猪主动脉脱细胞血管基质制备及保存

目的探讨脱细胞血管基质的制备和保存方法。方法采用酶、低渗溶液、化学除垢剂联合法处理猪胸主动脉制备脱细胞血管基质,标本行苏木精-伊红染色,大体、光镜及扫描电镜、透射电镜观察。并将标本放入液氮中保存,于保存1、2、3月分别取标本用20g/L戊二醛固定,扫描电镜观察。结果经该法处理的猪血管细胞全部脱除,胶原纤维、弹性纤维无断裂,细胞外基质保持完好。液氮保存后1、2、3月扫描电镜观察与新鲜标本无明显差别。结论酶、低渗溶液、化学除垢剂联合法是制备脱细胞血管基质的较好方法,制得的脱细胞血管基质可放入液氮中保存。     

新型天然血管支架:猪胸主动脉脱细胞血管基质的制备

目的研究用酶-化学除垢剂联合法制备猪胸主动脉脱细胞血管。方法猪的新鲜胸主动脉经消毒后,于离心管中经过胰蛋白酶+EDTA,曲拉通X-100溶液作用后取标本。血管体积与各作用溶液体积比为3∶7。标本作苏木素—伊红、弹力纤维染色,大体、光镜及扫描电镜观察。结果胸主动脉中的细胞成分被除去,留下成分主要包括胶原纤维、弹性蛋白等。结论酶-化学除垢剂联合法可将猪胸主动脉细胞成分除去。胰蛋白酶,曲拉通X-100是制备血管脱细胞基质(ACTM)的良好试剂。     

构建组织工程瓣膜支架中3种去垢剂的比较

背景:目前,组织工程瓣膜去细胞支架的制备方法和效果各不相同,但总的来说,酶结合去垢剂法显示出一定的优势作用.目的:探讨脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠、曲拉通3种去垢剂结合酶消化法对于猪主动脉瓣膜脱细胞的效果以及去细胞后对支架的影响.方法:将新鲜猪主动脉瓣膜用抗生素溶液浸泡12 h后,置于胰蛋白酶和EDTA溶液中12 h,再分别用脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠、曲拉通进行处理,最后转入核酸酶溶液中浸泡12 h,以达到去除内皮细胞和间质细胞的目的,常规苏木精一伊红染色观察内皮细胞是否除完全,Masson染色观察胶原纤维和弹力纤维损害程度,电子扫描显微镜观察纤维结构以评价效果.结果与结论:3种去垢剂结合酶消化法均能彻底去细胞,但脱氧胆酸钠对支架胶原纤维和弹力纤维的损害较轻微,十二烷基硫酸钠次之,曲拉通对支架的损害作用最大.提示脱氧胆酸钠结合酶消化法是一种较合理的组织工程瓣膜支架构建方法.     

组织工程血管基质的制备及保存

背景:为构建全生物化组织工程血管,制备及保存脱细胞血管基质.目的:制备组织工程血管基质,观察其保存于液氮中的可行性.方法:采用胰蛋白酶、低渗溶液、化学除垢剂法处理兔胸主动脉来制备组织工程血管基质,标本作大体、光镜及扫描电镜、透射电镜观察,并将制备的血管基质放入液氮中保存,3个月后取出作扫描电镜观察.结果与结论:经该法处理的兔血管细胞全部脱除,胶原纤维、弹性纤维无断裂,细胞外基质保持完好,液氮保存3个月后扫描电镜观察与新鲜基质无明显差别.提示酶、低渗溶液、化学除垢剂联合法是制备组织工程血管基质的较好方法,制备的血管基质可放入液氮中进行短期保存.     

新型天然血管支架：猪胸主动脉脱细胞血管基质的制备

目的 研究用酶－化学除垢剂联合法制备猪胸主动脉脱细胞血管。方法 猪的新鲜胸主动脉经消毒后，于离心管中经过胰蛋白酶＋EDTA，曲拉通X－100溶液作用后取标本。血管体积与各作用溶液体积比为3：7。标本作苏木素－伊红，弹力纤维染色，大体，光镜及扫描电镜观察。结果 胸主动脉中的细胞成分被除去，留下成分主要包括胶原纤维，弹性蛋白等。结论 酶－化学除垢剂联合法可将猪胸主动脉细胞成分除去。胰蛋白酶，曲拉通X－100是制备血管脱细胞基质（ACTM）的良好试剂。     

