BAG-1基因与肿瘤

BAG 1基因是BAG基因家族的重要成员 ,于 1995年发现[1] ,可以通过其功能域与多种信号因子 (如Bcl 2 ,热休克蛋白Hsp70和Hsc70 ,RAF 1激酶等 )相互作用 ,目前已成为生命科学领域的研究热点。因此 ,深入研究BAG 1基因结构、功能及其分子调控机制 ,对揭示细胞生长调控机理及肿瘤发     

干细胞培养物表面滴注对豚鼠皮肤重度缺损的修复作用

背景：干细胞是动物和人的一种特殊功能的细胞，存在于多种组织之中，其大部分分化成各种特定组织器官，一部分保持干细胞状态，以备组织修复之用。有研究将间充质干细胞移植于烧伤创面，用以诱导皮肤干细胞的增生和活化，以达到治疗烧伤的目的。目的：观察采用体外培养干细胞培养液滴注于豚鼠皮肤重度缺损局部对创面愈合时间及愈合情况的影响。设计：随机分组，空白对照实验。单位：吉林大学公共卫生学院毒理学教研室。材料：成年健康豚鼠14只，体质量300～350g，雌雄不限。方法：实验于2003-03／09在吉林大学公共卫生学院毒理学教研室实验室完成。取10豚鼠，经颈部放血处死，提取骨髓，经过培养制成单细胞悬液备用。将14只豚鼠制成两侧重度皮肤损伤模型。随机选取10只豚鼠，其中一侧滴加干细胞培养物（干细胞组），而另一侧滴加培养液（培养液组）；剩余4只动物不做任何治疗，作为空白对照组。3d后，每两天用透明有机玻璃置创面上方，描画其形状，观察创面情况，并将其图形复制到透明玻璃纸上，在直角坐标纸上精确查出创面面积，计算创面愈合速度。主要观察指标：大体观察各组豚鼠创面愈合情况及平均愈合时间和速度。结果：14只豚鼠均进入结果分析。①各组豚鼠创面愈合情况：3d时，干细胞组创面干燥，无明显渗出，在创面底部有一层膜状物质，与纱布粘贴比较牢固，敷料不易脱离；培养液组创面情况与干细胞组基本一致，但无膜状物质形成，敷料易脱离；空白对照组动物创面炎症明显。②各组豚鼠创面愈合时间：干细胞组明显少于培养液组和空白对照组[（12．45&;#177;2．18）d比（26．29&;#177;1．38）d和〉30d，P〈0．05]。③各组豚鼠创面愈合速度：干细胞组明显快于培养液组和空白对照组[（40．42&;#177;2．14）mm^2／d比（15．53&;#177;5．22）mm^2／d和（10．27&;#177;4．57）mm^2／d．P〈0．051。结论：利用同种异体动物干细胞培养物进行皮肤表面滴注修复其损伤创面，干细胞能够在创面上生长，并向皮肤细胞转化，促进创面皮肤修复，用于皮肤重度缺损治疗是可行的。     

间充质干细胞对辐射诱发胸腺瘤β-catenin和c-myc基因影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)对辐射诱发胸腺瘤过程中β-catenin和c-myc mRNA表达影响,为阐明MSCs在肿瘤发生发展中作用提供理论依据。方法全骨髓贴壁培养C57BL/6小鼠MSCs,X射线照射C57BL/6小鼠建立胸腺淋巴瘤模型,将小鼠随机分成对照组、辐射组及MSCs组,每组6只;逆转录-聚合酶链反应技术检测各组小鼠胸腺β-catenin和c-myc mRNA表达。结果辐射组小鼠胸腺瘤β-catenin mRNA表达量(0.92±0.23)明显高于对照组(0.64±0.21)(P<0.05),MSCs组β-catenin mRNA表达量(0.77±0.24)下降;与对照组(1.48±0.34)比较,辐射组c-myc mRNA表达量(1.61±0.37)上调,MSCs组c-myc mRNA表达量(1.18±0.34)明显低于辐射组(P<0.05)。结论 MSCs可通过抑制β-catenin和c-myc基因异常表达,抑制肿瘤的增殖。     

