尿酸对帕金森病模型大鼠多巴胺能神经元氧化应激的影响

目的 探讨尿酸对6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导的SD大鼠帕金森病体外模型多巴胺(DA)能神经元氧化应激损伤的影响. 方法取孕12～14 d SD大鼠中脑原代细胞进行培养.实验分3组:(1)对照组:原代培养细胞;(2)6-OHDA组:原代培养细胞加6-OHDA;(3)尿酸组:不同浓度尿酸(5、50、100、250、500 μmol/L)分为5个亚组.培养第5天开始加尿酸干预,持续作用5 d,于第10天加50μmol/L的6-OHDA,作用2 h,培养第10天收集细胞.经酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞化学染色,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测细胞活力;通过流式细胞仪,用罗丹明123(Rh123)检测线粒体膜电位(△ψm). 结果对照组TH阳性(TH~+)细胞[(296.8±42.5)个/ml]较多,突起较长,部分密集成网状;6-OHDA组TH~+细胞[(92.8±19.7)个/ml]明显减少,突起较短,部分有断裂;5、50、100、250、500 μmol/L尿酸组TH~+细胞数(96.5±20.1、115.5± 30.0、152.5±26.7、205.0±48.2、230.1±22.5)个/ml,较对照组减少,但明显多于6-OHDA组,并且同尿酸浓度成正相关(F=13.94,P<0.05).与对照组比较,6-OHDA组细胞活力明显下降(F=90.19,P<0.05);5、50、100、500μmol/L尿酸组细胞活力较对照组下降(F=14.56,P<0.05),但高于6-OHDA组(F=40.96,P<0.05).250 μmol/L尿酸组细胞活力与对照组比较,差异无统计学意义(F=1.27,P>0.05).对照组△ψm(30.05±5.88)%,与6-OHDA组(23.67±2.72)比较明显下降(F=6.30,P<0.05);而尿酸各组与6-OHDA组比较,均升高;其中100、250μmol/L尿酸组△ψm(36.91±2.44)%、(38.08±2.90)%高于对照组(F=4.62,P<0.05). 结论尿酸可减少6-OHDA对神经元的毒性作用,提高细胞活力,稳定细胞膜电位,表明尿酸能通过抗氧化应激活性发挥其对多巴胺能神经元的保护作用.     

内质网应激及其相关性凋亡在多巴胺能神经元选择性变性死亡中的作用

目的探讨内质网应激反应（endoplasmic retieulum stress response，ERS）及相关凋亡途径在多巴胺能神经元变性死亡中的作用。方法6羟基多巴胺（6-OHDA）、N-甲基-4苯基吡啶离子（MPP^＋）、鱼藤酮作用于神经生长因子（NGF）诱导的PC12细胞，MTT及流式细胞仪方法检测各种药物的神经毒性作用及细胞凋亡率，应用RT-PCR和Western印迹技术观察以上药物处理后ERS通路中XBP1、Grp78、CHOP表达水平的变化及相关凋亡因子caspase-12的活化和利血平耗竭胞内多巴胺水平后的影响。结果3种神经诱变剂处理PC12细胞后，细胞活力呈浓度依赖性下降，其中6-OHDA 100μmol／L、MPP^＋ 75μmol／L、鱼藤酮20nmol／L作用24h使细胞活力分别下降52％、44％、40％。流式细胞仪显示的细胞凋亡率在8h、16h、24h内逐渐增高（P〈0．01）。RT—PCR及免疫组化检测显示处理后XBP1、Grp78表达和CHOP的基因及蛋白表达水平明显增加，分别在8h、16～24h达到高峰（P〈0．01）。caspase-12 mRNA水平也在诱导后16h显著升高（P〈0．01），利血平预处理使其基因表达减弱（P〈0．05）。结论内质网应激和相关凋亡途径是多巴胺能神经元选择性变性死亡的内在环节之一。     

Sources of calcium in agonist-induced contraction of rat distal colon smooth muscle in vitro

