BMSCs移植对辐射诱发小鼠胸腺瘤VEGF mRNA水平的影响

目的观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对电离辐射诱发的小鼠胸腺瘤血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,为探讨BMSCs在辐射致癌中的作用奠定基础。方法采用X射线照射C57BL/6小鼠建立胸腺淋巴瘤模型,HE染色观察胸腺组织的病理变化,并判断成瘤情况。将C57BL/6小鼠随机分成正常对照组、照射组及照射+MSCs组。6个月后取胸腺组织,提取总RNA、合成cDNA,采用RT-PCR对VEGF基因mRNA进行检测。结果 C57BL/6小鼠经照射后,胸腺组织皮质和髓质分界不清,淋巴样肿瘤细胞弥漫分布,侵犯周围的脂肪组织,形成多泡型。胸腺瘤VEGF基因mRNA表达水平(1.3280±0.2385)高于正常胸腺组织(0.8263±0.3844)和BMSCs输注组(0.8931±0.2268),差异有统计学意义(P﹤0.05)。结论成功建立辐射诱发的小鼠胸腺瘤模型;VEGF基因与辐射诱发小鼠胸腺瘤密切相关,输注的MSCs可下调VEGF基因的表达,降低胸腺瘤的成瘤率。     

多氯联苯对大鼠间充质干细胞c-myc和-βcatenin表达的影响

目的探讨多氯联苯(polychlorinated biphenyls,PCBs)对大鼠间充质干细胞((mesenchy-mal cells,MSCs)功能的影响,为深入研究环境激素对MSCs功能的影响提供依据。方法实验分为对照组、低剂量组(10-7mol/L PCB126)和高剂量组(10-6mol/L PCB126)共3个组。PCB126作用MSCs不同时间后,采用MTT方法检测细胞增殖率,免疫荧光化学方法评价细胞c-myc和-βcatenin的表达,RT-PCR分析c-myc和-βcatenin mRNA的表达,Western blot分析细胞c-myc和-βcatenin蛋白的表达。结果随着PCB126作用时间的延长,细胞增殖率显著增加(P<0.01)。低剂量组12 h时,c-myc和-βcatenin的阳性率分别为50.0%、51.3%,24 h的阳性率分别为67.8%、73.3%;高剂量组12 h时,c-myc和-βcatenin的阳性率分别为54.6%5、1.8%,24 h的阳性率分别为73.0%、74.9%,与对照组(10.0%、16.7%)相比差异有显著性(P<0.01);2个剂量组c-myc和-βcateninmRNA表达丰度在多数时间明显高于对照组(P<0.01);高剂量组24 h时,-βcatenin蛋白表达显著上调(P<0.01);在相同时间,高剂量组-βcatenin蛋白表达水平高于低剂量组(P<0.01)。结论 PCB126影响MSCs生物学功能。     

辐射诱发胸腺淋巴瘤c-mye基因启动子甲基化检测

目的 研究辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤c-mcy基因启动子CpG岛甲基化状态和mPNA表达的变化.方法 X射线照射BALB/c小鼠建立胸腺淋巴瘤模型,采用硫化测序PCR(bisulfite sequencing PCR,BCP)法和逆转录--聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测c-myc基因启动子CpG岛甲基化状态和mRNA的表达.结果 辐射诱发胸腺淋巴瘤c-myc基因启动子CpG岛与正常胸腺组织比较呈去甲基化状态,RT-PCR检测结果显示,胸腺淋巴瘤c-myc基因mPNA相对表达量(1.12±0.99)明显高于正常胸腺组织(0.89±0.08),2组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 c-myc基因启动子去甲基化可能与辐射诱发胸腺淋巴瘤密切有关.     

