二甲双胍刺激肝脏瘦素受体基因表达上调血浆可溶性瘦素受体水平

目的 探讨二甲双胍上调血浆可溶性瘦素受体(soluble leptin receptor,sOB-R)的可能机制.方法 42只6～8周龄健康雄性C57BL/6小鼠,按随机数字表法分为正常饮食(CD)组(n=21)及高脂饮食(HF)组(n=21).喂养5月后,CD组及HF组分别再随机分为3个亚组,每组7只,分别予蒸馏水(不用药对照组),二甲双胍50、200 mg/(kg·d)灌胃,灌胃15 d后取其血浆及肝、肾组织.ELISA法检测小鼠血浆可溶性瘦素受体(soluble leptin receptor,sOB-R)水平,Real-time PCR检测肝、肾脏组织中瘦素受体基因(OB-Rt、OB-Ra、OB-Rb、OB-Rc、OB-Rd)及解聚素样金属蛋白酶10(a disintegrin and metalloproteinase 10,ADAM10)、ADAM17基因的表达,Western blot检测肝、肾脏组织中ADAM10、ADAM17蛋白的表达.结果 与不用药对照组比较,给予不同剂量的二甲双胍后均能升高CD组和HF组小鼠血浆sOB-R,CD组中二甲双胍200 mg/(kg·d)组与其他2组比较,HF组中二甲双胍50、200 mg/(kg·d)组与不用药对照组比较,差异有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01);sOB-R水平升高具有二甲双胍剂量依赖性效应.二甲双胍能上调肝脏瘦素受体基因OB-Rt mRNA的表达,并呈剂量依赖性升高,HF组瘦素受体上升更为明显;瘦素受体亚型OB-Ra、OB-Rc、OB-Rd的上升趋势与OB-Rt趋势一致.肾脏组织中,瘦素受体基因OB-Rt、OB-Ra、OB-Rb、OB-Rc、OB-Rd的表达水平在二甲双胍用药组及不用药对照组相比没有显著变化,CD组与HF组之间也没有显著差异.肝脏和肾脏组织中ADAM10、ADAM17表达量在CD组与HF组、二甲双胍用药组及不用药对照组之间均无显著改变.结论 二甲双胍能显著上调血浆sOB-R水平,该作用主要是通过刺激肝脏瘦素受体基因表达实现的,最主要的来源是肝脏的短型瘦素受体.     

正常及肿瘤细胞中参与IL─3基因表达调节的转录因子研究

应用凝胶迁移率分析法，以静止与激活的正常人原代Ｔ淋巴细胞和Ｊｕｒｋａｔ细胞为材料，以ＩＬ－３基因５′侧翼含κＢ样位点的序列为探针，考证ＮＦ－κＢ是否参与ＩＬ－３基因表达的调节。结果表明：①在以ＰＨＡ／ＰＭＡ刺激及未刺激的Ｊｕｒｋａｔ细胞和正常人Ｔ淋巴细胞中，都存在与这一序列结合的蛋白带，其中在刺激后的正常人Ｔ淋巴细胞中出现了一条新的蛋白结合带，而Ｊｕｒｋａｔ细胞中则没有新带型出现，但刺激后的结合带强度显著高于未刺激组。②正常人Ｔ淋巴细胞和Ｊｕｒｋａｔ细胞中，与此序列结合的蛋白带型是不相同的。③当用１５０倍克分子过量的未标记探针与３２Ｐ标记的探针竞争结合核蛋白因子后，从凝胶迁移中清楚地看到Ｊｕｒｋａｔ细胞和正常人Ｔ淋巴细胞中的蛋白带都特异地消失。以上结果提示：①ＩＬ－３基因５′侧翼的κＢ样序列的确存在与之特异结合的蛋白因子，且该蛋白因子的表达是可诱导的。②正常细胞和肿瘤细胞中，与κＢ样序列结合的转录因子是不完全相同的。从而提示：在正常细胞和肿瘤细胞中，ＩＬ－３基因表达调控的机制可能并不完全一致     

