运用酵母双杂交系统筛选肌营养不良相关蛋白2(DRP2)相互作用蛋白

目的应用酵母双杂交系统筛选小鼠、大鼠、人类大脑文库中与DRP2相互作用的蛋白,分析中枢神经系统中DRP2分子复合体的组成成分。方法设计3个含有DRP2不同蛋白结构域的诱饵质粒,在完成诱饵质粒的自激活性的鉴定后,对小鼠、大鼠、人类脑MATCHMAKER cDNA文库进行筛选。结果运用DRP2蛋白N-Bait筛选大鼠脑MATCHMAKER cDNA文库,笔者获得了一个阳性文库质粒。该质粒的插入子编码一种SNAP25相互作用的蛋白质Scoilin。Scoilin又被命名为Zwint-1蛋白。同时笔者还确定了这两种相互作用蛋白质的精确结构域:DRP2蛋白以其含有两个Spectrin重复和一个WW蛋白结构域的氨基端与Scoilin(Zwint-1)全蛋白相互作用。结论应用酵母双杂交,笔者于大鼠大脑中找到了DRP2的相互作用的蛋白质Scoilin(Zwint-1),并且确定了这两种相互作用蛋白质的精确结构域。     

人抗肌萎缩蛋白Dp71 shRNA载体构建与检测

目的:构建有效针对人Dystrophin Dp71基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,并验证其干扰效果。方法:设计合成3对针对人Dystrophin Dp71基因的和1对无同源性的siRNA片段,在两端和中间加上酶切位点和Loop环。将合成的DNA片段插入到干扰载体pRNAT-U6.1/Neo中,经过酶切和测序验证,成功构建人Dp71基因的shRNA和空白对照载体。将各干扰载体和空白载体转染人正常胃黏膜上皮细胞(gastric epithelial cells,GES-1)和人支气管上皮细胞(human bronchial epithelium,HBE),Western印迹检测Dp71 shRNA真核表达载体的干扰效率。结果:酶切和测序验证均表明各Dp71-shRNA载体构建成功。将空载体及各Dp71 shRNA载体分别转染GES-1和HBEC,和空白细胞对照及shRNA空白载体组相比,3组Dp71-shRNA能够明显抑制Dp71蛋白表达,但是3组质粒的抑制效率有一定的差异,以Dp71 shRNA2对Dp71表达的干扰效率最强。结论:成功构建了3个有效针对人Dystrophin Dp71基因的shRNA干扰载体,3组质粒都能有效地抑制Dp71在GES-1和HBEC中的表达,其中以Dp71-shRNA2的抑制效率最高。     

人肺腺癌肿瘤细胞免疫表型CD133、CD34、CD44的实验研究

目的 拟验证CD133、CD34、CD44作为人肺腺癌肿瘤干细胞表面标记物的合理性.方法 采集新鲜肺腺癌组织标本,利用两种体外培养方法扩增出贴壁细胞和悬浮细胞球两种肿瘤细胞,采用免疫荧光检测比较CD133、CD34和CD44在两种培养细胞中表达的差异.结果 悬浮球肿瘤细胞培养较贴壁肿瘤细胞生长速度慢、维持时间长且成功率高(72.5% vs 47.5%,P＜0.05).CD133、CD34和CD44在悬浮细胞球中表达率和表达量明显高于贴壁肿瘤细胞(68.97%,82.76%,93.10% vs 5.26%,15.79%,5.26%,P＜0.01).结论 CD133、CD34和CD44可能作为分离人肺腺癌肿瘤干细胞的表面蛋白表标记组合.

Abstract：

Objective To validate the possibility of CD133 CD34 CD44 be served as biomarkers in cancer stem cell of human lung adenocarcinoma. Methods Two kinds of culturing methods were performed to generate adhesive tumor cells and floating aggregates, and the differences of expression of CD133 CD34 CD44 between 2 kinds of cultured cells were observed by immunofluorescence. Results Floating aggregates grew more slowly, kept activity for longer period than adhesive cells (72.5% vs 47.5%,P＜0.05). Floating aggregates expressed higher level of CD133, CD34 and CD44 than adhesive cells (68.97%,82.76%,93.10% vs 5.26%,15.79%,5.26%,P＜0.01). Conclusions The combination of CD133, CD34 and CD44 probably can be used as surface markers of cancer stem cells for human lung adenocarcinoma.     