RNA干扰STIM1基因表达抑制宫颈癌细胞增殖侵袭及Wnt/β-catenin信号通路的机制研究

目的探讨抑制宫颈癌基质相互作用蛋白分子1(STIM1)基因表达对癌细胞增殖侵袭及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法人宫颈鳞癌siha细胞分为空白对照组、阴性对照组和STIM1-siRNA组,通过RT-PCR及WesteRnbloting检测STIM1的siRNA转染细胞48h的效果;CCK8法于转染的24h、48h和72h检测各组细胞的活力;TRanswell小室检测转染48h的各组细胞的侵袭能力;WesteRnbloting检测增殖蛋白细胞增殖核抗原(PCNA)、侵袭蛋白基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及Wnt/β-catenin信号通路的β-连环蛋白(β-catenin)和c-myc的蛋白表达。结果TIM1-siRNA组STIM1的mRNA及蛋白相对表达量均显著低于空白对照组(P<0.05),而空白对照组和阴性对照组间STIM1的mRNA及蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);STIM1-siRNA转染细胞24h的细胞活力无明显变化,转染48h和72h后的细胞活力均显著低于空白对照组(P<0.05);与空白对照组比较,STIM1-siRNA组细胞侵袭能力显著降低,PCNA、MMP-2、β-catenin、c-myc的蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论抑制宫颈癌细胞STIM1基因表达可通过下调Wnt/β-catenin信号通路降低癌细胞的增殖及侵袭能力。     

二噁英诱导胎鼠腭裂组织中TGF-β3表达变化

目的 探讨转化生长因子( TGF-β3)在2,3,7,8-四氯二噁英(TCDD)诱导C 57 BL/6 J胎鼠腭裂发生中的作用.方法 在小鼠怀孕第10 d(GD 10),二噁英组以TCDD 64 μg/kg灌胃,对照组以玉米油16 mL/kg灌胃,于GD 18.5解剖显微镜下观察胎鼠腭裂发生率,并于GD 13.5、14.5、15.5剪取胎鼠腭突组织提取RNA及蛋白,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和western blot分别检测腭突组织中TGF-β 3 mRNA和TGF-β 3蛋白表达情况.结果 二噁英组腭裂发生率为100% (39/39),对照组无腭裂发生(0/42);在GD 13.5、14.5、15.5时,二噁英组TGF-β 3 mRNA相对表达量分别为(0.392±0.056)、(0.467±0.064)、(0.192±0.032),明显高于对照组(0.081±0.020)、(0.178±0.011)、(0.113±0.016)(P＜0.05);二噁英组TGF-β 3蛋白相对表达量分别为(0.046±0.009)、(0.089±0.015)、(0.028±0.003),明显高于对照组(0.017±0.001)、(0.039±0.003)、(0.005±0.001) (P ＜0.05).结论 TCDD可诱导C 57 BL/6 J胎鼠形成腭裂,并明显上调胎鼠腭突组织中TGF-β3表达.     

2,3,7,8-四氯二苯二■英诱导胎鼠腭裂过程中转化生长因子β受体基因表达变化

目的 探讨转化生长因子β受体(TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ及TβR-Ⅲ)基因变化与2,3,7,8-四氯二苯二■恶(TCDD)所致胎鼠腭发育障碍的相关性。方法 将24只C57BL/6 J孕鼠随机分为TCDD组和对照组,每组再根据怀孕时间分成3个亚组,每组4只孕鼠。在妊娠第10日(GD10)一次性分别灌胃20μg/kg TCDD(TCDD组)和等量玉米油(对照组)。在GD13、GD14和GD15分别剖腹取各组胎鼠腭组织,提取总RNA,逆转录成cDNA,利用q-PCR技术检测各组胎鼠腭组织中TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ及TβR-Ⅲ mRNA表达变化。结果 对照组TβR-Ⅰ mRNA相对表达量在GD13、GD14和GD15分别为(2.06±0.21)、(1.38±0.12)和(0.78±0.17);TCDD组分别为(0.98±0.26)、(0.75±0.14)和(1.22±0.05)。对照组TβR-Ⅱ mRNA相对表达量在GD13～GD15分别为(1.84±0.08)、(1.14±0.09)、(0.81±0.13);TCDD组分别为(0.91±0.22)、(0.96±0.06)、(1.30±0.13)。TβR-Ⅲ mRNA在对照组的相对表达量分别为(1.86±0.10)、(1.11±0.11)、(0.67±0.15);TCDD组分别为(0.85±0.05)、(0.93±0.09)、(1.17±0.16)。TCDD组的TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ及TβR-Ⅲ mRNA在GD13和GD14相对表达量均低于对照组(P0.05);而在GD15,TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ及TβR-Ⅲ mRNA高于对照组(P0.05)。结论 TCDD诱导的胎鼠在腭发育关键时期GD13与GD14,TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ及TβR-Ⅲ mRNA的低表达很可能参与了TCDD诱发胎鼠腭部融合障碍的过程。     

