ΔNp63蛋白在膀胱移行上皮癌中的表达及其临床意义

目的 :探讨 p5 3基因家族新成员截短型p6 3(△Np6 3)在膀胱癌组织中的表达及其意义。 方法 :采用免疫组织化学SP法检测 4 0例膀胱移行上皮癌 (TCC)、6例膀胱内翻性乳头状瘤和 8例正常膀胱移行上皮中△Np6 3的表达 ,并分析△Np6 3表达与膀胱癌病理类型、临床分期的关系。 结果 :正常膀胱移行上皮、膀胱内翻性乳头状瘤、TCC中△Np6 3的阳性表达率分别为 37.5 % (3/ 8)、6 6 .7% (4/ 6 )、10 0 % (40 / 4 0 ) ,组间差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。TCCG3 级与G2 级△Np6 3的强阳性、中度阳性表达率显著高于G1级 (P <0 .0 1)。Ta～T1期以△Np6 3弱阳性为主 (6 6 .7% ) ,随TCC浸润程度的增加 ,△Np6 3染色强度逐渐增强。T2 期△Np6 3强阳性表达率为 35 .3% ,T3 ～T4期增至 6 3.6 %。结论 :△Np6 3在TCC中高表达 ,与TCC病理分级、临床分期密切相关 ;△Np6 3可能参与TCC的发生、发展 ,是评估TCC预后的潜在因素之一。     

具有双重黏膜肌层的Barrett食管腺癌一例

患者男，59岁。因进食梗阻感2个月余伴腹痛8d入院。10年前曾因十二指肠球部溃疡穿孔行修补术。食管吞钡X线检查示：食管下段黏膜呈颗粒状微细改变，形态表现类似胃小区。内镜检查示：距门齿35cm处食管下段黏膜呈桔红色，桔红色的黏膜累及食管全周，与胃黏膜无明显界限并呈全周性地向食管侧延伸，齿状线上移。部分区域黏膜略隆起，表面呈粗糙颗粒状，伴有浅糜烂。内镜诊断：Barrett食管，癌变待排。取活检提示为：     

乳腺癌中激素受体和雌激素调节蛋白PS2的表达及其与预后的关系

目的　探讨乳腺癌中雌激素受体 (ER)、孕激素受体 (PR) 和雌激素调节蛋白 (PS2) 的表达及其与预后的关系。方法　应用免疫组织化学链霉亲和素 生物素过氧化物酶连接法 (SABC法) 检测 ER、PR和 PS2 在 76 例随访5~9年的乳腺浸润性癌中的表达。结果　ER、PR和 PS2 三者的表达两两之间呈明显正相关 (P<0 .01), 与患者的年龄关系密切 (P<0. 01), 而与肿瘤大小、腋窝淋巴结有无转移、组织学分类以及分级无明显相关。在预后方面,PR和PS2的表达与患者的无瘤生存、复发及死亡状况密切相关 (均P<0 .05)。结论　PR和PS2能够反映雌激素调节系统的功能和完整性, 作为评估预后的指标优于ER。同时进行 ER、PR和 PS2 的三联检测, 可以得到 3 个指标的累积效果, 以弥补单一ER检测或ER、PR检测的不足。     

缺氧诱导丝裂原因子在先天性膈疝胎鼠肺中的表达

目的研究缺氧诱导丝裂原因子（hypoxia—inducedmitogenicfactor，HIMF）在先天性膈疝（congenitaldiaphragmatichernia，CDH）胎鼠肺组织中的表达，探讨其在CDH肺发育不良中的作用。方法实验组10只BABL／C小鼠妊娠8d时经胃管注入25mg除草醚，正常对照组给予食用油，妊娠21d行剖腹产，解剖胎鼠两侧肺组织，采用免疫组化、Westernblot方法检测HIMF表达。结果实验组CDH致畸率56．5％，肺发育不良，处于假腺体期和原始肺小管期，HIMF蛋白显著表达下调（P〈0．05）；实验组内产生CDH者胎肺内HIMF表达水平与无CDH者比较差异无显著性意义（P〉0．05）；CDH膈疝侧与非膈疝侧肺组织HIMF表达差异无显著性意义（P〉0．05）。结论在CDH肺发育不良组织中HIMF蛋白表达显著下调，且早于膈疝形成，可能参与CDH肺发育不良的发病机制。     

