Inhibiting effect of antisense hTRT on telomerase activity of human liver cancer cell line SMMC-7721

Objective: To induce changes in biological character of human liver cancer cell line SMMC-7721 by blocking the expression of telomerase genes hTRT and to explore its value in cancer gene therapy. Methods: The vehicle for eukaryotic expression of antisense hTRT was constructed and then transfected into SMMC-7721 cells. The effects of antisense hTRT gene on telomerase activity, cancer cell growth and malignant phenotypes were analyzed. Results: The obtained transfectants that could express antisense hTRT gene stably showed marked decrease in telomerase activity;the shortening of telomere was obvious; cells presented contact growth inhibition; in nude mice transplantation, the rate of tumor induction dramatically decreased. Conclusion : Antisense hTRT gene expression can significantly inhibit telomerase activity of cancer cells and decrease malignant phenotypes in vitro and in vivo. Therefore, as a telomerase inhibitor, antisense hTRT gene may be a new pathway for cancer therapy.     

银屑病生物治疗研究进展

 当前医学界一致认为，银屑病是一种 T 细胞引发并维持的自身免疫性疾病，病人机体免疫系统紊乱，健康细胞受到攻击，造成临床上典型的皮肤鳞屑性炎症病变^[1]。这种慢性炎症性疾病的病理过程包括T细胞浸润、真皮血管的改变、表皮角质细胞过度增生和异常分化 。其中参与银屑病发病的 T 细胞大致经历3个阶段的变化：T细胞（CD45RO+）的初始活化；T 细胞迁移至病变皮肤；活化T 细胞释放细胞因子发挥促增殖功能。真皮内的 CD4+ T细胞及其产生的细胞因子是银屑病发病的中心环节，角质细胞与血管内皮细胞的变化只是继发于细胞免疫机制异常的一种改变^[2]。随着对银屑病发病机制及免疫学机制研究的不断深入，人们陆续开发出多种生物制剂。这些生物制剂与传统的化学制药制造出来的具有严格化学分子式的小分子药品完全不同，它们都是蛋白质大分子，可以特异性作用于T细胞活化过程中不同的信号转导分子及途径，从而阻断疾病进程。此类生物制剂均通过生物工程技术获得，按性质大致可以划分为重组单克隆抗体（单抗）、重组抗体融合蛋白、重组细胞因子或生长因子等 3 大类；根据作用于 T 细胞活化靶点的不同，又可以分为针对原发性刺激、阻断共刺激分子作用、抑制T细胞增殖、抑制有炎症介导活性细胞因子和平衡有免疫调节活性的细胞因子等 5 大类^[3-4]。生物制剂的出现，为银屑病治疗提供了新的选择，正逐步改变着皮肤科医师治疗银屑病的传统模式。本文就近几年来银屑病生物治疗方面的最新研究进展做一综述。......     

流式细胞仪分析100例正常成人T细胞亚群

<正> 流式细胞仪分析T细胞亚群具有不失真、重复性好和快速等优点,国外已多采用。我们于1986年起,用流式细胞仪分析全血溶解染色的正常国人T细胞及其亚群100例,探讨与国外正常值的差异及其变异范围。     

肝纤维化大鼠血小板衍生生长因子受体β亚单位的表达及其与细胞外基质成分的相关性

目的 研究血小板衍生生长因子(PDGF)受体β亚单位在肝纤维化组织中的动态表达及其与细胞外基质成分的相关性。 方法 将动物分为正常对照组和模型组,用C Cl4复制肝纤维化模型,用免疫组化方法动态检测PDGF受体β亚单位、α～平滑肌抗体(α-SMA)、Ⅰ、Ⅲ型胶原在肝纤维化组织中的表达,将免疫组化结果行图像扫描半定量后进行统计学分析并计算其相关性。 结果 随着肝纤维化程度的加重,PDGF受体β亚单位、α—SMA表达逐渐增加,Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达也逐步增加。在2周时PDGF受体β亚单位与Ⅰ、Ⅲ型胶原的相关性不明显,但与α-SMA呈显著相关,其相关系数为0.6 2(P<0.05);在4周时其与Ⅰ、Ⅲ型胶原和α—SMA的相关系数分别为0.74、0.60和0.69(P<0.05);在6周时其与Ⅰ、Ⅲ型胶原和α-SMA的相关系数分别为0.83、0.67和0.81(P<0.05)。 结论 PDGF受体β亚单位在肝纤维化的发生发展中起重要作用,抑制PDGF受体β亚单位的表达可望能减少细胞外基质的合成。     

分泌mRANTES趋化因子的小鼠肝癌细胞的建立及其体内致瘤性的初步研究

目的：建立分泌mRNATES的小鼠肝癌细胞，并观察其体内致瘤性。方法：mRNATES cDNA被克隆入pBabe puro逆转录病毒载体，构建的重组逆转录病毒载体pBabe puro mRNATES转染包装细胞，嘌呤酶素抗性细胞培养上清感染小鼠肝癌细胞系Hepal-6，免疫组化检测Hepal-6、Hepal-6 mRNATES的mRNATES蛋白的表达。绘制Hepal-6 mRNATES与Hepal-6的生长曲线观察细胞的生长。琼脂糖凝胶打孔法体外观察Hepal-6 mRNATES分泌蛋白对小鼠脾细胞的趋化作用。观察Hepal-6 mRNATES体内致瘤性。结果：构建了重组逆转录病毒载体pBabe puro mRNATES,Hepal-6不表达mRNATES,Hepal-6 mRNATES表达mRNATES蛋白。Hepal-6 mRNATES与Hepal-6的生长曲线基本一样。Hepal-6 mRNATES分泌了对小鼠脾细胞有趋化作用的分子。Hepal-6 mRNATES体内致瘤性降低。结论：Hepal-6 mRNATES能产生mRNATES,mRANTES不改变细胞体外生长状况，Hepal-6 mRNATES产生的mRNATES有趋化活性，mRNATES能使Hepal-6 mRNATES致瘤性降低。     