脱细胞血管基质材料同种异体移植10个月研究

背景：异体血管移植之所以至今未能在临床应用,关键是异体组织抗原性排斥反应的难题未能得到解决。目的：制备动脉脱细胞血管基质,探讨脱细胞血管异体移植的可行性。方法：采用不同去垢剂（1%TritonX-100、1%SDS）多步骤对犬血管进行脱细胞处理,通过组织学和力学观测,建立犬动脉血管脱细胞的方法;并进行脱细胞血管的异体移植。结果与结论：经胰蛋白酶、低渗溶液和去垢剂TritonX-100、SDS等多步骤处理,犬颈总动脉血管的细胞基本脱除,细胞外基质保持完好,血管的弹性、韧性保存较好;用该法制备的犬颈总动脉（直径约4.0mm）进行异体移植,经10个月观察,4/5通畅。提示经去垢剂TritonX-100、SDS加低渗溶液、胰蛋白酶和蛋白酶抑制剂处理的多步法,可以脱除血管的细胞成分,细胞外基质和力学特性保持完好,是一种较好的方法;用该法制备的犬颈总动脉可以直接进行异体移植,是一可选择的血管移植材料。     

应用猪主动脉脱细胞基质制备新型组织工程血管支架:生物相容性及力学性能评价

背景:组织工程血管构建的关键依赖于理想的支架.猪血管作为组织工程血管构建材料已有广泛应用,但其较高的免疫原性及较差的力学强度限制了该材料作为组织工程支架的应用.目的:应用猪主动脉脱细胞基质制备一种新的具有良好机械性能及生物相容性的组织工程血管支架.方法:对猪主动脉进行脱细胞处理和热交联改性制备脱细胞血管基质支架,采用苏木精-伊红染色及生物力学分析评估其脱细胞效果及血管基质的力学性能.将人脐静脉血管内皮细胞接种于脱细胞血管基质支架中进行体外培养,评估其生物相容性.结果与结论:用1%的Triton X-100溶液处理猪主动脉84 h可完全脱除血管细胞,同时不破坏血管基质结构;经真空下120 ℃热交联处理12 h,脱细胞基质的拉伸断裂强度得到明显提高,达到1.70 MPa.在该改性血管基质支架上接种人脐带静脉内皮细胞体外培养7 d,扫描电镜显示内皮细胞呈现典型的血管内皮层状结构.表明猪主动脉经过脱细胞处理能够维持血管基质完整,冷冻干燥和真空热交联处理可有效提高其拉伸强度,且对血管内皮细胞具有良好的相容性.     

胰蛋白酶法和Trilon X-100法脱猪软骨细胞的比较

背景:作为修复软骨缺损的一种材料,脱细胞软骨基质已受到越来越多研究者的关注,但是制备脱细胞软骨基质的两种主要背景:作为修复软骨缺损的一种材料,脱细胞软骨基质已受到越来越多研究者的关注,但是制备脱细胞软骨基质的两种主要方法其脱细胞效果孰优孰劣尚不清楚.目的:对比胰蛋白酶法和Triton X-100法脱猪关节软骨细胞的效果.设计、时间及地点:对比观察,于2008-03/07在山西医科大学第二医院骨科中心实验室完成.材料:新鲜猪膝、髋关节软骨市场上购得.方法;选取新鲜猪关节软骨片分别置入2.5g/L胰酶溶液和2.5 g/L Triton X-100溶液中脱细胞处理,并以未经处理的新鲜软骨片作对照.主要观察指标:①大体观察脱细胞后关节软骨的外观形态.②免疫组织化学染色及扫描电镜下观察两种脱细胞方式对细胞外基质胶原的影响.③每组随机选取10片软骨片进行加载、卸载试验和拉断试验,测定断裂强度和断裂拉伸率.结果:①经过两种方法脱细胞后,软骨脱细胞基质在外观上与未脱细胞软骨差别甚微,只是颜色较软骨略白,触摸较未脱细胞基质柔软.②免疫组织化学染色及扫描电镜可见,胰酶法和Triton X-100法均彻底脱去了关节软骨上的细胞成分,胰酶法观察到胶原排列有序,纹理清晰,可见胰酶在脱细胞的同时对细胞外基质没有明显的破坏;Triton X-100法观察到胶原仍比较多,但纹理结构有些紊乱,可能是Triton X-100法脱细胞对细胞外基质进行了破坏.③新鲜关节软骨组、胰酶组和Triton X-100组断裂强度和断裂拉伸率相比,差异均无显著性意义.结论:两种方法均彻底脱去了关节软骨上的细胞成分,脱胰酶法脱猪关节软骨细胞的方法作用时间较短,胶原保存好,且成本较低.Triton X-100法脱细胞步骤较多,时间较长,对胶原结构有轻微的破坏,但对软骨的力学性能没有显著影响.     

