样本A值／标准A值&;#215;10x稀释倍数&;#215;1／组织质量）。采用均相放射免疫竞争法直接测定血浆内皮素1水平。㈤计量资料差异比较采用t检验。结果：兔12只均进入结果分析。①实验组心肌细胞中热休克蛋白70含量（A值）明显高于对照组（P〈0．01）。②实验组兔心肌羟脯氨酸含量明显高于对照组（P〈0．01），血清内皮素1水平明显低于对照组俨〈0．01）。结论：腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素诱导未成熟大白兔心脏热休克蛋白70表达，在注射24h后热休克蛋白70表达明显增多，热休克蛋白70可明显减轻未成熟心肌内皮素的释放和心肌胶原的降解。     

热休克蛋白70对大鼠体外心脏细胞功能的影响

目的:观察重酒石酸去甲肾上腺素诱导后热休克蛋白70在体外心脏中的表达,并探讨热休克蛋白70对大鼠体外心脏细胞功能的影响。方法:实验于2003-03/09在华中科技大学同济医学院药理实验室进行。取成年雄性Wistar大鼠12只,随机分为2组,每组6只:①生理盐水组:腹腔注射生理盐水0.4mL,注射后24h取体外心脏,常规建立Langendorff体外心脏灌注模型,灌注15min转为工作心15min后停灌45min,恢复灌注15min改为工作心30min。②重酒石酸去甲肾上腺素组:腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素3.1μmol/kg(0.53mg/kg),24h后取体外心脏,方法同生理盐水组。采用Westernblot法测定心肌细胞中热休克蛋白70含量及生化指标。结果:12只大鼠全部进入结果分析。①热休克蛋白70含量(吸光度):重酒石酸去甲肾上腺素组明显高于生理盐水组(t=10.16,P<0.01)。②生化指标:重酒石酸去甲肾上腺素组三磷酸腺苷含量、超氧化物歧化酶活性、心肌线粒体Ca2+-ATPase活性、心肌线粒体合成三磷酸腺苷能力优于生理盐水组犤(13.67±2.60),(5.36±0.89)μmol/g;(2.44±0.14),(4.64±0.29)μkat/g;(6.77±0.90),(2.54±0.28)μkat/g;(124.22±13.58),(61.25±5.84)mmol/g;P均<0.01犦,丙二醛含量、肌酸激酶和乳酸脱氢酶漏出率、心肌细胞内Ca2+含量、心肌线粒体Ca2+含量低于生理盐水组(P<0.01)。结论:重酒石酸去甲肾上腺素诱导的热休克蛋白70的高表达对缺血再灌注未成熟心肌细胞功能具有明显的保护效应,可以减轻细胞内和线粒体内Ca2+超载而发挥其细胞保护效应,减轻再灌注损伤。     

热休克蛋白70对大鼠体外心脏细胞功能的影响

目的观察重酒石酸去甲肾上腺素诱导后热休克蛋白70在体外心脏中的表达,并探讨热休克蛋白70对大鼠体外心脏细胞功能的影响.方法实验于2003-03/09在华中科技大学同济医学院药理实验室进行.取成年雄性Wistar大鼠12只,随机分为2组,每组6只[1]生理盐水组腹腔注射生理盐水0.4 mL,注射后24 h取体外心脏,常规建立Langendorff体外心脏灌注模型,灌注15 min转为工作心15 min后停灌45 min,恢复灌注15 min改为工作心30 min.[2]重酒石酸去甲肾上腺素组腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素3.1μmol/kg(0.53 mg/kg),24 h后取体外心脏,方法同生理盐水组.采用Western blot法测定心肌细胞中热休克蛋白70含量及生化指标.结果12只大鼠全部进入结果分析.[1]热休克蛋白70含量(吸光度)重酒石酸去甲肾上腺素组明显高于生理盐水组(t=10.16,P＜0.01).[2]生化指标重酒石酸去甲肾上腺素组三磷酸腺苷含量、超氧化物歧化酶活性、心肌线粒体Ca2+-ATPase活性、心肌线粒体合成三磷酸腺苷能力优于生理盐水组[(13.67±2.60),(5.36±0.89)μmol/g;(2.44±0.14),(4.64±0.29)μkat/g;(6.77±0.90),(2.54±0.28)μkat/g;(124.22±13.58),(61.25±5.84)mmol/g;尸均＜0.01],丙二醛含量、肌酸激酶和乳酸脱氢酶漏出率、心肌细胞内Ca2+含量、心肌线粒体Ca2+含量低于生理盐水组(P＜0.01).结论重酒石酸去甲肾上腺素诱导的热休克蛋白70的高表达对缺血再灌注未成熟心肌细胞功能具有明显的保护效应,可以减轻细胞内和线粒体内Ca2+超载而发挥其细胞保护效应,减轻再灌注损伤.     