胞二磷胆碱对帕金森病模型中多巴胺能神经元的保护作用

目的 探讨胞二磷胆碱（citicoline,CC）对6-OHDA诱导的帕金森病体外细胞模型的神经保护作用机制.方法 MTT法检测细胞活力;采用Fluo3/AM通过流式细胞仪检测细胞内[Ca^2＋]i,采用罗丹明123检测线粒体膜电位（△ψm）.结果 2、1和0.1 mmol/L浓度的胞二磷胆碱,细胞活力与对照组比较明显增高（P＜0.01）,0.1 mmol/L组（P＜0.05）;1、0.1、0.01和0.001 mmol/L胞二磷胆碱能对抗由6-OHDA引起的多巴胺能神经元的损害,细胞活力高于6-OHDA组（P＜0.01）;胞二磷胆碱能对抗6-OHDA造成的细胞内[Ca^2＋]i增高及△ψm的下降（P＜0.01）;1 mmol/L胞二磷胆碱＋6-OHDA组△ψm高于对照组（P＜0.01）.结论 胞二磷胆碱通过保护神经元细胞膜,降低细胞内[Ca^2＋]i,提高线粒体膜电位,增强细胞活力,发挥其对多巴胺能神经元的保护作用.     

人血管内皮细胞生长因子基因体外转染皮肤成纤维细胞后的表达效应

目的:观察外源性人血管内皮细胞生长因子基因导入正常真皮成纤维细胞后,能否表达及分泌血管内皮细胞生长因子,为进一步构建转VEGF165基因组织工程皮肤在创伤修复中的应用提供新移植物。方法:实验于2001-06/2005-06在长春吉林大学完成。①真核表达载体pcDNA3.0-hVEGF165的扩增、纯化和鉴定过程为大肠杆菌DH5a感受态细胞的制备→pcDNA3.0-hVEGF165质粒DNA细菌转化→pcDNA3.0-hVEGF165质粒大量制备(碱裂解法)→质粒纯化→质粒含量纯度测定。提取的质粒载体用EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切,琼脂糖凝胶电泳鉴定。②选取清洁级新生日本大耳白兔2只,无菌条件下取新生兔皮肤,尽量去除皮下组织,切成宽0.3cm小条块,Ⅰ型胶原酶消化,进行真皮成纤维细胞的分离与培养。脂质体介导真核表达质粒pcDNA3.0-hVEGF165转染体外培养的兔皮肤成纤维细胞,经G418筛选,获得阳性转染细胞克隆,并进行传代扩增。③酶联免疫吸附法检测转染后不同时间段的血管内皮细胞生长因子蛋白表达水平;原位杂交显示转基因细胞内VEGF165mRNA的表达情况;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况;透射电子显微镜观察转染后真皮成纤维细胞的超微结构。结果:①质粒酶切鉴定结果:提取的质粒经双酶切、琼脂糖凝胶电泳鉴定后可得到5.4kb和0.57kb两个片段,与原质粒图谱符合,表明所提取的质粒为重组质粒pcDNA3.0-VEGF165。②pcDNA3-hVEGF165基因转染真皮成纤维细胞情况:共进行15次转染试验,35孔(皿)均有G418抗性集落形成,表明pcDNA3.0-hVEGF165经脂质体介导可有效转染正常皮肤成纤维细胞。③血管内皮细胞生长因子蛋白的表达:pcDNA3.0-hVEGF165转染成纤维细胞后,24h即有较高水平的血管内皮细胞生长因子蛋白表达,高达(3280±2054)ng/L,并于48,72h呈下降趋势。④血管内皮细胞生长因子cDNA原位杂交检测结果:转染后成纤维细胞可见散在的阳性细胞表达hVEGFmRNA。G418应用2～4周后,可成功筛选出转基因成纤维细胞克隆,筛选后可见大量阳性的转染细胞表达hVEGFmRNA。⑤成纤维细胞的细胞周期分布及凋亡检测:转染后成纤维细胞S期细胞比例增加,G1和G2期细胞减少,表明细胞DNA的合成以及细胞的增殖活动加强。但细胞凋亡率逐渐升高,转染前为1.26%,转染后2d为2.64%,至12代时高达17.35%。⑥转染后成纤维细胞超微结构观察:细胞表面有较多微绒毛,核呈不规则形,胞质内可见较多的粗面内质网、线粒体,沿膜可见一些膜包被颗粒。结论:真核表达质粒pcDNA3.0-hVEGF165成功导入家兔皮肤成纤维细胞,在短时期内可高水平地表达分泌血管内皮细胞生长因子,在治疗缺血性疾病和促进创伤修复及以其作为种子细胞构建转基因组织工程皮肤治疗皮肤缺损等方面显示出较好的应用前景。     

p53基因单核苷酸多态性与肺癌易感性

目的 p53基因是与多种肿瘤发生、发展密切相关的抑癌基因，其单核苷酸多态性与肺癌的早期诊断和放射治疗疗效密切相关。检测p53基因多态性将对肺癌患者的放疗疗效及预后提供指导意义。本文简要综述p53基因单核苷酸多肽性与肺癌及与其组织学类型和种族的关系。     