不同方法制备脱细胞猪主动脉瓣膜支架的组织结构

背景:理想的脱细胞方法要求既能完全去除供体细胞,降低免疫原性,又能保留天然瓣膜的胶原纤维、弹力纤维等细胞外基质成分,以保持足够的机械强度。目的:采用不同洗剂制备脱细胞猪主动脉瓣膜支架,对比其组织结构,探讨最为有效的脱细胞瓣膜支架制备方法。方法:20个新鲜猪主动脉瓣膜随机分为新鲜对照组、去污剂组、酶消化组和去污剂-酶消化组,后3组分别使用TritonX-100、胰蛋白酶以及二者联合的方法制备脱细胞瓣膜支架,对比支架大体形态、苏木精-伊红染色、Mallory-Heidenhain染色和电镜下超微结构的不同。结果与结论:经脱细胞处理后,去污剂组瓣叶柔软、光滑,苏木精-伊红染色少量核物质存留、纤维排列规整,Mallory-Heidenhain染色胶原纤维和弹性纤维相交错,电镜下呈波浪状排列、原纤维横纹清楚;酶消化组瓣叶局部塌陷,苏木精伊红染色细胞完全去除、纤维排列较紊乱,Mallory-Heidenhain染色胶原纤维和弹性纤维呈网状排列,电镜下纤维部分断裂、原纤维横纹存在;去污剂-酶消化组瓣叶柔软、光滑,苏木精伊红染色细胞完全去除、纤维完整,Mallory-Heidenhain染色胶原纤维和弹性纤维平行排列,电镜下纤维完好,但排列稀疏,原纤维横纹清晰。说明3种方法均可有效去除供体细胞,保持纤维结构相对完整,在完全清除供体细胞并保持纤维支架完整性方面,TritonX-100联合胰蛋白酶的方法更为有效。     

脱细胞猪主动脉基质重建犬颈段食管的实验

目的：探索用脱细胞猪主动脉基质重建食管缺损的可行性。 方法：实验于2005-02／2006-02在解放军第二军医大学长海医院胸心外科研究所完成。选用健康杂种犬7只，清洁级，雌雄不拘。体质量163-19Akg，采用酶消化法制备脱细胞猪主动脉基质，以脱细胞猪主动脉基质置换7只犬颈段2cm的食管缺损。分别于术后1。2，3个月各处死实验犬1只，取出新生食管。大体观察新生食管愈合、肉芽生长及黏膜爬行再生情况，常规法行光镜检查和扫描电镜检查。观察食管再生和改建情况。 结果：7只实验犬除实验犬1因化脓性腹膜炎术后3d死亡外，其余6只均存活。①大体观察结果：所有实验犬术后未出现吻合口瘘，存活犬术后45—60d出现不同程度的狭窄症状。3只术后狭窄经扩张治疗后进食改善，体质量恢复到术前水平，1只在行狭窄扩张治疗时新生食管撕裂死亡。②食管再生和改建情况：脱细胞猪主动脉基质能诱导新生血管的形成，达到生物学固定；实验犬术后1个月新生食管完全上皮化，并可见血管平滑肌再生；术后2个月时黏膜上皮分化为8-10层。上皮下可见有序排列的胶原纤维；术后3个月时上皮进一步分化为8-12层，上皮下有序排列的胶原纤维较前增厚，并可见横纹肌岛状再生。脱细胞猪主动脉基质逐步降解吸收。 结论：①脱细胞猪主动脉基质原位替代食管后未因排异反应和假体感染而脱落。②诱导了宿主食管组织上皮细胞、平滑肌和横纹肌细胞的再生，有望成为人工食管的理想替代材料。