热休克蛋白70对大鼠体外心脏细胞功能的影响

目的：观察重酒石酸去甲肾上腺素诱导后热休克蛋白70在体外心脏中的表达,并探讨热休克蛋白70对大鼠体外心脏细胞功能的影响.方法：实验于2003-03/09在华中科技大学同济医学院药理实验室进行.取成年雄性Wistar大鼠12只,随机分为2组,每组6只：[1]生理盐水组：腹腔注射生理盐水0.4 mL,注射后24 h取体外心脏,常规建立Langendorff体外心脏灌注模型,灌注15 min转为工作心15 min后停灌45 min,恢复灌注15 min改为工作心30 min.[2]重酒石酸去甲肾上腺素组：腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素3.1μmol/kg（0.53 mg/kg）,24 h后取体外心脏,方法同生理盐水组.采用Western blot法测定心肌细胞中热休克蛋白70含量及生化指标.结果：12只大鼠全部进入结果分析.[1]热休克蛋白70含量（吸光度）：重酒石酸去甲肾上腺素组明显高于生理盐水组（t=10.16,P＜0.01）.[2]生化指标：重酒石酸去甲肾上腺素组三磷酸腺苷含量、超氧化物歧化酶活性、心肌线粒体Ca^2＋-ATPase活性、心肌线粒体合成三磷酸腺苷能力优于生理盐水组[（13.67&;#177;2.60）,（5.36&;#177;0.89）μmol/g;（2.44&;#177;0.14）,（4.64&;#177;0.29）μkat/g;（6.77&;#177;0.90）,（2.54&;#177;0.28）μkat/g;（124.22&;#177;13.58）,（61.25&;#177;5.84）mmol/g;P均＜0.01],丙二醛含量、肌酸激酶和乳酸脱氢酶漏出率、心肌细胞内Ca^2＋含量、心肌线粒体Ca^2＋含量低于生理盐水组（P＜0.01）.结论：重酒石酸去甲肾上腺素诱导的热休克蛋白70的高表达对缺血再灌注未成熟心肌细胞功能具有明显的保护效应,可以减轻细胞内和线粒体内Ca^2＋超载而发挥其细胞保护效应,减轻再灌注损伤.     

热休克蛋白70对心脏移植大鼠供心心肌生化指标的影响

目的:观察应激情况下产生的热休克蛋白70对心脏移植大鼠供心心肌相关生化指标的影响。方法:实验于2006-04/09在青岛市市立医院中心实验室完成。①实验动物及分组:取成年SPF级雄性Wistar大鼠18只,按随机数字表法分为2组,每组9只。对照组腹腔注射生理盐水0.5mL,注射后24h取离体心脏,灌注HTK心脏保护液,并置于HTK液4℃保存3h后建立Langendorff离体心脏灌注模型,灌注K-H液2h。实验组腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素(溶于生理盐水中)3.1μmol/kg(0.53mg/kg),24h后取离体心脏,余处理步骤同对照组。②实验评估:应用全自动生化分析仪测定心肌肌酸激酶、乳酸脱氢酶含量;计算心肌肌酸激酶(乳酸脱氢酶)10min漏出率、心肌含水量;采用羟胺法测定超氧化物歧化酶活性,采用硫代巴比妥酸法测定丙二醛含量,采用双缩脲法测定组织蛋白含量;采用免疫组织化学法,以染色阳性面积占视野面积的百分比作为心肌组织热休克蛋白70的表达量。结果:18只大鼠全部进入结果分析,无脱失。①心肌组织热休克蛋白70含量:实验组高于对照组(t=17.96,P<0.01)。②相关生化指标:实验组大鼠心肌肌酸激酶、乳酸脱氢酶10min漏出率、心肌含水量及丙二醛含量显著均低于对照组(t=4.13～15.81,P<0.01),实验组大鼠心肌超氧化物歧化酶活性显著高于对照组(t=10.89,P<0.01)。结论:热休克蛋白70的高表达能减少氧自由基对供心心肌的损害,是热休克蛋白70发挥其供心心肌保护作用的可能途径之一。     