叶酸对AD模型小鼠脑内Aβ沉积及BACE1表达影响

目的探讨叶酸对阿尔茨海默病(AD)小鼠脑内β–淀粉样蛋白(Aβ)沉积影响及机制。方法将6月龄雄性APP/PS1模型小鼠随机分为4组:叶酸缺乏组、叶酸对照组、叶酸低、高剂量组(120、600μg/kg);同月龄野生型小鼠作为阴性对照组。叶酸缺乏组小鼠饲以叶酸缺乏饲料,其他各组饲以普通饲料,干预60 d。采用实时荧光定量PCR法(RT-PCR)检测β位淀粉样前体裂解酶–1(BACE1)mRNA水平;免疫印迹法(WB)检测脑组织BACE1蛋白表达;免疫组化法检测脑组织Aβ表达;酶联免疫吸附法检测脑组织中和含量。结果与叶酸对照组比较,叶酸高剂量组小鼠脑组织中Aβ蛋白表达降低,叶酸缺乏组Aβ蛋白表达升高(P<0.05);与叶酸对照组(0.295±0.034)比较,叶酸高剂量组小鼠脑组织含量(0.209±0.041)降低,叶酸缺乏组含量(0.396±0.043)升高(P<0.05);与叶酸对照组(15.99±1.434)比较,叶酸缺乏组小鼠脑组织BACE1 mRNA水平(21.97±4.396)升高,叶酸低、高剂量组小鼠脑组织中BACE1 mRNA表达水平[分别为(9.932±1.903)、(10.53±2.750)]均降低(均P<0.05);与叶酸对照组(1.371±0.213)比较,叶酸缺乏组小鼠脑组织中BACE1蛋白表达水平(1.655±0.241)升高,叶酸低、高剂量组小鼠脑组织中BACE1蛋白表达水平[分别为(1.003±0.271)、(0.906±0.188)]均降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论补充叶酸可减少AD小鼠脑组织中Aβ沉积及含量,其机制可能与叶酸抑制小鼠脑组织中淀粉样蛋白生成途径的分泌酶BACE1表达有关。     

Wnt信号通路在氟中毒肾脏中表达及其意义

目的 观察Wnt/β-catenin信号通路及其相关信号分子蛋白及mRNA表达水平在实验性氟中毒大鼠肾组织中的变化,探讨氟中毒发病机制.方法 选择健康成年SD大鼠36只,雌雄各半,随机分为:对照组(饮水含氟量＜1 mg/L),低、高氟组(饮水加氟量5、50 mg/L),每组12只,观察大鼠氟斑牙发生情况,测定尿氟、骨氟含量及肾功能变化;光镜观察肾组织病理形态学变化;采用实时荧光定量PCR和免疫组化方法检测肾组织中Wnt4、β-连环蛋白(β-catenin)、E-粘钙蛋白(E-cadherin)蛋白及mRNA表达.结果 低氟组大鼠氟斑牙检出率为75％(9/12),高氟组为91.7％(11/12),与对照组比较,染氟组大鼠尿氟、骨氟含量随染氟浓度增加而逐渐升高,差异有统计学意义(P＜0.05);染氟组大鼠血清肌酐及尿素氮明显高于对照组(均P＜0.05);光镜观察染氟组大鼠肾小管上皮细胞明显水肿、渗出、坏死,细胞间界限不清,且随着染氟浓度增高,损伤加重;低、高氟组大鼠肾组织中Wnt4、β-catenin、E-cadherin蛋白表达分别为[(7.78±1.17)、(6.66±0.59)、(3.23±0.82)]和[(17.46±3.18)、(12.46±0.89)、(1.23±0.35)],mRNA表达分别为[(3.01 ±0.81)、(1.86±0.43)、(0.276±0.12)]和[(5.79±0.86)、(5.84±1.19)、(0.12±0.46)],与对照组比较,氟中毒组大鼠肾组织中Wnt4 、β-catenin蛋白和mRNA表达升高,而E-cadherin蛋白及mRNA表达降低.结论 慢性氟中毒时,氟通过刺激Wnt信号通路中Wnt4、β-catenin过表达、E-cadherin低表达,导致肾小管上皮细胞间充质转分化(EMT).     

