杨梅素通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路诱导MTB感染巨噬细胞发生自噬的研究

目的 对杨梅素通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路诱导MTB感染的巨噬细胞发生自噬进行研究,从而探讨杨梅素抗结核作用的机理。方法 用CCK8法检测杨梅素对细胞增殖的影响,确定安全的用药范围;以H37Ra菌株感染的小鼠巨噬细胞Raw 264.7为模型组,并设空白组和药物处理组。按感染复数(MOI,即细菌∶细胞=10∶1)加入模型组、药物处理组,共孵育4h后,磷酸盐缓冲液(PBS)洗3次以弃掉未进入胞内的MTB。药物处理组分别用不同浓度(12.5、25、50、100μmol/L)的杨梅素作用24h, Western blot法检测自噬相关蛋白即“微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和p62”表达水平的变化,并以此筛选出杨梅素促进自噬的最佳作用浓度;100μmol/L杨梅素作用于感染细胞72h后,0.1%聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)冰上裂解细胞10min,菌落形成单位(CFU)法检测巨噬细胞胞内荷菌量;杨梅素作用感染细胞不同时间(30、60、180min)后Western blot测定PI3K/Akt/mTOR信号通路中Akt、mTOR的磷酸化水平。以Image J软件做蛋白定量分析,用GraphPad Prism 7.0制图,采用单因素方差分析(ANOVA)进行统计分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果 杨梅素在100μmol/L浓度以下细胞生存率在90%左右,对细胞毒性较小;Western blot结果显示:与模型组(0.52±0.01)相比,杨梅素不同浓度(12.5、25、50、100μmol/L)处理均能促进LC3Ⅱ的表达(0.59±0.02、 0.65±0.01、 0.71±0.01、 0.83±0.01),差异有统计学意义(t=2.97、P=0.04,t=7.91、P=0.00,t=9.77、P=0.00,t=16.37、P=0.00);而较模型组p62蛋白(0.86±0.02),药物处理亦能抑制p62的表达(0.72±0.01、0.86±0.00、0.60±0.02、0.58±0.01),25μmol/L杨梅素处理组差异无统计学意义(t=0.81、P=0.46),12.5、50、100μmol/L处理组差异均有统计学意义(t=6.50、P=0.00,t=9.53、P=0.00,t=12.01、P=0.00);杨梅素促进自噬的最佳药物浓度为100μmol/L;100μmol/L杨梅素作用于感染细胞72h后,对胞内MTB的抑制率为21.02%;模型组细胞在MTB感染后30、60、180min时,PI3K/Akt/mTOR通路中Akt蛋白的磷酸化(p-Akt)水平(1.23±0.01、1.52±0.01、0.74±0.02)明显增加,而杨梅素作用相同的时间后,可明显抑制Akt蛋白的磷酸化(0.99±0.01、0.96±0.01、0.43±0.01),差异有统计学意义(t=27.60、P=0.00,t=30.06、P=0.00,t=18.60、P=0.00);而模型组磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白水平仅在MTB感染后180min(0.57±0.00)明显增加(t=94.61、P=0.00),杨梅素作用180min亦能抑制mTOR蛋白的磷酸化(0.46±0.01),差异有统计学意义(t=21.60、P=0.00)。结论 杨梅素通过抑制Akt和mTOR蛋白的磷酸化来抑制PI3K/Akt/mTOR通路,从而诱导MTB感染的巨噬细胞发生自噬来杀灭胞内的MTB。     

载紫杉醇缓释微球的制备及其体外抑瘤效果的观察

目的 应用乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)制备载紫杉醇(PTX) PLGA微球,探讨其理化性质及其体外抑瘤效果.方法 采用双乳剂挥发法制备PTX-PLGA微球,扫描电镜及光学显微镜观察其外观形态,测定微球径线.高效液相色谱法评价PTX-PLGA微球载药率及其包封率.培养卵巢癌SKOV3细胞株,并设空白对照组、生理盐水组、PLGA微球悬液组、紫杉醇注射液组和PTX-PLGA微球悬液组,应用MTT法检测不同处理组在不同时间细胞的生长抑制情况,倒置显微镜下观察肿瘤细胞凋亡形态.结果 PTX-PLGA微球大小均匀,表面光滑无粘连,平均直径为(2.00±0.19) μm,载药率约为5.68％,包封率为81.10％.给药72 h后药物浓度为1×105 mol/L时,PTX-PLGA组的卵巢癌细胞增殖明显受到抑制(P＜0.05).结论 本法制备的PTX-PLGA微球性质稳定,对卵巢癌细胞的抑制作用具有一定缓释效果.     