大鼠全脑缺血再灌注后HAX-1蛋白与皮质神经元凋亡的关系

目的探讨大鼠全脑缺血再灌注后皮质组织中HAX-1蛋白(HS1-associated protein X-1,HAX-1)与皮质神经元凋亡的关系。方法建立大鼠四血管法全脑缺血模型,将实验动物分为5组(n=5):正常组,缺血6、24、48、72h组。采用HE染色,观察大鼠皮层组织病理变化;采用免疫组化、TUNEL法检测大鼠全脑缺血再灌注后HAX-1蛋白的表达以及皮质神经元凋亡蛋白Caspase-3的表达情况。结果HAX-1蛋白在缺血后6h表达最高(37.60±3.45),24、48、72h降低[分别为(11.40±1.14)、(10.40±1.52)、(9.80±1.30)],且低于正常水平(P<0.01);Caspase-3蛋白随着缺血时间的延长逐渐增高[6、24、48、72h分别为(72.80±5.49)、(106.20±6.91)、(129.00±19.74)、(166.20±15.32)](P<0.01),并伴随神经元凋亡的数目逐渐增加[(92.00±9.06)、(133.80±10.64)、(157.00±10.83)、(187.80±14.96)]。结论全脑缺血再灌注后皮质神经元中HAX-1蛋白在短期...     

二甲双胍降低糖尿病患者肿瘤发病风险及机制的研究进展北大核心CSCD

糖尿病患者罹患各类癌症的风险明显高于正常人,但其原因和机制仍不十分清楚,目前认为与高血糖、高胰岛素血症、胰岛素抵抗等因素相关。另外流行病学研究还提示糖尿病的治疗与癌症的发病率和死亡率有一定的关系,胰岛素或磺脲类药物因能增加体内胰岛素水平或加重胰岛素抵抗而使癌症风险增加,二甲双胍可能因为减轻胰岛素抵抗及血浆胰岛素水平而与癌症风险降低相关。本文就二甲双胍抗肿瘤分子机制的相关进展进行综述。     

Effects of hammerhead ribozyme (RCP) on HBV P gene in vitro

Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｈａｍｍｅｒｈｅａｄｒｉｂｏｚｙｍｅ（ＲＣＰ）ｏｎＨＢＶＰｇｅｎｅｉｎｖｉｔｒｏＧａｎＬｉｘｉａ（甘立霞），ＷａｎｇＰｉｎｇ（王平），ＺｈｕＸｉｈｕａ（朱锡华），ＤｏｎｇＹａｎｌｉｎ（董燕麟），ＨｏｕＹｕｎｄｅ（侯云德）（Ｄｅｐａｒ...     

锤头状核酶的设计,构建及与反义RNA在阻断HBV基因表达中的比较研究

锤头状核酶的设计、构建及与反义ＲＮＡ在阻断ＨＢＶ基因表达中的比较研究ＤｅｓｉｇｎａｎｄｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｈａｍｍｅｒｈｅａｄｒｉｂｏｚｙｍｅａｎｄｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｓｔｕｄｙｏｆｉｔｓｂｌｏｃｋｉｎｇｅｆｅｃｔｏｎＨＢＶｇｅｎｅｅｘｐ...     

可溶性瘦素受体与疾病关联性的研究进展

瘦素是脂肪组织分泌的激素,由肥胖基因（obese gene,ob）编码,具有抑制食欲、调节能量代谢、神经内分泌、生长、生殖和免疫反应等多种功能.瘦素通过结合瘦素受体发挥其广泛的生理作用.瘦素可通过与下丘脑的受体结合从而降低食欲和增加能量消耗;还可通过与外周组织受体结合而影响一系列机体代谢过程.瘦素在血液循环中以游离型和结合型两种形式存在,其游离型具有生物活性.现知道,可溶性瘦素受体（soluble leptin receptor,sOB-R）是人体血液循环中最主要的瘦素结合蛋白[1],它们从细胞表面瘦素受体的胞外区水解脱落产生,调节瘦素的生物利用度及其生理功能.越来越多的临床研究显示,在不同的生理及病理情况下,如1型糖尿病、肥胖等患者中,血浆sOB-R的水平不同.因此,sOB-R可能通过增强或减弱瘦素的信号功能,从而在疾病的发生发展中起重要的调节作用.本文就近年来临床研究中有关血浆sOB-R与疾病的关联研究的相关进展作一综述.     

