聚丙烯人工补片在骨恶性肿瘤关节置换中的应用

目的探讨骨恶性肿瘤关节置换患者术中应用聚丙烯人工补片修复关节囊及软组织的方法及其价值。方法2014年3月至2017年1月,回顾性分析12例接受肩关节及髋关节周围非病理性骨折的骨恶性肿瘤关节置换手术患者,男7例,女5例;年龄5~74岁,平均42岁。肩关节置换4例,髋关节置换8例。骨转移癌7例,骨原发性恶性肿瘤5例。所有患者均行广泛切除+假体置换术,并用聚丙烯人工补片修复关节囊。患者术前、术后的关节功能用美国骨与软组织肿瘤协会(musculoskeletal tumor society,MSTS)功能评价系统进行评估。结果本组患者均获随访,随访时间6~20个月,平均10.5个月。术后平均5d拔除术区引流管,伤口均I期愈合,术后功能恢复良好,均无术后并发症,伤口渗液无明显增多。术前MSTS关节功能评定,良4例,可8例;术后MSTS关节功能评定,良10例,可2例。随访期间,所有患者对诊疗效果满意。结论聚丙烯人工补片对骨恶性肿瘤广泛切除后软组织缺损的修复及关节假体置换后关节的稳定性和动力重建起到了重要的作用,近期疗效满意。     

再生障碍性贫血血清造血调控活性及其临床意义

造血环境因素包括多种细胞成分(如各种骨髓基质细胞,外周血的T淋巴细胞与单核细胞等)及循环血液中的血清(血浆)。再生障碍性贫血(AA)患者血清(血浆)中含有多种已知及未知的造血正/负调控因子,对AA血清造血调控活性研究有助于从体液因子角度探讨造血环境对造血的影响,亦可用于指导患者临床分型治疗及判断患者预后。     

核受体辅助抑制因子中ETO结合结构域的确定

目的 为消除急性髓系白血病标志基因AML1／ETO的活性，确定核受体辅助抑制因子（nuclear receptor co-repressor,N-CoR)与ETO基因相互作用的活性部位。方法 用PCR扩增不同区段的N－CoR(N-CoRY)，克隆入酵母表达质粒pGADGL中，构建获得pGADGL／N－CoRY。应用酵母双杂交技术及X-gal染以确定pGADGL／N－CoRY10个区段的N－CoR是否与ETO结合。结果 N－CoR的988－1126氨基酸残基与1551－1801氨基酸残基共存时，才能与ETO发生结合作用，是ETO相互作用的结构域。结论 N－CoR两个结构域能与ETO的两个锌指结构作用，保持两种蛋白之间的稳定结合。     

真性红细胞增多症患者内源性红系集落检测及其临床意义

目的　了解真性红细胞增多症 (PV)患者内源性红系集落 (EEC)生长情况及其临床意义。方法　应用半固体甲基纤维素培养体系培养 2 6例PV患者及 19名正常对照者骨髓单个核细胞中的EEC ,应用流式细胞术检测 8例PV患者及 10名正常对照者骨髓单个核细胞AnnexinⅤ并分析其与EEC之关系。结果　① 2 6例PV患者中 2 5例 (96 .2 % )检测到EEC ,继发性红细胞增多症患者及正常对照组EEC检出率为 0。②PV患者的EEC数、EEC/Epo依赖CFU E(EEC率 )与患者血红蛋白水平呈正相关(r=0 .6 0 8,P =0 .0 1) ,EEC率与患者外周血白细胞和血小板计数及中性粒细胞碱性磷酸酶 (ALP)指数无明显相关性。③EEC与血清Epo水平无相关性 (r =0 .5 18,P =0 .12 5 )。④ 15例PV患者应用羟基脲(HU)和 (或 )干扰素 (IFN)治疗 ,治疗前EEC率与达完全缓解 (CR)所需治疗时间呈正相关 (r=0 .6 5 1,P=0 .0 0 9) ,与缓解持续时间呈负相关 (r=- 0 .5 92 ,P <0 .0 2 )。⑤ 7例应用HU和 (或 )IFN治疗的PV患者 ,血常规恢复正常后EEC及EEC率均减低。⑥EEC率与血栓栓塞发生率呈正相关 (r =0 .5 2 4 ,P =0 0 1)。⑦PV患者骨髓单个核细胞的凋亡率较正常对照组明显减低 ,PV患者中EEC与骨髓细胞凋亡率呈负相关 (r=- 0 .192 ,P <0 .0 4 5 )。结论　EEC特异性见于PV     

