猪心脏移植缺血再灌注损伤中NO和NOS的表达

①目的　了解猪同种原位心脏移植术后早期一氧化氮 (NO)、一氧化氮合酶 (NOS)含量的变化 ,及其与早期缺血再灌注损伤的关系。②方法　建立猪同种原位心脏移植模型。供心在移植前低温保存 (Thomas液 ,4℃ ) 4h ,移植成功心脏复搏后 2h取材。应用组织化学方法测定心肌组织中NO、NOS的含量 ,应用核酸原位末端标记法 (TUNEL)测定心肌细胞凋亡指数 ,作为评价心肌缺血再灌注损伤的指标。以正常心肌及单纯缺血心肌组织作为对照。③结果　移植后心肌组织NO、NOS的含量较缺血组与正常组低 ,差异有显著意义 (F =2 7.2 2 9、16 .2 0 3,q =5 .716～ 6 .4 12 ,P <0 .0 1)。移植组心肌细胞凋亡指数与正常组及缺血组比较明显升高 ,差异有显著性(F =16 3.884 ,q =7.4 82、6 .975 ,P <0 .0 1)。心肌组织NO、NOS含量与心肌细胞凋亡指数呈负相关关系 (r =- 0 .886、- 0 .795 ,P <0 .0 1)。④结论　猪心脏移植后早期心肌缺血再灌注损伤所致的细胞死亡主要表现为心肌细胞凋亡 ;再灌注期间内源性NO、NOS的减少参与了心脏移植后早期缺血再灌注损伤的发生     

热休克蛋白70对兔未成熟心肌和心肌间质的影响

目的: 探讨热休克蛋白70(HSP70)对未成熟心肌和心肌间质的影响. 方法:健康新生长耳大白兔12只随机分为2组. 对照组(C组):ip生理盐水0.4 mL,24 h后取离体心脏,常规建立Langendorff离体心脏灌注模型,灌注15 min转为工作心15 min后停灌45 min,恢复灌注15 min改为工作心30 min;实验组(E组):ip去甲肾上腺素, 24 h后取离体心脏,方法同对照组. 测定心肌细胞中HSP70含量、血流动力学指标、心肌含水量(MWC)、心肌肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、三磷酸腺苷(ATP)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量、心肌组织羟脯氨酸(HP)含量、内皮素(ET) 含量、心肌细胞内Ca2 含量、心肌线粒体Ca2 -ATPase活性及其Ca2 含量、心肌线粒体合成ATP能力[ATP]m,心肌超微结构. 结果:E组HSP70含量明显高于C组(P<0.01);MWC低于C组(P<0.05);ATP含量、SOD活性、心肌线粒体Ca2 -ATPase活性、[ATP]m, HP含量优于C组(P<0.01),MDA含量、CK, LDH漏出率、心肌细胞内Ca2 含量、心肌线粒体Ca2 含量、ET含量低于C组(P<0.01),心肌超微结构损伤较C组明显减轻. 结论:HSP70对缺血再灌注未成熟心肌和心肌间质具有明显的保护作用.     

下肢缺血预处理对未成熟心肌的保护作用及其机制

目的　探讨下肢缺血预处理对未成熟心肌保护作用的机制。方法　采用双下肢缺血预处理 (DLIP)大白兔Langendorff离体心脏灌注模型。分为 4组 ,每组大白兔 6只 :E1组 ,动物麻醉后反复 3次阻断双下肢血流 5min ,松开 5min ,建立模型 ,灌注 15min转为工作心 15min ,全心停灌 45min ,恢复灌注 15min改为工作心 3 0min ;E2组 ,双下肢缺血预处理前静脉注射超氧化物歧化酶至双下肢缺血预处理完毕 ,重复E1组方法 ;E3组 ,静脉注射蛋白激酶C(PKC)阻滞剂多粘菌素B(PMB) ,时间 10min ,重复E1组方法 ;E4组 ,静脉注射ATP敏感性钾通道 (mitoKATP)阻滞剂(5 HD) ,时间 10min ,重复E1组方法。以左室功能恢复、心肌含水量、血清肌酸激酶 (CK )和乳酸脱氢酶 (LDH)漏出率、心肌组织ATP和丙二醛 (MDA)含量、超氧化物歧化酶 (SOD)活性、心肌细胞内Ca2 含量、心肌线粒体钙依赖性ATP酶 (Ca2 ATPase)活性及其Ca2 含量、心肌线粒体合成ATP能力 [ATP] m、超氧阴离子自由基 (O2 -)作为观察指标。结果　E1组左心室功能恢复优于其他各组 (P <0 .0 5 ) ,心肌ATP含量、SOD活性、Ca2 ATPase活性、[ATP] m 均优于其他各组 (P <0 .0 1) ,心肌含水量低于其他各组 (P <0 .0 5 ) ,MDA含量、CK、LDH漏出率、心肌细胞内Ca2 含量、心肌     