复方芙蓉花叶提取物对烧伤后创面感染大鼠创面愈合的影响及其作用机制

目的 探讨复方芙蓉花叶提取物对烧伤后创面感染大鼠创面愈合的影响及其作用机制。方法 选取45只大鼠，10只作为空白组，其余35只建立烧伤后创面感染模型，35只建模大鼠最终有30只建模成功，将最终建模成功的30只大鼠分为模型组、药物对照组、实验组，每组各10只。药物对照组给予庆大霉素，实验组给予4 g/L复方芙蓉花叶提取物，空白组、模型组给予普通无菌纱布，连续干预10 d后观察大鼠变化。结果 与空白组比较，模型组、药物对照组、实验组创面愈合率、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6水平上升，血管内皮生长因子(VEGF)、Wnt1、β-连环蛋白(β-catenin)mRNA表达量及相对表达量下降(P<0.05);与模型组相比，药物对照组、实验组创面愈合率、VEGF水平、Wnt1、β-catenin mRNA表达量及相对表达量上升，MMP-2、MMP-9、TNF-α、IL-1β、IL-6下降(P<0.05);与药物对照组比较，实验组创面愈合率、VEGF水平、Wnt1、β-catenin mRNA表达量及...     

某营养复合物对荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响

目的了解百合、薏米、黑豆、红枣、乳清蛋白粉和螺旋藻6种营养复合物对C57BL/6荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响,为肿瘤患者营养干预提供依据。方法以24只C57BL/6雄性荷瘤小鼠为研究对象,低、中、高剂量组分别给予8、20、40 g/kgbw剂量的百合、薏米、黑豆、红枣、乳清蛋白粉和螺旋藻6种营养复合物,对照组给予0.5%CMC-Na溶液,所有小鼠连续灌胃7 d,测定小鼠增重、瘤体积、瘤重、抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数、T淋巴细胞增值能力、NK细胞杀伤率和白细胞介素-2 (IL-2)表达量等指标水平。结果各剂量组小鼠的瘤重均低于对照组(P0.05);各剂量组CD3+T淋巴细胞数均大于对照组(P0.05)。低、中、高剂量组抑瘤率分别为32.46%、45.14%和48.03%。各剂量组的OD值、NK细胞杀伤率、脾细胞IL-2表达量和T淋巴细胞亚群水平的差异呈现剂量依赖性(P0.05)。其中,中、高剂量组的胸腺指数、NK细胞杀伤率、脾细胞IL-2表达量、CD4+T淋巴细胞数和CD4+/CD8+T淋巴细胞值均大于对照组(P0.05);中、高剂量组的瘤体积和CD8+T淋巴细胞数均小于对照组(P0.05);高剂量组的OD值大于对照组(P0.05)。结论百合、薏米、黑豆、红枣、乳清蛋白粉和螺旋藻6种营养复合物可以通过调节荷瘤小鼠免疫功能发挥抗肿瘤作用。     

