柠檬酸镱诱导肝癌细胞HepG2凋亡作用及蛋白质表达变化研究

目的 研究稀土配合物柠檬酸镱([YbCit2]3-)诱导人肝癌HepG2细胞株凋亡的作用及其机制.方法 用DMEM培养基培养人肝癌细胞株HepG2细胞,以DMEM无血清培养细胞为对照组,以0.01～5.00 mmol/L[YbCit2]3-无血清培养基培养组为处理组,应用四噻唑蓝(MTT)法检测[YbCit2]3-对HepG2细胞生长的影响;以2.00 mmoL/L[YbCit2]3-无血清培养基培养组为处理组,Hoechst 33258染色法考察[YbCit2]3-对细胞的作用,采用差异蛋白质组学及H2O2、线粒体膜电位检测的方法研究[YbCit2]3-对HepG2细胞作用的可能机制.结果 2.00～5.00 mmol/L浓度范围内处理72 h,[YbCit2]3-能抑制HepG2细胞的生长,半数抑制浓度(IC50)值为(2.46 ±0.23)mmol/L.2.00 mmol/L[YbCit2]3-处理HepG2细胞48、72 h,Hoechst 33258染色检测表明其作用是诱导HepG2细胞凋亡.HepG2细胞经2.00 mmol/L[YbCit2]3-处理72 h后,通过双向电泳分离和质谱鉴定,鉴定出14个差异表达蛋白质点,包括丝切蛋白1、过氧化物氧化还原酶6、S100钙结合蛋白A6、蛋白酶26s非ATP酶亚基13亚型3等在细胞中分别参与抗凋亡、氧化还原、细胞增殖、蛋白降解等过程的蛋白质.2.00 mmol/L[YbCit2]3-分别作用HepG2细胞24、48 h后,细胞线粒体膜电位检测红绿荧光比值对照组为2.45 ±0.28,24 h组为1.56 ±0.23,48 h组为1.16 ±0.18,与对照组比,差异具有统计学意义(F=23.97,P=0.001);胞内H2O2检测荧光强度对照组为20.00 ±2.08,24 h组为40.00 ±5.50,48 h组为48.00±2.03,与对照组相比,差异具有统计学意义(F=48.40,P=0.000),表明[YbCit2]3-作用后线粒体膜电位下降,H2O2产生增加.结论 [YbCit2]3-可通过调节胞内氧化应激水平和线粒体凋亡途径诱导HepG2癌细胞凋亡.     

过氧化氢致H9c2大鼠心肌细胞DNA损伤作用

目的 研究不同浓度过氧化氢(H2O2)对H9c2大鼠心肌细胞DNA损伤及诱导细胞凋亡的作用.方法 H9c2心肌细胞处理组分别暴露于50,100,200,400μmol/L H2O2中1,3,6,12,24 h后,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;采用丫啶橙/溴乙锭(AO/EB)双染技术观察细胞凋亡;利用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)观察细胞DNA损伤.结果 H2O2可以引起H9c2心肌细胞损伤,随时间呈剂量效应关系(P<0.05),其中24 h,400μmol/L剂量组细胞存活率最低达40.6%.H2O2可诱导H9c2心肌细胞出现凋亡并观察到明显的凋亡形态学的改变,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中6 h时,100 μmol/L剂量组细胞凋亡最明显,凋亡率达22.2%.H2O2可引起H9c2心肌细胞DNA损伤,且损伤随剂量增加而增大(P<0.01),以400 μmol/L剂量组最为明显,细胞DNA损伤率可达64.0%.结论 H2O2造成H9c2心肌细胞氧化损伤和DNA损伤,随着其暴露剂量和时间的不同表现为凋亡和坏死.     

迷迭香酸拮抗H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡及作用机制

目的研究迷迭香酸(Rosmarinic acid,RA)对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞株ECV304凋亡的抑制作用及其机制。方法以H2O2诱导ECV304细胞凋亡为模型,用MTT比色法检测RA对细胞活性的影响;流式细胞仪检测法和Tunel法检测RA对细胞凋亡率的影响;用Western-blotting检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白的表达情况和第24hcaspase-3活性。结果用0.5mmol/LH2O2孵育细胞24h细胞凋亡明显。不同浓度的RA(1、3、10μmol/L)预处理细胞后,呈浓度依赖性的增加内皮细胞活性,降低细胞凋亡率,并且Bcl-2蛋白表达呈浓度依赖性的上调,而Bax蛋白的表达和caspase-3蛋白活性呈浓度依赖性下降。结论迷迭香酸可以拮抗H2O2诱导的内皮细胞凋亡,其抑制内皮细胞凋亡与激活Bcl-2活性有关。     