热休克蛋白70对离体心脏心肌间质的保护作用

目的探讨热休克蛋白70（HSP70）对大鼠离体心脏心肌间质的影响。方法Wistar大鼠16只，分为2组：对照组（C，n=8），腹腔注射生理盐水0．4ml，24h后取离体心脏灌注HTK心脏保护液，4℃保存3h后建立Langendorff灌注模型，灌注KH液2h；实验组（E，n=8），腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素，24h后取离体心脏，方法同对照组。以心肌细胞中HSP70含量、血流动力学指标、心肌组织羟脯氨酸（HP）、内皮索（ET）含量和心肌超微结构等作为观察指标。结果HSP70含量E组与C组比较明显增高；E组心功能恢复方面优于C组（P〈0．05），HP含量优于C组（P〈0．01），ET含量低于C组（P〈0．01），心肌超微结构损伤较C组明显减轻。结论HSP 70对供心心肌间质具有保护作用。     

肾缺血预处理对未成熟心肌凋亡蛋白表达的影响

目的 :探讨肾缺血预处理 （RIP）对未成熟心肌细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法 :采用兔Langendorff模型 ,幼兔 2 4只随机分为 3组 ,对照组 （C ,n =8） :仅灌注KH液 180min ,然后取标本 ;缺血 /再灌组 （I/R ,n =8） :灌注 2 0min后 ,停灌 4 5min ,再灌 12 0min ;肾缺血预处理组 （RIP ,n =8） ,反复 2次阻断肾血流 5min/放开 5min ,建立Langendorff模型 ,然后重复I/R组缺血 /再灌方法。以凋亡细胞原位标记与半定量分析、琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段梯及Bcl 2、Bax、Fas基因蛋白的表达作为观察指标。结果 :凋亡细胞原位标记与半定量分析 :RIP组与I/R组比较 ,心肌细胞凋亡率显著减少 ;琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段梯 :RIP组与I/R组比较 ,光密度显著降低 ;RIP组与I/R组比较 ,Bcl 2表达明显增多 ,Bax、Fas表达显著减少。结论 :RIP可能通过调节Bcl 2、Bax、Fas蛋白的不同表达影响心肌细胞的凋亡。     

微创小切口对不停跳冠状动脉搭桥术后疼痛影响

目的对比分析微创小切口和常规正中切口对不停跳冠状动脉搭桥术(off-pump coronary artery bypass grafting,OP-CABG)后疼痛的影响差异,并对其处理措施作简要分析。方法对比分析作者所在科室2012-06/2013-07月行微创小切口不停跳冠状动脉搭桥术(minimally invasive direct CABG,MID-CABG)的20例患者(M组)和随机抽取的同期正中切口行OP-CABG的40例患者(N组)的病历资料,统计术后镇痛药物使用情况,于患者麻醉清醒后2、8、12、24、48、72 h使用视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)测评,出院后回访患者对术后切口疼痛的感知,依据剧痛、疼痛、微痛、无痛四个等级来评定。结果 M组患者止痛药物使用量较N组增加,术后各时间段VAS疼痛评分较N组高,术后将切口疼痛感受评定为剧痛的患者比例较N组升高。结论 MID-CABG加重了患者切口疼痛,经过积极处理可增加微创外科优势。     