AIM： To study the origin of calcium necessary for agonist-induced contraction of the distal colon in rats.METHODS： The change in intracellular calcium concentration （[Ca^2＋]i） evoked by elevating external Ca^2＋ was detected by fura 2/AM fluorescence. Contractile activity was measured with a force displacement transducer. Tension was continuously monitored and recorded using a Powerlab 4/25T data acquisition system with an ML110 bridge bioelectric physiographic amplifier.RESULTS： Store depletion induced Ca^2＋ influx had an effect on [Ca^2＋]i. In nominally Ca^2＋-free medium, the sarco-endoplasmic reticulum Ca^2＋-ATPase inhibitor thapsigargin （1 μmol/L） increased [Ca^2＋]i from 68 to 241 nmol/L, and to 458 （P 〈 0.01） and 1006 nmol/L （P 〈 0.01）, respectively, when 1.5 mmol/L and 3.0 mmol/L extracellular Ca^2＋ was reintroduced. Furthermore, the change in [Ca^2＋]i was observed with verapamil （5 μmol/L）, La3＋ （1 mmol/L） or KCl （40 mmol/L） in the bathing solution. These channels were sensitive to La3＋ （P 〈 0.01）, insensitive to verapamil, and voltage independent. In isolated distal colons we found that in normal Krebs solution, contraction induced by acetylcholine （ACh） was partially inhibited by verapamil, and the inhibitory rate was 41% （P 〈 0.05）. On the other hand, in Ca^2＋-free Krebs solution, ACh induced transient contraction due to Ca^2＋ release from the intracellular stores. The transient contraction lasted until the Ca^2＋ store was depleted. Restoration of extracellular Ca^2＋ in the presence of atropine produced contraction, mainly due to Ca^2＋ influx. Such contraction was not inhibited by verapamil, but was decreased by La3＋ （50 μmol/L） from 0.96 to 0.72 g （P 〈 0.01）. CONCLUSION： The predominant source of activator Ca^2＋ for the contractile response to agonist is extracellular Ca^2＋, and intracellular Ca^2＋ has little role to play in mediating excitation-contraction coupling by agonists in rat distal colo     

胡黄连苷Ⅱ对H2O2损伤L-02细胞的保护作用

目的:探讨胡黄连苷Ⅱ(picroside Ⅱ)对氧化应激损伤L-02细胞的保护作用.方法:H2O2损伤的L-02细胞作为氧化应激损伤模型,MTT法检测细胞增殖状况,膜联蛋白(Annexin-Ⅴ)和碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡,罗丹明123染色FCM检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial potential membrane,△Ψm),双氢罗丹明123染色FCM检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量.结果:0.6 mmol/L H2O2可诱导L-02细胞凋亡.细胞内ROS浓度增加,细胞线粒体跨膜电位明显下降.预先经过0.05,0.5,5 mmol/L浓度的胡黄连苷Ⅱ处理后,H2O2诱导的L-02细胞凋亡明显减少(30.8%±9.09%,10.2%±9.82%,8.2%±7.10%vs 42.8%±8.28%,均P＜0.01),同时明显减弱H2O2对细胞内ROS浓度和线粒体跨膜电位的影响.结论:胡黄连苷Ⅱ对氧化应激损伤L-02细胞具有保护作用,其机制可能与降低细胞内ROS含量,进而抑制△Ψm的降低有关.     

羊膜上皮细胞对6-OHDA所致PC12细胞损伤的保护作用

目的 探讨羊膜上皮细胞（HAEC）对6-羟基多巴胺（6-OHDA）所致PC12细胞损伤的保护作用机制.方法 采用MTT检测、AO活体荧光素标记和流式细胞仪检测技术,观察加入终浓度分别为30、40、50 μmol/L的6-OHDA 24 h后,HAEC培养液上清对6-OHDA所致的P C 12细胞损伤的保护作用.结果 随着6-OHDA浓度的增大,PC12细胞活力逐渐降低,受损伤细胞的数量逐渐增加,终浓度为50 μmol/L的6-OHDA损害组可见细胞凋亡样改变;HAEC培养液上清可明显拮抗6-OHDA的毒性作用,使PC12细胞的存活率增加,受损伤细胞的数量降低.结论 HAEC培养液上清能拮抗6-OHDA所致的PC12 细胞损伤.     

