乌头碱对大鼠卵巢颗粒细胞毒性研究

[目的]研究乌头碱对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞的毒性。[方法]对25～29日龄雌性SD大鼠皮下注射孕马血清促性腺激素(PMSG),无菌制备卵巢颗粒细胞悬液,采用透射电镜观察管嵴状线粒体进行细胞鉴定。试验设4个乌头碱浓度组(0、5×101、5×102、5×103、5×104μg·L-1)和1个溶剂对照组(二甲亚砜)。选用MTT法(四唑盐比色法)测定乌头碱对大鼠卵巢颗粒细胞活力的影响,用雌二醇和孕酮的放免分析药盒测定乌头碱对颗粒细胞激素分泌功能的影响,用丙二醛和超氧化物歧化酶试剂盒测定乌头碱对大鼠颗粒细胞的氧化损伤作用。[结果]与溶剂对照组相比,乌头碱作用24h后,高浓度和次高浓度组(5×103、5×104μg·L-1)可明显抑制大鼠颗粒细胞的增殖,差异有统计学意义(P﹤0.01);高剂量组(5×104μg·L-1)丙二醛含量明显高于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]在本实验室条件下,乌头碱浓度高于5×103μg·L-1时,对雌性大鼠卵巢颗粒细胞有毒性作用,主要表现为抑制颗粒细胞的增殖及对细胞的氧化损伤作用。     

乌头碱对大鼠睾丸支持细胞的毒性研究

[目的]研究乌头碱对体外培养的大鼠睾丸支持细胞的毒性。[方法]无菌制备18～20日龄SD大鼠的睾丸支持细胞,通过Tris-Hcl低渗处理进行细胞纯化,采用HE染色、瑞氏-吉姆萨染色进行细胞鉴定。然后用MTT法(四唑盐比色法)检测浓度为0、5×101、5×102、5×103、5×104 ng/ml的乌头碱对大鼠睾丸支持细胞活力的影响,并用乳酸试剂盒检测乌头碱对支持细胞乳酸分泌功能的影响。[结果]MTT结果显示:乌头碱作用24h后,各剂量组对大鼠睾丸支持细胞的增殖均有促进作用;作用48 h后,低剂量乌头碱(5×101、5×102ng/m)对大鼠睾丸支持细胞的增殖有促进作用;高剂量乌头碱(5×103、5×104 ng/ml)抑制支持细胞的增殖。乳酸测定结果显示:乌头碱作用24 h后,各剂量组乳酸分泌量均增加,乌头碱剂量为5×104 ng/ml时,乳酸分泌量增加率降低。[结论]低剂量乌头碱可促进大鼠睾丸支持细胞的增殖及乳酸分泌量的增加,高剂量乌头碱可抑制大鼠睾丸支持细胞的增殖,降低其对乳酸分泌的刺激作用。     

成纤维样滑膜细胞Toll样受体在类风湿性关节炎的研究进展

Toll样受体（toll-like receptor,TLRs）是一种I型跨膜蛋白受体,可识别微生物上特定结构的病原相关分子模式（pathogen-associated molecular patterns,PAMPs）和宿主自身损伤细胞产生的损伤相关分子模式（damage-associated molecular patterns,DAMPs）,在天然免疫中发挥着重要作用。     

乌头类中药对CHL细胞的DNA损伤作用

[目的]观察乌头类中药盐附子和乌头碱对CHL细胞(中国仓鼠肺成纤维细胞)的DNA损伤作用。[方法]采用单细胞凝胶电泳法检测盐附子、乌头碱对CHL细胞DNA即刻损伤的影响。在加和不加S9时,盐附子均设5个剂量组(终浓度分别为5、2.5、1.25、0.625、0.313 mg生药∕ml)、乌头碱设4个剂量组(终浓度分别为100、50、25、5μg/ml),试验同时设PBS阴性对照组和阳性对照组,阳性对照在不加S9时为0.1 mmol/ml重铬酸钾,加S9时为80μg/ml环磷酰胺。[结果]在加和不加S9时,盐附子各浓度组拖尾细胞率和拖尾细胞尾长与阴性对照比较差异无统计学意义(P﹥0.05),乌头碱100μg/ml和50μg/ml组拖尾细胞率和拖尾细胞尾长与阴性对照之间差异有统计学意义(P﹤0.05),乌头碱各浓度组拖尾细胞率和拖尾细胞尾长存在剂量反应关系。[结论]在本试验条件下,加与不加S9时,乌头碱浓度为100μg/ml和50μg/ml时对CHL细胞有DNA损伤作用;盐附子5、2.5、1.25、0.625、0.313 mg生药/ml时未观察到对CHL细胞有DNA损伤作用。     

Gαq蛋白信号与免疫调控和自身免疫研究进展

Gαq是G蛋白家族成员之一,是Gq蛋白的功能单位。其功能为传导来自GPCR的信号到细胞内。研究证明,Gαq与免疫细胞活化、增殖、死亡、分化、迁移,细胞因子分泌以及自身免疫等均有非常密切的关系。本文就Gαq蛋白信号与免疫调控和自身免疫研究方面的新进展结合我们在这方面的研究结果进行阐述。     

