Tip30真核表达载体的构建及其在HepG2细胞中的表达

目的：探讨人Tip30全长基因的真核表达载体pAAV-TIP30的构建,并观察其转染肝癌细胞株HepG2后的表达。方法：以正常人肝组织mRNA为模板,用RT-PCR方法扩增Tip30,利用限制性内切酶BamH I和Xba I,将Tip30基因克隆到真核表达载体pAAV-MCS中,并经酶切和测序鉴定。重组质粒转染HepG2细胞,运用Western blot法检测Tip30蛋白表达。结果：RT-PCR方法正确地扩增出全长Tip30基因。限制性内切酶酶切和测序结果证实Tip30基因克隆完全正确。重组质粒转染肝癌细胞系HepG2后,Western blot证实Tip30蛋白表达增高。结论：成功构建了真核表达重组质粒pAAV-TIP30并转染HepG2细胞,为进一步研究Tip30基因对肝癌的影响及其机制打下了基础。     

CYP2C10基因多态性对奥美拉唑治疗十二指肠溃疡的影响

目的 探讨奥美拉唑治疗十二指肠溃疡合并幽门螺旋菌感染的疗效及其与CYP2C19基因多态性的关系.方法 应用奥美拉唑+阿莫西林+克拉霉素三联用药1周后单用奥美拉唑抑酸3周的方案治疗65例经胃镜证实的十二指肠溃疡合并幽门螺旋菌( Hpylori)感染患者.记录治疗前和用药后症状的变化,并于治疗结束时复查胃镜.患者CYP2C19的基因型检测采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析方法.结果 65例十二指肠溃疡患者中,24例为纯合子强代谢者,31例为杂合子强代谢者,10例为弱代谢者.纯合子强代谢组、杂合子强代谢组和弱代谢组有效率分别为75.0％、90.3％和100％,纯合子强代谢组的治愈率显著低于弱代谢组(P＜0.05).弱代谢型组患者的Hpylori清除率显著高于纯合子强代谢型和杂合子强代谢型(P＜0.05).结论 CYP2C19基因多态性与奥美拉唑治疗十二指肠溃疡合并幽门螺旋菌感染的疗效密切相关.CYP2C19基因分型检测是临床治疗酸相关性疾病中的一个重要的工具.     

侧方淋巴结清扫在低位直肠癌根治术中的应用

目的 评价侧方淋巴结清扫在低位直肠癌根治术中的应用价值.方法 将2004年7月至2010年12月在中南大学湘雅医院行直肠癌根治术的152例低位直肠癌患者随机分为两组,观察组(67例)行全直肠系膜切除(TME)+侧方淋巴结清扫,对照组(85例)行单纯TME,比较两组的平均手术时间、术中失血量,局部复发率、远处转移率及3年生存率,术后排尿功能及性功能等指标.结果 观察组的平均手术时间、术中失血量分别为(263.2±48.4)min、(535.3±62.7)ml,对照组分别为(207.1±45.5)min、(409.5±48.3)ml,两组比较差异有统计学意义(P<0.05),观察组的局部复发率、远处转移率及3年生存率分别为8.20%、6.56%、83.61%,对照组分别为21.74%、20.29%、65.22%,差异有统计学意义(P<0.05),两组的术后排尿功能及性功能指标相比,差异无统计学意义(P>0.05),低分化腺癌及黏液腺癌的侧方淋巴转移率分别为33.33%、40.00%,高于高、中分化腺癌的7.14%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 侧方淋巴结清扫能安全有效地改善低位直肠癌根治术的治疗效果,提高生存率,改善生存质量,应常规用于低分化腺癌、黏液腺癌者.     

