转化黄体酮菌株的筛选及转化产物研究?

目的：用微生物转化的方法获得新型的黄体酮类衍生物,对于相关新药的研发至关重要。方法通过微生物转化,利用薄层层析法(TLC)和硫酸显色法跟踪监测,筛选能够有效转化黄体酮的菌株,然后通过硅胶柱层析法对发酵液中的转化产物进行分离纯化,将纯化产物进行质谱、红外光谱和核磁共振谱表征,确定转化产物的物质结构。结果本研究筛选到了1株真菌,通过分子生物学鉴定其为 Fusarium 属,该菌能够完全转化底物黄体酮,同时得到2种重要的药物中间体：雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮和睾内酯。结论本研究筛选得到的这株菌对大规模发酵生产雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮和睾内酯具有潜在的应用价值。     

BD926对骨髓源性未成熟树突状细胞增殖及吞噬作用的影响

目的 研究苯并噻唑类衍生物BD926对小鼠骨髓源性未成熟树突状细胞(immature dendritic cells, imDCs)增殖及吞噬作用的影响. 方法 分离小鼠骨髓源性单核细胞诱导imDCs,借助PE/Annexin V凋亡检测试剂盒、CFSE细胞增殖试剂盒以及FITC-葡聚糖,应用流式细胞术检测BD926对imDCs在粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)刺激下的细胞存活、细胞增殖以及吞噬作用的影响.结果 与PBS组相比,25 、5 、1 μM 的BD926处理imDCs后,其细胞增殖水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);高、中、低3个剂量组BD926处理后,imDCs与PBS组相比,细胞存活差异无统计学意义 (P>0.05);高、中、低3个剂量组BD926处理后,imDCs与PBS组相比,吞噬作用差异无统计学意义 (P>0.05).结论 BD926在体外可明显抑制GM-CSF刺激的imDCs增殖作用,对imDCs的细胞存活和吞噬作用则无明显影响.     

Lck-Cre×Perp^flox/flox条件敲除小鼠的繁育及基因型鉴定

目的 制备Cre-LoxP重组酶系统调控下的T淋巴细胞Perp基因条件性敲除的纯合子小鼠并进行鉴定,为进一步在整体动物水平研究Perp基因在T细胞发育以及在自身免疫疾病发病中的作用提供研究平台.方法 将引进的Perp条件敲除小鼠和T淋巴细胞特异性表达Cre重组酶的Lck-Cre小鼠分别进行繁殖和鉴定,然后将两种小鼠进行杂交并对其子代小鼠的基因型进行鉴定,其子代基因型为Lck-Cre×Perpflox/flox的小鼠即为本实验所构建的T细胞Perp基因特异性敲除的纯合子小鼠.结果 Lck-Cre×Perp^flox/flox的纯合子小鼠被繁殖成功并准确鉴定.Lck-Cre×Perp^flox/flox小鼠脾脏CD3-细胞的Perp基因的RNA及蛋白表达水平与Lck-Cre×Perp^＋/＋小鼠相比显著降低.结论 本研究利用Cre-LoxP技术成功构建了T细胞特异性敲除Perp基因的纯合子小鼠,为进一步研究Perp基因在T淋巴细胞发育以及自身免疫性疾病发病中的作用提供了优良的工具.     

雄甾-4-烯-3,17-双酮转化菌株的筛选及转化产物的鉴定

目的甾体化合物雄甾-4-烯-3,17-双酮（andros-t 4-ene-3,17-dione,4AD）是制造甾体激素类药物的关键药物中间体之一,开展4AD的微生物转化,以探索具有新活性的4AD衍生物的合成。方法本研究通过摇瓶培养转化,TLC分析,筛选能够对4AD进行有效转化的菌株,利用硅胶柱层析对转化产物进行分离纯化,通过TOF-MS、IR、1 HNMR、13 C NMR光谱数据分析,同时与相关文献报道结合,确定转化产物的结构。结果本研究筛选到了一株能够对4AD进行有效转化的菌株,初步确定其为茄病镰孢菌（Fusarium solani）,得到2种转化产物：具有较大生物活性潜力的17-hydroxy-pregen-1,4-dien-3-one和重要的药物中间体雄二烯二酮（ADD）。结论本研究筛选得到的茄病镰孢菌能够对4AD进行有效转化,对于利用微生物转化的方法生产17位羟基化甾体物质和ADD具有较大的应用潜力。