热休克蛋白70对离体大鼠供心心肌细胞的保护作用

目的探讨热休克蛋白70（HSP70）对离体大鼠供心的保护作用,观察其对供心心肌细胞功能及超微结构的影响。方法Wistar大鼠18只,随机分为2组：对照组腹腔注射生理盐水0.5mL,24h后取心脏灌注HTK心脏保护液,4℃保存3h后建立Langendorff离体心脏灌注模型,灌注KH液2h;实验组腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素（溶于生理盐水中）3.1μmol/kg（0.53mg/kg）,24h后取心脏,处理方法同对照组。测定两组心肌肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）漏出率以及心肌水含量（MWC）、HSP70、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的水平。观察心肌细胞光镜结构和电镜下的超微结构。结果实验组HSP70、SOD的含量较对照组明显增高（t=17.96,P〈0.01）;实验组MWC、MDA含量、CK、LDH漏出率较对照组明显降低（t=4.13~15.81,P〈0.01）。实验组心肌细胞光镜下以及电镜下超微结构的损伤程度较对照组明显减轻。结论心肌HSP70高表达对离体大鼠供心心肌细胞具有明显的保护效应。     

大鼠外周血内皮祖细胞体外向内皮细胞诱导分化时的表型变化特征

目的 研究大鼠外周血内皮祖细胞(EPC)体外分化为内皮细胞的过程中,干细胞标志物以及内皮细胞表型的变化.方法 取SD大鼠外周血,应用Ficoll密度梯度离心的方法获得单个核细胞,体外培养于纤连蛋白处理的培养皿中,同时应用VEGF和bFGF诱导,使之向内皮细胞转化,用免疫组织化学方法检测细胞CD31、CD34、Flk-1、vWF在第1～7天的表达.结果 贴壁细胞的CD31、CD34、Flk-1、vWF在不同时段呈不同程度的表达.干细胞的标志物CD31、CD34的表达逐步减弱,第6天时消失.内皮标志物Flk-1和 vWF表达逐步增强,第7天时达100%.结论 大鼠外周血干细胞向内皮祖细胞分化的过程中,干细胞标志物逐渐消失,内皮细胞的表型逐步显现.     

猪脱细胞血管基质的制备及其生物学性状检测

背景：目前脱细胞血管基质的制备方法有酶消化法和去污剂法。十二烷基硫酸钠为离子型去垢剂，脱细胞效果强，但易引起较多蛋白纤维损伤，影响血管的结构和力学特性。Triton X-100为柔和的非离子型去垢剂，两者联合应用可减少纤维损伤。 目的：采用酶、非离子型和离子型去垢剂联合法制备猪脱细胞血管基质，并检测其生物学性状。 设计、时间及地点：对比观察的细胞学实验，于2007-08／2008—05青岛市市立医院心脏中心实验室完成。 材料：雄性幼猪1只，取其胸主动脉用于制备脱细胞血管基质。 方法：采用含双抗的0．125％胰蛋白酶、1％Triton X-100、1％十二烷基硫酸钠逐步处理猪胸主动脉。 主要观察指标：苏木精-伊红染色观察细胞脱除情况。扫描电镜、透射电镜观察细胞脱除情况及胶原纤维和弹性纤维情况。测定脱细胞血管基质中胶原蛋白含量，检测血管脱细胞血管基质的伸长比、极限应力。 结果：经该法处理的猪血管内细胞全部脱除，胶原纤维、弹性纤维无断裂，细胞外基质保持完好，其胶原蛋白含量和力学性状与新鲜组织无明显差别。 结论：酶、非离予型和离子型去垢剂联合法是制备脱细胞血管基质的较好方法，制备获得的脱细胞血管基质生物学性状保持良好。     

急性心肌梗死并发心源性休克急诊冠状动脉旁路移植术体会

目的:总结急性心肌梗死(AMI)并发心源性休克(CS)急诊冠状动脉旁路移植术(CABG)治疗效果。方法:9例AMI并发CS患者急诊在全麻体外循环下实施CABG。结果:治愈6例,死亡3例,2例死于顽固性低心排血量综合征,1例死于肾功能衰竭和上消化道出血。结论:急诊CABG可以有效提高AMI并发CS患者的生存率。