乌头碱对大鼠卵巢颗粒细胞毒性研究

[目的]研究乌头碱对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞的毒性。[方法]对25～29日龄雌性SD大鼠皮下注射孕马血清促性腺激素(PMSG),无菌制备卵巢颗粒细胞悬液,采用透射电镜观察管嵴状线粒体进行细胞鉴定。试验设4个乌头碱浓度组(0、5×101、5×102、5×103、5×104μg·L-1)和1个溶剂对照组(二甲亚砜)。选用MTT法(四唑盐比色法)测定乌头碱对大鼠卵巢颗粒细胞活力的影响,用雌二醇和孕酮的放免分析药盒测定乌头碱对颗粒细胞激素分泌功能的影响,用丙二醛和超氧化物歧化酶试剂盒测定乌头碱对大鼠颗粒细胞的氧化损伤作用。[结果]与溶剂对照组相比,乌头碱作用24h后,高浓度和次高浓度组(5×103、5×104μg·L-1)可明显抑制大鼠颗粒细胞的增殖,差异有统计学意义(P﹤0.01);高剂量组(5×104μg·L-1)丙二醛含量明显高于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]在本实验室条件下,乌头碱浓度高于5×103μg·L-1时,对雌性大鼠卵巢颗粒细胞有毒性作用,主要表现为抑制颗粒细胞的增殖及对细胞的氧化损伤作用。     

吴茱萸及其主要成分的遗传毒性研究

目的:研究吴茱萸及其主要成分吴茱萸碱、吴茱萸次碱和柠檬苦素的遗传毒性,为有毒中药吴茱萸的开发利用提供依据。方法:选用了Ames试验、体外CHL细胞染色体畸变试验和小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验。Ames试验选用TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535组氨酸缺陷型菌株。吴茱萸碱、吴茱萸次碱和柠檬苦素分别设5个剂量组:0.000 5、0.005、0.05、0.5、5mg/皿;体外CHL细胞染色体畸变试验,吴茱萸碱、吴茱萸次碱和柠檬苦素的剂量分别为0.005 mg/mL、0.05/mL和0.5 mg/mL,受试药物与CHL细胞接触时间分别为4 h和24 h;吴茱萸醇提物小鼠骨髓微核试验,设吴茱萸醇提物0.88、3.52、10.55 g(生药)/kg 3个给药剂量组。连续给药4 d,每天给药1次。结果:吴茱萸碱、吴茱萸次碱和柠檬苦素各剂量组Ames试验结果为阴性。CHL试验中,吴茱萸碱的试验结果为阴性;吴茱萸次碱24 h组细胞染色体畸变率略有增加,差异有统计学意义(P0.05);柠檬苦素4 h和24 h组细胞染色体畸变率都略有增加,0.05 mg/mL、0.5 mg/mL组与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P0.05),而0.005 mg/mL组与阴性对照比较,差异无统计学意义(P0.05)。微核试验中,吴茱萸醇提物的小鼠骨髓细胞微核试验结果为阴性。结论:综合以上3个试验结果,认为在本实验室条件下,吴茱萸醇提物无遗传毒性。但在体外试验中,吴茱萸次碱和柠檬苦素有致突变性。为进一步确认吴茱萸及其主要成分的遗传毒性,可进一步研究和探讨。     

大鼠致畸试验中阳性对照环磷酰胺的给药方法研究

目的： 比较致畸敏感期环磷酰胺不同给药方案对孕鼠的致畸效应,确定一种最佳的给药方案以指导环磷酰胺作为大鼠致畸敏感期生殖毒性试验阳性对照的使用。 方法：交配成功的SD大鼠随机分为3组,每组10只,分别为：环磷酰胺连续给药组 (A组),于妊娠第6~15天 (即GD6～GD15)每天按4.8 mg/kg皮下注射给予环磷酰胺;环磷酰胺单次给药组 (B组),于GD12一次性按12 mg/kg皮下注射给予环磷酰胺;对照组 (C组),于GD6～GD15每天皮下注射给予大鼠相应体积的生理盐水。孕期称取母鼠体质量并观察一般状况,于GD20用CO2对孕鼠实施安乐死,解剖后称重并记录其生殖器官质量,检查胎仔外观、骨骼和内脏畸形情况。 结果：两个环磷酰胺给药组一般状况观察均未见异常;B组子宫胎盘质量、胎盘质量、子宫质量低于对照组 (P<0.05)。 外观检查,A组未出现显著的畸形种类;B组能引起明显的外观畸形,主要有脑膜膨出、小头、脑露、足内翻等。内脏检查,A组显著增加的畸形仅见侧脑室扩大或淤血;B组出现明显的内脏畸形,主要表现为第三脑室扩大或淤血、侧脑室扩大或淤血、心室心房异常等。骨骼检查,A组骨骼畸形种类较少,且与对照组比较差异无统计学意义;B组大部分骨骼畸形发生率比对照组高,主要表现在头部和胸腔,如基蝶骨异常、肋骨数目异常等。结论：在本试验条件下,大鼠于GD12按12 mg/kg经皮下注射给予环磷酰胺为较为理想的阳性对照给药方法,显示出更宽的畸形谱和更重的畸形程度,推荐在大鼠致畸敏感期生殖毒性试验中选用。     

合笼时间对大鼠交配率的影响

[目的]研究不同时间点合笼对大鼠交配率的影响,为生殖毒性研究中选择操作方便、切实可行的合笼时间提供依据。[方法]本试验设计5个合笼时间点,即16:00时、17:00时、18:00时、19:00时、20:00时,交配d2早晨9～10点,检查合笼大鼠底盘中的阴栓,发现阴栓者判断为交配成功。比较本试验设计的5个合笼时间点大鼠的交配率差异有无统计学意义。[结果]各时间点大鼠的交配率差异均无统计学意义(P﹥0.05)。[结论]雌雄大鼠的合笼时间为16:00时、17:00时、18:00时、19:00时、20:00时,对SD大鼠的交配率无明显影响。