2,2′,4,4′-四溴联苯醚对小鼠肝脏甲状腺激素受体TRα1和TRβ1表达的影响

目的观察2,2′,4,4′-四溴联苯醚(BDE-47)暴露对小鼠肝脏甲状腺激素受体亚型TRα1、TRβ1在mRNA及蛋白水平表达的影响。方法将C57BL/6小鼠分成对照组和低、中、高三个染毒剂量组,对照组给予玉米油,染毒组分别按0.5、5和50mg/kgBW剂量给予BDE-47,连续4天腹腔注射后,以GAPDH为内参,实时荧光定量PCR(QRT-PCR)和蛋白印迹(Westernblot)测定肝脏组织甲状腺激素受体TRα1、TRβ1mRNA和蛋白表达。结果与对照组相比,中、高染毒剂量组小鼠肝脏TRα1和TRβ1mRNA表达均上调(P0.05),幅度分别为1.9、1.7和1.9、1.5倍(P0.05);三个剂量组TRα1蛋白表达均升高,TRβ1均下降。结论 BDE-47可改变小鼠肝脏TRα1、TRβ1mRNA和蛋白表达。     

2,2',4,4'-四溴联苯醚对小鼠肝脏甲状腺激素受体TRα1和TRβ1表达的影响

目的 观察2,2',4,4'-四溴联苯醚(BDE-47)暴露对小鼠肝脏甲状腺激素受体亚型TRα1、TRβ1在mRNA及蛋白水平表达的影响.方法 将C57BL/6小鼠分成对照组和低、中、高三个染毒剂量组,对照组给予玉米油,染毒组分别按0.5、5和50mg/kg BW荆量给予BDE-47,连续4天腹腔注射后,以GAPDH为内参,实时荧光定量PCR(QRT-PCR)和蛋白印迹(Western blot)测定肝脏组织甲状腺激素受体TRα1、TRβ1mRNA和蛋白表达.结果 与对照组相比,中、高染毒剂量组小鼠肝脏TRα1和TRβ1mRNA表达均上调(P<0.05),幅度分别为1.9、1.7和1.9、1.5倍(P<0.05);三个剂量组TRα1蛋白表达均升高,TRβ1均下降.结论 BDE-47可改变小鼠肝脏TRα1、TRβ1mRNA和蛋白表达.     

Wnt信号通路GSK-3β和β-catenin mRNA在胎鼠围生期脑缺血再灌注损伤中的变化

目的探讨围生期脑缺血再灌注损伤后,不同发育期胎鼠胚脑Wnt信号通路关键分子糖原合成酶激酶(GSK)-3β及β-连环蛋白(catenin) mRNA表达水平变化。 方法采用完全随机设计,将40只成功受孕的雌性SD大鼠分为实验组及对照组,每组各20只。两组分别于孕14,16,18及20 d(分别计为E14,16,18及20)时,各取5只孕鼠予相关处理：实验组钳夹双侧子宫动脉30 min,建立围生期脑缺血再灌注模型,并于再灌注24 h后留取胎鼠胚脑标本;对照组则不钳夹子宫动脉,仅在与实验组对应时间点留取胎鼠胚脑标本。采用实时定量(RT)-PCR检测胎鼠胚脑Wnt信号通路关键分子GSK-3β和β-catenin mRNA表达水平;采用尼氏染色和TUNEL标记法,检测两组胎鼠胚脑神经细胞凋亡情况。统计学比较两组胎鼠在相同发育期及同组胎鼠在不同发育期胚脑GSK-3β及β-catenin mRNA相对表达量,以及胚脑神经细胞凋亡率差异。 结果①两组胎鼠在相同发育期(E14,16,18或20)胚脑GSK-3β及β-catenin mRNA相对表达量比较,以及同组胎鼠胚脑GSK-3β或β-catenin mRNA相对表达量在不同发育期(E14,16,18及20)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。②实验组胎鼠胚脑神经细胞凋亡率,在相同发育期均较对照组高,且差异有统计学意义[(0.254±0.001) vs (0.027±0.004),t＝46.547;(0.256±0.022) vs (0.029±0.003),t＝45.917;(0.263±0.011) vs (0.029±0.002),t＝34.355;(0.265±0.031) vs (0.030±0.003),t＝91.108;均为P<0.001]。不同发育期(E14,16,18及20)同组胎鼠胚脑神经细胞凋亡率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。③胎鼠胚脑尼氏染色结果显示,实验组神经细胞的细胞质嗜碱性增强,细胞核固缩浓染。 结论Wnt信号通路和发育期宫内缺血缺氧性脑损伤的关系尚待进一步研究。     

