三种细胞外基质蛋白对大鼠小胶质细胞活化的影响

目的:细胞外基质蛋白是整合素重要的配体,通过信号转导系统可影响细胞的形状、代谢、功能、迁移、增殖和分化.细胞外基质蛋白是否参与小胶质细胞的活化过程,是否参与小胶质细胞调控表达整合素而进一步参与一些疾病的进展,目前尚不清楚.实验拟观察纤维结合蛋白、玻璃体结合蛋白和层黏连蛋白3种细胞外基质蛋白对大鼠小胶质细胞整合素表达的影响.方法:实验于2006-05/2007-08在华中科技大学同济医学院临床神经研究中心完成.①实验材料:新生Wistar大鼠由同济医学院实验动物中心提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.②实验方法:体外分离培养和纯化大鼠小胶质细胞,应用纤维结合蛋白、玻璃体结合蛋白和层黏连蛋白包被培养板,以未加任何细胞外基质成分的为对照.③实验评估:采用流式细胞术检测3种细胞外基质蛋白对小胶质细胞MHCⅠ类分子的表达和整合素表达的影响.结果:①相对于对照组,添加纤维结合蛋白和玻璃体结合蛋白的培养基使小胶质细胞MHCⅠ类分子表达明显增加(P < 0.001),添加层黏连蛋白的培养基使小胶质细胞MHCⅠ类分子表达明显下降(P < 0.05).②相对于对照组,添加纤维结合蛋白的培养基可以上调小胶质细胞α4亚基的表达、α5亚基和Mac-1整合素(即αMβ2)表达(P均 < 0.005),添加玻璃体结合蛋白的培养基同样可上调α4亚基表达、α5亚基和Mac-1表达(P < 0.05,P < 0.005).层黏连蛋白对α4亚基,α5亚基和Mac-1整合素表达无影响,但可以上调小胶质细胞表达αⅤ亚基(P < 0.005),纤维结合蛋白和玻璃体结合蛋白对αⅤ亚基表达无影响.纤维结合蛋白、层黏连蛋白和玻璃体结合蛋白可小胶质细胞LFA-1(即αLβ2)表达增加(P < 0.001,P < 0.005),α6亚基表达下调(P < 0.005).结论:细胞外基质成分纤维结合蛋白和玻璃体结合蛋白可促进小胶质细胞的活化,使小胶质细胞α4β1和α5β1和Mac-1的表达增加.层黏连蛋白不能促进小胶质细胞的活化.     

对海风藤酮治疗实验性缺血再灌注脑损伤的磁共振波谱分析

目的 探讨血小板活化因子(platelet activiting factor，PAF)受体拮抗剂海风藤酮对活体实验性脑梗死大鼠脑组织氮-乙酰天门冬氨酸(NAA)及乳酸(Lactic Acid，Lac)等代谢产物的影响。方法 建立活体动物大脑中动脉栓塞再灌模型，采用磁共振波谱技术，分别对缺血再灌注组及海风藤酮、银杏苦内酯治疗组鼠脑组织NAA及Lac等代谢产物变化进行观察和比较。结果 在缺血60min再灌注1h、3h、6h海风藤酮均能有效减少脑缺血后Lac／(PCr Cr)比值的上升和NAA／(PCr Cr)比值的下降，与银杏苦内酯治疗组比较无差异。结论 海风藤酮与传统的PAF受体挂号抗剂银杏苦内酯均具有显著的缺血后脑保护作用。     

补肾益心片对男性高血压病患者勃起功能障碍的临床观察

目的：补肾益心片对男性高血压病患者勃起功能障碍的临床疗效观察及作用机理。方法：按照随机对照盲法的原则，将54例男性高血压病ED患者按2：1随机分成治疗组和对照组。两组都参照HOT研究方案进行基础降压治疗，治疗组加用补肾益心片，观察8周后的临床疗效，并测定T、PRL、E2，同时观察患者的不良反应。结果：治疗后治疗组与对照组血压均明显下降，治疗组明显改善勃起功能指数和每月性交次数，而对照组无改善甚至有所降低（P〈0．01或P〈0．05）；治疗组能明显改善临床症状，其在改善临床症状的总有效率是91．66％，优于对照组的55．56％（P〈0.01）；另外治疗组的内分泌各项指标在治疗后均有改善，但只有E2具有统计学意义。结论：补肾益心片可以改善男性高血压病患者勃起功能障碍，疗效确切，其机理可能是通过调节内分泌、提高神经介质的传递功能、干预动脉粥样硬化、改善血管内皮功能、改善症状、提高生活质量等实现其临床疗效的。     

