镉对大鼠血睾屏障的损伤及黄芪甲苷的保护作用

目的观察黄芪甲苷和SB203580对镉致大鼠血睾屏障破坏及相关蛋白表达改变的保护效应,探讨黄芪甲苷的保护机制。方法 21只成年雄性SD大鼠随机分为7组:单纯镉组[0.1%氯化镉腹腔内注射,1mg/(kg·d)],镉+黄芪甲苷组[镉剂量同上,同时注射黄芪甲苷,10mg/(kg·d)],镉+SB203580组[镉剂量同上,同时注射SB203580,100μg/(kg·d)],以上各组又分为连续处理5d和10d两个时间组,对照组腹腔内注射等量生理盐水。各实验和对照组动物均为3只。取睾丸做光学显微镜、电子显微镜观察以及免疫组织化学染色和Western blotting检测。结果 HE染色观察对照组支持细胞核染色较浅且不规则,镉组支持细胞内有空泡形成,镉+黄芪甲苷组与镉+SB203580组未见明显形态异常。免疫组织化学染色观察对照组闭锁小带-1蛋白(ZO-1)、紧密连接蛋白-11(claudin-11)阳性产物在生精上皮靠近基底部表达。镉组ZO-1、claudin-11阳性产物表达均显著降低(P0.05),镉+黄芪甲苷组与镉+SB203580组阳性产物表达低于对照组但明显高于镉组(P0.05)。超微结构观察对照组血睾屏障紧密连接形态完整,呈连续的电子密度较深致密线,镉组血睾屏障紧密连接及支持细胞均见不同程度破坏,镉+黄芪甲苷组与镉+SB203580组破坏程度较相应处理时间镉组为轻。Western blotting结果显示,镉组磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)水平明显增强(P0.05),镉+黄芪甲苷组与镉+SB203580组pp38MAPK水平虽高于对照组,但较镉组明显减弱(P0.05)。结论镉致大鼠血睾屏障ZO-1、claudin-11表达降低,紧密连接超微结构损伤,黄芪甲苷具有保护作用,其保护机制与抑制p38MAPK磷酸化有关。     

急性染镉对大鼠心肌细胞闰盘超微结构和连接蛋白43表达的影响及黄芪甲苷的拮抗作用

目的:观察急性染镉对大鼠心肌细胞闰盘超微结构和连接蛋白43(Cx43)表达的影响,探讨黄芪甲苷的保护机制.方法:SD大鼠随机分为正常组、镉处理组、镉加黄芪甲苷处理组,取心室肌组织,分别作光镜、透射电镜观察和免疫组织化学检测.结果:与正常组相比,镉组心肌细胞连接蛋白43的表达量明显降低,心肌纤维和闰盘超微结构破坏严重;而镉加黄芪甲苷组心肌细胞连接蛋白43的表达量较镉组显著增加,心肌纤维和闰盘超微结构的损伤也明显减轻.结论:镉能破坏心肌细胞闰盘超微结构,影响连接蛋白43的表达及分布,黄芪甲苷能在一定程度上拮抗镉对心肌细胞闰盘超微结构和连接蛋白43的毒性损伤.     

蒿甲醚治疗实验大鼠肺孢子虫肺炎的电镜观察

用皮下注射醋酸可的松６周建立实验大鼠肺孢子虫肺炎动物模型，并用国产蒿甲醚进行试验治疗。治后大鼠肺组织超薄切片透射电镜观察，发现蒿甲醚可导致卡氏肺孢子虫产生以下３种超微结构改变：（１）胞浆内出现大量空泡；（２）线粒体肿胀；（３）核膜破裂。以上改变与戊烷脒对照组相似。     

多发性硬化研究的动物模型制备

目的：探索实验性变应性脑脊髓炎（experimental allergic encephalomyelitis,EAE)动物模型的制备，了解其病理改变，为多发性硬化免疫病理机制及实验性治疗的研究提供实验依据。方法：采用免疫诱导方法制备EAE模型，利用光镜，电镜观察豚鼠EAE模型的组织学改变。结果：至免疫后18d，全部豚鼠均出现EAE临床症状，光镜下见脑实质及蛛网膜下腔小血管充血，血管周围炎性细胞浸润，呈“袖套”状改变，电镜下见髓鞘明显分层，水肿甚至断裂，轴突细胞器消失，结论：EAE模型建立方法稳定，可靠，其病理改变为血管周围炎性浸润，白质脱髓鞘。     

34例肝糖原累积病的临床病理观察

目的:分析肝糖原累积病的临床病理表现,以提高对该病的认识.方法:34例确诊为肝糖原累积病患儿的临床资料,用光镜及电镜观察其肝活检组织的病理形态.结果:肝糖原累积病患儿临床主要表现为肝大,生长发育滞后,部分有低血糖表现;实验室检查可见低血糖,高乳酸血症,肝功能异常;肝穿刺活检光镜观察见肝细胞肿胀,呈植物细胞样镶嵌状排列;胞质内有大量红色粉尘样物,过碘酸希夫染色(Periodic acid-schiff,PAS)阳性证实其为糖原;电镜示肝细胞胞质内大量糖原沉积及大小不等脂滴形成.结论:肝糖原累积病发病隐匿,对临床不明原因的生长发育迟缓、肝脏肿大、有低血糖及酸中毒表现的患儿应疑诊本病.肝穿刺活检PAS染色及电镜观察对本病的确诊有重要意义.     

