脂肪细胞谷氨酰胺合成酶抑制结肠癌细胞的肝、肺转移

目的 探讨脂肪细胞谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)对结肠癌细胞迁移及转移的调控作用.方法 分别用野生型(WT)小鼠和脂肪细胞GS转基因(TgGS)小鼠的脂肪细胞条件培养基处理结肠癌MC38及CT26细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力;通过尾静脉注射结肠癌MC38细胞建立肿瘤血行转移小鼠模型,病理切片观察肝、肺组织的转移情况.结果 CCK-8检测发现脂肪细胞条件培养基对结肠癌MC38及CT26细胞的增殖无明显影响(P＞0.05);流式细胞仪检测发现脂肪细胞条件培养基对结肠癌MC38及CT26细胞的凋亡无明显影响(P＞0.05);划痕实验和Transwell实验结果显示TgGS小鼠脂肪细胞条件培养基可以抑制结肠癌MC38及CT26细胞的迁移能力(P＜0.05);尾静脉注射结肠癌MC38细胞后,与WT小鼠比较,TgGS小鼠肺转移瘤的大小及数量明显减少(P＜0.01),且TgGS小鼠较WT小鼠更不易发生肝转移(P＜0.0l).结论 脂肪细胞GS可以抑制结肠癌细胞的迁移及转移.     

脂肪细胞谷氨酰胺合成酶抑制结肠癌细胞的腹腔转移及血管生成

目的 探讨脂肪细胞谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)对结肠癌腹腔转移及血管生成的影响.方法 转基因小鼠的鉴定:Western blot检测野生型(WT)小鼠及脂肪细胞GS转基因(TgGs)小鼠脂肪细胞GS蛋白的表达.体内实验:分别构建WT小鼠及TgGs小鼠的腹腔转移模型,观察结肠癌细胞在腹腔的种植情况;免疫组化检测移植瘤的血管生成情况.体外实验:取WT及TgGS小鼠的脂肪进行无菌培养,收集条件培养基;通过小管形成实验、CCK8实验、Transwell实验观察条件培养基对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的小管形成、增殖及迁移的影响.结果 Western blot检测结果显示,TgGs小鼠较WT小鼠脂肪细胞GS蛋白水平显著上调(P＜0.05).TgGs小鼠较WT小鼠腹腔移植瘤数量明显减少[(6.33±4.04)vs(16.00±6.56),P＜0.05],体积明显减小[(2.35±1.93)vs(9.37±5.07),P＜0.01].免疫组化结果显示,TgGs小鼠肿瘤血管生成明显少于WT小鼠(P＜0.05).体外小管形成实验显示TgGs组较WT组HUVECs小管形成总长度明显缩短(P ＜0.05);CCK8实验显示TgGs组及WT组HUVECs的增殖差异无统计学意义(P＞0.05);Transwel实验显示TgGs组HUVECs细胞迁移数量明显少于WT组[(15.33±5.50)vs (78.33 ±13.58),P＜0.01].结论 脂肪细胞GS可抑制结肠癌腹腔转移及肿瘤血管生成.     

结直肠癌腹膜转移治疗的基础与临床研究

在中国，结直肠癌(CRC)发病率在各癌种中位于第2位，死亡率在各癌种中位于第4位。其中5%～15%的CRC患者会发生同时性腹膜转移(PM),约20%会发生异时性PM。CRC PM是位于肝、肺转移之后的第3大常见转移方式。虽然化疗取得了较好进展，使CRC PM患者的预后有所改善，但CRC PM患者的生存获益仍较少。目前，主要采用细胞减灭术联合腹腔内热疗法，预后较好，但仍会复发。目前，CRC PM的机制主要是肿瘤细胞自身生物学发生改变及肿瘤微环境改变。随着人们对CRC PM机制的深入研究，CRC PM治疗的潜在途径也变得更加多样。该文简要介绍了临床常见CRC PM的治疗方法，并从CRC PM机制出发对CRC PM潜在治疗方法进行了综述。     

腺病毒介导MCP-1-siRNA对人单核细胞体外迁移能力的影响

目的 构建针对单核细胞趋化蛋白1(monoeyte chemoattractant protein 1,MCP-1)基因的小分子干扰RNA(siRNA)重组腺病毒,探讨干扰MCP-1表达对人单核细胞白血病株THP-1迁移能力的影响.方法 设计并合成针对人MCP-1的siRNA的靶DNA序列,克隆于穿梭载体pAdTrack-CMV中,与带有腺病毒骨架质粒pAdeasy-1的BJ5183细菌中进行同源重组,获得重组腺病毒载体pAdeasy-si-MCP-1,转染人胚肾细胞株293细胞,包装并扩增病毒颗粒.体外感染能表达MCP-1的293细胞,RT-PCR检测siRNA对MCP-1转录水平影响.Millicell细胞迁移实验检测对人单核细胞白血病株THP-1体外迁移能力的影响.结果 高糖诱导下,人293细胞MCP-1的表达增强;而Ad-si-MCP-1感染后,能够显著抑制高糖刺激的MCP-1 mR-NA水平的升高;Ad-si-MCP-1感染293细胞后的培养上清对THP-1的趋化作用较高糖刺激组及其siRNA阴性对照组显著降低.结论 成功构建了抑制MCP-1表达的siRNA腺病毒载体,其抑制MCP-1表达可明显抑制高糖诱导的THP-1的趋化作用,提示MCP-1表达的干预可能为糖尿病肾病等MCP-1相关疾病提供新的预防和治疗手段.     