低糖诱导的HUVEC-12细胞氧化损伤与线粒体膜电位的关系

目的 探讨低浓度葡萄糖对人脐静脉内皮细胞株HUVEC-12细胞的氧化损伤作用及其与线粒体膜电位的关系。方法 以人脐静脉内皮细胞株HUVEC-12细胞为研究对象,用5.5mmol/L及低浓度葡萄糖(2.8 mmol/L或0mmol/L)培养液培养HUVEC-12细胞4h,甲基噻唑基四唑(MTT)法测定细胞活力;超氧化物阴离子荧光探针标记测定细胞活性氧(ROS)产量;罗丹明123荧光探针标记测定线粒体膜电位(MMP)水平。结果 与5.5 mmol/L葡萄糖组(正常对照组)的细胞活力(96.80±3.20)％相比,2.8 mmoL/L葡萄糖组活动度(66.40±1.60)％与0 mmol/L葡萄糖组细胞活力(58.93±1.67)％分别低约32％、40％ (P＜0.01);5.5mmol/L葡萄糖组、2.8mmol/L葡萄糖组、0 mmol/L葡萄糖组的ROS水平分别为0.59±0.02、0.74±0.04、0.88±0.05,2.8mmoL/L葡萄糖组、0 mmoL/L葡萄糖组的ROS水平较正常对照组分别高25％和48％ (P＜0.01);5.5 mmol/L葡萄糖组、2.8 mmol/L葡萄糖组、0 mmol/L葡萄糖组的MMP水平分别为148.83±3.51、271.07±19.54、357.74±51.32,2.8 mmol/L葡萄糖组、0mmol/L葡萄糖组的MMP水平分别是正常对照组的1.8倍和2.4倍(P＜0.01)。结论 低浓度葡萄糖可以导致HUVEC-12细胞损伤,这种损伤作用可能与线粒体膜电位升高导致的氧化应激有关。     

银杏叶提取物对ECV304细胞正常功能的保护作用研究

目的 探讨高糖环境下银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract, EBG)对ECV 304细胞的保护作用.方法 将细胞分为正常细胞组(不施加任何处理因素)、高糖组(加入葡萄糖至终浓度35 mmol/L);甘露醇组(加入甘露醇使其终浓度达35 mmol/L);银杏叶保护组(加入葡萄糖至终浓度35 mmol/L,同时加入银杏叶提取物使其终浓度达500 μg/ml).加入处理因素24 h后,利用流式细胞仪测定细胞内Ca2+浓度、线粒体的膜电位和细胞凋亡情况.结果 高糖组细胞内Ca2+浓度与其它各组相比较显著升高,线粒体的膜电位显著降低,发生凋亡的细胞显著增加(P＜0.05).银杏叶保护组细胞内Ca2+浓度显著低于高糖组,线粒体膜电位显著高于高糖组,发生凋亡的细胞显著减少(P＜0.05).甘露醇组细胞内Ca2+浓度显著低于高糖组,线粒体膜电位高于高糖组,细胞发生凋亡情况少于高糖组(P＜0.05).结论 银杏叶提取物能够保护高糖环境下的ECV304免受高糖的损伤.     

薯蓣皂苷对培养乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用

目的研究薯蓣皂苷对培养乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法采用体外培养乳鼠心肌细胞，建立缺氧／复氧损伤模型，以薯蓣皂苷进行干预。心肌细胞随机分为5组：空白对照组（C组）；缺氧／复氧组（A／R组）；薯蓣皂苷（Dioscin）低、中、高剂量干预组（Dioscin＋A／R组）。分别观察各组心肌细胞搏动频率；MTr法测细胞存活率；用Rhl23荧光探针标记线粒体，检测荧光强度以反映线粒体膜电位（△ψm）变化；Fluo-3负载心肌细胞，激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内钙离子浓度变化。结果薯蓣皂苷干预组心肌细胞搏动频率、细胞存活率、△ψm与A／R组比较明显升高；细胞内平均钙离子荧光强度显著低于A／R组。结论从细胞水平初步证实薯蓣皂苷预处理心肌细胞对A／R损伤有一定保护作用，保护机制可能涉及对线粒体膜保护和防止细胞内钙超载等。     