半夏泻心汤抑制巨噬细胞分泌促炎因子抗胃炎机制研究

[目的]探讨中国经典方半夏泻心汤调节固有免疫细胞巨噬细胞分泌促炎性细胞因子抗胃炎的机制。[方法]采用含药血清作用原代培养的巨噬细胞,用荧光定量PCR的方法检测巨噬细胞内IL-8、IL-12、IL-18、TNF-α表达变化情况结果作用3h时,5%含药血清对巨噬细胞分泌IL-8、IL-12、IL-18无影响,能抑制巨噬细胞分泌TNF-α(P0.05);10%含药血清能促进巨噬细胞分泌IL-8、IL-18、TNF-α(P0.01),对巨噬细胞分泌IL-12仍无影响。作用6h时,5%含药血清能明显抑制巨噬细胞分泌IL-8(P0.01)、同时促进IL-18、TNF-α分泌(P0.05),对IL-12分泌无影响;10%含药血清能明显抑制巨噬细胞分泌IL-8、IL-18、TNF-α(P0.01),对IL-12分泌仍无影响。对于IL-8的影响,只有在作用6h时呈现剂量—效应关系。对于IL-18的影响,有明显的时间-剂量依赖性,含药血清作用时间越长,作用浓度越高,对抑制巨噬细胞分泌细胞因子作用越明显。对于TNF-α的影响,只有在作用6h时呈现剂量—效应关系,无时间—效应关系。[结论]半夏泻心汤可以有效地治疗因幽门螺杆菌感染导致的胃炎,其作用机制为通过调节固有免疫细胞巨噬细胞的活性,抑制巨噬细胞分泌IL-8、IL-18、TNF-α等炎性因子,减轻胃黏膜上皮细胞的炎性损伤。     

结核分枝杆菌北京基因型菌株新型分子遗传标志的鉴定

目的分析结核分枝杆菌北京基因型菌株与非北京基因型菌株间差异表达的蛋白质，寻找可用于快速区分北京基因型的分型标志。方法应用间隔寡核苷酸分型法对56株结核分枝杆菌进行基因分型，经双向电泳技术比较北京基因型菌株与非北京基因型菌株的全菌蛋白表达图谱差异，差异表达的蛋白质通过基质辅助激光解吸-电离飞行时间质谱仪进行质谱分析，蛋白质数据库进行检索。进而对差异表达的蛋白质相应基因及上游进行序列分析。结果56株结核分枝杆菌中有49株为北京型菌株，7株为非北京型菌株。两个基因型菌株中差异明显表达的蛋白质为Rv0927c，该蛋白质斑点在49株北京基因型菌株中均缺失，而在7株非北京菌株和H37Rv中均有出现。北京基冈型菌株Rv0927c基因有两个特征性突变：在421位核苷酸位点的AGC3个碱基缺失，以及该基因上游127位点G—A的突变；而非北京基因型菌株该基因及其上游序列与H37Rv完全相同。结论 Rv0927c基因在北京基因型菌株中的特征性突变，对开发新型区分北京基因型和非北京基因型结核分枝杆菌的方法奠定了基础。     

小檗碱对脂多糖诱导的COX-2表达的影响

目的:研究中药小檗碱对脂多糖(LPS)诱导的COX-2表达的影响。方法:取人外周静脉血分离及培养单个核细胞,分为3组:空白对照组、LPS组、LPS+小檗碱组。分别在培养后30 min,6 h,12 h,24 h提取细胞,行RT-PCR法测定COX-2 mRNA水平,Western blot法测定p38MAPK,p-p38MAPK,ERK,p-ERK及COX-2蛋白水平。同时加入选择性p38MAPK抑制剂(SB203580),以及特异性ERK抑制剂(PD098059)分别测定COX-2 mRNA及蛋白水平。结果:与空白对照组相比,LPS组COX-2 mRNA及蛋白表达明显增强(P<0.01)。与LPS组相比,LPS+小檗碱组COX-2 mRNA及蛋白表达明显抑制(P<0.05),且随着浓度增加,抑制作用更明显,在给药后12 h,小檗碱对COX-2抑制作用最强。与LPS组相比,LPS+小檗碱组P38MAPK活性水平差异无统计学意义(P>0.05)。但是与LPS组相比,LPS+小檗碱组ERK活性水平差异有统计学意义(P<0.05)。加入p38MAPK抑制剂以及ERK抑制剂之后,COX-2 mRNA及蛋白水平降低明显...     