替代激活巨噬细胞及其免疫调节作用

巨噬细胞(macmphage,Mφ)是免疫系统中最具多向性功能的细胞,具有多种生物学功能,包括噬菌、杀菌、促炎或抗炎作用等。另外,Mφ还可通过分泌细胞因子、共刺激分子和抗原提呈等途径发挥特异性和非特异性免疫调节功能。多年来,人们已经认识到微生物抗原和效应 T 细胞(如辅助性 T 细胞1型、2型、3型和调节性 T 细胞等)及其分泌产物可以影响 Mφ的表型和异质性。近年,不同 Mφ亚型已被证实,最具特征性的 Mφ是经典激活 Mφ(classically activatedmacrophages,caMφ),可在辅助性 T 细胞1型(Th1)分泌因子(γ-干扰素和肿瘤坏死因子)环境中被细菌脂多糖     

电离辐射联合自噬和凋亡抑制剂或诱导剂对MCF7细胞的影响

Objective To detect the inhibiting effects of ionizing radiation combined with inhibitors or inducer of autophagy and apoptosis on MCF7 cell line,and to provide the evidence for human breast cancer therapy radiation.Methods MCF7 cells were exposed to X-rays and randomly divided into 4 groups,including 0 Gy,4 Gy,4 Gy+rapamycin,4 Gy+3-MA,and 4 Gy+z-VAD-fmk groups,including 0 Gy,4 Gy,4 Gy+rapamycin,4 Gy+3-MA,and 4 Gy+z-VAD-fmk groups,respectively.The growth doubling time was calculated by MTT method.The specific protein expressions of LC3 autophagy and beclinl were detected by using Western blot and the difference of Drotein contents was LC3 autophagy and beclinl were detected by using Western blot and the difference of Drotein contents was compared.The percentage of apoptosis of MCF7 cells was measured by flow cytometry (FCM).Resuits The growth doubling time of MCF7 cells in 4 Gy group wag longer than that in O Gy group(t=4.41,P相似文献   

Taurolidine 联合X射线对小鼠恶性黑色素瘤细胞周期进程的影响

目的：观察taurolidine联合X射线照射对小鼠恶性黑色素瘤（B16-4A5和B16-F10）细胞周期进程的影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的发生机制。方法：选择B16-4A5和B16-F10细胞系按给药浓度随机分为4组,taurolidine剂量分别为0、25、50和100  μmol.L^-1,同时进行1、2和4 Gy X射线照射,采用流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,Western blotting分析cyclin B、cdc2和caspase-3的表达。结果：与25  μmol.L^-1 taurolidine组比较, 50和100  μmol?L-1 taurolidine组诱导B16-4A5和B16-F10细胞发生_G0/_G1期阻滞,细胞数分别升高54.9%、73.7%和36.8%、55.5%（P＜0.05）; 50  μmol.L^-1 taurolidine联合2和4 Gy X射线照射组,细胞G2/M期阻滞消除,细胞数分别降低52.1%、44.2%和59.3%、52.7%（P＜0.05）。与对照组、单纯taurolidine组及单纯照射组比较,联合4 Gy X射线照射组cyclin B和cdc2的表达降低,caspase-3的表达升高（P＜0.05）。结论：taurolidine联合X射线照射可去除G2/M期阻滞,可选择地抑制肿瘤细胞cyclin B和cdc2的表达、增强caspase-3的表达,共同诱导细胞凋亡。     

辐射诱导表达载体pshuttle-Egr1-shTRAIL对肝癌SMMC7721细胞生长的抑制作用

目的：研究携带可溶性人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(shTRAIL)基因的辐射诱导表达载体pshuttle-Egr1-shTRAIL在人肝癌细胞株中的表达及其促凋亡作用。方法：体外通过脂质体转染SMMC7721细胞。转染细胞分别接受0(假照组)、2、5和10 Gy X线照射,ELISA法检测sTRAIL的表达;细胞分为正常SMMC7721组,分别接受0(假照组)、2和5 Gy X线照射的转染空质粒pshuttle-Egr1组及转染重组质粒pshutlle-Eyr1-shTRAIL组,采用AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率;分别取SMMC772细胞、转染STRAIL细胞、转染空载体及照射组细胞,采用克隆形成实验检测细胞存活率。结果：不同剂量X射线照射SMMC7721-shTRAIL细胞上清中可溶性TRAIL表达量明显高于假照组（P< 0.001）;与假照组比较,照射转染后SMMC7721细胞的凋亡细胞百分数明显增加（P<0.05或P<0.001）,细胞存活率明显下降（P<0.05
或P<0.001）。结论：pshuttle-Egr1-shTRAIL