高原红细胞增多症患者中性粒细胞[Ca2＋]i及NADPH氧化酶活性变化

目的 观察高原红细胞增多症（HAPC）患者外周血中性粒细胞[Ca2＋]i及NADPH氧化酶活性变化.方法 HAPC患者30例（HAPC组）,世代居住的健康者29例（健康组）,分离两组外周血中性粒细胞,两组细胞各添加fM-LP（终浓度为0、0.001、0.01、0.1、1、10 μmol/L）及PMA（终浓度为0、10、20、30、40、50 μmol/L）后,采用钙离子荧光探针（Fura-2/AM）法检测两组中性粒细胞内[Ca2＋]i;ELISA法检测中性粒细胞NADPH氧化酶活性.结果 fMLP终浓度为0.1、1、10 μmol/L时,健康组中性粒细胞[Ca2＋]i分别为（223.6 ±34.6）、（260.7 ±30.0）、（316.6 ±53.8） nmol/L;HAPC组分别为（203.2±25.6）、（235.5 ±35.9）、（278.1 ±47.1） nmol/L,两组比较,P＜0.05或＜0.01.fMLP终浓度为0.1、1、10 μmol/L时,健康组中性粒细胞NADPH氧化酶活性分别为（81.3±16.9）、（97.6±23.7）、（119.5 ±33.8）pmol/（10-6个细胞·30 min）;HAPC组分别为（72.0±16.9）、（83.6±15.3）、（102.9±26.3） pmol/（10-6个细胞·30min）,两组比较,P＜0.05或＜0.01.PMA终浓度为30、40、50 μmol/L时,健康组中性粒细胞[Ca2＋]i分别为（224.9±33.1）、（326.7 ±45.3）、（646.9 ±78.1） nmol/L;HAPC组分别为（205.5±26.3）、（293.9 ±52.6）、（567.9±103.1）nmol/L,两组比较,P ＜0.05或＜0.01.PMA终浓度为30、40、50 μmol/L时,健康组中性粒细胞NADPH氧化酶活性分别为（258.2±25.1）、（327.3 ±38.5）、（383.1±36.7）pmol/（10-6个细胞·30 min）;HAPC组分别为（213.8 ±36.3）、（291.3 ±50.5）、（337.2±36.0） pmol/（10-6个细胞·30 min）,两组比较,P＜0.01.结论 高原缺氧降低人外周血中性粒细胞NADPH活性及[Ca2＋]i浓度升高幅度.     

孕妇血尿Ca2+、Mg2+、BGP和DPD的变化

选择120例无妊娠合并症、未曾补钙及应用激素类药物的健康初孕妇女,30例年龄、身高、体质量与上述孕妇相近的非孕健康妇女,测其空腹静脉血Ca^（2＋）、Mg^（2＋）、骨钙素（BGP）,同时测其尿Ca^（2＋）、Mg^（2＋）及尿脱氧吡啶啉（DPD）、肌酐（Cr）。结果显示,孕妇血清Ca^（2＋）由孕早期的（1.840±0.39）mmol/L降至孕末期的（1.710±0.31） mmol/L,明显低于非孕妇,P〈0.01;血清Mg^（2＋）亦有下降趋势,低于非孕妇,P〈0.05;血清BGP由孕早期的（6.16±3.33）ng/L降至孕晚期的（3.93±2.57）ng/L,明显低于非孕妇,P〈0.01;尿Ca^（2＋）/Cr在妊娠过程中呈上升趋势,高于非孕妇,P〈0.05;尿DPD/Cr由孕早期的（17.59±5.65）mmol/L升至孕晚期的（24.4±14.4）mmol/L,明显高于非孕妇,P〈0.01;尿Ca^（2＋）、Mg^（2＋）与DPD呈正相关（r分别为0.617、0.648,P均〈0.01）,尿Ca^（2＋）与尿Mg^（2＋）呈正相关（r=0.471,P〈0.01）,血清Ca^（2＋）与DPD呈负相关（r=-0.226,P〈0.05）。认为孕妇体内处于低Ca^（2＋）、低Mg^（2＋）状态,骨吸收增加。     

胰岛淀粉样纤维对体外胰岛细胞膜的毒性作用

目的探讨胰岛淀粉样多肽（IAPP,也称胰淀素Amylin）的纤维状态胰岛淀粉样纤维（IAf）对胰岛细胞膜的毒性作用及可能机制。方法比较用可溶性IAPP和IAf孵化培养的胰岛细胞膜流动性的变化,并在黏附细胞仪570记录各组[Ca^2＋]i的动态变化;以10μmol/LIAf组为对照组,分别比较Ca^2＋通道阻断剂组、无Ca^2＋培养液组、胆固醇干预组[Ca^2＋]i的动态变化,了解[Ca^2＋]i变化与钙离子通道的关系。结果细胞膜流动性和[Ca^2＋]i在IAf组中呈剂量依赖性升高,与可溶性IAPP组及空白对照组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;而可溶性IAPP组与空白对照组间差异无统计学意义（P〉0.05）。Ca^2＋通道阻断剂预处理组加10μmol/LIAf刺激后[Ca^2＋]i变化与对照组相比差异无统计学意义（P〉0.05）,而无Ca^2＋培养液组和胆固醇预处理组加10μmol/LIAf刺激后[Ca^2＋]i变化均明显低于对照组（P〈0.01）。结论IAf可能通过改变胰岛细胞膜流动性和细胞内钙超载而导致细胞损伤,钙超载是由于外钙内流所致,其途径可能并非经过钙离子通道,可能与“淀粉样通道”形成有关。胆固醇具有拮抗此毒性的作用。     