神经病学PBL教学质量评估问卷的设计及信度、效度分析

目的　编制神经病学课程PBL教学质量评估问卷,并进行信度、效度检验。方法　参考文献报道的评价体系框架,针对神经病学课程特点,设计PBL教学质量评估问卷。以参与神经病学课程PBL的临床医学生为对象,实施问卷调查;检验问卷重测信度与内部一致性信度;使用相关分析和探索性因子分析来评估问卷效度。结果　编制的神经病学课程PBL教学质量评估问卷包含“教案质量评估”“教学方式评估”“教学质量评估”3个一级指标,共包含6个二级指标、25个三级指标。问卷相关系数ρ=0.990（P<0.01）,表明重测信度良好;克龙巴赫?琢系数为0.901,达到内部一致性信度要求;内容效度相关系数为0.307~0.7（P<0.05）,表明每个三级指标均与总分项有显著相关性,问卷项设计良好;使用3个一级指标做公因子进行探索性因子分析,评估结构效度且提示问卷优化方向。结论　该问卷具有良好的信度和效度,可作为科学评价神经病学PBL教学效果的工具,也为未来进一步研究提供了优化方向。     

新型隐球菌颅内感染的临床表现及其抗原检测的临床应用

目的 探讨新型隐球菌性颅内感染的临床特点、脑脊液的相关检查和隐球菌抗原胶乳凝集系统检测的临床应用。方法应用临床病例分析统计方法，对本院78例确诊的新型隐球菌脑膜炎或脑炎患者的发病规律、临床特点和脑脊液检查进行归纳、分析，并进行脑脊液隐球菌抗原胶乳凝集系统的检测。结果78例患者中有69例（88．5％）为亚急性或慢性起病，9例（11．5％）为急性起病，64．1％以上的患者有头痛、发热；第1次腰穿隐球菌抗原胶乳凝集检查阳性者为97．4％。结论新型隐球菌颅内感染起病形式各异，临床表现、脑脊液常规、生化检查及头颅影像学检查均缺乏特异性；隐球菌抗原胶乳凝集对早期诊断新型隐球菌颅内感染有重要价值。     

CADASIL伴脑出血的临床和基因分析:3例报告

目的:评估常染色体显性遗传性皮质下梗死和白质脑病(CADASIL)伴脑出血(ICH)的临床表现、影像学和基因特征。方法:CADASIL伴ICH患者3例,在Pubmed数据库纳入另外25例有详细资料的患者,评估出血性CADASIL的临床表现、影像学特征和基因突变特点。结果:共纳入患者28例,男19例、女9例,平均年龄(54.2±13.4)岁。高血压病是最常见的危险因素(18例,64.3%),50%的患者曾接受抗栓治疗。10例患者以ICH为首发表现,最常见的出血部位是基底节和脑叶。11号外显子R544C位点是最常见的突变位点(46.2%)。18例患者(64.3%)发现数量不等的微出血灶。结论:CADASIL可发生ICH且可能是首发临床表现。严格控制高血压和谨慎使用抗血栓药可能有助于防止CADASIL患者发生ICH。     

Intraclot recombinant tissue-type plasminogen activator reduces perihematomal edema and mortality in patients with spontaneous intracerebral hemorrhage

The study aimed to investigate the impact of intraclot recombinant tissue-type plasminogen activator （rt-PA） on perihematomal edema （PHE） development in patients with intracerebral hemorrhage （ICH） treated with minimally invasive surgery （MIS） and the effects of intraclot rt-PA on the 30-day survival. We reviewed the medical records of ICH patients undergoing MIS between October 2011 and July 2013. A volumetric analysis was done to assess the change in PHE and ICH volumes at pre-MIS （T1）, post-MIS （T2） and day 10-16 （T3） following diagnostic computed tomographic scans （To）. Forty-three patients aged 52.8±11.1 years with （n=30） or without rt-PA （n=13） were enrolled from our institutional ICH database. The median rt-PA dose was 1.5 （1） mg, with a maximum dose of 4.0 mg. The ratio of clot evacuation was significantly increased by intraclot rt-PA as compared with controls （77.9%±20.4% vs. 64%±15%; P=0.046）. From TI to T2, reduction in PHE volume was strongly associ- ated with the percentage of clot evacuation （p=0.34; P=-0.027）. In addition, PHE volume was positively correlated with residual ICH volume at the same day （p ranging from 0.39-0.56, P〈0.01）. There was no correlation between the cumulative dose of rt-PA and early （T2） PHE volume （p=0.24; P=0.12） or de- layed （T3） PHE volume （p=0.19; P=0.16）. The 30-day mortality was zero in this cohort. In the selected cohort of ICH patients treated with MIS, intraclot rt-PA accelerated clot removal and had no effects on PHE formation. MIS aspiration and low dose of rt-PA seemed to be feasible to reduce the 30-day mor- tality in patients with severe ICH. A large, randomized study addressing dose titration and long-term outcome is needed.     