HSP90β在结肠癌组织和细胞中的表达及其与化疗耐药的关系

目的 研究热休克蛋白90β(HSP90β)在结肠癌组织和HCT-8细胞中的表达,及其与结肠癌细胞对化疗药物耐药性之间的关系.方法 应用免疫组化染色法研究HSP90β在结肠癌组织中的表达水平以及与Duke's分期、病理分级之间的关系;MTT法检测长春新碱(VCR)对结肠癌亲本细胞HCT-8和耐药细胞HCT-8/VCR的半数抑制浓度(IC50;以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HSP90β mRNA在结肠癌亲本和耐药细胞系中表达的差异,探讨其与细胞耐药性之间的关系.结果 结肠癌组织中HSP90β的表达阳性率为41.67%,高于癌旁结肠组织的16.67%(P<0.05).HSP90β表达水平与肿瘤分化之间有关(r=-0.8825,P<0.05),与肿瘤Duke'S分期之间无关(P>0.05);HCT-8/VCR细胞对VCR的耐药性显著高于HCT-8细胞(P<0.05);HSP90β mRNA在耐药细胞中的含量(0.955±0.03)明显高于亲本细胞(0.835±0.029)(P<0.01).结论 HSP90β在结肠癌中的表达水平升高,可能与结肠癌的恶性转化、化疗耐药性有关,可望作为改善结肠癌化疗敏感性的一个新靶点.     

内镜下离断胸廓穿支血管对乳沟重建的临床研究

目的  探讨内镜技术在隆乳术中乳沟重建技术中的应用。方法  采用内镜隆乳术，术中离断胸部穿支血管，重建乳沟。结果  所有患者均顺利恢复，乳房外形丰满圆润，手感柔软逼真，活动度好，乳沟构建效果良好，无假体移位或双侧不对称等并发症出现。结论  采用内镜辅助下离断穿支血管重建乳沟，手术在直视下进行，手术创伤度小，安全性高，出血少，且能提高乳房美观性。

     

胆囊结石合并全内脏转位1例

1　临床资料陈路君 ,女 ,5 8岁。因反复左上腹痛 4 0年于2 0 0 2年 5月 2 7日入院。患者于 4 0年前反复出现左上腹痛 ,无寒热、黄疸。 3年前在当地医院B超检查发现胆囊结石及腹腔脏器转位。体查发现右位心 ,左上腹轻压痛 ,肝浊音区位于左季肋部 ,胃泡鼓音区位于右季肋部。胸透 :右位心。ECG :右位心。B超 :腹腔内脏反位 ;胆囊多发结石 ,胆囊炎。诊断为 :胆囊结石并胆囊炎 ;全内脏转位。完善术前准备后于全麻下行经腹腔镜胆囊切除术。先于脐下穿刺置 10mmTrocar ,插入腹腔镜探查整个腹腔情况 ,见肝脏及胆囊位于左上腹 ,胃、脾位于右上腹 ,…     

腹腔镜手术术中气腹压对肝功能的影响

目的研究腹腔镜手术中气腹压对术后短期肝功能的影响。方法分别设立高气腹压腹腔镜胆囊切除组（HPLC）、低气腹压腹腔镜胆囊切除组（LPLC）、妇科手术组、泌尿外科手术组,每组40人,除低气腹压腹腔镜胆囊切除组的腹内压为7mmHg外,其余各组的气压均为14mmHg。在术前及术后24、48和72h抽血行肝功能检测,比较4组间术后肝功能的变化。结果在HPLC组及妇科手术组,术后24、48和72h的ALT、AST与术前比较有显著增高（P〈0.01）,但在术后72h时,基本降至正常范围;LPLC组术后24h和48h的ALT、AST较术前亦有显著增高（P〈0.01）,但术后72h即与术前差异无显著性（P〉0.05）,且增高幅度较HPLC组及妇科组显著降低（P〈0.05）,而在泌尿科组,ALT、AST较术前均无显著变化,各组患者手术前后的ALP、GGT、总胆红素无显著变化（P〉0.05）。结论腹腔镜手术气腹压对术后短期肝功能有一定的影响,使ALT、AST增加,且气腹压越高,损伤越大,但这种作用是暂时的。     