苯对小鼠骨髓单个核细胞多药耐药基因1和P-糖蛋白表达的影响

目的 探讨苯染毒对C57BL/6小鼠骨髓单个核细胞多药耐药基因1(multidrug resistance 1,MDR1)基因和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的影响.方法 实验动物随机分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组24只,分别以单纯玉米油及25、50、100 mg/kg剂量苯灌胃染毒C57BL/6小鼠,每日1次,每周5次,连续染毒4周,染毒12、26、29 d后分批处死小鼠,检测C57BL/6小鼠外周血常规,实时定量PCR检测骨髓单个核细胞MDR1基因表达,免疫印迹法检测骨髓单个核细胞的P-gp表达.结果 染毒12d,高剂量组红细胞、血红蛋白明显低于对照组、低剂量组、中剂量组,差异有统计学意义(P＜0.01、P＜0.05).染毒26 d,高剂量组白细胞明显低于对照组、低剂量组、中剂量组,差异有统计学意义(P＜0.01、P＜0.05).各时间点各染毒组的MDR1基因mRNA表达均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01).染毒26 d,高剂量组P-gp表达低于对照组、低剂量组和中剂量组,中剂量组P-gp表达低于低剂量组,差异均有统计学意义(P＜0.01、P＜0.05);染毒29 d,各染毒组P-gp表达均低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 苯染毒干扰骨髓单个核细胞MDR1基因和P-gp表达,可能是苯血液毒性的机制之一.     

限时摄食改善AD模型小鼠大脑皮质AQP4极性分布的作用及机制探讨

目的探讨限时摄食可通过升高β羟基丁酸(βOHB)水平而抑制组蛋白去乙酰化酶(HDACs),进而调节α-互养蛋白(SNTA1)表达,改善阿尔兹海默病(AD)模型小鼠脑中水通道蛋白-4(AQP4)极性分布。方法将5月龄APPswe/PS1dE9双转基因小鼠分为AD模型组、AD禁食组,同窝出生的野生型C57/BL6小鼠分为野生对照组、野生禁食组,每组10只,雌雄各半;禁食组小鼠隔日禁食,AD模型组与野生对照组小鼠自由摄食,连续处理5月;采用免疫荧光双标法检测大脑皮质AQP4极性分布情况,qRT-PCR和Westernblotting法检测大脑皮质SNTA1、HDAC1/2mRNA及蛋白表达水平。以终浓度为1mmol/LβOHB预处理人星形胶质细胞瘤(U251)细胞,再以终浓度为2、10μmol/L的β-淀粉样蛋白(Aβ)进行处理,同时设立对照组;此外,以siRNA方法沉默U251细胞HDAC1/2基因,并设立对照组;qRT-PCR和Western blotting法检测细胞SNTA1、HDAC1/2 mRNA及蛋白表达水平。结果限时摄食可改善AD模型小鼠大脑皮质AQP4极性分布的丧失,并可抑制AD模型小鼠大脑皮质SNTA1的降低和HDAC1/2的升高(P0.01)。βOHB可抑制2、10μmol/L Aβ诱导的U251细胞SNTA1的降低和HDAC1/2的升高(P0.05或P0.01)。沉默HDAC1可上调U251细胞SNTA1mRNA和蛋白表达(P0.01),而沉默HDAC2后SNTA1表达则未见改变。结论βOHB可通过抑制HDAC1表达,介导限时摄食拮抗AD模型小鼠大脑皮质SNTA1表达的降低,从而恢复AQP4的极性分布。[营养学报,2019,41(6):580-586]     