Thy 1.1干细胞移植能抑制动脉损伤后内膜增生

目的 探讨大鼠Thy-1.1干细胞局部移植对大鼠颈总动脉球囊损伤后内膜增生的影响,评价干细胞移植对再狭窄的作用.方法 雌性SD大鼠60只随机分为2组,每组30只,即干细胞移植组:于颈总动脉球囊损伤后即刻将约5×105Thy-1.1干细胞注入至损伤血管局部;对照组:颈总动脉球囊损伤后局部注入等量生理盐水.另有30只4～6周龄雄性SD大鼠提供骨髓Thy-1.1干细胞.2组各于术后即刻、3 d、7 d、14 d、28 d取损伤血管段,病理组织学方法 观察细胞增殖情况,原位杂交方法 观察移植细胞的定植、分化情况,RT-PCR方法 分析内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达情况.结果 干细胞移植组内膜面积低于对照组[I/M,干细胞移植组:2.06±0.28比对照组2.42±0.19,P<0.05],干细胞移植组内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达明显高于对照组[eNOS mRNA,干细胞移植组:0.44±0.06比对照组0.35±0.02,P<0.05],干细胞移植组原位杂交图片中可见内皮细胞有移植的异体细胞.结论 Thy-1.1干细胞局部移植可促进大鼠颈总动脉球囊损伤后再内皮化,抑制内膜增生,预防血管成形术术后再狭窄.     

卡维地洛对高血压伴焦虑患者的疗效观察

目的:研究卡维地洛、硝苯地平及福辛普利在高血压伴焦虑患者中的降血压与抗焦虑疗效。方法:经导入期安慰剂治疗后舒张压95～115 mmHg及收缩压<180mmHg,贝克焦虑量表(BAI)评分>45分的32例患者为研究对象,采用自身交叉对照的方法,每例在不同治疗期分别给予卡维地洛、硝苯地平控释片及福辛普利治疗4周。观察血压及BAI评分的变化。结果:卡维地洛对收缩压和舒张压的降压作用比其他两组为佳,差异非常显著(P<0.01);BAI评分也显著下降(P<0.01)。结论:对于轻、中度高血压伴焦虑患者,卡维地洛的降血压和减轻焦虑效果较硝苯地平控释剂和福辛普利更好。     

T-2毒素抗原的制备与ELISA法检定

目的 制备T-2毒素抗原，为建立检测T-2毒素的ELISA法奠定基础。方法 T-2毒素与琥珀酸酐在吡啶参与下于蒸汽浴中反应，生成T-2-半琥珀酸酐后，再与小牛血清白蛋白经碳二亚胺偶联结合生成T-2毒素抗原。结果 利用琥珀酸酐法成功制备T-2毒素抗原，即BSA-T-2HS。结论 T-2毒素抗原的制备为ELISA法的建立奠定了基础。     

动态心电图对房颤合并Ⅱ度房室传导阻滞的诊断分析

目的　探讨合适的心房颤动 (AF)合并Ⅱ度房室传导阻滞 (Ⅱ°AVB)的诊断标准。　方法　记录 6 7例AF病人的 2 4小时心电图。　结果　 (1) 5 8例病人发生 >1 5秒的长R -R间歇 ,平均最长R -R为 2 30秒± 0 5 3秒 ,多数发生在夜间 (占 84 91% ) ;(2 )平均心室率为 80 95次 分± 15 17次 分 ,发生长间歇病人的平均心室率为76 2 5次 分± 5 32次 分 ;(3) 10例转复为窦性心律 ,无一例存在Ⅱ°AVB ,仅 1例P -R延长至 0 2 2秒 ;(4)分别以长间歇≥ 1 5秒、平均心室率≤ 6 0次 分、逸搏占总心跳百分比≥ 0 1%作为诊断标准 ,其诊断阳性率分别为 86 75 %、2 99%、2 98%。　结论　AF时发生 1 5秒以上的长间歇很常见 ,单以长间歇≥ 1 5秒诊断AF合并Ⅱ°AVB易造成误诊 ,应结合平均心室率、逸搏占总心跳百分比等其它指标     

死髓牙根管治疗术368例临床分析

目的：探讨死髓牙根管治疗效果的影响因素及预防措施。方法：收集死髓牙根管治疗术368例进行分析。结果：根管治疗总有效率为73．91％，疗效与患者的年龄，牙位，病变及治疗操作等因素关系明显。结论：熟悉根管解剖形态及其变异，可以进一步提高根管治疗成功率。