高效毛细管电泳法测定利多卡因代谢产物单乙基甘氨酰二甲苯胺

目的 :建立一种测定利多卡因代谢产物单乙基甘氨酰二甲苯胺 (MEGX)含量的高效毛细管电泳法。方法 :用50mmol/L硼酸缓冲液 (pH =8.8)为电泳电解液 ,电压 1 2kV ,运行电流 1 8.8～ 2 3 .2 μA ,检测波长 2 1 4nm ,有效毛细管长度 50cm ,管径 50 μm ,氨茶碱为内标 ,展开 1 2min。 8只昆明种小白鼠腹腔注射 0 .2 %利多卡因 4 0mg/kg ,用本法测定其 5h尿液中MEGX累积排泄量。结果 :MEGX迁移时间 7.8min ,氨茶碱迁移时间 1 0 .7min。MEGX含量为 0 .0 62～1 .0mg/ml时 ,其浓度与色谱峰面积线性关系良好 ,r =0 .9991 ,日内、日间变异系数均小于 7.8% ,回收率为98.4 %～ 1 0 1 .6% ,常用 3 0种药物对其无干扰。 8只小鼠MEGX累积排泄量为 ( 2 95.2± 55.2 ) μg ,其中游离型MEGX为 4 4.7% ,结合型为 55.3 %。结论 :该方法简单、快速、灵敏 ,特异性和重现性良好 ,具有较强实用价值。     

Ⅰ型细胞间粘附分子mRNA表达与肝癌侵袭转移的关系

目的：研究Ⅰ型细胞间粘附分子（ＩＣＡＭ－１）ｍ ＲＮＡ 的表达与肝癌侵袭转移的关系。方法：采用原位分子杂交及Ｎｏｒｔｈ－ｅｒｎ ｂｌｏｔ方法检测３４例肝癌组织中ＩＣＡＭ－１ ｍ ＲＮＡ 的表达。结果：３４例肝癌中２４例包膜不完整、门静脉癌栓或形成转移灶,１０例肝癌包膜完整,３４例肝癌中２１例肝癌细胞ＩＣＡＭ－１ ｍ ＲＮＡ表达阳性。伴门静脉癌栓或形成转移的肝癌１８例中,１６例ＩＣＡＭ－１ｍ ＲＮＡ 表达（＋ ＋ ）～（＋ ＋ ＋ ）;６例包膜不完整的肝癌３例表达阳性,而１０例包膜完整的肝癌仅有２例表达阳性。门静脉癌栓及肝内转移灶ＩＣＡＭ－１ ｍ ＲＮＡ 表达强阳性。结论：肝癌细胞ＩＣＡＭ－１ ｍ ＲＮＡ 的表达与肝癌的侵袭转移相关。     

Flt3配体修饰小鼠肝癌疫苗的制备及其体内抗肿瘤活性观察

目的:以小鼠Flt3配体(murine flt3 ligand, mFL)的重组腺病毒载体(AdmFL)体外感染小鼠肝癌细胞株Hepa1-6制备肝癌疫苗,并观察其体内抗肿瘤活性.方法:腺病毒载体体外感染Hepa1-6细胞,48 h后通过载体所携带的绿色荧光蛋白(GFP)的表达检测感染的效率;并用ELISA方法检测第0、2、4、6、8天培养上清中mFL的表达量;每天进行细胞计数(连续14 d),观察细胞的体外生长曲线;取5×106个修饰后的Hepa1-6细胞接种C57BL/6小鼠,4周后于原接种部位的对侧再接种2×106个野生型Hepa1-6或EL4细胞.结果:AdmFL能有效感染靶细胞Hepa1-6,培养上清中mFL表达量在第2天最高,达到(71.1±6.3) ng/ml,感染后Hepa1-6的体外生长未受到明显抑制;修饰后Hepa1-6细胞的体内成瘤性下降;4周后再接种Hepa1-6细胞,肿瘤生长速度明显降低;而再接种的EL4细胞呈渐进性生长,与对照组相比无显著差异.结论:腺病毒介导的Flt3配体基因修饰后的肝癌细胞的体内成瘤性下降,并能激发特异性免疫保护反应,是有效的肝癌疫苗.     

肝癌组织中T淋巴细胞浸润对肝癌的扩散和预后的影响

最近曾报道肿瘤局部免疫反应能直接反映机体特异性抗肿瘤免疫反应状态并与预后有关,但迄今尚未见有关肝癌局部免疫反应研究的报道。为了深入探讨机体免疫机制对肝癌发生、发展和预后的影响,本文对原发性肝癌(HCC)局部淋巴细胞浸润程度与肝癌扩散和预后的关系进行了研究。