中链脂肪酸对肥胖C57BL/6J小鼠小肠TLR4传导通路分子表达的影响

目的观察和分析中链脂肪酸(辛酸/癸酸)对高脂膳食诱导的肥胖C57BL/6J小鼠小肠中TLR4传导通路相关分子表达的影响,探讨中链脂肪酸(MCFA)降体重的机制。方法 36只高脂饲料诱导的C57BL/6J肥胖小鼠按空腹体重随机分为3组,每组12只,分别给予含2%辛酸(C8:0)、癸酸(C10:0)和油酸(C18:1)的高脂饲料喂养16周,测定小鼠体重、肝脏重、肠系膜、附睾及肾周脂肪垫重,测定血清脂代谢指标,采用ELISA法测定小肠中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)水平,采用Real-time PCR法检测小肠组织中Toll样受体-4(TLR4)、髓样细胞分化因子88(My D88)和TNF-α的mRNA表达。结果辛酸和癸酸组肥胖小鼠体重、肝脏重、附睾周脂肪重、小肠组织中TNF-α水平以及TLR4 mRNA表达均显著低于油酸组(P<0.05)。辛酸组小鼠血清胆固醇(TC)和游离脂肪酸(FFA)、小肠组织中IL-6、IL-1β水平以及My D88、TNF-αmRNA表达显著低于油酸组(P<0.05),而高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)以及HDL-C/LDL-C显著高于油酸组(P<0.05)。癸酸组血清甘油三酯(TG)和FFA水平显著低于油酸组。结论 MCFA可能通过下调小肠中TLR4传导通路相关分子水平抑制肥胖个体炎症反应,降低肥胖个体体重。     

RNA干扰β-catenin基因对二氧化硅诱导的MH-S细胞中基质金属蛋白酶表达的影响

目的观察β-catenin短发夹RNA干扰(shRNA)重组慢病毒对二氧化硅诱导的小鼠肺泡巨噬细胞系MH-S细胞中基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinases,MMP)9表达的影响。方法将MH-S细胞分为4组:空白细胞对照组(MH-S)、SiO_2诱导组(silica)、病毒干扰组(silica+LV-shβ-catenin)、病毒对照组(silica+LV-shβ-catenin-NC),除空白细胞对照组外,各组细胞均用终浓度为200μg/ml的SiO_2刺激,培养18 h后,western blot检测各组细胞β-catenin和MMP9蛋白表达水平,realtime-PCR检测各组细胞MMP9 mRNA水平。结果 SiO_2诱导后,与silica组和silica+LV-shβ-cateninNC组比较,silica+LV-shβ-catenin组β-catenin蛋白表达显著降低(P0.05);realtime-PCR和western blot检测结果显示,silica+LV-shβ-catenin组细胞中MMP9的mRNA和蛋白表达较silica组和silica+LV-shβ-catenin-NC组均显著降低(P0.05)。结论重组慢病毒LV-shβ-catenin能够有效抑制经SiO_2诱导的MH-S细胞株β-catenin蛋白表达,并对MMP9的表达有明显抑制作用。     