提高研究生电镜实验教学质量的几点体会

实验教学是研究生电镜教学的重要内容,通过课前精心准备,重视基础理论的讲解,教学结合临床,教学结合科研,提高图像分析能力以及对考试方法进行改革等多种方法和手段,有助于提高研究生电镜实习教学质量。     

黄芪甲苷对镉致大鼠睾丸支持细胞相关蛋白表达及p38MAPK磷酸化的拮抗作用

目的：探讨镉对培养大鼠睾丸支持细胞相关蛋白表达、p38M A PK磷酸化及超微结构的影响和黄芪甲苷的保护效应。方法对照组、镉（50 mol/L ）处理组、镉（50 mol/L ）加黄芪甲苷（10 mg/L ）组的培养支持细胞用于超微结构观察、波形蛋白、E-钙粘连蛋白/-环连蛋白免疫组织化学及磷酸化p38M A PK检测。结果镉处理组支持细胞线粒体内室肿胀,脂滴堆积,内质网扩张和（或）空泡化,髓样结构形成,少许支持细胞出现凋亡,镉加黄芪甲苷组支持细胞超微结构改变较镉处理组轻;免疫组织化学显示镉处理组波形蛋白、E-钙粘连蛋白及-环连蛋白阳性产物较对照组明显减弱（P＜0．05）,镉加黄芪甲苷组阳性产物虽较对照组减少但明显高于镉处理组（P＜0．05）;镉处理组支持细胞内磷酸化P38MAPK阳性产物表达量较对照组明显增强,且有向细胞核移位趋势,镉加黄芪甲苷组阳性产物表达量明显少于镉处理组（P＜0．05）。结论镉致大鼠睾丸支持细胞超微结构损伤、细胞骨架蛋白及粘连蛋白破坏并增强 P38MAPK磷酸化;黄芪甲苷可拮抗镉的毒性,其保护效应可能与减少 P38MAPK的磷酸化等有关。     

Lrg1基因敲除损伤小鼠睾丸睾酮产生与生精功能

目的 利用富亮氨酸α-2-糖蛋白1(leucine-rich-alpha-2-glycoprotein 1,Lrg1基因敲除小鼠模型,对Lrg1在睾丸中的生物学功能进行研究.方法 通过Crispr/cas9技术制备Lrg1基因敲除小鼠.6只4月龄Lrg1基因敲除雄性小鼠与6只4月龄野生型雄性小鼠分别作为实验组与对照组,HE染色方法观察两组小鼠睾丸形态变化,采用ELISA方法测定小鼠促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)与睾酮水平.利用高通量测序方法分析睾丸组织基因转录谱表达变化.结果 LRG1表达于睾丸精原细胞与精母细胞.免疫荧光与Western blot实验结果表明LRG1蛋白在敲除小鼠睾丸中表达缺失.Lrg1敲除影响睾丸发育:生精小管直径降低[(196.22±27.88) μm vs(183.67±26.32) μm,P＜0.05],退化生精细胞增多[(26.17 +±5.03)vs(196.00 ±40.34),P＜0.01],平均每生精小管圆形精子数量减少[(76.00±12.45)vs(60.00±11.40),P＜0.01].血清睾酮水平下降[(2.90±0.92) ng/mL vs(1.90±0.29) ng/mL,P＜0.05].附睾精子数量减少,活力降低.生物信息学分析显示Lrg1敲除导致差异表达的基因集中于有丝分裂、减数分裂、染色体分离及代谢程序.具有转录调控作用的48个C2H2锌指蛋白家族成员和17个miRNA在Lrg1敲除睾丸中表达异常,提示睾丸转录调节网络失调.结论 Lrg1基因在小鼠睾丸中参与生精功能与睾酮合成.     

在电镜技术与细胞超微结构选修课中开展双语教学的初探

介绍在电镜技术与细胞超微结构选修课中开展双语教学的具体做法和体会，探讨双语教学的师资培养、课前准奋、授课方式及课后评价等相关问题。     

病毒性心肌炎心肌线粒体结构功能变化及大剂量维生素C干预作用

目的：探讨病毒性心肌炎（ＶＭＣ）小鼠心肌线粒体结构和功能，并用大剂量维生素Ｃ进行干预。方法：雄性Ｂａｌｂ／ｃ小鼠随机分为柯萨奇Ｂ３病毒（ＣＶＢ３）感染组（ＩＧ）、ＣＶＢ３感染加大剂量维生素Ｃ治疗组（ＩＶＧ）和对照组（ＣＧ）。采用电镜和形态计量学方法观察心肌线粒体形态、数量和膜磷脂定位，用酶细胞化学法分析心肌线粒体细胞色素氧化酶（ＣＣＯ）和琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）活性。结果：ＩＧ小鼠心肌线粒体大量破坏，ＣＣＯ和ＳＤＨ活性降低，膜磷脂严重缺失、定位改变（Ｐ　＜０．０５～　０．０１）。不同时相点ＩＶＧ上述各项指标均较ＩＧ显著改善（Ｐ　＜０．０５～０．０１）。结论：ＶＭＣ心肌线粒体结构严重破坏、功能明显下降，大剂量维生素Ｃ能有效保护心肌线粒体结构和功能。