缺氧对肝癌细胞HepG2中HIF-1α和HK11表达的影响

目的探讨缺氧对肿瘤细胞周期调控的机制及乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）、己糖激酶Ⅱ（HKⅡ）表达的影响。方法人肝癌细胞HepG2分成3组：缺氧12h组、缺氧24h组及对照组。缺氧组分别在缺氧条件下（37℃，5％CO2、2．0％O2饱和度）培养12h和24h，对照组置于正常氧浓度条件下（37℃。5％CO2、21．0％O2饱和度）培养24h。流式细胞仪检测细胞周期分布，免疫组织化学S2P法检测HIF-1α表达，荧光定量PCR法检测HKⅡ mRNA表达量。结果缺氧情况下细胞周期分析处于G0／G1期细胞百分比明显增多，处于G2／M期的细胞减少，并且可见到较明显的凋亡峰的形成，缺氧12h组、缺氧24h组的CO／G1期比例显著高于对照组（p〈0．05）；HIF-1α和HKⅡ在两组缺氧组与对照组比较，其表迭量明显增加（p〈0．05），缺氧24h组与缺氧12h组比较有显著性差异（p〈0．05）。结论HIF-1α可刺激人肝癌细胞HKⅡ表达的增加，细胞阻滞在Go／G1期，以HIF-1α为药物靶点可望成为治疗肝癌基因治疗的新途径。     

大蒜素抑制H2O2诱导的心肌细胞凋亡的实验研究

目的 探究大蒜素对过氧化氢（Hydrogen Peroxide, H2O2）诱导的H9c2细胞凋亡的影响。方法 H2O2和不同浓度大蒜素分别作用于H9c2细胞,Western blot检测对Caspase-3表达的影响,流式细胞术检测对细胞凋亡的影响,RT-PCR和Western blot检测对血红素氧合酶1(Heme Oxygenase-1,HO-1)表达的影响。分别通过HO-1抑制剂ZnPP9(Zinc protoporphyrin IX)和PI3K/AKT抑制剂LY294002,MTT检测对细胞增殖活性的影响,Western blot检测对p-Akt、 核转录因子Nrf2(nuclear factor-erythroid 2 related factor 2)和HO-1等表达的影响。结果 对照组和100 μM H2O2+大蒜素(0、5、10、20、40 mg/L)组细胞凋亡率分别为(4.83±0.66)%、(68.38±6.97)%、(61.19±6.01)%、(47.32±5.21)%、(22.07±3.73)%和(20.05±2.93)%、与Caspase-3蛋白表达趋势一致,并具有浓度依赖性(P＜0.05)。大蒜素作用下,HO-1 mRNA和蛋白表达亦呈浓度依赖性增加(P＜0.05)。H2O2组细胞相对增殖活性降低至(61.38±1.76)%(P＜0.05),大蒜素处理使其上调至(81.64±3.79)%(P＜0.05),而ZnPP9可阻断该上调,为(69.82±2.22)%(P＜0.05)。大蒜素明显增加p-Akt、Nrf2和HO-1等表达,可被LY294002阻断(P＜0.05)。结论 大蒜素可通过Akt/Nrf2途径上调HO-1表达并抑制H2O2诱导的H9c2细胞凋亡。     

H_2O_2对人鼻咽癌细胞系CNE-2Z生长和增殖的影响

目的观察H2O2对人鼻咽低分化鳞癌细胞系CNE-2Z细胞生长、增殖的影响,并探讨其可能机制。方法应用H2O2体外诱导培养CNE-2Z细胞,用生长曲线、MTT及平板克隆形成观察H2O2对肿瘤细胞生长、增殖的影响,以流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡,以W estern B lot分析诱导培养后细胞中EGR-1、P53、P16、Cyc lin D1的表达。结果生长曲线、MTT及平板克隆形成实验表明不同浓度H2O2对CNE-2Z细胞生长、增殖具有明显抑制作用;流式细胞仪检测发现H2O2诱导培养后细胞周期进程减慢(G1期阻滞)、凋亡增加;W estern B lot检测发现CNE-2Z细胞缺失EGR-1、P16表达,H2O2诱导培养后可见EGR-1短暂高表达,但无P16表达,且EGR-1表达与P53表达水平呈正相关(P<0.05);Cyc lin D1表达与EGR-1表达无明显相关性(P>0.05)。结论人鼻咽低分化鳞癌细胞系CNE-2Z中EGR-1表达缺失,H2O2体外诱导培养后可见其一过性高表达,且其表达水平与P53表达相一致,两者可能在H2O2所致的细胞生长抑制及凋亡中起作用。一定浓度的H2O2在体外实验中显示出对CNE-2Z细胞具有生长抑制作用,并能诱导细胞凋亡。     