靶向人肝素酶短发卡状RNA表达载体的构建及其沉默作用

目的 构建靶向人肝素酶(HPSE)的短发卡状RNA(shRNA)表达载体,探讨其基因沉默作用.方法 根据人肝素酶mRNA序列设计shRNA,合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pGenesil-1载体,转化扩增后进行测序鉴定;重组质粒在阳离子脂质体Lipofectamine 2000的介导下,瞬时转染人胃癌细胞株SGC-7901、人前列腺癌细胞株PC-3、人膀胱癌细胞株EJ,每种细胞分别设空白对照组、空载体pGenesil-Negative转染组、pGenesil-HPSE shRNA转染组3组,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测各种细胞中肝素酶基因表达水平,黏附实验和transwell小室实验检测癌细胞游走、侵袭能力.结果 所构建的shRNA载体插入基因片段与设计序列完全匹配,载体构建成功;重组质粒转染SGC-7901、PC-3、EJ细胞后,肝素酶mRNA表达分别下调78.6%(P<0.01)、82.6%(P<0.01)、81.9%(P<0.01),肝素酶蛋白表达分别下调76.4%(P<0.01)、85.9%(P<0.01)、83.3%(P<0.01),细胞黏附能力分别下降37.7%(P<0.01)、44.6%(P<0.01)、43.8%(P<0.01),细胞侵袭能力分别下降66.8%(P<0.01)、76.6%(P<0.01)、80.5%(P<0.01).结论 成功构建了靶向人肝素酶的shRNA表达载体,沉默肝素酶基因表达后,能抑制多种癌细胞的游走和侵袭能力.     

Effect of Smac on TRAIL-induced apoptosis of prostate cancer cell line PC-3 and the molecular mechanism

The effect of Smac gene on the TRAIL-induced apoptosis of the prostate cancer cell line PC-3 and the molecular mechanism were investigated. The Smac gene was transfected into PC-3 cells under the induction of liposome. The intrinsic Smac gene expression was detected by Western blotting. After treatment with TRAIL as an apoptosis inducer, in vitro cell growth activity was as-sayed by MTT colorimetry. The apoptosis rate of PC-3 cells was determined by annexin Ⅴ-FITC and propidium iodide staining flow cytometry. The expression of cellular XIAP and caspase-3 genes was examined by Western blotting. Smac-transfected cells (PC-3/Smac group) had significantly in-creased Smac protein level as compared with PC-3 controls (P<0.01). After induction with 100-200 ng/mL TRAIL for 12-36 h, cellular proliferation rate in PC-3/Smac group was significantly lower than in PC-3 controls (P<0.05). After induction with 100 ng/mL TRAIL for 24 h, the apoptosis rate in PC-3/Smac group was significantly enhanced as compared with that of PC-3 controls (P<0.05). Ac-cordingly, the XIAP expression level was down-regulated significantly (P<0.05) and caspase-3 sub-unit P20 was up-regulated significantly (P<0.05). It is suggested that the over-expression of cellular Smac can inhibit inhibitor of apoptosis proteins (IAPs), enhance caspases activity and the apoptosis rate of PC-3 cells induced by TRAIL, which may provide a useful experimental basis for prostate cancer therapy.     

