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| 靶向人肝素酶短发卡状RNA表达载体的构建及其沉默作用 | |
| 引用本文： | 蒋国松,曾甫清,郑丽端,童强松,董继华,侯晓华.靶向人肝素酶短发卡状RNA表达载体的构建及其沉默作用[J].中华实验外科杂志,2010,27(5). |
| 作者姓名： | 蒋国松 曾甫清 郑丽端 童强松 董继华 侯晓华 |
| 作者单位： | 1. 华中科技大学同济医学院附属协和医院外科,武汉,430022 2. 华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科,武汉,430022 3. 华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室,武汉,430022 4. 华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科,武汉,430022 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金，教育部新世纪优秀人才支持计划，教育部回国人员基金资助项目 |
| 摘 要： | 目的 构建靶向人肝素酶(HPSE)的短发卡状RNA(shRNA)表达载体,探讨其基因沉默作用.方法 根据人肝素酶mRNA序列设计shRNA,合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pGenesil-1载体,转化扩增后进行测序鉴定;重组质粒在阳离子脂质体Lipofectamine 2000的介导下,瞬时转染人胃癌细胞株SGC-7901、人前列腺癌细胞株PC-3、人膀胱癌细胞株EJ,每种细胞分别设空白对照组、空载体pGenesil-Negative转染组、pGenesil-HPSE shRNA转染组3组,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测各种细胞中肝素酶基因表达水平,黏附实验和transwell小室实验检测癌细胞游走、侵袭能力.结果 所构建的shRNA载体插入基因片段与设计序列完全匹配,载体构建成功;重组质粒转染SGC-7901、PC-3、EJ细胞后,肝素酶mRNA表达分别下调78.6%(P<0.01)、82.6%(P<0.01)、81.9%(P<0.01),肝素酶蛋白表达分别下调76.4%(P<0.01)、85.9%(P<0.01)、83.3%(P<0.01),细胞黏附能力分别下降37.7%(P<0.01)、44.6%(P<0.01)、43.8%(P<0.01),细胞侵袭能力分别下降66.8%(P<0.01)、76.6%(P<0.01)、80.5%(P<0.01).结论 成功构建了靶向人肝素酶的shRNA表达载体,沉默肝素酶基因表达后,能抑制多种癌细胞的游走和侵袭能力. |
| 关 键 词： | 肝素酶 短发卡状RNA 肿瘤 基因表达 |
Construction of heparanase-targeted shRNA expression vector and its gene silencing effects |
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| JIANG Guo-song,ZENG Fu-qing,ZHENG Li-duan,TONG Qiang-song,DONG Ji-hua,HOU Xiao-hua.Construction of heparanase-targeted shRNA expression vector and its gene silencing effects[J].Chinese Journal of Experimental Surgery,2010,27(5). | |
| Authors: | JIANG Guo-song ZENG Fu-qing ZHENG Li-duan TONG Qiang-song DONG Ji-hua HOU Xiao-hua |
| Abstract: | |
| Keywords: | Heparanase Short hairpin RNA Tumor Gene expression |
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