瘦素在肝脏中的生理功能及其在肝脏疾病中的作用

瘦素是由肥胖基因(obese gene,ob)编码,体内瘦素主要由脂肪组织分泌,通过结合瘦素受体调节中枢及外周组织多种重要生理功能.正常肝组织不表达瘦素,但有瘦素受体的表达,通过与肝细胞瘦素受体结合,参与调节葡萄糖的产生、转运、代谢,脂肪的分解合成及胰岛素信号的调控.近年研究发现,在多种肝脏疾病状态下,血浆及肝组织局部瘦素或瘦素受体的表达发生改变,通过干扰胰岛素信号功能、激活肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)、介导肝Kupffer细胞的激活,进而诱导多种促炎、促细胞增殖及纤维化的相关基因表达,加剧了炎症细胞的浸润、细胞外基质堆积,在肝脏炎性反应、肝纤维化以及肝细胞癌发生发展中发挥作用.本文对瘦素在肝脏中的作用及其与肝病的关系进行综述.     

应用SoftLinkTM Soft Release Avidin树脂亲和层析纯化融合IL-16蛋白

目的 分离、纯化大肠杆菌中表达的融合ＩＬ－１６蛋白。方法 采用ＳｏｆｔＬｉｎｋ＾ＴＭＳｏｆｔＲｅｌｅａｓｅＡｖｉｄｉｎＲｅｓｉｎ亲合树脂分离,、纯化由大肠杆菌产和的生物素化融合ＩＬ－１６蛋白。结果 融合ＩＬ－１６蛋白成功地在该系统中被分离、纯化,每升细菌培养物可获得１．４ｍｇ重组融合蛋白,纯化蛋白经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和毛细管电泳检测均为１条蛋白质量,结论 此系统纯化ＩＬ－１６融合蛋白操作方便,快捷,     

腺病毒介导MCP-1-siRNA对人单核细胞体外迁移能力的影响

目的 构建针对单核细胞趋化蛋白1(monoeyte chemoattractant protein 1,MCP-1)基因的小分子干扰RNA(siRNA)重组腺病毒,探讨干扰MCP-1表达对人单核细胞白血病株THP-1迁移能力的影响.方法 设计并合成针对人MCP-1的siRNA的靶DNA序列,克隆于穿梭载体pAdTrack-CMV中,与带有腺病毒骨架质粒pAdeasy-1的BJ5183细菌中进行同源重组,获得重组腺病毒载体pAdeasy-si-MCP-1,转染人胚肾细胞株293细胞,包装并扩增病毒颗粒.体外感染能表达MCP-1的293细胞,RT-PCR检测siRNA对MCP-1转录水平影响.Millicell细胞迁移实验检测对人单核细胞白血病株THP-1体外迁移能力的影响.结果 高糖诱导下,人293细胞MCP-1的表达增强;而Ad-si-MCP-1感染后,能够显著抑制高糖刺激的MCP-1 mR-NA水平的升高;Ad-si-MCP-1感染293细胞后的培养上清对THP-1的趋化作用较高糖刺激组及其siRNA阴性对照组显著降低.结论 成功构建了抑制MCP-1表达的siRNA腺病毒载体,其抑制MCP-1表达可明显抑制高糖诱导的THP-1的趋化作用,提示MCP-1表达的干预可能为糖尿病肾病等MCP-1相关疾病提供新的预防和治疗手段.