反转录病毒介导的Luciferase基因稳定转染细胞株的建立及其生物发光成像检测

目的 建立反转录病毒介导的Luciferase基因(Luc2)稳定转染的细胞株,通过体内及体外实验探讨Luc2阳性细胞数与生物发光成像系统光通量之间的关系.方法 采用分子克隆方法构建pMX-Luc2质粒,将其与pMD.G质粒共转染293T gag-pol细胞,获得表达Luc2的反转录病毒.将该反转录病毒感染小鼠结肠癌CT26、人小细胞肺癌NCI-H446、人结肠癌HT-29、人卵巢癌SKOV3、人肝癌sMMC-7721细胞系,建立并筛选Luc2阳性表达的细胞株.分别接种10～1×104个SKOV3-Luc2细胞于培养皿中,在4只裸鼠背侧皮下16个位点分别接种200μl不同浓度(1×107、5×106、2.5×106、1 × 106、5×105、2.5 × 10s、1×105、5 × 104/ml)的SKOV3-Luc2细胞,在另外4只裸鼠尾静脉中分别注射1 ×106和3×106个SKOV3-Luc2细胞.采用生物发光成像系统检测体外、体内接种细胞的光通量值.结果 成功获得表达Luc2的反转录病毒,感染肿瘤细胞系CT26、NCI-H446、HT-29、SKOV3、SMMC-7721,筛选阳性细胞株,均可稳定表达Luc2.体外生物发光成像系统检测结果表明,光通量值与培养皿中接种的细胞数之间存在显著的线性关系(R2=0.944,β=0.972,P＜0.01);活体检测结果表明,光通量值与裸鼠尾静脉注射和皮下接种的细胞数之间均存在显著的线性关系(R2=0.991,β=0.996,P＜0.01; R2=0.351,β=0.628,P＜0.01).结论 采用表达Luc2的反转录病毒感染肿瘤细胞系是快速建立Luc2阳性细胞株的一种可行方法.Luc2阳性细胞数与生物发光成像系统中光通量值具有显著的线性关系.     

基因沉默MTA1对宫颈癌细胞生物学效应的影响

目的:探讨基因沉默MTA1对宫颈癌CaSki细胞株生物学效应的影响。方法:构建针对MTA1基因的siRNA,体外转染人宫颈癌CaSki细胞株,通过RT-PCR检测其对CaSki细胞MTA1 mRNA表达的影响,并检测转染前后细胞增殖、生长及细胞周期改变情况。结果:瞬时转染MTA1-siRNA入CaSki细胞,可见细胞中MTA1 mRNA表达降低,转染后细胞生长减慢,克隆形成及划痕愈合能力下降,但对细胞周期的改变不明显。随着干扰浓度的增加,时间的延长,siRNA对MTA1 mRNA表达的抑制作用逐渐增强。结论:基因沉默MTA1能使宫颈癌细胞生长减慢,细胞迁移能力下降,一定程度上逆转了宫颈癌细胞的恶性表型。     

食管鳞癌组织芯片中MTA1 蛋白表达的免疫组织化学研究

 目的 研究食管鳞癌组织中转移相关基因MTA1蛋白定位及表达水平的改变及与食管鳞癌进展、转移的关系。方法 应用食管鳞癌组织芯片通过免疫组织化学染色研究MTA1蛋白在食管癌中的表达情况。结果 MTA1蛋白在食管鳞癌组织中主要定位于胞核,在淋巴结转移灶中出现胞浆与胞核同时着色。正常组织与重度不典型增生、原位癌及癌组织之间差异有统计学意义,在食管鳞癌不同进展阶段的组织中MTA1表达逐渐升高,并且出现异位表达。结论 MTA1与食管鳞癌的侵袭和转移高度相关,在食管鳞癌的发展过程中可能发挥着重要作用,可作为判断食管癌侵袭及转移能力的辅助因子。     

Ad-p53与Ad-p16联合对人肺腺癌GLC-82细胞作用的体外实验研究 *

探讨腺病毒介导的p53与p16基因的联合对人肺腺病GLC-82疗效提高的可能性。方法：将分别携有p53基因、p16基因重组腺病毒(Ad-p53与Ad-p16)联合使用,通过细胞生长和存活实验、克隆形成实验、流式细胞分析、TUNEL检测、RT-PCR分析、免疫组织化学实验,观察其对人肺腺癌GLC-82细胞的作用。结果：在总感染强度相同的前提下,Ad-p53与Ad-p16联合导入GLC-82细胞,对细胞生长存活及克隆形成能力的抑制、以及所造成的凋亡效果比施用单种基因的效果强,表明p53基因与p16基因在体外疗效上互为协同。结论： Ad-p53与Ad-p16联合,可以提高对人肺腺癌GLC-82细胞的疗效。     

重组腺病毒介导反义c-myc基因对人肝癌细胞系的治疗作用

目的：探讨重组腺病毒介导反义ｃ－ｍｙｃ基因（Ａｄ－ＡＳｍｙｃ）治疗人肝癌细胞的作用。方法：观察Ａｄ－ＡＳｍｙｃ对人肝癌细胞系的转导效率,通过细胞生长曲线、克隆形成实验、ＤＮＡ片段化分析、ＲＴ－ＰＣＲ、裸鼠皮下移植瘤治疗实验,分析Ａｄ－ＡＳｍｙｃ对人肝癌细胞系Ｂｅｌ－７４０２、ＱＳＧ－７７０１、ＳＭＭＣ－７７２１和ＨＣＣ－９２０４细胞生长和ｃ－ｍｙｃ基因表达及裸鼠肿瘤生长的抑制作用。结果：Ａｄ－ＡＳｍｙｃ可高效转导人肝癌细胞系,抑制细胞生长;转染细胞克隆形成能力降低,克隆成活率为对照组的５３．９％～６９．１％,ｃ－ｍｙｃ基因表达下降;Ａｄ－ＡＳｍｙｃ处理肝癌细胞,ＤＮＡ凝胶电泳出现明显的梯形条带,瘤内注射Ａｄ－ＡＳｍｙｃ可抑制裸鼠皮下移植瘤生长。结论：重组腺病毒介导的反义ｃ－ｍｙｃ基因转移,有可能成为肝癌基因治疗     