TFP5抑制高糖诱发的细胞周期依赖性激酶5过度激活、减少胰岛β细胞凋亡

目的：探讨TFP5对高糖诱发的细胞周期素依赖性激酶5（Cdk5）活性的抑制作用及其对胰岛β细胞的保护作用。方法体外培养小鼠胰岛细胞株Min6。将TFP5转染Min6细胞,分别用免疫印迹和免疫荧光观察其表达。实验分3组：低糖（5mmol/L）组,高糖（25mmol/L）＋空病毒载体（EV）组和高糖（25mmol/L）＋TFP5组,分别用同位素标记法测定3组细胞内Cdk5激酶活性;用酶联免疫吸附法测定3组细胞胰岛素分泌水平;用免疫印迹法测定胰岛β细胞凋亡。结果（1）表明TFP5来源和它的分子序列;（2）TFP5在Min6细胞内表达良好;（3）在高糖＋TFP5组Cdk5的活性明显低于高糖＋EV组（ P＜0.01）,而且在高糖＋TFP5组胰岛素分泌明显高于高糖＋EV组（P＜0.01）;（4）在高糖组Min6细胞的Bax表达增加,Bcl-2表达减少,Bax/Bcl-2比值升高,细胞凋亡增加（P＜0.01,vs 低糖组）,而加入TFP5后,Bax表达减少,Bcl-2表达增加,Bax/Bcl-2的比值减低（P＜0.01,vs 高糖组）,细胞的凋亡减少。结论 TFP5可抑制高糖诱发的Cdk5激酶的过度活性、减少高糖刺激下胰岛细胞凋亡,从而恢复胰岛素分泌,具有潜在的以Cdk5为靶点治疗2型糖尿病的前景。     

α-synuclein片段对PC12细胞内蛋白聚集、线粒体功能和活性氧水平的影响

目的　研究α synuclein的纤维源性片段NAC对PC12细胞内蛋白聚集、线粒体功能及活性氧水平的影响。　方法　采用神经生长因子将PC12细胞诱导分化成多巴胺能细胞 ,后经不同浓度的NAC(0、0 1、1 0、10 0、2 5 0、5 0 0 μmol/L)处理 4 8h ,MTT法测定线粒体氧化还原酶的活力。用硫磺素S染色观察细胞内蛋白聚集情况 ,JC 1检测线粒体膜电位 ,DCFH DA检测细胞内活性氧水平。　结果　经NAC处理 4 8h后 ,与对照组比较 ,PC12细胞线粒体活力在高浓度 (≥ 2 5 μmol/L)NAC作用时明显下降 6 4 1% (P <0 0 5 )。NAC(2 5 μmol/L)可诱导出现蛋白聚集 ,JC 1荧光染色可检测到线粒体膜电位明显去极化 ,DCFH DA荧光染色及流式细胞仪检测显示PC12细胞内活性氧增加。 6 0 6 %　结论　NAC可引起PC12细胞内蛋白聚集 ,进而线粒体功能障碍及氧化应激增强 ,最终导致细胞死亡。     

尼莫地平对老龄大鼠大脑皮层和海马细胞内游离钙浓度的影响

采用Fura－2／AM荧光探剂法测定不同龄大鼠大脑皮层和海马两个脑区细胞内游离钙浓度（[Ca2 ]i）以及尼莫地平对老龄大鼠（24月龄）上述两个脑区[Ca2 ]i的影响，另外用同位素标记法测定尼莫地平对老龄大鼠上述两脑区细胞线粒体摄钙的影响。结果发现，随增龄两个脑区细胞[Ca2 ]i呈渐进性增长，应用尼莫地平后．老龄大鼠两脑区细胞[Ca2＋]i的升高明显被抑制（P＜0．01），同时细胞线粒体摄钙能力亦明显升高（P＜0.01）但无明显剂量依赖性。提示尼莫地平可通过阻断钙通道、促进细胞内钙库对Ca2＋封存等不同途径降低神经细胞[Ca2＋]i，延缓神经细胞的损伤和老化。     