金属硫蛋白对离体缺血再灌注未成熟心肌细胞功能的影响

背景：实验已证实金属硫蛋白对成熟心肌有保护作用,但对于未成熟心肌的保护作用尚缺乏实验证据.目的：探讨诱导金属硫蛋白在未成熟心肌中的表达及对缺血再灌注未成熟心肌细胞功能的影响,为未成熟心肌的保护提供有效的方法.设计：完全随机分组设计,对照实验.单位：青岛大学医学院附属青岛市立医院妇产科和心脏外科,华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科.材料：实验于2001-10/2002-09在华中科技大学同济医学院药理实验室（安全级别一级）完成.选用出生14～21 d日本长耳大白兔27只,雌雄不拘.随机将兔分为4组：对照组9只,腹腔注射ZnSO4 12,24,48 h组各6只.方法：①对照组：腹腔注射蒸馏水0.3 mL,按注射后12,24和48 h取离体心脏,灌注重碳酸氢盐缓冲液15 min转为工作心15 min,全心停灌45 min,恢复灌注15 min改为工作心30 min.腹腔注射Zn-SO412,24,48 h组：分别按腹腔注射36 g/L ZnSO4 12,24和48 h后取离体心脏,余方法同对照组.②计算心肌肌酸激酶和乳酸脱氧酶15 min漏出率=心肌肌酸激酶（乳酸脱氢酶）（IU/L）&;#215;15 min漏出液（L）/[1000&;#215;心肌湿重（g）].③采用荧光素酶法心肌组织三磷酸腺苷含量.④心肌线粒体Ca^2＋-三磷酸腺苷酶活性按Jones方法在Shimadzu UV-1200型紫外分光光度计上测定.⑤在电感耦合等离子体原子发射光谱仪上测定线粒体Ca2＋含量.⑥取制备的心肌线粒体悬液按Nayler法测定线粒体合成三磷酸腺苷能力.⑦采用109Cd-血红素饱和法测定心肌组织中金属硫蛋白含量.组间计量资料差异比较采用t检验.主要观察指标：各组兔心肌细胞中金属硫蛋白含量、肌酸激酶和乳酸脱氢酶漏出率、三磷酸腺苷含量、心肌细胞内Ca^2＋含量、心肌线粒体Ca^2＋-三磷酸腺苷酶活性及线粒体Ca^2＋含量、心肌线粒体合成三磷酸腺苷能力比较.结果：日本长耳大白兔27只均进入结果分析.①乳酸脱氧酶漏出率、肌酸激酶漏出率、心肌Ca^2＋含量、线粒体Ca^2＋含量：腹腔注射ZnSO424,48h组明显低于对照组和腹腔注射ZnSO412 h组（P＜0.01）;.②心肌三磷酸腺苷含量、心肌线粒体Ca^2＋-三磷酸腺苷酶活性、心肌线粒体合成三磷酸腺苷能力、心肌金属硫蛋白含量：腹腔注射ZnSO4 24,48 h组明显高对照组和腹腔注射ZnSO4 12 h组（P＜0.05～0.01）.结论：腹腔注射ZnSO4可诱导心肌金属硫蛋白长时间表达,金属硫蛋白可减轻未成熟心肌细胞缺血再灌注损伤.     