肿瘤坏死因子-α拮抗瘦素抑制胰岛素合成及分泌作用的实验观察

目的 探讨在炎症情况下,瘦素(leptin)对胰岛β细胞胰岛素合成与葡萄糖刺激的胰岛素分泌(glucose-stimulated insulin secretion,GSIS)功能的影响.方法 在含5.5 mmol/L葡萄糖培养基中培养传代的大鼠胰腺癌细胞系(INS-1E)和大鼠原代分离的胰岛,经生理浓度leptin(...     

军医大学创新教育背景下人才培养模式的探索

随着新时期新军事变革面临的新形势，现代高新技术的迅速发展在医学领域得到普遍应用，使人才培养模式发生了根本性变革。创新教育已从一种理念发展成为势不可挡的人才培养模式，成为军医大学教育的一大主要特征。该文在当前新军事形势与创新教育的大背景下，结合军医大学特点，从实际情况出发，通过分析影响创新教育人才培养的因素，探索创新教育的人才培养模式。     

医学院校创新教学方法探索

教育模式的创新是时代的需求。教学方法 改革是医学院校优质完成医学教学任务和培养优秀医学人才的关键。该文着重介绍几种医学院校在创新教学潮流中产生的教学方法 ，即兴趣引导教学法、以问题为导向的教学法、启发式教学法、多媒体教学法和升华教学法。在临床医学教学中，教师应该从临床医学的目的和任务出发，依据不同的教学内容、教学目标和教学对象，选择最优化的教学方法 ，博采众长，融为一体，才能达到最佳教学效果。     

脂肪细胞因子与胰岛素抵抗

脂肪细胞因子是指从脂肪组织分离的生物活性分子,包括细胞因子、生长因子、炎性蛋白等,与肥胖、胰岛素抵抗等密切相关.胰岛素与靶细胞膜上特异受体结合后发挥正常的信号转导作用,而该转导途径直接或者间接地受大部分脂肪细胞因子的负件调节,导致机体出现胰岛素抵抗及其相父疾病.本文综述了胰岛素信号转导作用、代谢综合征患者血浆脂肪细胞因子水平的变化以及脂肪细胞因子调节胰岛素信号转导的机制.     

CGI-58抵抗5-FU诱导的巨噬细胞凋亡

目的 观察CGI-58对5-FU诱导的巨噬细胞凋亡的影响,并探讨其作用及机制.方法 用5-FU处理巨噬细胞(PLKO)与CGI-58敲低(knockdown)的巨噬细胞(CGI-58 KD)后分别用CCK-8法检测其细胞增殖能力;流式细胞术检测其细胞周期与凋亡;Westem blot检测其凋亡蛋白(cleaved Caspase-3)的表达水平;Seahorse Assays检测其线粒体功能.结果 CCK-8检测发现CGI-58 KD+ 5-FU组细胞活力降低更明显(P＜0.01);流式细胞术结果显示经5-FU处理后,CGI-58 KD组的细胞凋亡率明显高于PLKO组(P＜0.01),Western blot检测发现CGI-58 KD+ 5-FU组cleaved Caspase-3的表达水平明显高于PLKO+ 5-FU组(P ＜0.01);Seahorse Assays检测发现CGI-58 KD组其基础耗氧率OCR明显降低(P＜0.0l),ATP生成减少(P＜0.05),ROS表达增加(P＜0.01);抗氧化剂NAC处理可拮抗巨噬细胞CGI-58缺失诱导的ROS增加(P＜0.05)、5-FU杀伤作用(P＜0.05)及cleaved Caspase-3表达水平.结论 CGI-58缺失可增强5-FU对巨噬细胞的杀伤作用并损伤巨噬细胞的线粒体功能,其作用机制可能是通过增加ROS的产生来实现的.     

巨噬细胞在结肠癌CT-26细胞获得性5-FU耐药中的作用

目的 探讨巨噬细胞在结肠癌CT26细胞对5-FU产生获得性耐药过程中的作用及其机制.方法 分别用正常培养基(NM)、巨噬细胞培养上清(CM)及预先用低剂量5-FU处理过的巨噬细胞培养上清[CM(5-FU)]处理CT-26细胞,并给予10μmol/L 5-FU处理,用CCK-8检测各组细胞增殖情况,PI/Annexin-V流式细胞术检测各组细胞凋亡情况及Western blot检测各组细胞凋亡信号通路.建立CT26小鼠皮下移植瘤模型,应用上述条件培养基处理联合5-FU化疗,动态观察移植瘤生长情况.结果 检测细胞凋亡情况发现,5-FU处理组CT26细胞的凋亡细胞百分比显著高于对照组(P＜0.05);Western blot检测结果显示5-FU处理组凋亡相关蛋白cleaved caspase-3及P-JNK的表达较对照组显著上调(P＜0.05);Western blot检测结果及结肠癌CT26细胞小鼠移植瘤模型发现P-JNK抑制剂可显著抑制由5-FU诱导的CT26细胞Caspase-3凋亡信号通路的激活;CCK-8检测结果及小鼠移植瘤模型中均发现CM(5-FU)能够显著降低CT26细胞对5-FU的化疗敏感性;细胞凋亡检测及Western blot检测结果发现CM(5-FU)可抑制由5-FU诱导的P-JNK/Caspase-3凋亡信号通路的激活.结论 5-FU可激活结肠癌CT-26细胞的P-JNK依赖的Caspase-3凋亡信号通路以发挥抗癌作用;5-FU诱导的巨噬细胞可导致结肠癌CT26细胞产生5-FU获得性耐药,其机制可能是5-FU诱导的巨噬细胞上清可拮抗CT-26细胞中5-FU激活的P-JNK/Caspase-3凋亡信号.