虾青素对Aβ25～35诱导小鼠皮层神经元损伤的保护作用

目的 研究虾青素(AST)对Aβ25 ～35诱导小鼠皮层神经元损伤的保护作用.方法原代培养的小鼠皮层神经元用AST预孵育2h,再与老化的10 μmol/L Aβ25-35共孵育24h.采用MTT法测定细胞活力,Hoechst 33342染色观察细胞凋亡,DCFH-DA荧光法检测细胞内ROS水平,Rhodamine 123荧光法检测线粒体膜电位.结果 500～4 000 nmol/L的AST预处理能有效抑制10 μmol/L Aβ25～35诱导的神经元活力下降,降低细胞内ROS的水平.2 000 nmol/L AST对神经元线粒体膜电位的保护作用最明显,能显著抑制神经元凋亡.结论AST对Aβ25～35诱导小鼠皮层神经元损伤有明显的保护作用,其机制可能和保护线粒体功能有关.     

星形胶质细胞在脂多糖诱导的多巴胺能神经元损伤中的作用

目的 探讨星形胶质细胞在不同浓度脂多糖诱导的多巴胺能神经元损伤中的作用.方法 在第3代星形胶质细胞中加入终浓度为0、0.1、10.0 mg/L脂多糖作用24 h,收集条件培养液.采用L-抗坏血酸-2-磷酸酯倍半镁盐和人成纤维生长因子促进孕12 d的SD大鼠中脑前体细胞扩增、分化为多巴胺能神经元,通过阿糖胞苷抑制胶质细胞的增殖,建立高比例多巴胺能神经元的纯神经元培养体系.在此基础上,利用Transwell双室培养系统建立星形胶质细胞和纯神经元共培养体系,观察脂多糖、条件培养液和星形胶质细胞对纯神经元体系中多巴胺能神经元存活及酪氨酸羟化酶mRNA表达的影响.结果 脂多糖对纯神经元体系中的多巴胺能神经元有损伤作用,并呈剂量依赖性.与单用脂多糖比较,条件培养液显著升高多巴胺能神经元存活,其中0.1 mg/L脂多糖刺激组多巴胺能神经元的存活能力最强,其次为10.0 mg/L组,最后为0 mg/L组.与条件培养液组比较,共培养体系中多巴胺能神经元存活能力更高,其中0.1 mg/L脂多糖干预后多巴胺能神经元的存活能力最强,随后依次为10.0 mg/L、0 mg/L、20.0 mg/L脂多糖.多巴胺能神经元表达酪氨酸羟化酶mRNA的变化类似多巴胺能神经元数量的变化.结论 脂多糖对多巴胺能神经元有损伤作用,并呈剂量依赖性,适度激活的星形胶质细胞对多巴胺能神经元有保护作用,过度激活则削弱了这种保护作用.     

苯那普利对缺氧复氧心肌心胞内钙离子的影响及机制研究

目的研究苯那普利对乳鼠缺氧复氧心肌细胞内钙离子浓度的影响及作用机制。方法采用纯化培养的乳鼠心肌细胞复制缺血再灌注模型。实验分为4组,每组8例：空白对照组、单纯缺氧复氧组（H／R）、缺氧复氧＋苯那普利（1×10^6mol／L）组、缺氧复氧＋苯那普利（1×10^6mol／L）＋缓激肽B2受体拮抗剂（HOE140）（1×10^6mol／L）组。细胞缺氧1h,复氧2h后取细胞培养液测定乳酸脱氢酶（LDH）,取细胞测定超氧化物歧化酶（SOD）的活性和丙二醛（MDA）含量,测定细胞内钙浓度。结果单纯缺氧复氧组与对照组比较,LDH、MDA、[Ca^2＋]i含量升高,SOD活性下降（P〈0．01）;苯那普利组与缺氧复氧组比较,LDH、MDA、[Ca^2＋]i含量降低,SOD活性升高（P〈0．01）;苯那普利＋HOE140组与苯那普利组比较,LDH、MDA、[Ca^2＋]i含量升高,SOD活性下降（P〈0．01）。结论苯那普利能降低细胞内钙离子浓度,有明显保护心肌的作用。其作用可能与激活激肽-缓激肽释放系统、抑制缓激肽的降解有关。     