金属硫蛋白对离体缺血再灌注未成熟心肌细胞功能的影响

背景实验已证实金属硫蛋白对成熟心肌有保护作用,但对于未成熟心肌的保护作用尚缺乏实验证据.目的探讨诱导金属硫蛋白在未成熟心肌中的表达及对缺血再灌注未成熟心肌细胞功能的影响,为未成熟心肌的保护提供有效的方法.设计完全随机分组设计,对照实验.单位青岛大学医学院附属青岛市立医院妇产科和心脏外科,华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科.材料实验于2001-10/2002-09在华中科技大学同济医学院药理实验室(安全级别一级)完成.选用出生14～21 d日本长耳大白兔27只,雌雄不拘.随机将兔分为4组对照组9只,腹腔注射ZnSO4 12,24,48 h组各6只.方法①对照组腹腔注射蒸馏水0.3 mL,按注射后12,24和48 h取离体心脏,灌注重碳酸氢盐缓冲液15 min转为工作心15 min,全心停灌45 min,恢复灌注15 min改为工作心30 min.腹腔注射Zn-SO412,24,48 h组分别按腹腔注射36 g/L ZnSO4 12,24和48 h后取离体心脏,余方法同对照组.②计算心肌肌酸激酶和乳酸脱氧酶15 min漏出率=心肌肌酸激酶(乳酸脱氢酶)(IU/L)×15 min漏出液(L)/[1000×心肌湿重(g)].③采用荧光素酶法心肌组织三磷酸腺苷含量.④心肌线粒体Ca2+-三磷酸腺苷酶活性按Jones方法在Shi-madzu UV-1200型紫外分光光度计上测定.⑤在电感耦合等离子体原子发射光谱仪上测定线粒体Ca2+含量.⑥取制备的心肌线粒体悬液按Nayler法测定线粒体合成三磷酸腺苷能力.⑦采用109Cd-血红素饱和法测定心肌组织中金属硫蛋白含量.组间计量资料差异比较采用t检验.主要观察指标各组兔心肌细胞中金属硫蛋白含量、肌酸激酶和乳酸脱氢酶漏出率、三磷酸腺苷含量、心肌细胞内Ca2+含量、心肌线粒体Ca2+-三磷酸腺苷酶活性及线粒体Ca2+含量、心肌线粒体合成三磷酸腺苷能力比较.结果日本长耳大白兔27只均进入结果分析.①乳酸脱氧酶漏出率、肌酸激酶漏出率、心肌Ca2+含量、线粒体Ca2+含量腹腔注射ZnSO424,48h组明显低于对照组和腹腔注射ZnSO412 h组(P＜0.01);.②心肌三磷酸腺苷含量、心肌线粒体Ca2+-三磷酸腺苷酶活性、心肌线粒体合成三磷酸腺苷能力、心肌金属硫蛋白含量腹腔注射ZnSO4 24,48 h组明显高对照组和腹腔注射ZnSO4 12 h组(P＜0.05～0.01).结论腹腔注射ZnSO4可诱导心肌金属硫蛋白长时间表达,金属硫蛋白可减轻未成熟心肌细胞缺血再灌注损伤.     

金属硫蛋白在供心中的表达和作用的研究

目的　探讨金属硫蛋白 (MT)在供心中的表达和作用。方法　Wistar大鼠 2 4只 ,分为 4组 :对照组 (C ,n =6 ) ,腹腔注射蒸馏水 0 5mL 2 4h后取离体心脏行Langendorff灌注 ,然后灌注HTK心脏保护液 ,4℃保存 3h后再行Langendorff灌注12 0min ;实验组 1组 (E1,n =6 )腹腔注射ZnSO412h后取离体心脏 ,处理方法同C组 ;实验组 2组 (E2 ,n =6 )腹腔注射ZnSO42 4h后取离体心脏 ,处理方法同C组 ;实验组 3组 (E3,n =6 )腹腔注射ZnSO448h后取离体心脏 ,处理方法同C组。测定心肌细胞中MT含量、心肌含水量 (MWC)、血清肌酸激酶 (CK)和乳酸脱氢酶 (LDH)漏出率、ATP含量、丙二醛 (MDA)含量、超氧化物歧化酶 (SOD)活性、心肌细胞内Ca2 含量、心肌线粒体Ca2 -ATPase活性及其Ca2 含量、心肌线粒体合成ATP能力 [ATP]m。结果　MT含量E2和E3组较C、E1组明显增高 (P <0 0 1) ;E2和E3组ATP含量、SOD活性方面均优于C组 (P <0 0 5 ) ,心肌含水量、MDA含量、CK、LDH漏出率方面均低于C组 (P <0 0 5 ) ,心肌线粒体Ca2 -ATPase活性、[ATP]m 均优于C组 (P <0 0 1) ,心肌细胞内Ca2 含量、心肌线粒体Ca2 含量低于C组 (P <0 0 1)。结论　腹腔注射ZnSO4可诱导供心MT长时间表达 ,MT对鼠离体供心具有明显保护作用     