反义PCNA联合wt-p53基因转染抑制膀胱癌细胞生长的实验研究

我们通过共转染方法观察了反义增殖细胞核抗原 (PCNA)联合野生型 p5 3(wt p5 3)基因对膀胱癌EJ细胞体外生长活性的抑制作用及其分子机制 ,现报告如下。材料与方法　PCNA反义表达载体pLAPSN和 pcDNA wt p5 3由本室常规保存。设置正常对照组、反义PCNA转染组、wt p5 3转染组、反义PCNA +wt p5 3转染组。参照脂质体lipofectamine 2 0 0 2说明书进行基因转染。细胞生长活性检测采用细胞计数法[1] 。DNA合成速率检测采用3 H TdR掺入法[1] 。细胞周期时相分析 :参照文献 [1]进行。基因表达检测采用RT PCR法[2 ] 。细胞凋亡检测采用…     

Barrett食管Wnt及Notch信号途径的表达

目的 研究Barrett食管(BE)组织中Wnt及Notch信号途径关键分子Tcf4、Cdx2、Hes1、Mathl的表达.方法 免疫组化法测定41例BE组织(肠化生18例、非肠化生3例)及其相应正常食管鳞状上皮组织中Tcf4、Cdx2、Hes1、Math1蛋白水平的表达.同时采用荧光定量PCR法测定其mRNA水平的表达.用△△CT法对结果进行相对定量分析,测定荧光信号显著增长时的循环次数(CT值),计算目的基因CT值与管家基因β-actin CT值的差值(△CT值),计算配对标本中BE组织△CT与正常组织△CT的差值(△△CT),并分析指标间的相关性.结果 肠化生者Tef4、Cdx2、Hes1、Math1表达水平高于非肠化生者(P＜0.05),有异型增生者高于无异型增生者(P＜0.05).布拉格分类C≥3Mn者高于其他分类者(P＜0.05,).在mRNA水平中,Tcf4表达与Cdx2、Hes1、Math1表达正相关(P=0.000),Hes1表达与Math1、Cdx2表达正相关(P=0.000),Cdx2表达与Math1表达正相关(P=0.000).结论 BE组织中存在与小肠增殖分化相关的Wnt及Notch信号途径关键分子的表达,其表达与BE的肠化生、异型增生及病变长度密切相关.     

Association of Ureaplasma urealyticum colonization with development of bronchopulmonary dysplasia: A systemic review and meta-analysis

There is controversy regarding the roles of Ureaplasma urealyticum （U. urealyticum） colo- nization in the development of hronchopulmonary dysplasia （BPD）. This study explored the association between U. urealyticum and bronchopulmonary dysplasia at 36 weeks post-menstrual age （BPD36）. Studies published before December 31, 2013 were searched from Medline, Embase, Ovid, Web of Sci- ence, and Cochrane databases, with the terms ＂Ureaplasma urealyticum＂, ＂chronic lung disease＂, or ＂BPD36＂ used, and English language as a limit. The association between U. urealyticum colonization and BPD36 was analyzed with RevMan 4.2.10 software, using the odds ratio （OR） and relative risk （RR） for dichotomous variables. Out of the enrolled 81 studies, 11 investigated the BPD36 in total 1193 in- fants. Pooled studies showed no association between U. urealyticum colonization and subsequent de- velopment of BPD36, with the OR and RR being 1.03 （95% CI=0.78-1.37; P=-0.84） and 1.01 （95% CI= 0.88-1.16, P=-0.84）, respectively. These findings indicated no association between U. urealyticum colo- nization and the development of BPD36.     

稳定过表达Smac基因对胃癌细胞株凋亡活性的调控作用

为探讨稳定过表达Smac基因对胃癌细胞凋亡的影响,采用脂质体介导Smac基因转染MKN45细胞,G418筛选阳性克隆。逆转录聚合酶链反应(RT PCR)和Western印迹鉴定Smac表达,同时以丝裂霉素作为凋亡诱导因子,采用锥虫蓝活细胞拒染法检测癌细胞体外生长活性,透射电镜、吖啶橙溴化乙啶荧光染色法、末端TdT酶标记技术(TUNEL)观察癌细胞凋亡及比率;Western印迹、比色法检测细胞内Caspase3表达。结果显示:所获胃癌亚克隆细胞MKN45/Smac的SmacmRNA、蛋白表达水平均显著高于MKN45(P<0.01)。10μg/ml丝裂霉素作用6～24h后,与MKN45细胞比较,MK…