三氧化二砷诱导人横纹肌肉瘤RD细胞株凋亡的实验研究

[目的]研究三氧化二砷(As2O3)体外抑制人胚胎型横纹肌肉瘤细胞株RD(RD细胞株)增殖及诱导凋亡的作用. [方法]以不同浓度的As2O3处理RD细胞株,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞的DNA含量及凋亡率. [结果]4～8 μmol/L hs2O3能以时间剂量依赖的方式抑制RD细胞株的增殖,并诱导其凋亡,在流式细胞仪DNA线条图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰”,细胞周期阻滞于G0/G1期,S期和G2/M期细胞减少;低浓度As2O3(＜2μmol/L)则有轻微促增殖作用,细胞周期向S期和G2/M期集中,G0/G1期细胞减少. [结论]As2O3浓度≥4μmol/L时,可明显抑制RD细胞株的生长并促进细胞凋亡,其临床应用还需进一步研究.     

姜黄素对H2O2诱导A549细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的 探究姜黄素对H2O2诱导A549细胞氧化损伤的保护作用及其作用机制。方法 使用不同浓度的H2O2对A549细胞进行不同时长的刺激,使用CCK-8法筛选A549细胞存活率约为50%时的H2O2浓度及刺激时间作为建模条件;通过Hoechst 33258染色及Western blot对模型进行验证;实验分为模型组（Model）、VC组（VC）和姜黄素组（CCM）;采用流式细胞术对细胞凋亡情况进行检测,采用Western blot法对凋亡及氧化应激信号通路相关蛋白进行检测。结果 CCK-8实验结果显示,采用600μmol/L的H2O2对A549细胞进行24h刺激,其存活率为56.45±5.33%,Hoechst 33258染色及Western blot结果证实了模型的可靠性。流式细胞术结果显示,VC组和CCM组细胞的凋亡率与Model组相比均降低（P＜0.05,P＜0.01）,且CCM组降低更加明显（P＜0.01）。Western blot结果显示,与Model组相比,VC组和CCM组Bax、Caspase-3和Keap1表达降低,Bcl-2和Nrf2表达升高,且CCM组较VC组改变更加明显,差异均有统计学意义（P＜0.01）。结论 姜黄素对H2O2诱导的A549细胞急性损伤具有保护作用,可能与其激活Keap1-Nrf2/ARE信号通路,抑制细胞凋亡有关。     

柚皮苷对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞损伤保护作用

目的探讨柚皮苷对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞凋亡的保护作用及机制。方法体外培养H9c2心肌细胞,用H_2O_2诱导建立细胞凋亡模型。实验设对照组、模型组、柚皮苷低、中、高剂量组(10、20、40μmol/L),噻唑蓝法检测细胞活力并用显微镜观察各组细胞形态;原位末端标记法检测H9c2心肌细胞凋亡情况;RT-PCR及Western blot法检测凋亡相关因子Bcl-2、Bax、caspase-3 m RNA及蛋白表达。结果与对照组比较,模型组细胞凋亡率[(17.2±2.1)%]明显升高(P<0.01);与模型组比较,10、20、40μmol/L柚皮苷组细胞凋亡率[分别为(10.7±1.9)%、(5.7±1.2)%、(6.4±1.5)%]均下降(均P<0.05)。与对照组比较,模型组H9c2心肌细胞Bcl-2蛋白表达水平(0.76±0.16)明显下调,Bax、caspase-3蛋白表达水平[分别为(5.42±0.52)、(1.09±0.11)]均上调(均P<0.01);与模型组比较,10、20、40μmol/L柚皮苷组H9c2心肌细胞Bcl-2蛋白表达水平[分别为(1.37±0.11)、(1.65±0.09)、(1.65±0.15)]均上调,Bax、caspase-3蛋白表达水平[分别为(2.78±0.55)、(3.43±0.15)、(2.69±0.26)和(0.59±0.08)、(0.77±0.06)、(0.82±0.05)]均下调(均P<0.05)。结论柚皮苷对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞损伤具有一定保护作用,其机制可能与其对凋亡信号途径的抑制作用有关。     