慢病毒载体靶向沉默原代大鼠海马神经元黏着斑激酶表达siRNA的筛选

目的制备针对黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)的siRNA慢病毒载体,转染入原代培养的大鼠海马神经元细胞,筛选最佳的感染条件和沉默靶点序列。方法根据siRNA原理设计、构建、酶切、转化、PCR鉴定、阳性克隆测序并病毒包装3种靶向大鼠FAK的siRNA(T1,T2,T3),并转染至原代培养的大鼠海马神经元细胞,荧光显微镜观察转染效率,实时荧光定量PCR检测神经元细胞FAK基因表达,Western blot检测FAK蛋白表达。结果成功制备3种FAK siRNA慢病毒载体,并成功转染到神经元细胞中,在感染复数(MOI)为10并加入5μg/mL polybrene条件下转染率达到90%以上。T1、T2、T3均可抑制FAK基因及蛋白的表达,但T1沉默效果最好,敲除效率达到65%,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论筛选出最佳的转染条件及最佳沉默靶向性序列T1,为后续研究整合素在阿尔茨海默病发病中的机制奠定了实验基础。     

Effect of second-generation antiepileptic drugs on diplopia: A meta-analysis of placebo-controlled studies

Different antiepileptic drugs(AEDs) may cause similar adverse effects,one of which is diplopia.However,the AEDs causing diplopia and the dose-response effect of each drug remains uncertain.In this study,we compared several second-generation AEDs to find out whether they would contribute to the risk of diplopia and their effect-causing dose.A meta-analysis was performed on 19 studies in agreement with our inclusion criteria.The results showed that eight commonly used second-generation AEDs(gabapentin,levetiracetam,oxcarbazepine,lamotrigine,pregabalin,topiramate,vigabatrin and zonisamide) could cause diplopia.The reported odds ratios(ORs) ranged from 1.406 to 7.996.Ranking risks from the highest to the lowest ORs of the eight AEDs of any dose resulted in the following order:use of oxcarbazepine(7.996),levetiracetam(7.472),lamotrigine(5.258),vigabatrin(3.562),pregabalin(3.048),topiramate(2.660),gabapentin(1.966),zonisamide(1.406).Taking into account the ORs above,we can conclude that second-generation AEDs of any dose may cause diplopia.However,the levetiracetam-caused diplopia needs to be further studied according to the data(OR,7.472;95% confidence interval,0.375-148.772).These findings ask for better concerns about patients’ quality of life when giving antiepileptic treatments.     

灯盏花素对大鼠脑缺血后细胞间粘附分子-1及其mRNA表达的影响

目的:灯盏花素对大鼠脑缺血后细胞间粘附分子-1(ICAM-1)及其mRNA表达的影响。方法:复制大鼠大脑中动脉闭塞/再灌注模型,应用RT-PCR及免疫组织化学的方法,观察各组大鼠脑缺血后细胞间粘附分子-1 mRNA及其蛋白的表达。结果:ICAM-1在假手术组大鼠脑组织呈低表达;单纯缺血组(缺血90 min)ICAM-1表达上调(P＜0.05);缺血再灌注组(缺血90 min再灌24 h)脑组织ICAM-1表达显著高于假手术组和单纯缺血组(P＜0.01);灯盏花素治疗组于相同时限ICAM-1表达与单纯缺血、缺血再灌注组相比显著下调(P＜0.01)。大鼠脑组织ICAM-1 mRNA在假手术组呈低表达;单纯缺血组ICAM-1 mRNA水平显著上调(P＜0.01);药物治疗组于相同时限ICAM-1 mRNA水平显著低于单纯缺血组及缺血再灌注组(P＜0.01)。结论:灯盏花素下调细胞间粘附分子-1mRNA及其蛋白的表达,减轻缺血后再灌注损伤,从而发挥脑保护作用。