RAS拮抗剂调节血管平滑肌细胞增殖、凋亡因子表达

目的探讨血管紧张素转化酶抑制剂卡托普利及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体拮抗剂氯沙坦对AngⅡ诱导的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的干预作用。方法体外原代培养Wistar大鼠主动脉平滑肌细胞,收集不同AngⅡ浓度和作用时间下的细胞和卡托普利组、氯沙坦组和二者联合作用组的细胞,以逆转录(RT)-PCR检测细胞中TNF-α和TGF-β1 mRNA的表达。结果 TNF-αmRNA表达量随AngⅡ浓度和作用时间增加而增加,AngⅡ浓度为10-7、10-6、10-5、10-4 mol/L时表达量分别为(0.43±0.05)、(0.81±0.13)、(0.97±0.17)、(1.09±0.19),与对照组(0.11±0.03)比较,差异有统计学意义(P<0.05或0.01);一定浓度卡托普利(5×10-6mmol/L)、氯沙坦(5×10-6 mmol/L)可明显抑制AngⅡ这一作用;TGF-β1 mRNA表达量随AngⅡ浓度和作用时间增加而明显增加,具有浓度依赖性;在AngⅡ10-7、10-6、10-5和10-4 mol/L时,卡托普利组mRNA表达量分别为(0.19±0.03)、(0.23±0.05)、(0.38±0.14)、(0.34±0.07),较AngⅡ组分别降低了59.57%、73.26%、54.44%和66.67%,差异均有统计学意义(P<0.05或0.01),氯沙坦组分别为(0.17±0.03)、(0.39±0.11)、(0.41±0.12)和(0.39±0.08),较AngⅡ组分别下降了63.82%、54.65%、54.44%和61.76%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 AngⅡ可促进血管平滑肌细胞TNF-α、TGF-β1 mRNA表达,且有时间和浓度依赖关系;卡托普利、氯沙坦对AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞TNF-α、TGF-β1 mRNA表达均有抑制作用,二者联合作用时抑制作用最明显。     

全氟辛烷磺酸对小鼠脾细胞NO分泌水平影响

目的观察短期、高剂量全氟辛烷磺酸(PFOS)对C57BL/6雄性小鼠一氧化氮(NO)分泌水平影响。方法选择雄性C57BL/6小鼠24只,PFOS经口灌胃染毒,剂量分别为5,20,40 mg/kg。每天1次,染毒7 d后,制备脾脏淋巴细胞悬液,细胞培养48 h后收取上清液,检测NO含量。结果20,40 mg/kg PFOS染毒组小鼠体重明显下降(P0.05);20 mg/kg PFOS染毒组小鼠脾脏和胸腺指数分别为(0.36±0.04)和(0.21±0.02),明显低于对照组(P0.05)。40 mg/kg PFOS染毒组NO分泌水平为(0.66±0.14)μmol/L,明显低于对照组(P0.05)。结论高剂量PFOS暴露可降低小鼠脾淋巴细胞NO分泌水平,抑制小鼠巨噬细胞的活化。     

四物汤配方颗粒对小鼠骨髓基质细胞造血功能的影响

目的 观察四物汤配方颗粒对骨髓抑制小鼠造血功能的影响,探讨其对抑制小鼠骨髓基质细胞内转化生长因子β1(TGF-β1)和细胞信号内转导分子果蝇MAD类似基因(Smads)表达影响.方法 将50只BALB/c小鼠随机分为正常组(A组)、模型组(B组)、3个不同剂量给药组(C、D、E组).除A组外其他组小鼠经2.0 Gy60Co γ照射后的第3天进行腹腔注射环磷酰胺(CTX,50 mg/kg),连续给药3 d后完成骨髓抑制模型制备.小鼠造模后,第2天开始给药,每日每只小鼠灌胃量20 ml/kg,A、B组灌入质量分数为0.9%生理氯化钠溶液,C、D、E组分别按四物汤颗粒剂的2.5、5.0、10.0g/kg溶于蒸馏水灌胃,共给药7 d.应用IMDM培养基培养骨髓基质细胞,免疫印迹法观察各组对骨髓基质细胞TGF-β1和Smads信号通路表达的影响.结果 ①TGF-β1的表达:与A组(0.463±0.075)比较,B组骨髓基质细胞表达显著升高(1.284±0.043,P<0.05);与B组比较,C、D、E组可使TGF-β1表达降低;②Smads的表达:与A组(0.973±0.032)比较,B组骨髓基质细胞表达显著升高(2.036±0.044,P<0.05);与B组比较,C、D、E组可使Smads表达降低.结论 四物汤配方颗粒可调节TGF-β1和Smads表达,对骨髓抑制小鼠造血微环境有一定改善.