半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒对肝癌细胞株HepG2侵袭力的影响

目的 研究半乳糖化磁性白蛋白阿霉素纳米粒(Gal-MADM)对肝癌细胞株HepG2侵袭力的影响。方法应用Gal-MADM于HepG2细胞,并设A组:RPMI 1640对照组、B组:普通盐酸阿霉素(ADM)组、C组:磁性白蛋白阿霉素纳米粒联合磁场(MADM M)组、D组:半乳糖化白蛋白阿霉素纳米粒(Gal-ADM)组、E组:Gal-MADM联合磁场(Gal-MADM M)组。药物作用后以β-actin基因作为参照,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测组织蛋白酶(C)B mRNA的表达差异,应用Transwell小室检测体外侵袭力的变化,并用裸鼠肝癌皮下转移模型检测对体内侵袭力的影响。结果Gal-MADM作用HepG2肝癌细胞后CB mRNA表达降低较其他各组更为明显且有显著性,侵过小室滤膜细胞数目减少于其他各组且差异有显著性(P<0.01),裸鼠肝癌生长明显受到抑制(P<0.01)。结论Gal-MADM抑制肝癌细胞株HepG2的侵袭力的作用较ADM、MADM和Gal-ADM为强。     

半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒体外杀伤肝癌细胞的实验研究

目的 研究半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒(Gal-MADM-NP M)在体外对人肝癌细胞系HepG2的杀伤作用。方法应用光镜、电镜下的形态学观察,DNA电泳以及四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测杀瘤活性。结果 形态出现明显改变,电镜证实出现细胞凋亡;白蛋白磁性阿霉素纳米粒联合磁场(MADM-NP M)组和半乳糖化白蛋白阿霉素纳米粒(Gal-ADM-NP)组抑制率及半数抑制率剂量相似(P>0.05),Gal-MADM-NP M组抑制率明显提高,半数抑制剂量明显降低(P<0.01)。结论MADM-NP M、Gal-ADM-NP、Gal-MADM-NP都具有明显抑制体外培养肝癌细胞生长增殖的作用。Gal-MADM-NP M对人肝癌细胞杀伤作用较性MADM-NP及Gal-ADM-NP为强,作用机制可能与半乳糖配体的特异性介导和人肝癌细胞上半乳糖受体的识别内吞作用及联合外磁场有关。     

荧光分光光度法检测纳米粒运载的阿霉素在大鼠体内的分布

目的　观察由半乳糖化磁性白蛋白纳米粒运载的阿霉素经舌静脉给药后在大鼠体内的的分布状况。方法　全部大鼠随机分为 4组 ,经舌静脉 ,按分组分别注射 :游离阿霉素组(FADM ) ;磁性阿霉素白蛋白纳米粒 (MADM ) ;半乳糖化磁性阿霉素白蛋白纳米粒组 (Gal2 9 ADM ) ;半乳糖磁性阿霉素白蛋白纳米粒 外加磁场 (Gal2 9 ADM M ) ,剂量均为阿霉素 2 .5mg/kg体重。取全血、心、肺、肝、脾、肾。全血制成血浆 ,器官组织制成匀浆 ,盐酸乙醇法提取阿霉素 ,用荧光光度计测量。结果　静脉注射同等剂量、不同剂型的阿霉素药物后 ,阿霉素在器官中的蓄积程度从高到低 :肝 :D靶肝 >D非靶肝、C >B >A ;心脏、肾、血浆 :A >B >D、C ;脾 :B >A、C、D ;肺 :B>A >C、D。磁性阿霉素白蛋白纳米粒注入体内后 ,在心、肺、肝、脾、肾中的药物浓度在 15～ 3 0min达峰值 ,而半乳糖化后 ,阿霉素的药物峰值提前到 5min或之前。外加磁场和未加磁场的半乳糖化磁性阿霉素白蛋白纳米粒组的药物靶向指数和药物选择指数是均高于磁性白蛋白纳米粒。结论　磁性阿霉素白蛋白纳米粒经半乳糖化后 ,可显著增强阿霉素对肝脏的靶向性 ,并显著降低心、肺、脾、肾、血浆肝外器官的组织阿霉素浓度。利用外加磁场 ,可提高阿霉素在肝脏特定部位蓄积的能力。