E-cadherin在白血病细胞膜表面的表达及与β-catenin细胞膜定位的关系

目的 研究E-cadherin在白血病细胞膜表面的表达并确定与其下游信号分子β-catenin细胞膜定位的关系.方法 通过免疫荧光标记、激光共聚焦显微镜观察46例白血病患者和17名正常人骨髓细胞膜表面E-cadherin的表达,并分析其与β-catenin在细胞内分布的相关性.结果 白血病患者E-cadherin表达水平(中位平均荧光强度16.78)显著低于正常人(26.03);进一步随机选取14份标本测定细胞膜表面E-cadherin的表达及β-catenin的细胞膜分布并分析二者的相关性,结果显示E-cadherin的表达与β-catenin的细胞膜分布明显相关(r=0.74,P=0.002);5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-CdR)诱导白血病细胞中E-cadherin表达后,β-catenin在细胞膜的分布增加,而细胞核内的β-catenin定位减少,初步证实E-cadherin表达后可募集β-catenin到细胞膜.结论 白血病细胞中E-cadherin表达降低或缺失可引起β'-catenin从细胞膜释放并进入细胞核,最终可能会引起β-catenin靶基因的转录.     

组蛋白脱乙酰基酶抑制剂苯丁酸钠对基因PIG7的表达作用研究

目的研究组蛋白脱乙酰基酶抑制剂苯丁酸钠（PB）作用于Kasumi-1细胞后PIG7基因的表达变化及其与细胞分化凋亡的关系。方法采用半定量RT—PCR检测1,2,3mmol／LPB作用后24h、48hKasumi-1细胞PIG7基因的表达水平,同步观察细胞的形态变化,流式细胞仪检测CD11b、CD13和AnnexinV／PI表达水平。结果处理前PIG7低表达不能检测到,处理后均明显升高（P〈0．05）,不同浓度、作用时间间差异无统计学意义（P〉0．05）;细胞形态呈现分化凋亡改变;CD11b、CD13表达增加（P〈0．05）,AnnexinV^＊／PI^-增加（P〈0．05）。结论组蛋白脱乙酰基酶抑制剂苯丁酸钠作用后Kasumi-1细胞PIG7基因的表达增加,同时细胞发生分化凋亡,PB可能通过上调PIG7的表达引起上述生物学效应。     

RhoA和CDC42在急性白血病的表达异常及其意义

目的 检测急性白血病(AL)患者骨髓单个核细胞中RhoA和CDC42蛋白的表达水平,探讨Rho GTP酶相关的骨髓微环境与造血干细胞相互作用异常在白血病细胞恶性行为中的作用.方法 分离并制备54例AL患者及22名正常供者的骨髓单个核细胞的细胞裂解液,应用Western blotting方法,检测其中RhoA和CDC42蛋白的相对表达量,非配对t检验分析RhoA和CDC42蛋白在AL患者和正常供者中表达的差异,Spearman分析患者RhoA和CDC42基因的蛋白表达量与临床资料的相关性.结果 初治AL患者骨髓中RhoA和CDC42的蛋白表达水平显著高于健康人,其中急性髓系白血病M2、M3,及M5亚型患者的RhoA蛋白表达升高尤为显著,M3亚型患者的CDC42蛋白表达量升高最为显著.结论 初治AL患者骨髓中RhoA和CDC42表达显著上调,提示Rho GTP酶介导的白血病细胞迁移活跃导致骨髓微环境相互作用异常在白血病发生中起作用.     