过量摄氟后大鼠肾细胞内钙水平与氧化应激损伤研究

目的 研究过量氟对大鼠肾细胞中游离钙（[Ca^2＋1i）水平的影响与氧化应激的关系。方法 应用饮水加入氟化钠进行大鼠染毒实验，采用Fura-2／AM荧光指示剂测定慢性氟中毒大鼠肾细胞内[Ca^2＋]i浓度的变化，同时测定谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性、超氧化物歧化酶（SOD）活性和脂质过氧化终产物丙二醛（MDA）生成。结果 过量氟可刺激肾细胞内[Ca^2＋]i浓度增高，高钙加氟组与高钙对照组相比差异有显著意义俨〈0．05），低钙加氟组高于低钙对照组俨〈0．001）；SOD活力水平低钙加氟组低于低钙对照组，差异有显著意义（P〈0．05），MDA生成低钙加氟组高于低钙对照组（P〈0．05）；GSH-Px活力变化不明显。结论 （1）过量氟所致的大鼠细胞内[Ca^2＋]i超载和不同程度的氧化侵袭，可能在氟骨症病理过程中起重要作用；（2）投氟伴随低钙可加重细胞内[Ca^2＋]i超载和氧化侵袭，提示钙营养与氟中毒发病有着重要联系。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对蛛网膜下腔出血后线粒体功能保护的机制研究

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对蛛网膜下腔出血(SAH)后线粒体功能的保护作用及其机制。方法利用PC12细胞,采用氧合血红蛋白(Oxy Hb)建立体外SAH模型,观察EGCG对SAH后线粒体的保护作用。噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;Furo-3 AM检测线粒体Ca~(2+)浓度([Ca~(2+)]m)变化;JC-1及DCFH-DA分别检测细胞内线粒体膜电位(Δψm)和活性氧(ROS)的变化;TUNEL法检测细胞凋亡。结果与对照组相比,Oxy Hb诱导PC12细胞增殖,但却出现线粒体[Ca~(2+)]m超载、线粒体膜电位去极化、细胞内ROS含量增多等现象,最终导致细胞凋亡。而EGCG治疗后细胞活力较SAH组相比显著降低且与EGCG浓度呈正相关,50μmol/L EGCG治疗组与SAH组差异具有统计学意义(P0.01)。50μmol/L EGCG显著抑制SAH后的[Ca~(2+)]m超载,由SAH后的3.30±0.04降至3.05±0.03(P0.01)。此时线粒体膜电位和ROS荧光强度均降至正常水平,与SAH组比较差异具有统计学意义(P0.01)。伴随线粒体功能的恢复,EGCG治疗组凋亡细胞也明显减少。结论 SAH后EGCG可能通过降低[Ca~(2+)]m超载和细胞内ROS水平、维持线粒体膜的稳定性,进而抑制神经细胞凋亡而发挥神经保护功能。     

胶质细胞源性神经营养因子对帕金森病大鼠多巴胺能神经元的修复作用

目的观察向脑室或壳核内直接注射胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）对帕金森病大鼠黑质纹状体系统多巴胺能神经元的修复作用。方法 70只大鼠,于右侧前脑内侧束（MFB）及腹侧被盖区（VTA）分别注射12μg 6-OHDA,观察2周获得39只帕金森病模型大鼠。其中15只大鼠（观察A组）脑室内注射人重组GDNF,14只（观察B组）壳核内注射人重组GDNF,5只（对照A组）脑室内注射赋形剂,5只（对照B组）壳核内注射赋形剂。采用免疫组化和量化形态学分析方法测算酪氨酸羟化酶阳性（TH＋）神经元数目、大小及TH＋纤维密度。结果对照A、B组大鼠右侧中脑组织黑质TH＋多巴胺能神经元大小和数目及纹状体内侧部TH＋神经纤维密度均较左侧降低,P均〈0.05。观察A组与对照A组相比、观察B组与对照B组相比,双侧中脑组织黑质TH＋多巴胺能神经元大小和数目及纹状体内侧部TH＋神经纤维密度均明显升高,P均〈0.05。结论脑室或壳核内直接注射GDNF对帕金森病大鼠黑质纹状体系统多巴胺能神经元损伤有修复作用。