儿童型脊肌萎缩症基因诊断的研究

目的 探讨儿童脊肌萎症（ＣＳＭＡ）的基因诊断方法。方法 ＰＣＲ－酶切分析法对７例ＣＳＭＡ患儿进行运动神经元生存（ＳＭＮ）基因的基因诊断分析,结果 ７例ＣＳＭＡ患儿ＳＭＮ基因７号８号一子ＰＣＲ产物经ＤｒａＩ、ＤｄｅＩ酶切后,６例仅剩下１６５ｂｐdisplay structure     

基于案例和问题的交互式病理生理学教学模式的效果评价

目的　评价病理生理学课堂教学应用“基于案例和问题的交互式教学”的效果,为促进学生从被动学习到主动学习,以及培养临床思维提供新思路。方法　在中南大学湘雅医学院2015级临床医学五年制和其他非临床专业的病理生理学教学中采用“基于案例和问题的交互式教学”,以460名医学生为调查对象,采取无记名问卷调查对基于案例和问题的交互式教学的效果进行评价,主要了解学生对该教学的认可程度。运用Excel收集、处理数据,描述性分析计算各指标百分率。结果　共发放问卷460份,回收有效问卷453份,获得如下评价结果：①针对该教学实施的课前导学,402人（88.7%）认为课前导学促使相关教学内容的预习;375人（82.8%）认为课前导学可以提高课堂讨论质量;347人（76.6%）认为课前导学扩大思考探索空间,而课前导学并不会增加学生的学习负担（306人,67.6%）。②学生认为“基于案例和问题的交互式教学”与传统教学相比具有以下优势：有利于培养学生的临床思维能力（414人,91.4%）;增强知识的理解记忆（400人,88.3%）;吸引学生课堂注意力（380人,83.9%）;激发学生参与讨论的兴趣（327人,72.2%）。③379名学生（83.4%）更喜欢这种教学方式,认为可以提高分析解决问题的能力（325人,71.7%）,培养临床思维能力（321人,70.9%）,提高自学能力（247人,54.5%）和综合归纳能力（197人,43.5%）。结论　在病理生理学课堂教学中采用“基于案例和问题的交互式教学”,可提高学生自主学习能力,活跃课堂气氛,提高教学质量,能有效培养学生的临床思维能力,在基础医学的课堂教学中值得推广和应用。     

人FoxA1 shRNA载体构建与检测

目的构建有效的针对人FoxA1基因的shRNA干扰载体,并验证其干扰效果。方法设计合成3对针对人FoxA1基因的和1对无同源性的shRNA片段,将合成的shRNA片段插入到干扰载体pRNAT-U6.1/Neo中,经过酶切和测序验证,成功构建人FoxA1基因的shRNA和空白对照载体。将各干扰载体和空白载体转染人正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)和胃癌细胞(SGC-7901),Realtime RT-PCR和Western-blotting检测干扰载体的干扰效率。结果①酶切和测序验证均表明各shRNA载体构建成功。将空载体及各干扰载体分别转染人正常胃黏膜细胞(GES-1)和胃癌细胞(SGC-7901)发现,和空白对照组相比,3组干扰载体能够从mRNA和蛋白表达水平明显抑制FoxA1的表达,但是3组质粒的抑制效率有一定的差异,以3号质粒对Foxa1的干扰效率最强。结论成功构建了三个有效的针对人FoxA1基因的shRNA干扰载体,三组质粒都能有效地抑制FoxA1在GES-1细胞和SGC-7901细胞中的表达。     

核仁素对糖尿病性心肌病小鼠心肌细胞凋亡的影响

目的：探讨核仁素对糖尿病性小鼠心肌病心肌细胞凋亡的影响。方法：小鼠给予高脂高糖饲料喂养,第 5,6周分别予链脲佐菌素60 mg/kg腹腔注射,构建2型糖尿病模型;实验分为4组：野生型小鼠对照组、核仁素转基 因小鼠对照组、野生型小鼠糖尿病组、核仁素转基因小鼠糖尿病组;第8周末检测糖尿病相关指标;第20周末,采用 HE染色观察心肌形态学改变;TUNEL染色和caspase-3活性检测心肌细胞凋亡程度。结果：糖尿病组小鼠空腹血糖值 较野生型对照组明显升高;与野生型对照组相比,野生型糖尿病组小鼠心肌HE染色显示细胞排列紊乱,部分肌纤维 出现断裂及溶解,TUNEL染色和caspase-3活性检测显示心肌细胞凋亡明显增加。与野生型糖尿病组小鼠相比,转基 因糖尿病组小鼠心肌形态学改变明显减轻,心肌细胞凋亡明显减少。结论：核仁素过表达可抑制糖尿病性心肌病中 心肌细胞凋亡的发生。     

RESEARCH OF MEDICAL CYTOGENETICS

Ｗｉｔｈｔｈｅｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｎｕｍｂｅｒｓｏｆｈｕｍａｎｂｅｉｎｇｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｔｏｂｅ４６ｉｎｔｈｅ１９５０ｓ,ｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｆｈｕｍａｎａｎｄｍｅｄｉｃａｌｇｅｎｅｔｉｃｓｈａｖｅｒｅａｃｈｅｄａｒａｐｉｄｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｓｔａｇｅ－ＴｈｅｍｅｄｉｃａｌｇｅｎｅｔｉｃｒｅｓｅａｒｃｈｉｎＣｈｉｎａａｌｓｏｓｔａｒｔｅｄｉｎｔｈｅｌａｔｅ１９５０ｓ－ＴｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｗａｓｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄｄｕｒｉｎｇｔｈｅＣｕｌｔｕｒａｌＲｅｖｏｌｕｔｉｏｎ,ｒｅｉｎｉｔ…