Overexpression of Bcl-2 partly inhibits apoptosis of human ce rvical cancer SiHa cells induced by arsenic trioxide

ＳｏｍｅｒｅｓｅａｒｃｈｅｒｓｆｒｏｍｔｈｅＨａｒｂｉｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙａｎｄｔｈｅＳｈａｎｇｈａｉＳｅｃｏｎｄＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｒｅｐｏｒｔｅｄｔｈａｔａｒｓｅｎｉｃｔｒｉｏｘｉｄｅ (Ａｓ2 Ｏ3)ｉｓａｎｉｄｅａｌｃｌｉｎｉｃａｌｃｏｍｐｏｕｎｄｆｏｒｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆａｃｕｔｅｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃｌｅｕｋｅｍｉａ (ＡＰＬ)ａｎｄｉｔｃｏｕｌｄｉｎｄｕｃｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＮＢ4ｃｅｌｌｓ 1 3　Ｔｈｒｏｕｇｈｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｉｎｖｉｖｏｅｘｐｅｒ…     

腺病毒介导的p16和p53的联合应用对胆管癌细胞QBC939的生长抑制作用

为研究p16和p53基因的联合应用对胆管癌细胞的作用,将重组体腺病毒p16、p53、p16联合p53转移到人胆管癌细胞QBC939,对p16、p53基因的表达,细胞的生长抑制及机制进行了分析。RT－PCR显示在胆管癌QBC939细胞系中p16呈低表达,p53不表达,重组体腺病毒能介导p16和p53等外源基因在胆管癌QBC939细胞系中高效表达,两者联合应用能明显抑制QBC939细胞的生长和集落形成。流式细胞计数证实其能诱导,QBC939细胞发生明显半调并导致其发生G1期阻滞,本研究显示p16及p53基因通过诱导肿瘤细胞凋亡及G1期阻滞在肿瘤的基因治疗方面发挥作用,两者联合应用具有协同作用。     

142例血红蛋白H病患者血液学与分子生物学检测结果分析

目的分析α-珠蛋白生成障碍性贫血（地贫）血红蛋白H病（HbH病）在临床血液学参数分析及分子生物学检测中的特点并探讨其原因。方法回顾性分析南宁市农村地区142例用分子生物学诊断为HbH病患者的CE结果和相关的血液学指标。结果142例HbH病患者中,缺失型HbH病89例,占62．68％,非缺失型HbH病53例,占37．32％;缺失型HbH病CE可见HbH峰,HbCS复合HbH病既可见HbH峰,又可见HbCS峰。血红蛋白电泳及血液学分析显示非缺失型HbH病患者的HbH水平及贫血程度高于缺失型HbH病（P＜0．05）。结论南宁市农村地区HbH病基因突变类型多样,以缺失型为主;HbCS复合HbH病在CE中可出现特异的HbCS峰;高HbH含量以及CS链在红细胞膜上的聚集是造成HbCS复合HbH病患者临床表现比缺失型HbH病患者严重的主要原因。     

静止型α地中海贫血基因携带者的血液学参数分析

目的 探讨平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞Hb（MCH）及血红蛋白A2（HbA2）筛查静止型α地中海贫血的价值.方法 选择单纯性静止型α地中海贫血136例,其中,缺失突变型73例（-α^3.7/αα基因型51例,-α^4.2/αα基因型22例）,点突变基因型63例[血红蛋白Constant Spring（HbCS）46例,Hb Westmead（HbWS）17例].将-α3.7/αα基因型（n=51）、-α4.2/αα基因型（n=22）及HbWS基因型（n=17）静止型α地中海贫血基因携带者作为混合组（n=90）.将46例HbCS基因型α地中海贫血基因携带者作为HbCS组,104例- -^sea/αα基因型α地中海贫血基因携带者作为- -^sea/αα基因型组,628例无α地中海贫血（αα/αα）的受检者作为对照组,检测其血MCV、MCH及HbA2,采用受试者工作特征（ROC）曲线确定各项参数的截割值,评价MCV、MCH及HbA2检测的灵敏度、特异度及准确度.结果 混合组MCV、MCH及HbA2的切割值范围分别为：74.00～86.00 fL、24.50～29.20 pg、≤2.70%.HbCS组MCV、MCH及HbA2的切割值范围分别为：73.00～83.00 fL、24.00～28.00 pg、≤2.30%.同一参数筛查两组的灵敏度、特异度及准确度比较,不同的参数筛查同组的灵敏度、特异度及准确度比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 MCV、MCH及HbA2对筛查静止型α地中海贫血有一定的参考价值.     

蓝唾液酸酶法快速检测细菌性阴道病的临床应用

目的探讨应用蓝唾液酸酶法（Blue）快速检测细菌性阴道病（BV）的临床应用价值。方法对本单位门诊及体检中心1280例疑为细菌性阴道病的女性分泌物标本,同时用蓝唾液酸酶法和Amsel法检测BV。结果BVBlue法检测BV与传统的Amsel法相比,检测的敏感性为93．07％,特异性为96．02％,阳性预测值86．44％,阴性预测值为98．07％。结论BVBlue法操作简便快速,技术易于掌握,无需特殊的仪器设备,敏感性和特异性较高,是一种较好的辅助诊断方法,值得临床推广。