H2O2诱导建立HTR-8/SVneo胎盘滋养细胞氧化应激模型

目的通过观察不同浓度过氧化氢(H2O2)对人胎盘滋养层细胞HTR-8/SVneo处理不同时间后的氧化应激状态,探讨建立H2O2诱导HTR-8/SVneo胎盘滋养细胞氧化损伤模型的最佳条件。方法2017年11月至2018年2月于西安交通大学第一附属医院进行实验研究。将HTR-8/SVneo细胞实验组分别给予不同终浓度的H2O2(50、150、300、500μmol/L),同时设立对照组,相同实验条件下分别继续培养1、3、6、12h,随后对此进行细胞存活率、细胞形态学观察,对超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢酶(CAT)测定,流式细胞仪分析活性氧自由基(ROS)水平和细胞凋亡的水平。结果与对照组比较,300μmol/L 3h经H2O2处理后可降低HTR-8/SVneo细胞的存活率(P=0.00<0.01),而且提高了LDH的释放,促使了SOD、CAT活性的下降和MDA含量的增加(P=0.00<0.01)。300μmol/L3h经H2O2处理后增加了细胞的凋亡率(P=0.00<0.01)及细胞内ROS水平(P=0.00<0.01)。同时,300μmol/L3h经H2O2处理后可明显促进细胞的形态学改变。结论通过H2O2可以成功建立HTR-8/SVneo氧化应激损伤细胞模型,最佳实验条件为300μmol/L H2O2处理3h。     

2 757名小学二年级儿童第一恒磨牙检查结果分析

目的对白云区19所小学2 757名小学二年级儿童的第一恒磨牙进行窝沟封闭前检查,对其表面形态、萌出情况、龋坏状况进行分析,为龋病防治工作提供参考。方法对2 757名儿童第一恒磨牙进行检查,按照牙齿表面形态及萌出状况进行分类、记录,检查结果汇总分析。结果 2 757名二年级小学生中有509名第一恒磨牙龋坏,患龋率18.5%。浅窝沟牙齿占总牙数2.7%,深窝沟占总牙数的81.87%,未萌出牙占总牙数5.3%,龋齿占总牙数10.13%。结论二年级小学生适合做窝沟封闭,此年龄组2 757名儿童的11 028颗六龄齿中,已经萌出并且需要窝沟封闭治疗的牙齿超过80%,浅窝沟率较低,部分牙齿尚未完全萌出,10.13%的牙齿已经龋坏,需及时充填,预防牙齿缺失。     

异位妊娠误诊2例分析

异位妊娠是受精卵在子宫腔以外着床发育，是妇产科常见的危重症病之一。它是早孕期引起死亡的首要原因，由于其临床表现和体征变化多样，易与其他疾病混淆，大约40％的异位妊娠第一次急诊就诊时被漏诊、误诊，现就我院误诊的2例作一回顾性分析，以提高对异位妊娠的诊断和鉴别诊断能力。     

2848例剖宫产指征分析

目的探讨近年来高剖宫产率的原因,寻找及制定降低剖宫产率的具体措施和对策。方法对2000~2004年5年间2848例剖宫产病例资料进行回顾性分析。结果5年平均剖宫产率为37·53%,明显高于WHO提出的目标15%~20%。以胎儿宫内窘迫、社会因素、头位难产、胎带绕颈、臀位、疤痕子宫排前6位。结论剖宫产率升高的原因与医患双方有关来自孕产妇及医生主观意愿影响着对分娩方式合理选择,降低剖宫产率应从医患双方着手。     

THE PROGRAMME OF WORK OF COMMITTEE 2 OF ICRP ON INTERNAL DOSIMETRY

ＴＨＥＰＲＯＧＲＡＭＭＥＯＦＷＯＲＫＯＦＣＯＭＭＩＴＴＥＥ２ＯＦＩＣＲＰＯＮＩＮＴＥＲＮＡＬＤＯＳＩＭＥＴＲＹＪｏｈｎＷＳｔａｔｈｅｒａｎｄＣｈｅｎＸｉｎｇａｎ（ＮａｔｉｏｎａｌＲａｄｉｏｌｏｇｉｃａｌＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎＢｏａｒｄ，Ｃｈｉｌｔｏｎ...     