N-cadherin在维持白血病干细胞特征中的作用

自我更新和抗药性是白血病干细胞的重要特征,为阐明N-cadherin参与维持白血病干细胞特征的分子机制,本研究以CD34病细胞系KG1a为研究模型,确定N-cadherin在维持白血病细胞自我更新和抗药性中的作用。通过流式细胞仪分选出N-cadherin阳性及N-cadherin阴性两群细胞,采用集落培养及化疗药物VP16分别处理两群细胞,比较二者的体外增殖及自我更新能力,以及VP16作用于两群细胞的半数抑制浓度IC50。结果显示:N-cadherin阳性的KG1a细胞的集落形成能力显著高于N-cadherin阴性细胞。VP16作用于N-cadherin阳性细胞的IC50(220μmol/L)显著高于N-cadherin阴性细胞(151μmol/L)(p=0.04);N-cadherin介导的黏附参与了N-cadherin阳性细胞的抗药性。结论:N-cadherin在维持白血病干细胞自我更新和抗药性的特征中起重要作用。     

急性早幼粒白血病细胞CD59表达缺失

CD59是糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白,通过抑制膜攻击复合物保护细胞免受补体介导的溶细胞作用。本研究探讨急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞CD59表达情况。应用流式细胞术检测19例急性早幼粒白血病细胞CD59的表达及NB4细胞经全反式维甲酸(ATRA)处理前后CD59的表达。用PCR方法扩增白血病患者和NB4细胞的pig-A基因编码序列并进行测序。结果表明,19例初治APL患者中12例CD59膜表达缺失,高于其他非APL细胞(40例non-APL中14例缺失,p=0.042)。对6例治疗前CD59表达缺失APL患者CR后再次检测CD59的表达,6例患者CD59的表达在CR后均恢复正常,这提示CD59的表达缺失只发生在早幼粒白血病细胞上。检测发现APL细胞系NB4的CD59表达也缺失,NB4细胞经ATRA处理后CD59的表达并没有随着细胞分化而出现变化。对NB4细胞和1例CD59表达缺失APL患者的pig-A基因编码序列测序显示,pig-A基因编码序列没有突变,因此APL的CD59表达缺失并不是由于pig-A基因的突变造成的。结论:APL细胞较多地有CD59表达缺失。     

组成活化型Rac1GTP酶通过上调促血小板血成素受体的表达促进白血病细胞的静息

目的:研究Rac1 GTP酶的活化对白血病细胞静息的影响,并探索其机制.方法:构建Rac1组成活化型慢病毒载体,以此感染急性髓系白血病KG-1a细胞,比较感染了组成活化型Rac1的KG-1a (Rac 1-V12-KG-1a)细胞和感染空载体的KG-1a(pCDH-KG-1a)细胞在G0期的比例差异.以Rac1特异性抑制剂NSC23766处理感染后KG-1a细胞,4d后检测两组细胞G0期比例的变化.实时定量PCR检测两组细胞中与细胞周期和细胞静息相关分子的表达.流式细胞术检测小鼠Rac 1GTP酶高度活化的AMLI-ETO9a白血病细胞模型中促血小板生成素受体(myeloproliferative leukemia MPL)-和MPL+细胞群在G0期的比例.结果:感染了组成活化型Rac1的Rac 1-V 12-KG-1a细胞的G0期细胞比例显著高于感染空载体的pCDH-KG-1a细胞的比例[(15.30±0.60)％ vs(11.50±0.17)％,P＜0.05];抑制剂处理KG-1a细胞后,随着抑制剂浓度的增加G0期细胞比例显著下降(P＜0.05).实时定量PCR检测结果显示,周期抑制因子P21、P27、P57的mRNA表达水平在Rac1-V12-KG-1a细胞表达均有不同程度的上调,静息相关调节分子N-Cadherin和MPL mRNA表达水平均显著升高(P＜0.05);流式检测结果显示,MPL+白血病细胞群的比例在G0期显著高于MPL组[(40.3±3.5)％vs (19.05±7.65)％,P＜0.05].结论:白血病细胞中Rac1 GTP酶的活化通过上调MPL等细胞外在调节因子的表达增加休眠期细胞的比例,从而促进白血病细胞维持静息状态.