BD926对骨髓源性未成熟树突状细胞增殖及吞噬作用的影响

目的 研究苯并噻唑类衍生物BD926对小鼠骨髓源性未成熟树突状细胞(immature dendritic cells, imDCs)增殖及吞噬作用的影响. 方法 分离小鼠骨髓源性单核细胞诱导imDCs,借助PE/Annexin V凋亡检测试剂盒、CFSE细胞增殖试剂盒以及FITC-葡聚糖,应用流式细胞术检测BD926对imDCs在粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)刺激下的细胞存活、细胞增殖以及吞噬作用的影响.结果 与PBS组相比,25 、5 、1 μM 的BD926处理imDCs后,其细胞增殖水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);高、中、低3个剂量组BD926处理后,imDCs与PBS组相比,细胞存活差异无统计学意义 (P>0.05);高、中、低3个剂量组BD926处理后,imDCs与PBS组相比,吞噬作用差异无统计学意义 (P>0.05).结论 BD926在体外可明显抑制GM-CSF刺激的imDCs增殖作用,对imDCs的细胞存活和吞噬作用则无明显影响.     

Lck-Cre×Perp^flox/flox条件敲除小鼠的繁育及基因型鉴定

目的 制备Cre-LoxP重组酶系统调控下的T淋巴细胞Perp基因条件性敲除的纯合子小鼠并进行鉴定,为进一步在整体动物水平研究Perp基因在T细胞发育以及在自身免疫疾病发病中的作用提供研究平台.方法 将引进的Perp条件敲除小鼠和T淋巴细胞特异性表达Cre重组酶的Lck-Cre小鼠分别进行繁殖和鉴定,然后将两种小鼠进行杂交并对其子代小鼠的基因型进行鉴定,其子代基因型为Lck-Cre×Perpflox/flox的小鼠即为本实验所构建的T细胞Perp基因特异性敲除的纯合子小鼠.结果 Lck-Cre×Perp^flox/flox的纯合子小鼠被繁殖成功并准确鉴定.Lck-Cre×Perp^flox/flox小鼠脾脏CD3-细胞的Perp基因的RNA及蛋白表达水平与Lck-Cre×Perp^＋/＋小鼠相比显著降低.结论 本研究利用Cre-LoxP技术成功构建了T细胞特异性敲除Perp基因的纯合子小鼠,为进一步研究Perp基因在T淋巴细胞发育以及自身免疫性疾病发病中的作用提供了优良的工具.     

乌头碱对乳鼠心肌细胞的毒性作用

目的 研究乌头碱对乳鼠心肌细胞的毒性作用.方法 分离培养SD乳鼠心肌细胞,给予100.0、10.0、1.0、0.1 μg·ml-1的乌头碱染毒后,观察乳鼠心肌细胞的形态及细胞搏动的情况,测定丙二醛(MDA)的含量,并采用MTT法检测细胞存活率.结果 随着乌头碱浓度的增加,心肌细胞存活率下降.与对照组相比,乌头碱浓度＞1.0 μg·ml-1时,心肌细胞的存活率显著降低(P＜0.01),MDA的含量随剂量的增加而明显升高(P＜0.01).结论 乌头碱浓度＞1.0 μg·ml-1时,对乳鼠心肌细胞有明显的氧化损伤作用,同时表现出较强的细胞毒性.     

Gαq对H2O2诱导THP-1细胞凋亡的影响

[目的]研究Gαq对H2O2诱导的人单核细胞白血病细胞(THP-1)凋亡的影响。[方法]实验分为3组:对照组,H2O2诱导凋亡组,Gp-2A抑制组,每组3个重复。Gp-2A抑制组在培养基加入10μM Gp Antagonist 2A(Gαq抑制剂Gp-2A),培养24h后与H2O2诱导凋亡组同时加入等浓度H2O2,对照组加等量PBS。8h后用流式细胞仪检测细胞凋亡。[结果]在1mM H2O2下,加入Gp-2A的实验组凋亡明显低于不加组。[结论]Gp-2A可以明显抑制低浓度下H2O2诱导的Thp-1细胞的凋亡。     

SF-36量表在糖尿病患者生命质量评价中的应用

目的:用SF-36量表对糖尿病患者生命质量进行评价,探讨促使病情加重的可能危险因素,为今后进一步开展干预研究奠定基础.方法:在成都市成华区小龙桥社区收集糖尿病患者167人,对患者进行一般情况以及SF-36量表的调查.所获资料用Visual-Foxpro6.0软件建立数据库,用SPSS11.5软件进行一般情况描述、生命质量的评价、单因素及多因素非条件Logistic回归分析.结果:糖尿病对患者生命质量损伤的严重程度依次为总体健康(均分=37.86)、躯体角色功能(均分=43.67)、情绪角色功能(均分=45.58)、精力(均分=65.45)、心理健康(均分=68.73)、躯体疼痛(均分=71.30)、躯体健康(均分=79.52)和社会功能(均分=86.75).合理膳食(OR=0.445,P＜0.05)、心理健康(OR=0.923,P＜0.05)和社会功能(OR=0.969,P＜0.05)得分高是糖尿病病情加重的保护因素,而肥胖史(OR=1.767,P＜0.05)是糖尿病病情加重的危险因素.结论:应在人群中提倡合理膳食、控制肥胖,提高糖尿病患者对疾病的认识,以健康的心态对待疾病.