登革4型病毒广东流行株NS2a-NS2b基因序列分析

目的分析登革4型病毒(DV4)广东株的基因序列，比较其同源性，追查DV4的地理来源。方法RT—PCR扩增DV4 NS2a—NS2b基因片段，克隆至PGEM T载体，分析其序列。结果1990年分离的4个毒株在所分析的区段具有相同的序列，与DV4H241、814669株、1978年广东株(GD785682)和1993年广东株(GZB5)的核苷酸(氨基酸)同源性分别是97％(98％)、94％(96％)、93％(98％)和99％(98％)。GD785682株与DV4H241、814669株和1993年广东株(GZB5)的核苷酸(氨基酸)同源性分别是93％(98％)、96％(97％)和98％(93％)。结论1990年引起广东省登革热流行的毒株很可能只有1个，1990年的毒株与1978年的毒株可能来自不同的疫源地。     

非肥胖的2型糖尿病患者危险因素分析

[目的]研究探讨非肥胖的2型糖尿病患者危险因素,并进行分析,以指导临床治疗。[方法]收集某院2008年1月~2010年10月健康体检及门诊、住院病人的临床资料,收集67例非肥胖的2型糖尿病患者(观察组),及80例体检健康者(对照组),比较两组FPG、PBG2h、FINS、HbA1c、hs-CRP、SBP、DBP、TG、TC及LDL-C、HDL-C等指标,分析其在非肥胖2型糖尿病患者中的分布情况,讨论非肥胖的2型糖尿病患者的危险因素等。[结果]观察组除HDL-C明显低于对照组外,其他观察指标如FPG、PBG2h、FINS、HbA1c、hs-CRP、SBP、DBP、TG、TC及LDL-C等指标明显高于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]高血糖、高血压、血脂异常及炎症状态是影响非肥胖型2型糖尿病患者的危险因素,临床上应该引起高度重视。     

机体脱水对Lipocalin-2蛋白质表达的影响

[目的]研究在机体脱水时,视上核中Lipocalin-2蛋白质表达的变化.从蛋白组学的水平上阐述大细胞神经元在调节机体水盐平衡过程中的作用.[方法]采用动物实验,实验组正常饮食但剥夺饮水72h后,断头法处死动物,取视上核组织,用免疫印迹法检测Lipocalin-2蛋白.[结果]慢性脱水刺激后,实验组Lipocalin-2蛋白的表达上调,显著高于对照组(P<0.05).[结论]Lipocalin-2蛋白在调节血浆水盐代谢平衡和心血管功能方面有着重要作用.     

细胞周期依赖性激酶抑制基因(CDKN2A/B)多态性与2型糖尿病的Meta分析

[目的]综合评价细胞周期依赖性激酶抑制基因(CDKN2A/B)多态性rs10811661与2型糖尿病(T2DM)的易感性关系。[方法]通过Pubmed、OMIM、ISI、Embase数据库全面检索CDKN2A/B基因多态性rs10811661与T2DM相关的论文,通过q值检查各研究间的异质性;用漏斗图和累积Meta分析评估发表偏倚;以OR值为统计量,在基因分型水平上做Meta分析。[结果]本研究共纳入14篇文献,包括27548病例和36502对照样本。Meta分析结果显示:T等位基因相对于C等位基因的合并OR值为1.22(95%CI:1.18～1.26),TT纯合子和TC杂合子与CC纯合子相比的合并OR值分别为1.52(95%CI:1.40～1.66),1.27(95%CI:1.17～1.39)。[结论]CDKN2A/B基因多态性rs10811661与2型糖尿病关联有统计学意义。     

2例气管支气管淀粉样变性分析

目的探讨气管及支气管淀粉样变性的临床表现、病理学、影像学特征和诊疗方法。方法总结广州市第一人民医院的2例气管支气管淀粉样变性病例特点,并结合相关文献进行分析和总结。结果①患者主要临床表现为反复咳嗽、咳痰、咳血及气促。②影像学特点:CT提示双侧假声带、气管管壁明显肿胀狭窄及环形增厚。③病理学检查提示气管粘膜上皮镜下可见大量片、块状红染的均质"云雾状"无结构物质沉积,淀粉染色阳性。④治疗:气管淀粉样变性的治疗有以马法兰+泼尼松治疗为主的化疗、激光、冷冻及手术治疗或对症治疗。结论该病临床表现无明显特征,容易误诊,病理学是确诊的唯一手段,治疗困难,往往预后不良。