黄芪干预脑缺血再灌注鼠脑组织热休克蛋白70的基因表达

目的:探讨脑缺血缺氧敏感标志热休克蛋白70在鼠脑缺血再灌注应用黄芪后基因的表达。方法:实验于2002-01在深圳市人民医院动物实验室完成。选取蒙古沙土鼠12只,随机分为假手术组、缺血再灌注组、缺血再灌注+黄芪组,4只/组,其中雌雄各两只。黄芪注射液由成都地奥九泓制药厂生产,生药含量为2g/kg,用生理盐水稀释成0.25g/mL。采用双侧颈动脉夹闭建立脑缺血再灌注模型,缺血再灌注+黄芪组腹腔内注射黄芪注射液2.5g/kg,缺血再灌注组和假手术组腹腔内注射等量生理盐水。于脑缺血15min再灌注24,48h后运用免疫组织化学技术观察热休克蛋白70基因的动态表达。结果:实验纳入12只鼠,全部进入结果分析。①热休克蛋白70的mRNA表达:各组均可检测到热休克蛋白70mRNA的表达信号。缺血再灌注组热休克蛋白70mRNA表达较假手术组升高24%,缺血再灌注+黄芪组较缺血再灌注组降低30.5%,较假手术组降低14%。表明黄芪可明显抑制脑缺血再灌注后热休克蛋白70mRNA的表达。②热休克蛋白70的蛋白表达:各组均可检测到热休克蛋白70的蛋白表达。缺血再灌注组热休克蛋白70的蛋白表达较假手术组升高58%,缺血再灌注+黄芪组较假手术组升高32%,较缺血再灌注组降低16.5%,表明黄芪对热休克蛋白70表达呈轻度抑制作用。结论:缺血缺氧后热休克蛋白70mRNA及蛋白表达明显增强,而黄芪的应用可以抑制热休克蛋白70的转录与翻译,明显减弱其表达,显示黄芪具有一定的脑保护作用,并有可能调控该基因的表达。提示检测热休克蛋白基因的表达可作为对脑保护药物黄芪的疗效评估指标。     

葛根素对缺血再灌注损伤心肌组织热休克蛋白70表达的影响

目的:葛根素注射液已初步被证实具有抗氧化自由基,减轻缺血再灌注后心肌超微结构损伤的药理作用.观察心肌缺血再灌注损伤时热休克蛋白70的表达变化及葛根素对其的影响,寻求其新的心肌保护机制.方法:实验于2005-03/2006-04在江西省心血管病研究所完成,动物实验方法符合动物伦理学要求.①实验材料及分组:选用健康雄性SD大鼠48只,按随机数字表法分为缺血再灌注模型组及葛根素组(n=24),每组再根据再灌注时间不同分为缺血20min再灌注0.5,4及8h组(n=8).②实验方法:结扎大鼠左冠状动脉前降支建立心肌缺血/再灌注模型,葛根素组在结扎冠状动脉前降支前10min经腹腔给予葛根素注射液50mg/kg;缺血再灌注模型组则给予等容量的生理盐水.③实验评估:于再灌注后0.5,4,8h各时相点,应用链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶法检测心肌热休克蛋白70含量;采用分光光度法检测血清髓过氧化物酶活性;应用透射电镜观察心肌组织超微结构.结果:48只大鼠全部进入结果分析.①热休克蛋白70主要在心肌细胞的胞浆表达,以细胞核的核周最为明显,细胞核很少表达.②随着再灌注时间延长心肌热休克蛋白70含量表达逐渐增强,心肌缺血再灌注后0.5,4,8h葛根素组大鼠心肌热休克蛋白70含量均显著高于缺血再灌注模型组(P＜0.05～0.01).③随着再灌注时间延长髓过氧化物酶活性呈现下降趋势,心肌缺血再灌注后0.5,4,8h葛根素组大鼠血清髓过氧化物酶活性均显著低于缺血再灌注模型组(P＜0.01).④缺血再灌注模型组大鼠心肌纤维排列不规则,部分发生断裂、溶解;线粒体排列紊乱,明显肿胀.葛根素组大鼠心肌纤维排列规则,结构完整;线粒体排列整齐.结论:葛根素能明显减轻心肌缺血再灌注损伤,其心肌保护途径可能是通过上调热休克蛋白70表达、降低血清髓过氧化物酶活性来实现的.